JP2015518876A

JP2015518876A - 睡眠障害を治療するためのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストの使用

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Publication number: JP2015518876A
Application number: JP2015515606A
Authority: JP
Inventors: エス．デニーウィリアム; ジャクソンマーガレット; ソンネンバーグガブリエール
Original assignee: ファイザー・インク
Priority date: 2012-06-04
Filing date: 2013-05-21
Publication date: 2015-07-06
Anticipated expiration: 2033-05-21
Also published as: CA2874196A1; AU2013273263A1; US9370516B2; KR20150013236A; WO2013182933A1; ES2716303T3; CN104334193A; HK1202459A1; KR101708989B1; EP2854856A1; RU2014146109A; ZA201408672B; BR112014029577A2; CA2874196C; SG11201407387UA; JP6165852B2; EP2854856B1; RU2600895C2; MX2014014813A; AU2013273263B2

Abstract

本発明は、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストの投与を含む、患者における睡眠障害を治療する方法に関する。本発明はまた、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストと、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物の投与を含む、睡眠障害を治療する方法も包含する。【図１】

Description

本発明は、睡眠障害を治療するために有用なグレリン受容体逆アゴニスト／アンタゴニストである化合物に関する。本発明はまた、そのような化合物を含有する医薬組成物にも関する。

不眠症は最も一般的な睡眠障害であり、およそ５０００〜７０００万人の米国成人が罹患している。不眠症は、就眠困難、夜間の頻繁な覚醒、早く目が覚めて再入眠できないこと、または起床しても気分がすっきりしないことを特徴とする。

不眠症のための初期治療は、バルビツレート等の中枢神経系（ＣＮＳ；ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ）抑制薬を一般に用いていた。これらの化合物は、典型的には、長い半減期を有し、倦怠感、精神錯乱、鬱病および翌日の残存効果を包含する周知の一連の副作用を有する。加えて、長期使用は、肉体的および精神的依存の両方を伴う中毒の高い潜在性に関連するとされてきた。治療は、バルビツレートおよび他のＣＮＳ抑制薬からベンゾジアゼピンクラスの鎮痛催眠剤へ移行した。このクラスの化合物は、以前の催眠薬よりも大きい安全マージンで、患者および動物において眠っているような状態をもたらす沈静効果を生成する。しかしながら、多くのベンゾジアゼピンは、ある特定の患者集団においてそれらの有用性を限定する副作用を保有する。これらの問題は、他のＣＮＳ抑制薬（とりわけアルコール）との相乗効果、繰り返し投薬時の耐性の発生、投薬の中止後の反跳不眠、翌日の残存効果、ならびに精神運動性能および記憶の機能障害を包含する。不眠症のためのより最近の治療では、非ベンゾジアゼピン化合物を使用した。アンビエン（ゾルピデム）、ソナタ（ザレプロン）は、承認医薬品の例である。当技術分野において、睡眠障害を治療するための安全かつ治療的に有効な非ベンゾジアゼピン剤の必要性が存在する。

夜間摂食症候群（ＮＥＳ；ＮｉｇｈｔＥａｔｉｎｇＳｙｎｄｒｏｍｅ）は、概して、午前中における不十分な食物摂取、晩の過食、次いで不眠症および睡眠覚醒にも関連している。例えば、ＶａｎｄｅｒＷａｌ、ＪｉｌｌｏｎＳ．、ＣｌｉｎｉｃａｌＰｓｙｃｈｏｌｏｇｙＲｅｖｉｅｗ（２０１２）３２（１）、４９〜５９を参照されたい。ＮＥＳに関する意識の高まりにもかかわらず、ＮＥＳは依然として認識されておらず、より重要なことには、治療へのアプローチは成功することなく調査され続けている。

本発明は、睡眠障害を治療するためのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストの使用に関する。

本発明は、患者における睡眠障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストを投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における睡眠障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストと、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

経口強制飼養による投薬の３５〜６５分後に、雄ウィスターハノーバーラットの自発活動を低減させることにおける、実施例１の効果のグラフ図である。ヒトにおける実施例１の傾眠効果のグラフ図である。実施例１またはビヒクルの１日１回（ＱＤ）投与後の、動物の個々の活動パターンの例を示す図である。実施例１またはビヒクルのＱＤ投与後の、動物の個々の食物摂取パターンの例を示す図である。実施例１の晩の投与後３時間以内の睡眠持続時間の変化を示す図である。実施例１の晩の投与後３時間以内の食物摂取の変化を示す図である。

別の実施形態において、本発明は、患者における原発性不眠症を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストを投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における日中の過剰な眠気を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストを投与するステップを含む方法に関する。本発明の方法は、プラダーウィリ症候群と診断された患者における日中の過剰な眠気を治療することを包含する。

別の実施形態において、本発明は、患者におけるＮＥＳを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストを投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における原発性不眠症を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストと、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における日中の過剰な眠気を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストと、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。本発明の方法は、プラダーウィリ症候群と診断された患者における日中の過剰な眠気を治療することを包含する。

別の実施形態において、本発明は、患者におけるＮＥＳを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストと、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における睡眠障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における原発性不眠症を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における日中の過剰な眠気を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。本発明の方法は、プラダーウィリ症候群と診断された患者における日中の過剰な眠気を治療するために有用である。

別の実施形態において、本発明は、患者におけるＮＥＳを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における睡眠障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における原発性不眠症を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、患者における日中の過剰な眠気を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。本発明の方法は、プラダーウィリ症候群と診断された患者における日中の過剰な眠気を治療するために有用である。

別の実施形態において、本発明は、患者におけるＮＥＳを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

別の実施形態において、本発明はまた、
睡眠障害、特に、原発性不眠症、日中の過剰な眠気またはＮＥＳを治療するための薬剤の製造のための、本明細書において記述されている通りのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストの使用、
薬剤として使用するための、本明細書において記述されている通りのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、
睡眠障害、特に、原発性不眠症、日中の過剰な眠気またはＮＥＳの治療において使用するための、本明細書において記述されている通りのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、
本明細書において記述されている通りのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストおよび薬学的に許容できる添加剤を含む医薬組成物、ならびに
本明細書において記述されている通りのグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストを含む、睡眠障害、特に、原発性不眠症、日中の過剰な眠気またはＮＥＳの治療のための医薬組成物
を提供し、特に、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストは（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノンまたは薬学的に許容できるその塩であり得る。

（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノンまたは薬学的に許容できるその塩は、単に、本明細書においては実施例１として概して参照され得る。

別の実施形態において、本発明はまた、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特にＲ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノンまたは薬学的に許容できるその塩が、別の薬理活性剤と組み合わせて投与される、本明細書において論じられている任意の方法も提供する。

