JP2015517525A - 糖尿病治療のためのグルコキナーゼ活性化因子組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、メトホルミン、シタグリプチンまたはエキセナチドからなる群より選択される抗糖尿病薬剤と組み合わせて、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イル−スルファニル｝−酢酸（ＦＲＩ−１）を含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、ＩＩ型糖尿病治療を経ている被験体において、インスリン感受性を回復させ、そして体重減少を含めて、ＩＩ型糖尿病を治療する際の、該薬学的組成物の使用にも関する。【選択図】図６

Description

本発明は、メトホルミン、シタグリプチンまたはエキセナチドからなる群より選択される抗糖尿病薬剤と組み合わせて、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸（ＦＲＩ−１）を含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、ＩＩ型糖尿病治療を経ている被験体において、インスリン感受性を回復させ、そして体重減少を含めて、ＩＩ型糖尿病を治療する際の、該薬学的組成物の使用にも関する。

糖尿病は、被験体におけるグルコースレベル上昇によって現れる、グルコース代謝障害によって特徴付けられる障害である。疾患の根底にある欠損に基づいて、２つの型の糖尿病がある。Ｉ型糖尿病は、被験体が、グルコース利用を制御するホルモンであるインスリンを産生する膵臓β細胞を欠く場合に生じる。ＩＩ型糖尿病は、被験体が、他の異常を含めて、β細胞機能障害を有する場合に生じる。ＩＩ型糖尿病被験体において、血漿インスリンレベルは、非糖尿病被験体に比較して、同じであるかまたはさらに上昇している可能性もある。こうした血漿インスリンレベルは、上昇している間、筋肉におけるインスリン刺激性グルコース取り込み障害を導く。また、インスリン耐性脂肪細胞は、脂質およびトリグリセリドを動員する能力を減少させる。その結果、循環グルコースおよび脂質の増加が見られ、ＩＩ型糖尿病にしばしば関連する代謝異常が導かれる。

Ｉ型被験体は、現在、インスリンで治療されている。ＩＩ型被験体の大部分は、スルホニル尿素またはメトホルミンで治療される一方、これらの被験体は、次第に、単一療法に反応する能力を失い、したがって、多剤での治療を必要とする。

血液グルコースレベルを正常化するためのオプションは、併用療法の使用である。例えば、ＩＩ型糖尿病のＦＤＡが認可する併用治療は、メトホルミンとジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤の使用である。現在研究中である別の併用治療は、メトホルミンと組み合わせたグルコキナーゼ（「ＧＫ」）活性化因子を使用し、そしてＷＯ１１／１４９９４５に記載される。

ＩＩ型糖尿病のための療法の長期有効性は、治療を受けている被験体における副作用、例えば低血糖症および体重増加が発展するリスクによって限定される。したがって、ＩＩ型糖尿病を治療するためのより優れたオプションを発見する必要性があり、これには、インスリン感受性の回復および／またはこうした治療を経ている被験体における体重増加のコントロールが含まれる。

ＷＯ１１／１４９９４５

本発明は、１またはそれより多いグルコキナーゼ活性化因子および１またはそれより多い抗糖尿病薬剤を含む薬学的組成物、ならびに２型糖尿病および関連障害を治療する際のその使用を提供する。

１つの側面において、本発明は、グルコキナーゼ活性化因子、または薬学的に許容されうるその塩、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、ＧＬＰ−１類似体、または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される、抗糖尿病薬剤；および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、希釈剤またはその混合物を含む、薬学的組成物を提供する。いくつかの態様において、グルコキナーゼ活性化因子、抗糖尿病薬剤、または両方は、最適以下の量で存在する。グルコキナーゼ活性化因子は肝臓選択的グルコキナーゼ活性化因子であってもよい。いくつかの態様において、グルコキナーゼ活性化因子は、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸または薬学的に許容されうるその塩であってもよい。別の態様において、抗糖尿病薬剤は、シタグリプチン、エキセナチド、または薬学的に許容されうるその塩である。

別の側面において、本発明は、ＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。いくつかの態様において、グルコキナーゼ活性化因子、抗糖尿病薬剤、または両方は最適以下の量で存在する。グルコキナーゼ活性化因子は肝臓選択的グルコキナーゼ活性化因子であってもよい。いくつかの態様において、グルコキナーゼ活性化因子は、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸または薬学的に許容されうるその塩であってもよい。他の態様において、抗糖尿病薬剤は、シタグリプチン、エキセナチド、または薬学的に許容されうるその塩である。

別の側面において、本発明は、血糖コントロールを改善する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

別の側面において、本発明は、被験体における状態を治療する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を投与する工程を含み、状態が、代謝障害、グルコース不耐性、糖尿病前症、インスリン耐性、高血糖症、耐糖能障害（ＩＧＴ）、シンドロームＸ、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）、Ｉ型糖尿病、脂質異常症、高脂血症、高リポタンパク血症、高血圧、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、糖尿病から生じるかまたは糖尿病に関連する合併症、心臓血管疾患、および肥満からなる群より選択される、前記方法を提供する。

別の側面において、本発明は、血糖を正常化するかまたは低下させるか；ＩＧＴからＩＩ型糖尿病までを遅延させるか；インスリン非要求性ＩＩ型糖尿病のインスリン要求性ＩＩ型糖尿病への進行を遅延させるか；食物摂取を低下させるか；食欲を制御するか；摂食行動を制御するか；エンテロインクレチン（ｅｎｔｅｒｏｉｎｃｒｅｔｉｎ）の分泌を増進させるか；グルコース耐性を改善するか；空腹時血漿グルコースを減少させるか；食後血漿グルコースを減少させるか；グリコシル化ヘモグロビンＨｂＡ１ｃを減少させるか；糖尿病の進行を緩慢にし、糖尿病の合併症を遅延させるかまたは治療するか；体重を減少させるかまたは体重増加を防止するかまたは体重減少を促進するか；膵臓ベータ細胞の変性を治療するか；膵臓ベータ細胞の機能性を改善し、そして／または回復させるか；膵臓インスリン分泌の機能性を刺激し、そして／または回復させるか；グルコースのリン酸化を増進させるか；インスリン感受性を維持するか；インスリン感受性を改善するか；高インスリン血症を治療するか；あるいはインスリン耐性を治療する方法であって、薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の他の特徴および側面もまた、本明細書に記載する。

図１は、オスｏｂ／ｏｂマウスにおける体重減少に対する、ＦＲＩ−１およびメトホルミンの組み合わせの相乗効果を示す。 図２は、オスｏｂ／ｏｂマウスにおける血漿グルコースおよびインスリンに対する、ＦＲＩ−１およびメトホルミンの組み合わせの薬理学的効果を示す。 図３は、インスリン感受性指数（ＩＳＩ）によって測定されるような、インスリン感受性増加に対する、ＦＲＩ−１およびメトホルミンの組み合わせの相乗効果を示す。 図４は、メス食餌誘導性肥満ラットにおける体重減少に対する、ＦＲＩ−１およびシタグリプチンの組み合わせの相乗効果を示す。 図５は、オスｏｂ／ｏｂマウスにおける血漿グルコースおよびインスリンに対する、ＦＲＩ−１およびエキセナチドの組み合わせの薬理学的効果を示す。 図６は、インスリン感受性指数によって測定されるような、インスリン感受性増加に対する、ＦＲＩ−１およびエキセナチドの組み合わせの相乗効果を示す。

