JP2015517310A5

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Publication number: JP2015517310A5
Application number: JP2015511775A
Authority: JP
Filing date: 2013-05-10
Publication date: 2016-06-23
Anticipated expiration: 2033-05-10

Claims

ａ．配列番号３６５、３６６、１５７、１５９、１５４、３７７、３６７、１２３、４２、４１、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１６、１１８、１１９、１２０、１２１、１２４、１２８、１２９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５５、１６０、１６１、３４６、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７８、３７９、３８０、又は３８１のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｂ．配列番号３６５、３６６、１５７、１５９、１５４、３７７、３６７、１２３、４２、４１、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１６、１１８、１１９、１２０、１２１、１２４、１２８、１２９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５５、１６０、１６１、３４６、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７８、３７９、３８０、又は３８１と少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％の同一性を含むポリペプチド；又は
ｃ．（ａ）又は（ｂ）の活性断片を含むポリペプチド。
配列番号２と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％の同一性を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、以下の領域のうちの１つ、すなわち、分子間二量体界面領域、ドメイン間界面領域、Ｎ−ドメイン表面ヘリックス領域、疎水性架橋領域、又はＣ末端テール領域の少なくとも１つに少なくとも１つの置換を含み、前記少なくとも１つの置換が位置Ｉ１３、Ｌ３３、Ｐ４７、Ｆ５０、Ｖ５３、Ｆ６１、Ａ６８、Ａ６９、Ａ７１、Ｇ７２、Ｖ７６、Ｉ８０、Ｓ８６、Ｌ８８、Ｋ９９、Ｙ１１３、Ｎ１１４、Ｖ１１７、Ｉ１２７、Ｉ１５２、Ｖ１５６、Ｓ１５７、Ｖ１７１、Ｍ２３８、Ｙ２３９、Ｅ２６４、Ｎ２６７、Ａ２６８、Ｑ２７２、Ｒ２７５、Ａ２７７、Ｒ２８０、Ｙ２８６、Ｉ２９１、Ｓ２９２、Ａ２９５、Ｍ３０１、Ｒ３０６、Ｓ３２２、Ａ３２９、Ｋ３３５、又はＡ３３６にある、ポリペプチド。
ケトール酸レダクトイソメラーゼ活性を有し、且つ
配列番号２との少なくとも約８５％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％の同一性と、以下の置換：Ｉ１３Ｌ、Ｐ４７Ｙ、Ｆ５０Ａ、Ｖ５３Ａ、Ａ７１Ｋ、Ｇ７２Ｗ、Ｖ７６Ｉ、Ｓ８６Ａ、Ｌ８８Ｖ、Ａ２６８Ｔ、Ａ２６８Ｅ、Ｙ２８６Ｆ、Ａ３２９Ｅ、Ａ３３６Ｒ、Ａ３３６Ｇ、Ｉ１５２Ｖ、Ｓ３２２Ａ、Ｓ２９２Ａ、Ｉ２９１Ｖの少なくとも１つ、又はそれらの組み合わせと
を含むポリペプチド；
又はかかるポリペプチドの活性断片を含むポリペプチド。
ケトール酸レダクトイソメラーゼ活性を有し、且つ
配列番号４１との少なくとも約８５％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％の同一性と：
以下の置換Ｍ３０１Ｉ、Ｙ２３９Ｈ、Ｙ１１３Ｆ、Ｓ３２２Ａ、Ａ７１Ｋ、Ｎ１１４Ｇ、Ａ３２９Ｒ、Ａ６９Ｔ、Ｎ１１４Ｓ、Ｇ７２Ｗ、Ａ２９５Ｖ、Ｅ２６４Ｋ、Ｒ２８０Ｄ、Ａ３２９Ｅ、Ｓ１５７Ｔ、Ｍ２３８Ｉ、Ｑ２７２Ｔ、Ｋ３３５Ｍ、Ｒ２８０Ｈの少なくとも１つ、又はそれらの組み合わせと
を含むポリペプチド；
又はかかるポリペプチドの活性断片を含むポリペプチド。
配列番号２の５２位に対応する位置のアミノ酸がＤ又はＥである、請求項２〜４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
ａ．配列番号２の２４位に対応する位置のアミノ酸がＦであり；
ｂ．配列番号２の３３位に対応する位置のアミノ酸がＬであり；
ｃ．配列番号２の４７位に対応する位置のアミノ酸がＰであり；
ｄ．配列番号２の５０位に対応する位置のアミノ酸がＦであり；
ｅ．配列番号２の６１位に対応する位置のアミノ酸がＦであり；
ｆ．配列番号２の８０位に対応する位置のアミノ酸がＩであり；及び
ｇ．配列番号２の１５６位に対応する位置のアミノ酸がＶである
請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
ケトール酸レダクトイソメラーゼ活性を有し、且つ
配列番号３４６との少なくとも約８５％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％の同一性と、以下の置換：Ａ６８Ｅ、Ｉ１５２Ｖ、Ｙ２８６Ｆ、及びＡ３３６Ｒの少なくとも１つとを含むポリペプチド。
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む組換え微生物宿主細胞。
前記宿主細胞が、低下又は消失したアセト乳酸レダクターゼ活性をさらに含む、請求項８に記載の組換え微生物宿主細胞。
前記宿主細胞が、ｆｒａ２における少なくとも１つの欠失、突然変異、及び／又は置換をさらに含む、請求項９に記載の組換え微生物宿主細胞。
ａ．ピルベートからアセトラクテート
ｂ．２，３−ジヒドロキシイソバレレートからα−ケトイソバレレート
ｃ．α−ケトイソバレレートからイソブチルアルデヒド；及び
ｄ．イソブチルアルデヒドからイソブタノール
への基質から生成物への変換をさらに含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の組換え微生物宿主細胞。
前記宿主細胞が酵母宿主細胞である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の組換え微生物宿主細胞。
前記宿主細胞がサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項１２に記載の組換え微生物宿主細胞。
アセトラクテートからジヒドロキシイソバレレートへの変換方法において、
ａ．請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む微生物宿主細胞を提供するステップ；
ｂ．前記ポリペプチドをアセトラクテートに接触させるステップであって、ジヒドロキシイソバレレートが生成される、ステップ
を含む方法。
イソブタノール、パントテネート、バリン、ロイシン、イソロイシン、３，３−ジメチルマレート、及び２−メチル−１−ブタノール又はそれらの組み合わせからなる群から選択される生成物を生成する方法において、
ａ．請求項８〜１３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を提供するステップであって、前記組換え宿主細胞が生成物生合成経路を含む、ステップと；
ｂ．前記生成物が生成される条件下で前記微生物宿主細胞を炭素基質に接触させるステップと
を含む方法。
前記接触させるステップの少なくとも一部が嫌気的条件下で行われる、請求項１５に記載の方法。
請求項１５の１つ以上の生成物を含み、前記１つ以上の生成物がイソブタノール又はイソブタノール及び２−メチル−１−ブタノールである、組成物。
炭化水素燃料とブレンドされるか又は化学溶媒若しくは他の化学的用途の基剤である、請求項１７に記載の組成物。
配列番号３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、５７４、５７５、５７６、５７７、５７８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、又は５８４の配列を含むポリヌクレオチド。
請求項１９に記載のポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞。
イソブタノールを生成する、請求項２０に記載の組換え宿主細胞。