別の実施形態において、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１は、化合物とも称され、当技術分野において公知であり、別個にまたは同じ医薬組成物中でのいずれかで投与される他の薬理活性剤と組み合わせて用いられてよく、これは以下を包含するがこれらに限定されない：（ｉ）グリタゾン（例えば、シグリタゾン；ダルグリタゾン；エングリタゾン；イサグリタゾン（ＭＣＣ−５５５）；ピオグリタゾン；ロシグリタゾン；トログリタゾン；チューラリック；ＢＲＬ４９６５３；ＣＬＸ−０９２１；５−ＢＴＺＤ）、ＧＷ−０２０７、ＬＧ−１００６４１およびＬＹ−３００５１２等）等のＰＰＡＲ．ガンマ．アンタゴニスト；（ｉｉｉ）メトホルミンおよびフェンホルミン等のビグアニドを包含するインスリン増感剤；（ｂ）ビオータ、ＬＰ−１００、ノバラピッド、インスリンデテミル、インスリンリスプロ、インスリングラルギン、インスリン亜鉛懸濁液（レンテおよびウルトラレンテ）；Ｌｙｓ−Ｐｒｏインスリン、ＧＬＰ−１（７３−７）（インスリントロピン）；およびＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ．ｓｕｂ．２）等のインスリンまたはインスリン模倣薬；（ｃ）アセトヘキサミド；クロルプロパミド；ダイアビネス；グリベンクラミド；グリピジド；グリブリド；グリメピリド；グリクラジド；グリペンチド；グリキドン；グリソラミド；トラザミドおよびトルブタミド等のスルホニル尿素；（ｄ）アカルボース、アジポシン；カミグリボース；エミグリテート；ミグリトール；ボグリボース；プラディマイシン−Ｑ；サルボスタチン；ＣＫＤ−７１１；ＭＤＬ−２５，６３７；ＭＤＬ−７３，９４５およびＭＯＲ１４等の．アルファ．−グルコシダーゼ阻害剤；（ｅ）（ｉ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（アトルバスタチン、イタバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、リバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンおよび他のスタチン）、（ｉｉ）コレスチラミン、コレスチポール、交差結合デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体；Ｃｏｌｅｓｔｉｄ（登録商標）；ＬｏＣｈｏｌｅｓｔ（登録商標）等の胆汁酸吸収剤／金属イオン封鎖剤、（ｉｉ）ニコチニルアルコール、ニコチン酸またはその塩、（ｉｉｉ）フェノフィブリン酸誘導体（ゲムフィブロジル、クロフィブラート、フェノフィブラートおよびベンザフィブラート）等の増殖因子活性化受容体．アルファ．アゴニスト、（ｉｖ）スタノールエステル、ベータ−シトステロール、チクエシド等のステロール配糖体；およびエゼチミブ等のアゼチジノン等の、コレステロール吸収の阻害剤、ならびにアバシミブおよびメリナミド等の（アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ））阻害剤、（ｖ）プロブコール等の酸化防止剤、（ｖｉ）ビタミンＥ、ならびに（ｖｉｉ）甲状腺ホルモン様物質等のコレステロール低下剤；（ｆ）ベクロフィブラート、ベンザフィブラート、シプロフィブラート、クロフィブラート、エトフィブラート、フェノフィブラートおよびゲムフィブロジル；ならびに、Ａｔｒｏｍｉｄ（登録商標）、Ｌｏｐｉｄ（登録商標）およびＴｒｉｃｏｒ（登録商標）等の他のフィブリン酸誘導体、ならびにＧｌａｘｏによるＷＯ９７／３６５７９において記述されている通りのＰＰＡＲ．アルファ．アゴニスト等の、ＰＰＡＲ．アルファ．アゴニスト；（ｇ）ＰＰＡＲ．デルタ．アゴニスト；（ｈ）ムラグリタザールおよび米国特許第６，４１４，００２号において開示されている化合物等のＰＰＡＲ．アルファ．／．デルタ．アゴニスト；ならびに、（ｉ）抗肥満剤、例えば、（１）ＮＮ７０３、ヘキサレリン、ＭＫ−０６７７、ＳＭ−１３０６８６、ＣＰ−４２４，３９１、Ｌ−６９２，４２９およびＬ−１６３，２５５等の、成長ホルモン分泌促進物質、成長ホルモン分泌促進物質受容体アゴニスト／アンタゴニスト；（２）タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤；（３）リモナバン（ＳａｎｏｆｉＳｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ＡＭＴ−２５１、ならびにＳＲ−１４７７８およびＳＲ１４１７１６Ａ（ＳａｎｏｆｉＳｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ＳＬＶ−３１９（Ｓｏｌｖａｙ）、ＢＡＹ６５−２５２０（Ｂａｙｅｒ）等、カンナビノイドＣＢ．ｓｕｂ．１受容体アンタゴニストまたは逆アゴニスト等のカンナビノイド受容体リガンド；（４）フェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、フェンテルミンおよびシブトラミン等の抗肥満セロトニン作動剤；（５）ＡＤ９６７７／ＴＡＫ６７７（大日本住友製薬株式会社／武田薬品工業株式会社）、ＣＬ−３１６，２４３、ＳＢ４１８７９０、ＢＲＬ−３７３４４、Ｌ−７９６５６８、ＢＭＳ−１９６０８５、ＢＲＬ−３５１３５Ａ、ＣＧＰ１２１７７Ａ、ＢＴＡ−２４３、トレカドリン、ゼネカＤ７１１４、ＳＲ５９１１９Ａ等の．ベータ．３−アドレナリン受容体アゴニスト；（６）オルリスタット（Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））、トリトンＷＲ１３３９、ＲＨＣ８０２６７、リプスタチン、テトラヒドロリプスタチン、茶サポニン、リン酸ジエチルウンベリフェリル等の膵リパーゼ阻害剤；（７）ＢＩＢＰ３２２６、Ｊ−１１５８１４、ＢＩＢＯ３３０４、ＬＹ−３５７８９７、ＣＰ−６７１９０６、ＧＩ−２６４８７９Ａ等のニューロペプチドＹ１アンタゴニスト；（８）ＧＷ−５６９１８０Ａ、ＧＷ−５９４８８４Ａ、ＧＷ−５８７０８１Ｘ、ＧＷ−５４８１１８Ｘ、ＦＲ２２６９２８、ＦＲ２４０６６２、ＦＲ２５２３８４、１２２９Ｕ９１、ＧＩ−２６４８７９Ａ、ＣＧＰ７１６８３Ａ、ＬＹ−３７７８９７、ＰＤ−１６０１７０、ＳＲ−１２０５６２Ａ、ＳＲ−１２０８１９ＡおよびＪＣＦ−１０４等のニューロペプチドＹ５アンタゴニスト；（９）メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）受容体アンタゴニスト；（１０）Ｔ−２２６２９６（武田薬品工業株式会社）等のメラニン凝集ホルモン１受容体（ＭＣＨ１Ｒ）アンタゴニスト；（１１）メラニン凝集ホルモン２受容体（ＭＣＨ２Ｒ）アゴニスト／アンタゴニスト；（１２）ＳＢ−３３４８６７−Ａ、および本明細書における特許公報において開示されているもの等のオレキシン受容体アンタゴニスト；（１３）フルオキセチン、パロキセチンおよびセルトラリン等のセロトニン再取り込み阻害剤；（１４）メラノタンＩＩ等のメラノコルチンアゴニスト；（１５）ＣＨＩＲ８６０３６（Ｃｈｉｒｏｎ）、ＭＥ−１０１４２およびＭＥ−１０１４５（Ｍｅｌａｃｕｒｅ）、ＣＨＩＲ８６０３６（Ｃｈｉｒｏｎ）；ＰＴ−１４１およびＰＴ−１４（Ｐａｌａｔｉｎ）等の他のＭｃ４ｒ（メラノコルチン４受容体）アゴニスト；（１６）５ＨＴ−２アゴニスト；（１７）ＢＶＴ９３３、ＤＰＣＡ３７２１５、ＷＡＹ１６１５０３、Ｒ−１０６５等の５ＨＴ２Ｃ（セロトニン受容体２Ｃ）アゴニスト；（１８）ガラニンアンタゴニスト；（１９）ＣＣＫアゴニスト；（２０）ＡＲ−Ｒ１５８４９、ＧＩ１８１７７１、ＪＭＶ−１８０、Ａ−７１３７８、Ａ−７１６２３およびＳＲ１４６１３等のＣＣＫ−Ａ（コレシストキニン−Ａ）アゴニスト；（２２）コルチコトロピン放出ホルモンアゴニスト；（２３）ヒスタミン受容体−３（Ｈ３）モジュレーター；（２４）ヒオペラミド、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロピルＮ−（４−ペンテニル）カルバメート、クロベンプロピット、ヨードフェンプロピット、イモプロキシファン、ＧＴ２３９４（Ｇｌｉａｔｅｃｈ）およびＯ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノール］−カルバメート等のヒスタミン受容体−３（Ｈ３）アンタゴニスト／逆アゴニスト；（２５）．ベータ．−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１阻害剤（．ベータ．−ＨＳＤ−１）；２６）テオフィリン、ペントキシフィリン、ザプリナスト、シルデナフィル、アミノン、ミルリノン、シロスタミド、ロリプラムおよびシロミラスト等のＰＤＥ（ホスホジエステラーゼ）阻害剤；（２７）ホスホジエステラーゼ−３Ｂ（ＰＤＥ３Ｂ）阻害剤；（２８）ＧＷ３２０６５９、デスピラミン、タルスプラムおよびノミフェンシン等のＮＥ（ノルエピネフリン）輸送阻害剤；（２９）第二または第三グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト；（３０）組換え患者レプチン（ＰＥＧ−ＯＢ、ＨｏｆｆｍａｎＬａＲｏｃｈｅ）および組換えメチオニル患者レプチン（Ａｍｇｅｎ）を包含するレプチン；（３１）レプチン誘導体；（３２）［Ｄ−Ｐｈｅ６，ベータ−Ａｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］Ｂｎ（６−１４）および［Ｄ−Ｐｈｅ６，Ｐｈｅ１３］Ｂｎ（６−１３）プロピルアミド、ならびにＰｅｐｔ．Ｓｃｉ．２００２年８月；８（８）：４６１〜７５）において開示されている化合物等のＢＲＳ３（ボンベシン受容体亜型３）アゴニスト；（３３）ＧＩ−１８１７７１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＳＲ１４６１３１（ＳａｎｏｆｉＳｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ブタビンジド、ＰＤ１７０，２９２およびＰＤ１４９１６４（Ｐｆｉｚｅｒ）等のＣＮＴＦ（毛様体神経栄養因子）；（３４）アキソキン（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）等のＣＮＴＦ誘導体；（３５）シブトラミン等のモノアミン再取り込み阻害剤；（３６）フィタン酸、４−［（Ｅ）−２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−１−プロペニル−ｌ］安息香酸（ＴＴＮＰＢ）、レチノイン酸等の、ＵＣＰ−１（脱共役タンパク質−１）、２または３活性化因子；（３７）ＫＢ−２６１１（ＫａｒｏＢｉｏＢＭＳ）等の甲状腺ホルモン．ベータ．アゴニスト；（３８）セルレニンおよびＣ７５等のＦＡＳ（脂肪酸シンターゼ）阻害剤；（３９）ＤＧＡＴ１（ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１）阻害剤；（４０）ＤＧＡＴ２（ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２）阻害剤；（４１）ＡＣＣ２（アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−２）阻害剤；（４２）グルココルチコイドアンタゴニスト；（４３）ｄｅｌＭａｒ−Ｇｒａｓａ，Ｍ．ら、ＯｂｅｓｉｔｙＲｅｓｅａｒｃｈ、９：２０２〜９（２００１）において開示されているオレオイル−エストロン等のアシル−エストロゲン；（４４）イソロイシンチアゾリジド、バリンピロリジド、ＮＶＰ−ＤＰＰ７２８、ＬＡＦ２３７、ＭＫ−４３１、Ｐ９３／０１、ＴＳＬ２２５、ＴＭＣ−２Ａ／２Ｂ／２Ｃ、ＦＥ９９９０１１、Ｐ９３１０／Ｋ３６４、ＶＩＰ０１７７、ＳＤＺ２７４−４４４等のジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤；（４６）ジカルボキシレート輸送体阻害剤；（４７）グルコース輸送体阻害剤；（４８）ホスフェート輸送体阻害剤；（４９）メトホルミン（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ（登録商標））；および（５０）トピラマート（Ｔｏｐｉｍａｘ（登録商標））；および（５０）ＢＩＭ−４３０７３Ｄ、ＢＩＭ−４３００４Ｃ（Ｏｌｉｔｖａｋ，Ｄ．Ａ．ら、Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．４４（３）：６４３〜４８（１９９９））等の、ペプチドＹＹ、ＰＹＹ３−３６、ペプチドＹＹ類似体、誘導体および断片；（５１）ＮＰＹ３−３６、Ｎアセチル［Ｌｅｕ（２８，３１）］ＮＰＹ２４−３６、ＴＡＳＰ−Ｖおよびシクロ−（２８／３２）−Ａｃ−［Ｌｙｓ２８−Ｇｌｕ３２］−（２５−３６）−ｐＮＰＹ等のニューロペプチドＹ２（ＮＰＹ２）受容体アゴニスト；（５２）膵臓ペプチド（ＰＰ）等のニューロペプチドＹ４（ＮＰＹ４）アゴニスト、および１２２９Ｕ９１等の他のＹ４アゴニスト；（５４）エトリコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、ＢＭＳ３４７０７０、チラコキシブまたはＪＴＥ５２２、ＡＢＴ９６３、ＣＳ５０２およびＧＷ４０６３８１、ならびに薬学的に許容できるその塩等のシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤；（５５）ＢＩＢＰ３２２６、Ｊ−１１５８１４、ＢＩＢＯ３３０４、ＬＹ−３５７８９７、ＣＰ−６７１９０６、ＧＩ−２６４８７９Ａ等のニューロペプチドＹ１（ＮＰＹ１）アンタゴニスト；（５６）ナルメフェン（Ｒｅｖｅｘ（登録商標））、３−メトキシナルトレキソン、ナロキソン、ナルトレキソン等のオピオイドアンタゴニスト；（５７）ＢＶＴ３４９８、ＢＶＴ２７３３等の１１．ベータ．ＨＳＤ−１（１１−ベータヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ１型）阻害剤；（５８）ミノレックス；（５９）アンフェクロラール；（６０）アンフェタミン；（６１）ベンズフェタミン；（６２）クロルフェンテルミン；（６３）クロベンゾレックス；（６４）クロフォレックス；（６５）クロミノレックス；（６６）クロテルミン；（６７）シクルエキセドリン；（６８）デキストロアンフェタミン；（６９）ジフェメトキシジン、（７０）Ｎ−エチルアンフェタミン；（７１）フェンブトラザート；（７２）フェニソレックス；（７３）フェンプロポレックス；（７４）フルドレックス；（７５）フルミノレックス；（７６）フルフリルメチルアンフェタミン；（７７）レバンフェタミン；（７８）レボファセトペラン；（７９）メフェノレックス；（８０）メタンフェピラモン；（８１）メタンフェタミン；（８２）ノルプソイドエフエドリン；（８３）ペントレックス；（８４）フェンジメトラジン；（８５）フェンメトラジン；（８６）ピシロレックス；（８７）ファイトファーム５７；ならびに（８８）ゾニサミド等。