Ｉ．定義
用語「ＧＫ活性化因子」は、グルコキナーゼ（ＧＫ）センサー系を感作する（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ）化合物を指す。ＧＫは、ヘキソキナーゼ・ファミリーに属する酵素であり、これは、グルコース代謝の第一段階、すなわちグルコースからグルコース−６リン酸への変換を触媒する。ＧＫは、膵臓および肝臓において、グルコースセンサーとして機能する。１つの態様において、ＧＫ活性化因子は、グルコースの存在下で、膵臓によるインスリン分泌を増加させない、肝臓選択的活性化因子である。例示的なＧＫ活性化因子には、ＦＲＩ−１またはＷＯ０５／０６６１４５に開示されるものが含まれる。１つの態様において、ＧＫ活性化因子はＦＲＩ−１である。

用語「ＦＲＩ−１」は、化学名｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸によって示される。本明細書において、ＦＲＩ−１は、遊離酸に限定されず、ＦＲＩ−１の薬学的に許容されうる塩も含まれる。１つの態様において、ＦＲＩ−１は遊離酸である。

用語「抗糖尿病薬剤」は、文献に見られる剤を指す。本明細書において、抗糖尿病薬剤には、薬学的に許容されうる塩、プロドラッグ、および抗糖尿病薬剤のプロドラッグの薬学的に許容されうる塩が含まれる。抗糖尿病薬剤は、例えばインスリン、インスリン感作活性化剤、インスリン、スルホンアミド、ビグアニジン誘導体およびα−グルコシダーゼ阻害剤の産生を増進させる活性剤のカテゴリーに属する。インスリンは、例えば、組換え技術によって調製されるヒト・インスリンである。インスリン感作活性剤は、インスリンの効果を増進させ、これには例えば、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）ガンマ−アゴニストが含まれ、チアゾリジンジオン誘導体、例えばピオグリタゾン、トログリタゾン、シグリタゾン、リボグリタゾン、ロシグリタゾンまたは他の２，４−チアゾリジンジオン誘導体が含まれる。インスリン産生を増進させる活性剤には、例えば、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、例えばシタグリプチン、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、リナグリプチン、デュトグリプチン、ゲミグリプチンまたはアログリプチン；ＧＬＰ−１類似体、例えばエキセナチド、リラグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド、またはリキシセナチド；ならびにＡＴＰ感受性カリウムチャネル調節剤、例えばミチグリニド、レパグリニドまたはナテグリニドが含まれる。スルホンアミドには、例えばスルホニル尿素誘導体、例えばトルブタミド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリピジド、グリクラジド、グリメピリド、グリキドン、グリボルヌリド、グリソキセピド、グリベンクラミド、グリセンチド、グリソラミド、グリブゾール、またはグリクロピラミドが含まれる。ビグアニジン誘導体には、例えば、メトホルミン、ブホルミン、またはフェンホルミンが含まれる。α−グルコシダーゼ阻害剤には、例えばミグリトール、アカルボースまたはボグリボースが含まれる。１つの態様において、抗糖尿病薬剤は、任意の投薬型、例えば経口、吸入または注射可能投薬型に含まれてもよい。別の態様において、抗糖尿病薬剤は、経口投薬型である。

用語「メトホルミン」は、化学名Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド酸ジアミドによって示される。本明細書において、メトホルミンは遊離塩基に限定されず、メトホルミンの薬学的に許容されうる塩もまた含まれる。１つの態様において、メトホルミンは塩酸メトホルミンである。

用語「ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤」は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶが、Ｎ末端プロリンまたはアラニン残基のいずれかを有する、タンパク質のＮ末端部分に位置するジペプチドを切断する作用を阻害する化合物を意味する。１つの態様において、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤はシタグリプチンである。

用語「シタグリプチン」は、化学名、（３Ｒ）−３−アミノ−１−［３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−５Ｈ−［１，２，４−］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル］−４−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−１−オンによって示される。本明細書において、シタグリプチンは遊離塩基に限定されず、シタグリプチンの薬学的に許容されうる塩、およびシタグリプチンの異性体も含まれる。１つの態様において、シタグリプチンはリン酸シタグリプチンである。

用語「ＧＬＰ−１類似体」は、グルカゴン様ペプチド−１（プログルカゴンともまた称される）に対して、約３０％〜約９０％、または約４０％〜約７５％の配列類似性を有するグルカゴン様ペプチド−１化合物を意味する。ＧＬＰ−１は、インスリン分泌促進性効果を有し、膵臓ベータ細胞からのインスリン分泌を刺激する。１つの態様において、ＧＬＰ−１類似体はエキセナチドである。

用語「エキセナチド」は、配列Ｈ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ_２（配列番号１）を有する３９アミノ酸ペプチドに相当する。本明細書において、エキセナチドは遊離塩基に限定されず、エキセナチドの薬学的に許容されうる塩も含まれる。１つの態様において、エキセナチドは遊離塩基である。

用語「薬学的に許容されうる塩」は、過度の毒性、刺激、アレルギー性反応等を伴わずに、ヒトおよびより低次の動物の組織と接触させて使用するために適しており、そして妥当な利益／リスク比と同等である、塩を指す。薬学的に許容されうる塩には、塩基として機能する主要化合物を、無機酸または有機酸と反応させて、塩、例えば塩酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、カンファースルホン酸、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、クエン酸、ギ酸、臭化水素酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、サリチル酸、マンデル酸、およびカルボン酸の塩を形成することによって得られるものが含まれる。薬学的に許容されうる塩にはまた、主要化合物が酸として機能し、そして適切な塩基と反応して、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、およびコリン塩を形成するものも含まれる。当業者は、既知の多くの方法のいずれかによって、化合物を、適切な無機酸または有機酸と反応させることによって、請求する化合物の酸付加塩を調製可能であることをさらに認識するであろう。あるいは、多様な既知の方法を通じて、本発明の化合物を適切な塩基と反応させることによって、アルカリおよびアルカリ土類金属塩を調製してもよい。

以下は、無機酸または有機酸との反応によって得られうる酸塩のさらなる例である；酢酸塩、ＤＩＰＥＡ塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、メシル酸塩およびウンデカン酸塩。１つの態様において、薬学的に許容されうる塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヒドロギ酸（ｈｙｄｒｏｆｏｒｍａｔｅ）塩、またはマレイン酸塩であってもよい。

用語「組み合わせて」は、別の化合物と組み合わせて化合物を投与することに対して、制限がない、すなわち、方法、型等の制限がない、薬学的組成物を意味する。例えば、いくつかの態様において、ＦＲＩ−１および抗糖尿病薬剤を、単一の投薬型で、例えば固定用量の組み合わせで、一緒に投与する。他の態様において、ＦＲＩ−１および抗糖尿病薬剤を別々に、別個の投薬型で投与し、例えば一方は経口調製物であってもよく、そしてもう一方は吸入用量型であってもよく、あるいは同じ投薬型として、あるいは別個の容器、例えばブリスター中であってもよい。別の態様において、ＦＲＩ−１および抗糖尿病薬剤の両方を、同時に投与するか、あるいは約５分間離して、または約１５分間離して、または約３０分間離して、または約１時間離して、または約２時間離して、または約４時間離して、または約８時間離して、または約１２時間離して、または約２４時間離して、連続投与し、ここでＦＲＩ−１が抗糖尿病薬剤よりも早く投与されるか、またはその逆である。

用語「治療することまたは治療」は、疾患、状態または障害を管理するかまたはコントロールすることを意味する。これには、疾患、障害もしくは状態または少なくとも１つのその症状の軽減、緩和、寛解、遅延、減少、逆転、または改善；疾患、障害、または状態の開始の遅延；あるいは疾患、障害、または状態およびその特徴的な症状の性質に応じた、疾患、障害、もしくは状態、またはその特徴的な症状の再発の遅延が含まれる。

用語「被験体」は、オスおよびメスの両方を含む動物を意味する。１つの態様において、被験体は哺乳動物を意味する。別の態様において、被験体はヒトを意味する。

用語「療法的効果」は、研究者、獣医、医師、患者または他の臨床家によって追究されている、治療されている疾患の症状の減少または緩和を含む、組織、系、または被験体における生物学的または医学的反応を誘発する活性成分（例えばＧＫ活性化因子または抗糖尿病薬剤）の量を意味する。

用語「血糖コントロール」は、診断パラメータまたはＨｂＡ１ｃおよび／またはＦＰＧによって測定されるような糖尿病の管理を意味する。不適切なまたは不十分な血糖コントロールを有する被験体には、ベースラインの約７．５％〜約１５％、ベースラインの約８％〜約１３％、およびベースラインの約９％〜約１２％のＨｂＡ１ｃ値を有する被験体が含まれる。１つの態様において、不適切な血糖コントロールを有する被験体には、メトホルミンでの治療にもかかわらず、ベースラインの７．５％〜約１０％のＨｂＡ１ｃ値を有する被験体が含まれる。

本明細書において、用語「からなる」は、絶対の制限ではなく、そしてこれには列挙されない構成要素も含まれる。典型的には、列挙されない構成要素には、元来会合していた不純物、または本発明には関連しない構成要素が含まれる。

ＩＩ．薬学的組成物
１つの態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＧＫ活性化因子、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤または賦形剤を含む、薬学的組成物を提供する。１つの態様において、薬学的に許容されうるキャリアーは、２つの別個の投薬型で存在し、一方の投薬型はＧＫ活性化因子を含み、そして他方の投薬型は抗糖尿病薬剤を含む。別の態様において、組み合わせの活性成分は、単一の投薬型に組み合わせられる。さらに別の態様において、投薬型は経口使用のために意図される。別の態様において、薬学的組成物は、ＧＫ活性化因子および抗糖尿病薬剤からなる。

経口使用のために意図される組成物は、任意の既知の方法にしたがって調製可能であり、そしてこうした組成物は、薬学的に洗練され、そして口当たりがよい調製物を提供するため、甘味剤、フレーバー剤、着色剤、および保存剤からなる群より選択される１またはそれより多い剤を含有してもよい。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容されうる賦形剤と混合された活性成分を含有してもよい。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒化剤および崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；ならびに潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってもよい。

別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチド、または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。

別の態様において、本発明は、メトホルミンまたは薬学的に許容されうるその塩と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を提供する。

別の態様において、本発明は、シタグリプチンまたは薬学的に許容されうるその塩と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を提供する。

別の態様において、本発明は、エキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を提供する。

本発明者らは、驚くべきことに、メトホルミン、シタグリプチンまたはエキセナチドと組み合わされたＦＲＩ−１の投与が、こうした修飾を必要とする被験体において、グルコース代謝を修飾する背景において相乗的であることを見出した。別の態様において、本発明者らは、驚くべきことに、シタグリプチンと組み合わされたＦＲＩ−１の投与が、グルコース代謝障害を有する被験体において、体重をコントロールする際に相乗的であることを見出した。さらに、本発明者らは、驚くべきことに、エキセナチドと組み合わされたＦＲＩ−１の投与が、グルコース代謝障害を有する被験体において、インスリン感受性を改善する背景において相乗的であることを見出した。さらに、本発明者らは、驚くべきことに、メトホルミンと組み合わされたＦＲＩ−１の投与が、グルコース代謝障害を有する被験体において、体重をコントロールする背景において、ならびにグルコース代謝が改善された被験体において、インスリン感受性を改善する背景においての両方で、相乗的であることを見出した。１つの態様において、本発明は、少用量のＦＲＩ−１または抗糖尿病薬剤のいずれかまたは両方を提供し、ここで少用量は、これらが療法的効果のため、ＦＲＩ−１または抗糖尿病薬剤いずれかの最適な用量未満であるようなものである。別の態様において、本発明のいずれかの活性成分の少用量を同時にまたは連続して任意の順序で投与する。

薬学的に許容されうる成分の選択を含めて、一般の当業者に知られる方法によって、薬学的組成物を調製してもよい。

１つの態様において、本発明は、別個の固形単位、例えばカプセル、錠剤、丸剤、粉末、顆粒等として投与される経口投薬型である、薬学的組成物を提供する。経口投薬型には、当該技術分野に知られる、任意の薬学的キャリアー、希釈剤（例えばスクロース、マンニトール、ラクトース、デンプン）または賦形剤が含まれてもよく、限定されるわけではないが、懸濁剤、可溶化剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、保存剤、着色剤、フレーバー剤、潤滑剤を含む剤が使用可能である。いくつかの態様において、本発明は、ＧＫ活性化因子および抗糖尿病薬剤のいずれかまたは両方の経口投薬型を提供する。

別の態様において、本発明は、液体型として投与される経口投薬型である薬学的組成物を提供する。例示的な液体経口投薬型は、水溶液および非水性溶液、エマルジョン、懸濁剤、シロップ、およびエリキシルである。こうした投薬型はまた、当該技術分野に知られる適切な不活性希釈剤、例えば水および当該技術分野に知られる適切な賦形剤、例えば保存剤、湿潤剤、甘味剤、フレーバー剤、ならびに本発明の化合物の乳化剤および／または懸濁剤も含有しうる。