用語「薬学的に許容できる塩」は、本明細書において使用される場合、妥当な医学的判断の範囲内で、必要以上の毒性、刺激、アレルギー応答等なしに、患者および下等動物の組織と接触させて使用するのに適切であり、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、塩を意味する。薬学的に許容できる塩は、当技術分野において周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、１９７７、６６：１〜１９において、薬学的に許容できる塩について詳細に記述している。塩は、本発明の実施例１の最終単離および精製中にインサイチュで、または実施例１の遊離塩基を適切な有機もしくは無機酸と反応させることによって別個に、調製することができる。代表的な酸付加塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩を包含するがこれらに限定されない。

用語「グレリン受容体」は、本明細書において使用される場合、成長ホルモン分泌促進物質受容体（ＧＨＳＲ１ａまたはＧＨＳ−１ａＲ）として公知のＧタンパク質共役受容体を意味する。

用語「睡眠障害」は、本明細書において使用される場合、患者の睡眠量、睡眠の質もしくはタイミングにおける、または睡眠に関連する行動もしくは生理学的条件における異常を特徴とする、およそ７０の症候群を包含する。睡眠障害症候群の代表例は、不眠症、原発性不眠症、睡眠時無呼吸、ナルコレプシー、むずむず脚症候群、概日リズム睡眠障害、レム睡眠行動障害、夢遊病（夢中歩行）、睡眠時ブラキシズム（歯ぎしり）、過眠症、頭内爆発音症候群、睡眠まひおよび日中の過剰な眠気（ＥＤＳ；ｅｘｃｅｓｓｉｖｅｄａｙｔｉｍｅｓｌｅｅｐｉｎｅｓｓ）を包含するがこれらに限定されない。

ＥＤＳは、プラダーウィリ症候群（ＰＷＳ；Ｐｒａｄｅｒ−Ｗｉｌｌｉｓｙｎｄｒｏｍｅ）患者の典型的な特色の１つであり、介護者は、ＰＷＳの小児を、眠く、高頻度で昼寝をするとして記述する。ＥＤＳは、夜間および日中の両方で入眠潜時の低減を伴うことが、反復睡眠潜時試験で実証されている。親の報告およびアンケートは、ＰＷＳを患う成人の９０〜１００％におけるＥＤＳの存在を示している。ＰＷＳ患者は、他の知的障害群および非ＰＷＳ対照と比較して、より高い自己報告レベルのＥＤＳも有する。

「ＮＥＳは、食事パターン、睡眠異常、臨床経過および家族集積性の観点から特徴付けられてきた。健常な対照と比較すると、ＮＥＳを患う人は、対照よりも、夕食後にカロリーのかなり大きな割合を消費し、夜間により頻繁に目を覚まし、覚醒時に食べる傾向が強い。」上記ＶａｎｄｅｒＷａｌ、５０頁、内部の表および引用への言及は省略。

用語「患者」は、本明細書において使用される場合、ヒトを意味する。

本発明はまた、１つまたは複数の非毒性の薬学的に許容できる担体と一緒に製剤化された、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、経口投与のために固体もしくは液体形態で、非経口注射のために、または経直腸投与のために、特別に製剤化されてよい。

用語「薬学的に許容できる担体」は、本明細書において使用される場合、任意の種類の、非毒性の、不活性固体、半固体もしくは液体フィルター、賦形剤、カプセル化材料または製剤化助剤を意味する。薬学的に許容できる担体として役立ち得る材料のいくつかの例は、ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖；コーンスターチおよびバレイショデンプン等のデンプン；セルロース、ならびにカルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のその誘導体；トラガカント末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤ロウ等の添加剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油等の油；グリコール；そのようなプロピレングリコール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝溶液、ならびにラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム等の他の非毒性の適合する滑沢剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および着香剤であり、調合者の判断により、保存剤および酸化防止剤が組成物中に存在していてもよい。本発明は、１つまたは複数の非毒性の薬学的に許容できる担体と一緒に製剤化された、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、経口投与のために固体もしくは液体形態で、非経口注射のために、または経直腸投与のために製剤化され得る。

本発明の医薬組成物は、経口的に、非経口的に、腹腔内に、局所的に（散剤、軟膏剤または点滴薬によって等）、口腔内にまたは経口もしくは鼻腔用スプレーとして、患者に投与され得る。用語「非経口的に」は、本明細書において使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、関節内注射および注入を包含する投与モードを指す。