さらに別の態様において、本発明は、等張性無菌溶液の形の、例えば静脈内への、注射可能投薬型である薬学的組成物を提供する。さらに別の態様において、本発明は、ＧＫ活性化因子および抗糖尿病薬剤のいずれかまたは両方のための注射可能投薬型を提供する。

別の態様において、本発明は、例えば粉末（例えば微粒子化）の形の、あるいは微粒化（ａｔｏｍｉｚｅｄ）溶液または懸濁物の形の、吸入可能投薬型である薬学的組成物を提供する。さらに別の態様において、本発明は、ＧＫ活性化因子および抗糖尿病薬剤のいずれかまたは両方のための吸入可能投薬型を提供する。

いくつかの態様において、薬学的組成物は、１またはそれより多いＧＫ活性化因子および１またはそれより多い抗糖尿病薬剤を含む単一投薬型である。他の態様において、２またはそれより多い投薬型を提供し、ここで少なくとも１つの投薬型は１またはそれより多いＧＫ活性化因子を含み、そして少なくとも１つの他の投薬型は１またはそれより多い抗糖尿病薬剤を含む。

ＩＩＩ．投薬量
本発明の薬学的組成物の投薬型は、症状、望ましい治療、被験体の年齢および体重、治療しようとする障害の性質および重症度、活性成分の投与経路および薬物動態に応じて多様であろう。示す用量の頻度もまた、望ましい治療および示す障害に応じて多様であろう。

１つの態様において、ＧＫ活性化因子を、療法効果を達成するために十分な量で、抗糖尿病薬剤と組み合わせて投与する。ＧＫ活性化因子の投薬範囲は、１日あたり約１ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲である。他の態様において、ＧＫ活性化因子の量は、１日あたり約５ｍｇ〜約９００ｍｇ、または１日あたり約１０ｍｇ〜約８００ｍｇ、または１日あたり約５０ｍｇ〜約７００ｍｇ、または１日あたり約１５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、または１日あたり約２００ｍｇ〜約４００ｍｇの範囲である。抗糖尿病薬剤の投薬範囲は、１日あたり約０．１μｇ〜約２０００ｍｇの範囲である。他の態様において、抗糖尿病薬剤の量は、１日あたり約０．５μｇ〜約１０００ｍｇ、または１日あたり約１μｇ〜約７５０ｍｇ、または１日あたり約５μｇ〜約５００ｍｇ、または１日あたり約２０μｇ〜約２５０ｍｇ、または１日あたり約１００μｇ〜約１００ｍｇ、または１日あたり約５００μｇ〜約１０ｍｇ、または１日あたり約１ｍｇ〜約５ｍｇの範囲である。

さらに他の態様において、ＦＲＩ−１の投薬量は、１日あたり約０．０５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約０．１ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約０．３ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約１ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約２５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約１００ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約２００ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約５００ｍｇ／体重ｋｇであり；そしてメトホルミン、シタグリプチン、およびエキセナチドからなる群より選択される抗糖尿病薬剤の投薬量は、１日あたり約０．００５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約０．０１ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約０．０５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約０．１ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約０．３ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約２５ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約１００ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約２００ｍｇ／体重ｋｇ、または１日あたり約５００ｍｇ／体重ｋｇである。当業者は、投与用量をヒトに同等の用量に変換可能であることを認識するであろう。

メトホルミンは、当業者に知られ、そして１日あたり５００ｍｇ〜１日あたり２５５０ｍｇの量で、典型的には、５００ｍｇ、８５０ｍｇおよび１０００ｍｇ錠剤の形で、単一療法として投与可能である。より少ない、最適以下の用量では、メトホルミンは、単一療法として投与された際、まったくまたは無視できる程度しか療法的利益を提供しない可能性もある。メトホルミンを、ＧＫ活性化因子と組み合わせて、最適以下の用量で投与して、そして療法的利益を提供することも可能である（例えば毎日５００ｍｇ未満）。メトホルミンをまた、ＧＫ活性化因子と組み合わせて、最適用量で投与して、そして相乗的な療法的利益を提供することも可能である。いくつかの態様において、メトホルミンの投与用量は、１日あたり約１００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、または１日あたり約２５０ｍｇ〜約２５００ｍｇ、または１日あたり約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、または１日あたり約２５０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または１日あたり約３５０ｍｇ〜約８５０ｍｇ、または１日あたり約４００ｍｇ〜約７５０ｍｇであることも可能である。他の態様において、メトホルミンの投与用量は、１日あたり５００ｍｇ未満、例えば１日あたり１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇまたは４７５ｍｇである。

シタグリプチンは、当業者に知られ、そして１日あたり１００ｍｇの量で、単一療法として投与可能であり、一方、中程度、重度および末期腎疾患を有する患者では、投与量は、１日あたり２５ｍｇまたは５０ｍｇでありうる。より少ない、最適以下の用量では、シタグリプチンは、単一療法として投与された際、まったくまたは無視できる程度しか療法的利益を提供しない可能性もある。シタグリプチンを、ＧＫ活性化因子と組み合わせて、最適以下の用量で投与して、そして療法的利益を提供することも可能である（例えば腎疾患を伴わない患者に関しては、毎日１００ｍｇ未満が最適以下の量であり、そして腎疾患を有する患者に関しては、毎日２５ｍｇ未満が最適以下の量である）。シタグリプチンをまた、ＧＫ活性化因子と組み合わせて、最適用量で投与して、そして相乗的な療法的利益を提供することも可能である。いくつかの態様において、シタグリプチンの投与用量は、経口投与される１日あたり約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲である。他の態様において、シタグリプチンの量は、１日あたり約０．２５ｍｇ〜約４００ｍｇ、または１日あたり約０．５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、または１日あたり約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、または１日あたり約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、または１日あたり約１０ｍｇ〜約２５ｍｇの範囲である。他の態様において、シタグリプチンの量は、１日あたり１００ｍｇ未満、例えば１日あたり２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇまたは９５ｍｇである。さらに他の態様において、シタグリプチンの量は、１日あたり約２５ｍｇ未満、例えば１日あたり約０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、７．５ｍｇ、１０ｍｇ、１２．５ｍｇ、１５ｍｇ、１７．５ｍｇ、２０ｍｇまたは２２．５ｍｇである。

エキセナチドは、当業者に知られ、そして１日あたり１０μｇ〜２０μｇ、または週あたり２ｍｇの量で、単一療法として投与可能である。より少ない、最適以下の用量では、エキセナチドは、単一療法として投与された際、まったくまたは無視できる程度しか療法的利益を提供しない可能性もある。エキセナチドを、ＧＫ活性化因子と組み合わせて、最適以下の用量で投与して、そして療法的利益を提供することも可能である（例えば毎日５００ｍｇ未満）。エキセナチドをまた、ＧＫ活性化因子と組み合わせて、最適用量で投与して、そして相乗的な療法的利益を提供することも可能である。１つの態様において、エキセナチドの用量は、皮下投与される１日あたり約０．１μｇ〜約１００μｇである。他の態様において、エキセナチドの量は、１日あたり約０．２５μｇ〜約７５μｇ、１日あたり約０．５μｇ〜約５０μｇ、１日あたり約１μｇ〜約２５μｇ、または１日あたり約５μｇ〜約１０μｇの範囲である。他の態様において、エキセナチドの量は、１日あたり１０μｇ未満、例えば１日あたり約０．２５μｇ、０．５μｇ、１μｇ、１．５μｇ、２μｇ、２．５μｇ、３μｇ、３．５μｇ、４μｇ、４．５μｇ、５μｇ、５．５μｇ、６μｇ、６．５μｇ、７μｇ、７．５μｇ、８μｇ、８．５μｇ、９μまたは９．５μｇである。

ＩＶ．治療法
１つの態様において、本発明は、治療が必要な被験体に、以下の方法のために、抗糖尿病薬剤と組み合わされてＧＫ活性化因子を含む薬学的組成物を投与する工程を含む、被験体を治療する方法を提供する：
（ａ）Ｉ型糖尿病および／またはＩＩ型糖尿病を治療する；
（ｂ）血糖レベルを正常化するかまたは低下させる；
（ｃ）耐糖能を改善する；
（ｄ）血糖コントロールを改善する；
（ｅ）空腹時血漿グルコースを減少させる；
（ｆ）食後血漿グルコースを減少させる；
（ｇ）グリコシル化ヘモグロビンＨｂＡ１ｃを減少させる；
（ｈ）糖尿病合併症、例えば糖尿病性腎障害、網膜症、神経障害または心臓血管疾患の進行を緩慢にするか、こうした疾患を遅延させるかまたは治療する；
（ｉ）体重を減少させるかまたは体重増加を防止するかまたは体重減少を促進する；
（ｊ）膵臓ベータ細胞の変性を治療する；
（ｋ）膵臓ベータ細胞の機能性を改善し、そして／または回復させる；
（ｌ）膵臓インスリン分泌の機能性を刺激し、そして／または回復させる；
（ｍ）グルコースのリン酸化を増進させる；あるいは
（ｎ）インスリン感受性を維持し、そして／または改善する；そして／または高インスリン血症および／またはインスリン耐性を治療する。

１つの態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、被験体において、血糖レベルを正常化し、そして耐糖能を改善する方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。

別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、被験体において、血糖コントロールを改善し；そして／または空腹時血漿グルコースを減少させ、食後血漿グルコースを減少させ、そして／またはグリコシル化ヘモグロビンＨｂＡ１ｃを減少させる方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。１つの態様において、方法は、ＨｂＡ１ｃ量を減少させる必要がある被験体において、少なくとも０．１パーセント、または０．２パーセント、または０．３パーセント、または０．４パーセント、または０．５パーセント、または０．６パーセント、または０．７パーセント、または０．８パーセント、または０．９パーセント、または１パーセント、ＨｂＡ１ｃ量を減少させることも可能である。さらに他の態様において、方法は、ＨｂＡ１ｃレベルを減少させる必要がある被験体において、７％未満まで、ＨｂＡ１ｃレベルを減少させることも可能である。他の態様において、ＨｂＡ１ｃレベルを、５〜６．５％の間のレベルまで減少させることも可能である。

別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、被験体において、合併症（例えば糖尿病性腎障害、網膜症、神経障害または心臓血管疾患）の進行を緩慢にするか、こうした疾患を遅延させるかまたは治療する方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。

さらに別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、被験体において、体重を減少させるかまたは体重増加を防止するかまたは体重減少を促進する方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。

別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、被験体において、膵臓ベータ細胞の変性を治療し；そして／または膵臓ベータ細胞の機能性を改善し、そして／または回復させ；そして／または膵臓インスリン分泌の機能性を刺激し、そして／または回復させる方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。

別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、被験体において、インスリン感受性を維持し、そして／または改善し；そして／または高インスリン血症および／またはインスリン耐性を治療する方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。さらに別の態様において、本発明は、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＦＲＩ−１または薬学的に許容されうるその塩を含む薬学的組成物を被験体に投与することによって、インスリンの１日用量を減少させる方法を提供し、ここで抗糖尿病薬剤は、メトホルミン、シタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される。

さらに別の態様において、本発明は、被験体における状態を治療する方法であって、抗糖尿病薬剤と組み合わせてＧＫ活性化因子を被験体に投与する工程を含み、状態が、代謝障害（メタボリックシンドロームを含む）、グルコース不耐性、糖尿病前症、インスリン耐性、血糖低下、高血糖症、耐糖能障害（ＩＧＴ）、シンドロームＸ、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、ＩＧＴからＩＩ型糖尿病への遅延、インスリン非要求性ＩＩ型糖尿病のインスリン要求性ＩＩ型糖尿病への進行の遅延、脂質異常症、高脂血症、高リポタンパク血症、高血圧、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、糖尿病から生じるかまたは糖尿病に関連する合併症（腎障害、網膜症、神経障害、創傷治癒障害を含む）、心臓血管疾患（動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症を含む）食物摂取低下、食欲制御、肥満、摂食行動制御、およびエンテロインクレチン分泌増進からなる群より選択される、前記方法を提供する。

さらに別の態様において、ＩＩ型糖尿病の治療には、より少ない用量、すなわち最適用量未満のＧＫ活性化因子または抗糖尿病薬剤いずれか、または両方を、療法効果が得られるまで投与する工程が含まれる。より少ない用量において、ＧＫ活性化因子または抗糖尿病薬剤いずれかは、単独で投与された際、無視できる程度しか療法的利益を提供しないであろう。さらに別の態様において、抗糖尿病薬剤と組み合わされたＧＫ活性化因子を、同時にまたは連続して投与して、望ましい療法効果を得る。

他の態様において、本発明は、ＩＩ型糖尿病またはＩ型糖尿病を有する被験体において、食餌および運動に付属したものとして、本明細書記載の治療法を提供する。

本発明は、ここで、以下の限定されない実施例を参照することによって、より詳細に記載されるであろう。

薬理学
メトホルミン、シタグリプチンまたはエキセナチドと組み合わせたＧＫ活性化因子の有効性を、ＩＩ型糖尿病に関する遺伝的機構に相当するｉｎ ｖｉｖｏモデル、例えばｏｂ／ｏｂマウスにおける、異なる機能的終点、例えば体重または食物摂取または耐糖能または血漿空腹時もしくは摂食時グルコースまたは血漿インスリンもしくはインスリン感受性指数に関して調べた。

５０匹のオスｏｂ／ｏｂマウス（およそ６週齢）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、イタリアから得た。標準的な食餌（Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ ２０１８食餌）および水道水にいつでも自由にアクセスできるようにして、マウスを個々に、ポリプロピレン・ケージ中で飼育した。すべての動物を２４±２℃および５５±２０％湿度で、逆転相の、１６時間点灯／８時間消灯の明暗周期（光はほぼ１７：３０〜９：３０に点灯）で維持した。