非経口注射用の本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる滅菌水性または非水性液剤、分散剤、懸濁剤または乳剤、および滅菌注射液剤または分散剤への再構成用の無菌粉末を含む。適切な水性および非水性担体、賦形剤、溶媒またはビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの適切な混合物、植物油（オリーブ油等）ならびにオレイン酸エチル等の注射用有機エステルを包含する。適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散剤の事例においては必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。

これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤等のアジュバントも含有し得る。微生物の作用の予防は、種々の抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等によって確実となり得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム等を包含することが望ましい場合もある。注射用医薬形態の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。

いくつかの事例では、薬物の効果を延長するために、多くの場合、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を減速させることが望ましい。これは、難水溶性の結晶性または非晶質材料の液体懸濁液の使用によって遂行され得る。次いで薬物の吸収速度がその溶解速度によって決まり、これは今度は結晶サイズおよび結晶形態によって決まり得る。代替として、非経口的に投与される薬物形態の遅延吸収は、薬物を油ビヒクルに溶解するまたは懸濁することによって遂行される。

懸濁剤は、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタ水酸化物、ベントナイト、寒天、トラガカント、ならびにそれらの混合物等の懸濁化剤を含有し得る。

所望ならば、より有効な分布のために、本発明のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１を、ポリマーマトリックス、リポソームおよびミクロスフェア等の緩徐放出または標的送達系に組み込むことができる。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または、使用直前に、滅菌水または何らかの他の無菌注射用媒体中に溶解され得る無菌の固体組成物の形態での滅菌剤の組み込みによって、滅菌できる。

グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１はまた、適切ならば、上記で注記した通り、１つまたは複数の薬学的に許容できる担体を加えたマイクロカプセル形態であってもよい。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、腸溶性コーティング、放出制御コーティングおよび医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻を伴って調製され得る。そのような固体剤形において、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１は、スクロース、ラクトースまたはデンプン等の少なくとも１つの不活性賦形剤と混和され得る。そのような剤形は、通常の実務と同様に、不活性賦形剤以外の追加の物質、例えば、錠剤化滑沢剤ならびにステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース等の他の錠剤化助剤も含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は、緩衝剤も含み得る。それらは、乳白剤を含有していてもよく、活性原料のみを、または優先的に、胃腸管のある特定の部分において遅延様式で放出するような組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質およびロウを包含する。

注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に薬物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作製される。薬物対ポリマーの比率および用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）を包含する。デポー注射用製剤は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルションに薬物を封入することによっても調製される。

注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または、使用直前に、滅菌水もしくは他の無菌注射用媒体に溶解もしくは分散され得る無菌の固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌できる。

注射用調製物、例えば、滅菌注射用水性または油脂性懸濁液は、公知の技術に従い、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して製剤化され得る。滅菌注射用調製物は、１，３−ブタンジオール中の溶液等、非毒性の非経口的に許容できる賦形剤または溶媒中の滅菌注射溶液、懸濁液またはエマルションであってもよい。許容できるビヒクルおよび溶媒のうちで用いられ得るのは、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張塩化ナトリウム溶液である。加えて、滅菌固定油が溶媒または懸濁媒として慣例的に用いられる。この目的のために、合成モノ−またはジグリセリドを包含するあらゆる無刺激性固定油を用いることができる。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注射液の調製において使用される。

経口投与のための固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を包含する。そのような固体剤形において、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸カルシウム等の少なくとも１つの不活性な薬学的に許容できる担体、ならびに／または、ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびサリチル酸等の充填剤もしくは増量剤；ｂ）カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア等の結合剤；ｃ）グリセロール等の保湿剤；ｄ）寒天、炭酸カルシウム、バレイショもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび炭酸ナトリウム等の崩壊剤；ｅ）パラフィン等の溶液遅延剤；ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収加速剤；ｇ）セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート等の湿潤剤；ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤；ならびにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物等の滑沢剤と、混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は緩衝剤も含み得る。

同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。

錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、腸溶性コーティングおよび医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻を伴って調製され得る。それらは、乳白剤を含有していてもよく、胃腸管のある特定の部分において、遅延様式で、活性原料のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質およびロウを包含する。

経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容できる乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を包含する。液体剤形は、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１に加えて、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤、ならびにエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル等の乳化剤、ならびにそれらの混合物等、当技術分野において一般に使用される不活性賦形剤を含有し得る。

経口組成物は、不活性賦形剤のほかに、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤等のアジュバント、甘味剤、香味剤、ならびに着香剤も包含し得る。

本発明の医薬組成物中におけるグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成物および投与モードについて、所望の治療応答を実現するのに有効な、グレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１の量を取得するために、変動させることができる。選択される投薬量レベルは、特定のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニストの活性、投与経路、治療されている状態の重症度、ならびに治療されている患者の状態および以前の病歴によって決まることになる。

患者に投与される本発明のグレリン受容体逆アゴニストまたはアンタゴニスト、特に実施例１の総日用量、約０．００３から約１０ｍｇ／ｋｇ／日まで。経口投与の目的のために、より好ましい用量は、約０．０１から約５ｍｇ／ｋｇ／日までの範囲内であってよい。好ましい用量は、１日当たり２５から３００ｍｇｓの間の範囲である。最も好ましいのは、１日当たり７５から２００ｍｇｓである。所望ならば、有効日用量を、投与目的のために複数回用量に、例えば１日当たり２から４回の別個の用量に分割することができる。

本明細書において引用されているすべての特許、特許出願および文献参照は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノンは、本明細書においておよびＵＳ２０１１／０２３０４６１において開示されている合成方法論を使用して調製され得る。

（実施例１）

（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン

２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）酢酸塩酸塩
酢酸（７５０ｍＬ）中の臭素（４３６ｇ、２．７３ｍｏｌ）の溶液を、酢酸（１０００ｍＬ）中の３−オキソブタン酸エチル（３５５ｇ、２．７３ｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、減圧下、４５℃で濃縮して、酢酸を除去した。残留物を塩化メチレン（４００ｍＬ）と水（２５０ｍＬ）とに分配した。有機層を、飽和重炭酸ナトリウム（２×３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）、ブライン（１２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶液を濾過し、濃縮して、エチル４−ブロモ−３−オキソブタノエートを黄色油（４２１ｇ）として得た。

アセトン（１５００ｍＬ）中の２−アミノ−５−メチルチアゾール（１５０ｇ、１．３１ｍｏｌ）の溶液に、エチル４−ブロモ−３−オキソブタノエート（３４５ｇ、１．６５ｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応混合物の温度を２２〜４０℃の間に維持した。混合物は濃厚なペーストになり、アセトン（３００ｍＬ）を添加して撹拌を容易にした。室温で終夜撹拌した後、混合物を濾過し、濾過ケーキをアセトンで洗浄して、白色固体を提供した。固体をヘキサンで洗浄し、真空オーブン内、４０℃で４時間乾燥させて、４−（２−アミノ−５−メチル−チアゾール）−３−オキソ酪酸エチルエステル臭化水素酸塩（２７２ｇ）を得た。

４−（２−アミノ−５−メチル−チアゾール）−３−オキソ酪酸エチルエステル臭化水素酸塩（２７２ｇ、０．８４ｍｏｌ）に、無水エタノール（６７５ｍＬ）を添加し、濃厚な混合物を９０℃で２時間加熱した。この時間の間に、固体は溶液になった。反応混合物を濃縮して褐色半固体を得、これをエタノールで粉砕して白色綿毛状固体を提供し、これを濾過によって収集した。固体をＥｔ_２Ｏで洗浄し、真空下、４０℃で４時間乾燥させて、エチル（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾール−６−イル）アセテート臭化水素酸塩（２２６ｇ）を得た。

エチル（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾール−６−イル）アセテート臭化水素酸塩（２２６ｇ、０．７４ｍｏｌ）を水（３５０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（５１．０ｇ、０．３７ｍｏｌ）の添加によって溶液をｐＨ７に調整した。水溶液を塩化メチレン（３００ｍＬ）で抽出し、有機相をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、エチル（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾール−６−イル）アセテートを褐色油（１５１．３ｇ）として得た。

エチル（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾール−６−イル）アセテート（１５１．３ｇ、０．６７ｍｏｌ）を１０％ＨＣｌ水溶液（４３５ｍＬ）に溶解し、混合物を２時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、真空で濃縮して、黄色油を得た。エタノール（１００ｍＬ）およびジエチルエーテル（２００ｍＬ）を添加し、得られた白色沈殿物を濾過によって収集し、真空オーブン内で終夜乾燥させて、１４４．３ｇ（９３％）の表題化合物を得た。MS (ES+) 197.1 (M+H)⁺. ¹H NMR (CD₃OD)
δ 2.48 (s, 3H), 3.88 (s, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.85 (s,
1H).