動物を、動物施設に２週間慣らした。翌週（すなわち第３週）、動物に、毎日の取り扱いプロトコルを開始した（動物に投薬するように取り扱うが、実際には体重測定もまた投薬もしなかった）。１週間の取り扱いプロトコルに続いて、動物に、７日間のベースライン期間（第−６日〜第０日）、毎日１回ビヒクルを経口投薬し、すなわち投薬は、動物が施設に到着した３週間後であった。投薬は、毎日０８：４５に開始し、したがって、動物のほぼ半数には光が消灯される前に投薬され、そして半数には光が消灯された（９：３０）後に投薬された。体重、ならびに食物および水摂取を毎日記録した。ベースライン期の間（第−６日）、動物は、側面尾静脈から血液試料採取（２０μＬ）され、試料は、リチウム・ヘパリン・コーティング試験管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ ＣＢ３００ＬＨ）内に採取され、すなわち自由摂食動物より試料を採取した。血液試料採取は、およそ１６：００に始まって、時限日程まで行われ、そして各動物から試料採取した後、直ちに食物を取り除いた。翌朝、先の試料から１６時間後、さらなる（空腹時）血液試料（２０μＬ）を、側面尾静脈からリチウム・ヘパリン・コーティング収集試験管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ ＣＢ３００ＬＨ）内に採取した。試料採取後、直ちに食物を置き換え、そして動物に投薬した。すべての血液試料を収集後直ちに遠心分離器中で回転させ、そして商業的に入手可能なキットおよび試薬：Ａｌｐｃｏマウス超高感度インスリンキット８０−ＩＮＳＭＳＵ−Ｅ１０；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｆｉｎｉｔｙグルコース試薬ＴＲ１５４２１を用いて、血漿グルコース（２つ組）およびインスリン（単一複製物）を決定する前に、血漿分画を凍結保存した（−８０℃）。

続いて、ベースライン治療を続けた。ベースライン期終了に向けて、体重、ベースライン食物および水摂取、ならびに空腹時血漿グルコースおよびインスリンに基づいて、動物を６つの治療群に割り当てた。マウスに１日１回１４日間、ビヒクルまたは以下の表１に詳述するような試験薬剤を投与した（最初の用量時におよそ１０週齢）。

表１：

すべての治療を、１日１回強制飼養によって経口投薬した。治療期間中、食物摂取、水摂取および体重を投薬セッション時に毎日記録した。投薬完了時、動物を調べ、そしていかなる顕在行動も記録した。すべての群に関して、毎日ほぼ０８：４５に投薬を開始した。第６日および第７日、ベースライン期中に先に記載するように、血液試料を収集した。したがって、動物は、第６日の１６：００、摂食状態で血液試料採取を受けた。続いて、各動物から食物を取り除いた。翌朝、さらなる血液試料を採取した（空腹状態）。この血液試料は、先の試料の１６時間後に採取されるように時間を選んで採取された。食物を戻し、そして動物に投薬した。各場合で、およそ２０μＬの血液をリチウム・ヘパリン・コーティング試験管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ＣＢ３００ＬＨ）内に採取した。各試料を直ちに遠心分離し、そして血漿をアリコット試験管内に分配した。すべての血漿試料を−８０℃で凍結し、そして続いて、商業的に入手可能なキットおよび試薬：Ａｌｐｃｏマウス超高感度インスリンキット８０−ＩＮＳＭＳＵ−Ｅ１０；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｆｉｎｉｔｙグルコース試薬ＴＲ１５４２１を用いて、グルコース（ｎ＝２）およびインスリン（ｎ＝１）含量に関してアッセイした。

第１３日、先に記載するように、自由摂食状態の動物から血液試料採取し（１６：００）、そして試料採取に続いて、食物を取り除いた。第１４日、マウスにＯＧＴＴを行った。各動物に、ビヒクルまたは試験化合物を投薬し、そして６０分後、Ｄ−グルコース（２ｇ／ｋｇ ｐｏ）を投薬した。ベースライン血液試料を化合物投薬直前（Ｂ１）、およびグルコース負荷直前（Ｂ２）に採取した。さらなる血液試料を、グルコース投与の１０、２０、３０、４５、６０および１２０分後に採取した。すべての血液試料（すべておよそ２０μＬ）を尾静脈から採取した。血液試料をリチウム・ヘパリン処理試験管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ＣＢ３００ＬＨ）内に採取し、そして遠心分離によって血漿を分離した。すべての血漿試料を−８０℃で凍結し、そして続いて、商業的に入手可能なキットおよび試薬：Ａｌｐｃｏマウス超高感度インスリンキット８０−ＩＮＳＭＳＵ−Ｅ１０；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｆｉｎｉｔｙグルコース試薬ＴＲ１５４２１を用いて、グルコース（ｎ＝２）およびインスリン（ｎ＝１）含量に関してアッセイした。ＯＧＴＴの完了に続いて、動物を処分した。

エキセナチドの評価を、メトホルミンの評価と同様に行った。

シタグリプチンを伴うまたは伴わないＦＲＩ−１の評価を、メス食餌誘導性肥満ラットにおいて行った。６８頭の食餌誘導性肥満メス・ウィスター・ラット（２５０〜３００ｇの体重範囲）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（ケント州マーゲート）から得て、そして２１±４℃の温度および５５±２０％の湿度で、硬い床およびおがくずの寝わらを含むポリプロピレン・ケージ中、ペアで飼育した。動物を、逆転相の明暗周期（光は９：３０〜１７：３０に、８時間消灯）で維持し、この間、部屋を赤い光で照射した。動物は、粉末高脂肪食餌（ＶＲＦ１＋２０％ラード）、挽いたチョコレート、挽いたピーナツおよび水道水にいつでも自由にアクセスできた。３つの異なる食餌は、アルミニウムの蓋が付いた、別個のガラス給餌ジャー（Ｓｏｌｍｅｄｉａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｕｐｐｌｉｅｒｓ、エセックス州ロンフォード）に含有された。各蓋には穴が空いており、食物へのアクセスが可能であった。肥満を誘導するため、動物を少なくとも１４週間、ペアで飼育した。ラットに関する他の実験法は、ｏｂ／ｏｂマウスに関するものと同様であった。