（Ｒ）−５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン
２２Ｌの５つ口丸底フラスコに、５−ブロモ−１−インダノン（１．０ｋｇ、４．７２ｍｏｌ）、無水ＴＨＦ（８Ｌ）および（Ｒ）−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（７３０ｍＬ、０．７３ｍｏｌ）を投入し、Ｎ_２下で−１０℃に冷却した。温度を−５℃未満に維持しながら、ボラン−メチルスルフィド（１０．０Ｍ、６５０ｍＬ、６．５ｍｏｌ）を１時間かけて滴下添加した。混合物を−１０℃から０℃で３時間撹拌し、反応温度を５℃未満に維持するような速度にて、水（４Ｌ）でクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（３×３Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（２Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、黄色固体を得た。粗生成物をショートシリカゲルカラム（ヘキサン中１％Ｅｔ_３Ｎを詰めた３Ｌのシリカゲル）に通過させ、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／３）で溶離した。濾液を濃縮し、残留物をヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃでスラリー化し、濾過し、乾燥させて、５８５ｇのオフホワイトの固体を（Ｓ）−５−ブロモ−インダン−１−オールとして得た。母液を再濃縮し、ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃでスラリー化し、濾過して、さらに２００ｇの黄色固体を（Ｓ）−５−ブロモ−インダン−１−オールとして得た。合わせたロット（７８５ｇ、７８％）をさらに精製することなく次のステップに持ち込んだ。

トルエン（２Ｌ）中の（Ｓ）−５−ブロモ−インダン−１−オール（２８８ｇ、１．３５ｍｏｌ）の溶液を、Ｎ_２下、氷浴中で冷却し、ジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ、４００ｍＬ、１．８５ｍｏｌ）で一度に、続いてトルエン（６００ｍＬ）中の１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ−７−エン（３００ｍＬ、２．０１ｍｏｌ）の溶液で処理した。３時間の添加中、反応温度を３から１０℃の間に保ち、混合物を３時間かけて１５℃に加温した（ＴＬＣは出発材料を示さなかった）。混合物をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で希釈し、水（３×２Ｌ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、５１６ｇの暗色油を得た。粗生成物をシリカゲルカラム（ヘキサン中１％Ｅｔ_３Ｎを詰めたもの、ヘキサン溶離液）によって精製して、（Ｒ）−１−アジド−５−ブロモ−インダン（２９１ｇ、９０％）を油として得、これを次のステップにおいて直接使用した。

（Ｒ）−１−アジド−５−ブロモ−インダンの溶液（１５４ｇ、０．６４５ｍｏｌ）をメタノール（２．４Ｌ）に溶解し、ＳｎＣｌ_２．２Ｈ_２Ｏ（２６５ｇ、１．１８ｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で終夜撹拌し（ＴＬＣは出発材料を示さなかった）、濃縮乾固した。得られた残留物を、２ＮＮａＯＨ水溶液（２．５Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）で処理した。混合物を１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（３×２５０ｍｌ）の助けにより、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した。有機溶液を分離し、水性層をＥｔＯＡｃ（３×２Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、１ＮＨＣｌ（２×２Ｌ）、続いて水（２Ｌ）で洗浄した。合わせた水性層のｐＨを、冷飽和ＮａＯＨ溶液で１１に調整し、混合物をＥｔＯＡｃ（３×２Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、（８７．５ｇ、６４．０％の）（Ｒ）−５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミンを暗黄色油として得、これを冷蔵すると凝固した。MS (ES+) 213.9 (M+H)⁺. ¹H NMR (CDCl₃)
δ 1.70-1.75 (m, 1H), 2.40-2.45 (m, 1H), 2.77-2.82 (m,
1H), 2.93-2.97 (m, 1H), 4.28-4.33 (m, 1H), 7.18-7.23 (m, 1H), 7.36-7.41 (m,
2H).

ｔｅｒｔ−ブチル４−（クロロメチル）−４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシレート
炉乾燥丸底フラスコ内、無水ＴＨＦ（１４０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（２２．６ｍＬ、１５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（６５．４ｍＬ、１６３ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５０Ｍ）を０℃で滴下添加した。溶液を４５分間撹拌し、ＴＨＦ（６０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（２０ｇ、８０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。クロロヨードメタン（１７．９ｍＬ、２３９ｍｍｏｌ）を滴下添加し、混合物を１時間撹拌した。混合物を２５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液でクエンチし、続いて酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を洗浄し（ブライン、２５０ｍＬ）、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して黄色油を得、これを、コンビフラッシュＩＳＣＯ精製システム（ＴｅｌｅｄｙｎｅＩｓｃｏＩｎｃ．、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ）システムを使用するシリカクロマトグラフィーによって精製して、１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（クロロメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１２ｇ、５２％）を得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.43 (s, 9H), 2.10-2.17 (m, 4H), 2.97 (br s, 2H), 3.56 (s, 2H),
3.74 (s, 3H), 3.83 (br s, 2H).

無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（クロロメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１１．７ｇ、４０．２ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。水素化アルミニウムリチウム（ＴＨＦ中１Ｎ、４４．３ｍＬ、４４．３ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し（１５〜２０分）、溶液を０℃で２５分間撹拌した。水（１．８ｍＬ）を十分に注意を払って滴下添加することにより、混合物をクエンチした。１ＮＮａＯＨ水溶液（１．８ｍＬ）を滴下添加し、混合物を５分間撹拌した。冷却浴を除去し、固体を濾過除去し、ケーキをＥｔ_２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（クロロメチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレートを固体（９．９６ｇ、９３．８％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.43 (s, 9H), 1.48-1.55 (m, 4H), 3.36-3.41 (m, 4H), 3.57 (s, 2H),
3.59 (br s, 2H).

炉乾燥丸底フラスコ内、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の塩化オキサリル（５．１ｍＬ、５７ｍｍｏｌ）の−７８℃溶液に、ジクロロメタン（１７ｍＬ）中のジメチルスルホキシド（８．２ｍＬ、１１４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２分間撹拌し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（クロロメチル）−４−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１３．７ｇ、５２ｍｍｏｌ）を１０分間かけて添加した。溶液を−７８℃で１５分間撹拌し、トリエチルアミン（３６ｍＬ、２６０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、室温に加温した。混合物を室温で１５分間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２００ｍＬ）でクエンチした。水溶液をＥｔ_２Ｏ（２×３００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色油として得、これを、窒素雰囲気下室温で静置すると凝固した（１３．７ｇ、９９％）。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.43 (s, 9H), 1.48-1.60 (m, 2H), 2.00-2.07 (m, 2H), 3.07 (t, 2H),
3.57 (s, 2H), 3.69-3.79 (m, 2H), 9.55 (s, 1H).

（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート
無水メタノール（２４Ｌ）中の（Ｒ）−５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン（１８３５ｇ、８．６６ｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（クロロメチル）−４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシレート（２３１０ｇ、８．８３ｍｏｌ）を添加した。混合物を５０℃で１６時間撹拌し、室温に冷却した。ＴＨＦ（１５Ｌ）中のシアノ水素化ホウ素ナトリウム（１０００ｇ、１５．９ｍｏｌ）を、シリンジポンプにより２時間かけて添加した。混合物を、漂白剤浴への通気孔による窒素下、６０℃で２４時間撹拌した。反応物を２０℃に冷却し、カニューレによって、２４Ｌの２．５Ｍ水酸化ナトリウムおよび３０ＬのＤＣＭを含有するベッセルに移した。層を分離し、水性層をＤＣＭ（２×５Ｌ）で抽出した。水性層を処理して、残留シアノ水素化ホウ素ナトリウムを破壊した。合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、減圧下で濃縮した。粗材料を、ＭＴＢＥ（７Ｌ）中、４０℃で１時間および室温で１時間撹拌することによってスラリー化した。固体を濾過し、ＭＴＢＥ（２×５００ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン下５０℃で乾燥させて、表題生成物を白色結晶（３６５７ｇ、９０％）として得た。MS (ES+) 422.3 (M+H)⁺. ¹H NMR (CDCl₃)
δ 1.44 (s, 9H), 1.67 (dd, 4H), 1.84-1.93 (m, 1H),
2.07-2.16 (m, 1H), 2.72-2.81 (m,1H), 2.95-3.15 (m, 5H), 3.31 (dd, 4H), 3.85 (br
s, 1H), 7.12 (d, 1H), 7.28 (br s, 1H), 7.35 (br s, 1H). [α]_D ²⁰=+39.6°(c=1.06
mg/mL, MeOH).