薬剤および投薬
ベースライン期の最初の５日間、動物に１％カルボキシメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ Ｃ４８８８；ロット１２０Ｍ０２１６Ｖ）ビヒクルを投与した。ベースライン期の最後の２日間、動物に、蒸留水中の２０％ ｇｅｌｕｃｉｒｅ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ；ロット１０３２０１）のビヒクルを投与した。ＦＲＩ−１を、到着に際して、そして使用まで、デシケーター中で冷蔵保存した。メトホルミンをＳｉｇｍａから購入した（カタログ番号Ｄ１５０９５９；ロットＢＣＢＦ１４８４Ｖ）。エキセナチドをＡｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅから購入した（カタログ番号４６−３−１２Ｂ；ロットＹ１００４９Ａ１）。リン酸シタグリプチンをＴｏｃｒｉｓ Ｃｏｏｋｓｏｎ、英国から購入した（ロットＴＣＳ９１３３Ｂ）。適切な量のビヒクル（蒸留水中２０％ ｇｅｌｕｃｉｒｅ）を、薬剤物質の重量測定した量を含有するバイアルに直接添加した。化合物を１０秒間ボルテックスし、そして室温で投薬した。薬剤混合物（すなわち群ＥおよびＦ）を単一投薬ボーラスとして投与した。適切な量のビヒクル（蒸留水中２０％ ｇｅｌｕｃｉｒｅ）を、ＦＲＩ−１およびメトホルミン両方の重量測定した量を含有するバイアルに直接添加した。生じた配合物を１０秒間ボルテックスし、そして室温で投薬した。薬剤を毎日、投薬直前に配合し、そして２．５ｍＬ／ｋｇの用量体積を用いて投与した。Ｄ−グルコースを体積２．５ｍＬ／ｋｇで投与した。

データ分析
第１日の体重を共変数とした共分散分析によって、体重、ならびに全体のおよび毎週の体重増加（ｇ）を決定した。ベースライン期（第−６日〜第０日）中の平均１日食物摂取を共変数とした共分散分析によって、食物および累積食物摂取（ｇ）を決定した。同じ方法を用いて、平均食物摂取を決定した。Ｍ概算およびＨｕｂｅｒ加重法を用い、デフォルトパラメータｃ＝１．３４５を用いた、ロバスト回帰モデルによって、水摂取（ｇ）を決定した。モデルは、因子として治療を有し、そして共変数として、ベースライン期（第−６日〜第０日）中の平均１日水摂取を有した。同じ方法を用いて、平均水摂取を分析した。ビヒクル群に対する多数の比較は、ＦＲＩ−１に関してはＷｉｌｌｉａｍ検定、メトホルミンに関しては多重ｔ検定、そしてメトホルミンとＦＲＩ−１の組み合わせに関してはＤｕｎｎｅｔｔ検定によった。ＦＲＩ−１およびメトホルミンの組み合わせを、Ｗｉｌｌｉａｍ検定によってメトホルミン単独に比較し、そして多重ｔ検定によってＦＲＩ−１単独に比較した。因子として治療を、ならびに共変数として出血順、ベースライン体重、血漿グルコースおよびインスリンを伴うロバスト回帰によって、血漿グルコースおよびインスリンデータを分析した後、適切な比較（両側）を行って、対照群からの有意な相違を決定した。統計法は、データが通常、群において、等しい分散で分布していることを仮定する。残差の正規性に関する最初のＳｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定は、対数（グルコース）および対数（インスリン）が、グルコースおよびインスリンよりも正規分布していることを示し、したがって、対数変換を用いた。しかし、いくつかのＳｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定は有意であり、したがって、ロバスト回帰を用いて、これらの変数の分析において、いかなるありうる異常値も加重を下げた（ｄｏｗｎｗｅｉｇｈｔ）。

ＯＧＴＴのため、治療群を各投与後時点で、そして０〜６０分および０〜１２０分の曲線下面積（ＡＵＣ）（それぞれＡＵＣ_６０分およびＡＵＣ_１２０分）によって比較した。これらは以下のように計算された：
ＡＵＣ_１２０分＝１／２４（２ｔ_０分＋４ｔ_１０分＋４ｔ_２０分＋５ｔ_３０分＋６ｔ_４５分＋１５ｔ_６０分＋１２ｔ_１２０分）
ＡＵＣ_６０分＝ＡＵＣ_１２０分−1/2（ｔ_６０分＋ｔ_１２０分）
Ｂ２ベースライン上のＡＵＣ（ＡＵＣＢ２）をＡＵＣ_１２０分−２ｔ_０時間およびＡＵＣ_６０分−ｔ_０時間として計算した。上記等式において、ｔは添え字によって示される特定の時間でのグルコースまたはインスリン濃度を示す。負である可能性もあるため変換しなかったＡＵＣＢ以外は、対数変換を用いた。ＯＧＴＴの分析は、Ｍ概算、Ｈｕｂｅｒ加重を用い、デフォルトパラメータｃ＝１．３４５を用いたロバスト回帰モデルによった。モデルには、因子として治療およびアッセイ日が含まれ、そして共変数として、出血順、第１日の体重および第−５日（空腹時）のベースライン血漿対数（グルコース）または対数（インスリン）が含まれた。ＡＵＣＢに関しては、対数（グルコース）または対数（インスリン）の代わりに、共変数として非変換第−５日のグルコースまたはインスリンを用いた。第７日の空腹時血漿グルコースおよびインスリンデータを対数変換し、そして因子として治療を、そして共変数として、出血順、第１日の体重および第−５日（空腹時）のベースライン血漿対数（グルコース）または対数（インスリン）を伴うロバスト回帰によって分析した。第６日および第１３日の非空腹時血漿グルコースおよびインスリンデータを対数変換し、そして因子として治療を、そして共変数として、出血順、第１日の体重および第−６日（非空腹時）のベースライン血漿対数（グルコース）または対数（インスリン）を伴うロバスト回帰によって分析した。ビヒクルに対する比較は、ＦＲＩ−１に関してはＷｉｌｌｉａｍ検定、メトホルミンに関しては多重ｔ検定、そして組み合わせに関してはＤｕｎｎｅｔｔ検定によった。組み合わせ治療を、Ｗｉｌｌｉａｍ検定によってメトホルミンに比較し、そして多重ｔ検定によってＦＲＩ−１の同じ用量に比較した。ｐ＜０．０５が統計的相違として許容されるレベルであった。偽陽性の確率は各時点の各化合物に関して５％である。両側検定として、検定を行った。

ＦＲＩ−１／メトホルミン組み合わせを用いた体重研究の結果
ＦＲＩ−１およびメトホルミンの長期投与は、図１に示すように、オスｏｂ／ｏｂマウスにおいて、体重コントロールに対して相乗効果を示した。ＦＲＩ−１（７５ｍｇ／ｋｇ ｐｏ）およびメトホルミン（１００ｍｇ／ｋｇ ｐｏ）の組み合わせでの１日１回の治療は、ビヒクル治療対照に比較して、研究第９日、第１０日、第１２日、第１３日、および第１４日に、有意に体重を減少させた（ｐ＞０．０５）。研究の投薬期中、他の薬剤治療はいずれも、体重に対して統計的に有意な効果を持たなかった。