（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート（４．０ｇ、９．４９ｍｍｏｌ）を投入した５０ｍＬのフラスコに、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（０．１７ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３．７３ｇ、３７．９７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．６５ｇ、１０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、続いて真空によって脱気し、次いで窒素で５回再充填した。脱酸素化した（添加前に３０分間窒素流）トルエン（４０ｍＬ）を混合物に添加し、反応物を１００℃で１．５時間加熱した。反応の完了をＨＰＬＣによってモニターした。ボロン酸エステル中間体が形成されたら、反応物を４０℃に冷却し、４Ｍ水酸化ナトリウムの脱気溶液（１１．８７ｍＬ、４７．４６ｍｍｏｌ）を投入し、続いて４−クロロ−６−メチルピリミジン（１．５３ｇ、１１．８７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、得られた混合物を９０℃に窒素下で５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水（２５ｍＬ）を投入した。２０分間撹拌後、混合物を濾過して黒色固体を除去した。１．５当量のＨＣｌ（４０ｍＬ）を含有する水溶液に有機層を抽出した。有機層を除去し、得られた溶液を（４ｇ）ＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｕｒｅＳｉ−チオールシリカゲルで１．５時間処理し、濾過した。水溶液を４ＮＮａＯＨでｐＨ７．８に調整し、トルエン（４０ｍＬ）で抽出した。真空下４５℃でトルエン層を濃縮しておよそ１５ｍＬとし、ヘプタン（７５ｍＬ）をゆっくり添加し、混合物を２０℃で１時間撹拌した。生成物を濾過し、真空下４５℃で８時間乾燥させて、表題化合物を白色固体（３．５６ｇ、８６％）として生じさせた。MS (ES+) 435.5 (M+H)⁺. ¹H NMR (CDCl₃)
δ 1.46 (s, 9H), 1.70-1.74 (m, 4H), 1.90-2.01 (m, 1H),
2.13-2.26 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.84-2.93 (m, 1H), 3.04-3.21 (m, 5H),
3.30-3.38 (m, 4H), 3.95-4.02 (m, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.87 (d, 1H),
7.95 (s, 1H), 9.12 (s, 1H).

２−［（Ｒ）−５−（６−メチル−ピリミジン−４−イル）−インダン−１−イル］−２，７−ジアザ−スピロ［３．５］ノナン二塩酸塩
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−カルボキシレート（７２．６ｇ、１６７ｍｍｏｌ）をメタノール（３６３ｍＬ）に懸濁し、１，４−ジオキサン中４ＭＨＣｌ（２５１ｍＬ）を添加した。２時間撹拌後、スラリーを濃縮乾固した。粗材料をＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に再懸濁し、濃縮した（３×）。得られた固体を真空下４５℃でさらに乾燥させて、表題化合物（７４．１ｇ、９９．９％）を生じさせた。MS (ES+) 335.2 (M+H)⁺. ¹H NMR (CD₃OD)
δ 2.16-2.23 (m, 5H), 2.59 (br s, 1H), 2.78-2.80 (m, 3H),
3.12 (br s, 1H), 3.19-3.24 (m, 4H), 3.37-3.49 (m, 1H), 4.14-4.23 (m, 3H), 4.49
(br s, 1H), 5.11 (br s, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.30-8.34 (m, 2H), 8.46 (s, 1H),
9.36 (s, 1H).

（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン
１０ｍＬのジクロロメタン中の２−［（Ｒ）−５−（６−メチル−ピリミジン−４−イル）−インダン−１−イル］−２，７−ジアザ−スピロ［３．５］ノナン二塩酸塩（５４０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリエチルアミン（４９２ｍｇ、４．９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物が均質溶液になったら、これを３ｍＬのジクロロメタン中の２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）酢酸塩酸塩（２５１ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を５分間撹拌し、２ｍＬのＤＭＦ中のＨＢＴＵ（４６２ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１．５時間撹拌した。１０ｍＬのＮａＨＣＯ_３の添加によって反応物をクエンチし、５０ｍＬのジクロロメタンで希釈した。有機層を飽和ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮した。残留物を５ｍＬのＣＨ_３ＣＮに溶解し、溶液を撹拌しながら１００℃に１時間加熱した。混合物を室温に冷却し、得られた固体を真空濾過して、所望の生成物をオフホワイトの粉末（４２８ｍｇ、６９％）として生じさせた。MS (ES+) 513.5 (M+H)⁺. ¹H NMR (CD₃OD)
δ 1.70-1.74 (m, 4H), 1.88-1.96 (m, 1H), 2.27-2.34 (m,
2H), 2.40 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.86-2.97 (m, 1H), 3.11-3.15 (m, 1H),
3.31-3.34 (m, 3H), 3.52-3.55 (m, 4H), 3.78 (s, 2H), 4.05-4.09 (m, 1H),
7.33 (s, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.78-7.79 (m, 1H), 7.94-8.03 (m, 2H), 8.93 (s,
1H). [α]_D ²⁰=+45.3°(c=2.5 mg/mL, MeOH).

インビトロアッセイ
放射性リガンド結合アッセイ
試験化合物の、グレリン受容体と結合する、したがってグレリン活性をモジュレートする潜在性を有する能力を計測するために、放射性リガンド置換アッセイを実施した。試験化合物のハイスループットスクリーニングにはＳＰＡフォーマットを利用し、より包括的な結合特性化にはフィルター結合が役立った。両方のフォーマットにおいて、試験化合物の親和性は、所与の濃度の放射性リガンドにおける特定の膜バッチについて、［^１２５Ｉ］グレリン結合を５０％減少させるために必要とされる化合物の濃度として定義されている、Ｋ_ｉ値として表現される。

患者グレリンＳＰＡ結合アッセイ
グレリンＳＰＡ結合アッセイは、０．５ｍｇのＳＰＡビーズ（コムギ胚芽凝集素コーティング、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＲＰＮＱ００６０）とカップリングした２５０ｎｇの患者ＧＨＳＲ１ａ（患者成長分泌促進物質受容体１ａを発現しているＨＥＫ２９３テトラサイクリン誘導性細胞株；膜として調製したもの）および５０ｐＭ［^１２５Ｉ］グレリン（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＥＸ−３８８）を含有する９０μｌの最終体積で、さらに試験化合物またはビヒクルの濃度を変動させて実施した。

手短に述べると、アッセイは、ＤＭＳＯ中２μｌの試験化合物（またはビヒクルとしてＤＭＳＯ）を含有する３８４ウェルプレート（Ｍａｔｒｉｘ、４３２２）内、室温で調製された。２８μｌのアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．２％のＢＳＡ、ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤−１錠／５０ｍｌ緩衝液、ｐＨ７．４）、いずれもアッセイ緩衝液中、３０μｌの８．３μｇ／ｍｌｈＧＨＳＲ１ａ膜および３０μｌの１５０ｐＭ［^１２５Ｉ］グレリンの添加によって、アッセイを開始した。

混合物を８時間インキュベートして結合が平衡に達するようにし、１４５０マイクロベータトリラックス（Ｗａｌｌａｃ）を使用する液体シンチレーション計数によって受容体−リガンド複合体の量を決定する。

患者グレリンフィルター結合アッセイ
グレリン結合アッセイは、１００ｎｇの患者ＧＨＳＲ１ａ（患者成長分泌促進物質受容体１ａを発現しているＨＥＫ２９３テトラサイクリン誘導性細胞株；膜として調製したもの）および５０ｐＭ［^１２５Ｉ］グレリン（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＥＸ−３８８）を含有する１００μｌの最終体積で、さらに試験化合物またはビヒクルの濃度を変動させて実施した。

手短に述べると、アッセイは、ＤＭＳＯ中２μｌの試験化合物（またはビヒクルとしてＤＭＳＯ）を含有する９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、３３５７）内、室温で調製された。２３μｌのアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．２％のＢＳＡ、ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤−１錠／５０ｍｌ緩衝液、ｐＨ７．４）、いずれもアッセイ緩衝液中、２５μｌの４μｇ／ｍｌｈＧＨＳＲ１ａ膜および５０μｌの１００ｐＭ［^１２５Ｉ］グレリンの添加によって、アッセイを開始した。

混合物を室温で９０分間インキュベートし、続いて、０．３％ＰＥＩで処理した９６ウェルガラス繊維濾過プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、６００５１７４）に移した。混合物を真空で吸引乾燥させ、２００μｌの氷冷５０ｍＭトリスｐＨ７．５で直ちに３回洗浄した。プレートを室温で終夜乾燥させ、３０μｌスーパーミックスシンチラント（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、１２００−４３９）を各ウェルに添加する。１４５０マイクロベータトリラックス（Ｗａｌｌａｃ）を使用する液体シンチレーション計数によって受容体−リガンド複合体の量を決定した。

イヌ（ＮＭ＿００１０９９９４５．１）、サル（ＸＭ＿００１０８４８８６．１）、マウス（ＮＭ＿１７７３３０）およびラット（ＮＭ＿０３２０７５）のＧＨＳＲ１ａ（いずれも固有のＨＥＫ２９３テトラサイクリン誘導性細胞株において発現したもの）について、使用される膜の最終量が下記の通りであることを除き、患者ＧＨＳＲ１ａについて記述したのと同一の様式で、放射性リガンド結合濾過フォーマットアッセイを実施した：２μｇのイヌＧＨＳＲ、２５０ｎｇのサルＧＨＳＲ、２００ｎｇのマウスＧＨＳＲ、または１２５ｎｇのラットＧＨＳＲ。

患者グレリン機能アッセイ
試験化合物の、患者ＧＨＳＲ１ａの活性をモジュレートする（アゴナイズする、アンタゴナイズする、部分的にアゴナイズする、逆アゴナイズする）能力を計測するために、ＤＥＬＦＩＡＧＴＰ結合アッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＤ０２６０およびＡＤ０２６１）を実施した。アッセイでは、ＧＤＰとＧＴＰとのリガンド依存性交換をモニターする。ＧＰＣＲ活性化は、受容体結合ＧＤＰがユーロピウム標識ＧＴＰによって置き換えられるため、蛍光の増加をもたらす。アンタゴニスト結合はＧＤＰ−ＧＴＰ交換を防止するのに対し、逆アゴニストの結合は受容体をＧＤＰ固定（不活性）状態に押しやり、いずれも蛍光の減少をもたらす。

グレリン機能アッセイは、７２０ｎｇの患者ＧＨＳＲ１ａ（患者成長分泌促進物質受容体１ａを発現しているＨＥＫ２９３テトラサイクリン誘導性細胞株、膜として調製したもの）、９ｎＭのＧＴＰ−ユーロピウムを含有する３９．５μｌの最終体積で、試験化合物またはビヒクルの濃度を変動させて実施した。受容体拮抗作用について試験するために、ＥＣ_８０濃度のアゴニストグレリン（Ａｎａｓｐｅｃ、２４１５８）、さらに試験化合物またはビヒクルの存在下で膜をインキュベートした。

手短に述べると、試験化合物は、３８４ウェルプレート（Ｍａｔｒｉｘ、４３４０）内、室温で調製された。試験化合物を最初にＤＭＳＯ中で希釈し、次いで、９ｎＭのグレリンペプチドを加えておよび加えずに、１５μｌから１０μｌの基本緩衝液（ｂａｓａｌｂｕｆｆｅｒ）（５０ｍＭのＨＥＰＥＳｐＨ７．４、３．７ｍＭのＭｇＣｌ_２、２５０μＭのＥＧＴＡ、１２５ｎＭのＧＤＰ）として添加した。次いで、試料を６μｌとして、基本緩衝液中３０μｌの２４μｇ／ｍｌｈＧＨＳＲ１ａ膜および０．３５ｍｇ／ｍｌのサポニン（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＤ０２６１）を含有する３８４ウェルフィルタープレート（Ｐａｌｌ、５０７１）に移した。

混合物を、穏やかに振とうしながら室温で２４時間インキュベートし、続いて、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４中３．５μｌの１００ｎＭＧＴＰ−ユーロピウムを添加した。試料を光から遮蔽し、穏やかに振とうしながら室温でさらに９０分間インキュベートした。反応物を真空で吸引乾燥させ、７５μｌの氷冷１ｘＧＴＰ洗浄液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＤ０２６１）で３回洗浄し、励起フィルター３２０ｎｍおよび発光フィルター６１５ｎｍを使用するエンビジョン２１０１マルチラベルリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で直ちに読み取った。

患者分散島細胞アッセイ
１日目：点滴（ｉｖ）バッグ内の患者島細胞を取得する。ｉｖバッグに連結器を接続することによって島細胞をデカントし、液体を５０ｍＬの円錐管内にデカントする。バッグを２０ｍＬの培地ですすぎ、プールする。細胞を毎分１０００回転（ｒｐｍ）で１分間スピンさせる。次いで、３７℃、５％ＣＯ_２で細胞を終夜インキュベートする（１０ｃｍ^２の懸濁培養用ディッシュ（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｄｉｓｈ）、１０ｍＬの培地／プレート）。

２日目：島細胞を５０ｍＬの円錐管に移し、カルシウムを含まないハンクス平衡塩緩衝液を添加して混合し、次いで、混合物を１０００ｒｐｍで１分間スピンさせる。次いで、カルシウムを含まないハンクス平衡塩緩衝液で島を洗浄し、混合し、その後、１０００ｒｐｍで１分間スピンさせる。次いで、１５ｍＬを除いてすべての緩衝液をピペットによって除去する。次いで、３０μＬの５００ｍＭＥＤＴＡ［１ｍＭ］を添加し、その後、室温で８分間インキュベートする。次いで、これに７５μＬの０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡおよび１５μｌの２ｍｇ／ｍｌＤＮＡｓｅＩ［２μｇ／ｍｌ］を添加する。混合物を６０ｒｐｍで振とうしながら３０℃で１０分間インキュベートする。１ｍＬのピペットで（５０回）粉砕することにより、凝塊を分散させる。５０ｍＬの培養培地を添加し、それぞれ６３μＭのナイロン膜に通過させる。混合物を１０００ｒｐｍで１分間スピンさせ、次いで培地をピペットによって除去する。ペレットを再懸濁し、細胞をおよそ２５ｍＬの培養培地で再度洗浄し、１０００ｒｐｍで１分間スピンさせる。上清を除去し、次いでペレットをおよそ５ｍＬの培養培地で再懸濁し、細胞を計数する。「Ｖ」底プレートに、５０００細胞／ウェル（２００μｌ／ウェル）で播種する。プレートを１０００ｒｐｍで５分間スピンさせ、細胞培養インキュベーションに入れる。カルシウムイメージングのために６００，０００個の細胞を取り出す。

３日目：分散島アッセイ
培養培地を、３ｍＭのグルコースを含有する１００μｌのインキュベーション緩衝液と交換する。プレートを１０００ｒｐｍで５分間スピンさせて、島を再ペレット化する。９５％Ｏ_２／５％ＣＯ_２ガスが連続的に供給される３７℃の水浴内でプレートを４５分間インキュベートする。プレインキュベーション緩衝液を、適切なグルコース濃度（各試料につきｎ＝４）で種々の試験化合物を含有する５０μｌのインキュベーション緩衝液と交換する。プレートを１０００ｒｐｍで５分間スピンさせて、細胞を再ペレット化する。９５％Ｏ_２／５％ＣＯ_２ガスが連続的に供給される水浴にプレートを６０分間戻す。４０μｌを別のプレートに移し、ＥＬＩＳＡ患者インスリンアッセイ（ＡＬＰＣＯ患者インスリンＥＬＩＳＡ；ＡＬＰＣＯ、Ｓａｌｅｍ、ＮｅｗＨａｍｐｓｈｉｒｅ、ＵＳＡから入手可能なカタログ番号８０−ＩＮＳＨＵ−Ｅ１０）を使用し、インスリンについてアッセイする。

表１において提供する薬理学的データは、実施例１について取得されたものである。ＩＣ５０（５．０２ｎＭ）およびＫｉデータ（４．３７ｎＭ）は、患者グレリンＳＰＡ結合アッセイから取得したものである。「ｎ」と表されている欄は、試験化合物をアッセイした回数である。試験化合物の機能性は、患者グレリン機能アッセイを使用して逆アゴニストであると決定したものである。

実施例１は、強力な（患者グレリンフィルター結合アッセイによりヒトＫ_ｄ＝３ｎＭ；種間で同様）、選択的な（広範な一連の受容体、輸送体、イオンチャネルおよび酵素に対して、ＩＣ_５０＞１ｕＭ）、適度なオン／オフ逆アゴニスト、成長ホルモン分泌促進物質受容体（ＧＨＳ−１ａＲ）の競合的アンタゴニストである。

インビボアッセイ
雄ウィスターハノーバーラットに、単回用量（１、１０、５０または１５０ｍｇ／ｋｇ）の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン（実施例１）を、経口強制飼養によって投与して、自発活動に対する実施例１の効果を２１時間にわたって評価した（図１）。動物を、投薬前１時間、自発運動装置に慣れさせた。明かりを午後４時に消し、午前４時に点けた。午後４時に動物に投薬した。投薬後２０時間、活動をモニターした。血漿、脳およびＣＳＦを、サテライト群の動物から、Ｔｍａｘ（投薬３０分後）に採取した。

投薬３５〜６５分後において、ビヒクル処置動物と比較した際に、１ｍｇ／ｋｇで生物学的にまたは統計的に有意な効果は見られなかった。１０ｍｇ／ｋｇでは、実施例１は、投薬３５〜６５分後において、育成を５６％および総自発活動を６０％減少させた。５０ｍｇ／ｋｇでは、実施例１は、育成を４３％および総自発活動を４８％減少させた。実施例１は、１５０ｍｇ／ｋｇでは、投薬３５〜６５分後、ビヒクル対照ラット（Ｐ＜０．５）と比較した際に統計的に有意な、総活動における低減を生成した。実施例１は、投薬２０時間後、総活動における統計的にまたは生物学的に有意な低減を生成しなかった。実施例１は、いかなる用量でも、活動過剰を誘発しなかった。