ＦＲＩ−１／メトホルミンの組み合わせを用いた血漿インスリン研究の結果
自由摂食ｏｂ／ｏｂマウスから、血漿インスリンを決定した。ＦＲＩ−１およびメトホルミンの長期投与は、図２および３に示すように、インスリン感受性の増加に対して相乗効果を示した。ビヒクル処理動物において、血漿インスリンは、およそ１１０ｎｇ／ｍＬのベースラインレベルから、第１３日の１８０ｎｇ／ｍＬまで増加した。高用量ＦＲＩ−１およびメトホルミンの組み合わせは、血漿インスリンに対して有意な効果を有した。具体的には、この組み合わせ治療は、血漿インスリンを第６日（ｐ＞０．０５）および第１３日（ｐ＜０．００１）に有意に減少させた。インスリンのこの減少は、ビヒクル処理対照のレベルに対してだけでなく、７５ｍｇ／ｋｇ ＦＲＩ−１（ｐ＜０．０１）またはメトホルミン（ｐ＜０．００１）単独のいずれかで治療された動物の第１３日のインスリンレベルに対しても有意に異なった。

ＦＲＩ−１／シタグリプチンの組み合わせを用いた体重研究の結果
ＦＲＩ−１およびシタグリプチンの長期投与は、図４に示すように、メス食餌誘導性肥満ラットにおいて、体重コントロールに対して相乗効果を示した。

ＦＲＩ−１／エキセナチドの組み合わせを用いた血漿インスリン研究の結果
ｏｂ／ｏｂマウスにおけるＦＲＩ−１およびエキセナチドの長期投与は、図５および６に示すように、インスリン感受性の増加に対して、相乗効果を示した。ビヒクルに比較した際、第７日に血漿グルコースを減少させる、エキセナチド、およびエキセナチドにＦＲＩ−１（２５ｍｇ／ｋｇ ｐｏ）を加えた組み合わせの小さいが有意な効果が観察された。エキセナチド、およびエキセナチドに両方の用量のＦＲＩ−１（２５ｍｇ／ｋｇ ｐｏ）を加えた組み合わせには、ビヒクルに比較して、第７日に血漿インスリンを減少させる、有意な効果があった。追加の統計比較によって、どちらの組み合わせの効果も第１４日に血漿インスリンを、ＦＲＩ−１単独のいずれかの用量の効果よりも有意に大きく減少させることが示された。

Claims (23)

1. ｉ）グルコキナーゼ活性化因子、または薬学的に許容されうるその塩、
   ｉｉ）ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、ＧＬＰ−１類似体、または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される、抗糖尿病薬剤；および
   ｉｉｉ）少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、希釈剤またはその混合物
   を含む、薬学的組成物。
2. グルコキナーゼ活性化因子、抗糖尿病薬剤、または両方が、最適以下の量で存在する、請求項１の組成物。
3. グルコキナーゼ活性化因子が肝臓選択的グルコキナーゼ活性化因子である、請求項１の組成物。
4. グルコキナーゼ活性化因子が、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸または薬学的に許容されうるその塩である、請求項３の組成物。
5. 抗糖尿病薬剤がシタグリプチンまたは薬学的に許容されうるその塩である、請求項１の組成物。
6. 抗糖尿病薬剤がエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩である、請求項１の組成物。
7. ＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法。
8. グルコキナーゼ活性化因子、抗糖尿病薬剤、または両方が最適以下の量で存在する、請求項７の方法。
9. グルコキナーゼ活性化因子が肝臓選択的グルコキナーゼ活性化因子である、請求項７の方法。
10. グルコキナーゼ活性化因子が、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸または薬学的に許容されうるその塩である、請求項９の方法。
11. 抗糖尿病薬剤がシタグリプチンまたは薬学的に許容されうるその塩である、請求項７の方法。
12. 抗糖尿病薬剤がエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩である、請求項７の方法。
13. 血糖コントロールを改善する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法。
14. グルコキナーゼ活性化因子、抗糖尿病薬剤、または両方が最適以下の量で存在する、請求項１３の方法。
15. グルコキナーゼ活性化因子が肝臓選択的グルコキナーゼ活性化因子である、請求項１３の方法。
16. グルコキナーゼ活性化因子が、｛２−［３−シクロヘキシル−３−（トランス−４−プロポキシ−シクロヘキシル）−ウレイド］−チアゾル−５−イルスルファニル｝−酢酸または薬学的に許容されうるその塩である、請求項１５の方法。
17. 抗糖尿病薬剤がシタグリプチンまたは薬学的に許容されうるその塩である、請求項１３の方法。
18. 抗糖尿病薬剤がエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩である、請求項１３の方法。
19. 被験体における状態を治療する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含み、状態が、代謝障害、グルコース不耐性、糖尿病前症、インスリン耐性、高血糖症、耐糖能障害（ＩＧＴ）、シンドロームＸ、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）、Ｉ型糖尿病、脂質異常症、高脂血症、高リポタンパク血症、高血圧、骨粗鬆症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、糖尿病から生じるかまたは糖尿病に関連する合併症、心臓血管疾患、および肥満からなる群より選択される、前記方法。
20. ｉ）糖尿病から生じるかまたは糖尿病に関連する合併症が、腎障害、網膜症、神経障害および創傷治癒障害からなる群より選択されるか、あるいはｉｉ）心臓血管疾患が、動脈硬化症およびアテローム性動脈硬化症からなる群より選択される、請求項１９の方法。
21. 血糖を正常化するかまたは低下させるか；ＩＧＴからＩＩ型糖尿病までを遅延させるか；インスリン非要求性ＩＩ型糖尿病のインスリン要求性ＩＩ型糖尿病への進行を遅延させるか；食物摂取を低下させるか；食欲を制御するか；摂食行動を制御するか；エンテロインクレチン（ｅｎｔｅｒｏｉｎｃｒｅｔｉｎ）の分泌を増進させるか；グルコース耐性を改善するか；空腹時血漿グルコースを減少させるか；食後血漿グルコースを減少させるか；グリコシル化ヘモグロビンＨｂＡ１ｃを減少させるか；糖尿病の進行を緩慢にし、糖尿病の合併症を遅延させるかまたは治療するか；体重を減少させるかまたは体重増加を防止するかまたは体重減少を促進するか；膵臓ベータ細胞の変性を治療するか；膵臓ベータ細胞の機能性を改善し、そして／または回復させるか；膵臓インスリン分泌の機能性を刺激し、そして／または回復させるか；グルコースのリン酸化を増進させるか；インスリン感受性を維持するか；インスリン感受性を改善するか；高インスリン血症を治療するか；あるいはインスリン耐性を治療する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＧＬＰ−１類似体または薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤を含む、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法。
22. ＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにシタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤からなる、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法。
23. 血糖コントロールを改善する方法であって、グルコキナーゼ活性化因子または薬学的に許容されうるその塩、ならびにシタグリプチンおよびエキセナチドまたは薬学的に許容されうるその塩からなる群より選択される抗糖尿病薬剤からなる、薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法。

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