表２において示されている実施例１の血漿および脳レベルは、投薬３０分後に決定した。

３つの臨床研究（図２）において、ヒトにおける傾眠により用量応答関係が観察され、ここで、１４日間にわたる１００ｍｇＢＩＤの最高用量および３００ｍｇの単回用量において、７５から１００％の間の対象が、傾眠または睡眠に関係する効果を報告した。患者に、実施例１を、Ｂ３３０１００１、Ｂ３３０１００２では用時調製した懸濁液、Ｂ３３０１００７ではＩＲとして、およびＢ３３０１００７では用時調製した浸透性カプセル剤（ＥＰＯＣ；ｅｘｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓｌｙｐｒｅｐａｒｅｄｏｓｍｏｔｉｃｃａｐｓｕｌｅ）として投与した。実施例１は安全であり、１４日間にわたる最大１００ｍｇＢＩＤでヒトにおいて概して良好な耐容性を示し、これは、２０時間にわたる推定８０％の全身の受容体占有率およびおよそ３時間にわたる７０％の中枢の受容体占有率と等しいものであった。心拍数の用量依存的増加（１分間当たり最大約１０回）、ならびにグレリン誘発性成長ホルモン分泌および食後グルコース両方の軽減が、急性投薬後に見られた。これらの効果の３つすべてが、ＢＩＤ投薬の１４日目までに完全にタキフィラキシー（ｔａｃｈｙｐｈｙｌａｘ）となるように思われた。

霊長類研究において、実施例１の晩の投薬３時間後の睡眠持続時間および食物摂取に対する実施例１の効果を、１日１回（ＱＤ）または１日２回（ＢＩＤ）のいずれかで投薬して研究した。８匹の健康な成体（５．８から９．７歳）の雄赤毛猿（インド産のアカゲザル（Ｍａｃａｃａｍｕｌａｔｔａ））を使用した。

動物を並行して研究した。クロスオーバー計画に従って、動物のうち４匹に、研究の第一相中にＱＤ、研究の第二相中にＢＩＤで、実施例１（または対照としてビヒクル）を投与した。逆の処置スケジュールは、残りの４匹の動物のために使用した。実施例１をＱＤで投与した場合、単回用量を晩に投与した。各処置期間は、連続２８〜３０日間続いた。ビヒクル処置は、実施例１が投与される相の直前に、１０〜１４日間続いた。また、動物を睡眠／概日チャンバー内に保って、慣れさせた。処置は、タイマー制御されたポンプを使用して自動的に分注される液体溶液として投与した。

睡眠／活動の内因性リズムおよび自己投与食物摂取を決定するために、処置期間全体を通して、動物を、光制御され防音された睡眠／概日チャンバー内、薄暗い照明の一定条件下に維持した。

データ収集：
睡眠／活動サイクルおよび睡眠持続時間は、Ｍａｓｕｄａら、ＪＢｉｏｌＲｈｙｔｈｍｓ．２０１０年１０月；２５（５）：３６１〜７１、ＩｎｔｒｉｎｓｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｒｈｙｔｈｍｓｉｎＭａｃａｃａｍｕｌａｔｔａ：ｔｈｅｉｒｅｎｔｒａｉｎｍｅｎｔｔｏｌｉｇｈｔａｎｄｍｅｌａｔｏｎｉｎにおいて記述されている通りの連続オンラインアクティグラフ画像分析技術を使用して記録した。赤毛猿における睡眠対覚醒状態のアクティグラフデータ分析のためのソフトウェアアルゴリズムは、Ｚｈｄａｎｏｖａら、ＪＢｉｏｌＲｈｙｔｈｍｓ．２０１１年４月；２６（２）：１４９〜５９、Ａｇｉｎｇｏｆｉｎｔｒｉｎｓｉｃｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｓａｎｄｓｌｅｅｐｉｎａｄｉｕｒｎａｌｎｏｎｈｕｍａｎｐｒｉｍａｔｅ，Ｍａｃａｃａｍｕｌａｔｔａにおいて説明されている。入眠および睡眠持続時間推定は、この種における睡眠ポリグラフとアクティグラフ睡眠との間の比較に基づくものであった。

各概日チャンバーは、自動ペレットディスペンサー（ＥＮＶ−２０３−１０００、ＭｅｄＡｓｓｏｃｉａｔｅｓＩｎｃ．、Ｓｔ．Ａｌｂａｎｓ、ＶＴ）と接続された個々のタッチスクリーンモニターを備えていた。これは、動いているスクリーン上の標的を押すことにより、１ｇの飼料ペレット（栄養学的に完全なダストレスプレシジョン（ｄｕｓｔｌｅｓｓｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）ペレット、Ｂｉｏ−Ｓｅｒｖ、Ｆｒｅｎｃｈｔｏｗｎ、ＮＪ）の自由裁量による２４時間の自己投与を可能にした。ペレットが分配される毎に時間を記録した。

データ分析は、ｐ＜０．０５の有意性のレベルで、線形混合モデル（ＳＰＳＳ）を使用して行った。データを、各処置条件：ビヒクルまたは実施例１のＱＤまたはＢＩＤ投与について、群平均（平均の標準誤差（ＳＥＭ；ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｏｆｔｈｅｍｅａｎｓ））として提示した。

図３および４は、ＱＤビヒクルまたは実施例１を晩に受けている間の個々の動物の活動パターン（図３）または食物摂取パターン（図４）についてのデータを提供するものである。１２：１２時間の明−暗サイクル（ＬＤ）、続いてその後の一定の薄暗い照明条件（グラフの右側に沿った矢印）中の動物からアクティグラフ記録を取った。この個体は、時間とともに遅延している全体的な活動パターン（右への緩やかなシフト）によって例証されている、２４時間よりも長い内因性概日期間を有していた。ビヒクルまたは実施例１は、同じ時刻（１７：００時）に投与した。ビヒクル処置期間（グラフの右側に沿った破線）の始まりにおいて、これは期待される入眠の２時間前（主観的夜の始まり）に対応していた。実施例１処置が開始される時間（グラフの右側に沿った実線）までは、この時刻は期待される入眠の３．５時間前頃に対応していた。

実施例１による処置は、睡眠潜時を大幅に低減させて入眠を容易にし、この効果は処置期間全体を通して続いた。この効果はまた、活動パターンの左への全面的なシフト（起床時間における相前進）にもつながり、より早い入眠時間は、主観的朝における同様に早い覚醒時間をもたらした。

実施例１処置は、投与から間もなく食物摂取を大幅に低減させ、この効果は処置期間全体を通して続いた。この効果はまた、食物摂取パターンの左への全面的なシフト（朝食の時間における相前進）にもつながった。この動物における食物摂取パターンは、活動パターンに準じていた。図３および図４を比較する。

図５は、ビヒクル（１群当たりＮ＝８（ＱＤ対ＢＩＤ））と比較した、実施例１の晩の処置後３時間以内の睡眠持続時間の変化を提供するものである。両方の群について、実施例１の処置の３時間以内に、ビヒクルだけの投与と比較して、睡眠持続時間における有意な増大が記録された。データは、動物がビヒクルを受けている場合について、実施例１を受けている群における他の動物と比較した、睡眠持続時間のパーセント変化として表現されている（エラーバーはＳＥＭ；ｐ＜０．０１対対照を提供している）。

図６は、実施例１またはビヒクルの晩の投与後３時間以内の晩の食物摂取の変化を提供するものである。図６は、実施例１の投与の３時間以内に、ビヒクルだけの投与と比較した場合の、食物摂取における有意な減少が両方の群について記録された実施例１ＱＤまたはＢＩＤ（１群当たりＮ＝８（ＱＤ対ＢＩＤ））を受けている動物について変化を提供するものである。データは、ビヒクルまたは実施例１の投与後３時間以内の食物摂取のパーセントとして表現されている（エラーバーはＳＥＭ；ｐ＜０．０１対対照を提供している）。

Claims

患者における睡眠障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする前記患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法。
睡眠障害が原発性不眠症である、請求項１に記載の方法。
睡眠障害が日中の過剰な眠気である、請求項１に記載の方法。
前記患者がプラダーウィリ症候群を有する、請求項３に記載の方法。
睡眠障害が夜間摂食症候群である、請求項１に記載の方法。
患者における睡眠障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする前記患者に、治療有効量の（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法。
睡眠障害が原発性不眠症である、請求項６に記載の方法。
睡眠障害が日中の過剰な眠気である、請求項６に記載の方法。
前記患者がプラダーウィリ症候群を有する、請求項８に記載の方法。
睡眠障害が夜間摂食症候群である、請求項６に記載の方法。
（Ｒ）−２−（２−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）−１−（２−（５−（６−メチルピリミジン−４−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２，７−ジアザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）エタノン、または薬学的に許容できるその塩が、別の薬理活性剤と組み合わせて投与される、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。