JP2015505823A - アミロイド結合剤としてのバクテリオファージのp3の使用 - Google Patents
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Abstract
Description
N1−N2フラグメントにおける変異を用いて、種々の変異体の安定性及び感染性が研究された(Eckert & Schmid, 2007)。「3A」と命名された1つの変種は、線毛結合を障害し、N2ドメインの安定性を低減した。この変異のため、TMは42.6℃まで低減される。3Aは、次の変異:W181A、F190A、及びF194Aを有する。N2における別の変異体G153Dは、N2を不安定化し、TMを44.4℃まで低減する。Q129H変異体は、N2を安定化し、TMを51.4℃まで増大する。IY変種は、ヒンジにおける変異T101I及びD209Yを含有し、N1−N2フラグメントの安定性を増大する(TM=56.5℃)。IHYは、変異T101I、Q129H、及びD209Yを含有する(TM=60.1℃)。IIHYは、変異T13I、T101I、Q129H、及びD209Yを含有する(TM=61.8℃)。Q129Y変異とT13I変異の両方が安定化し、これらの変異の追加は更に融点TMを増大する。ファージ感染性は、g3p内のドメイン相互作用の強さと逆に変動した(Eckert & Schmid, 2007)。N2ドメインの欠損(ファージfd(ΔN2))は、TolAのN1結合に対するN2ドメインの阻害作用を取り除くことにより、感染性を増大した(同上)。
用語「g3p」は、単独、又は用語(例えば、「g3p−由来」)において用いられるとき、任意の野生型又は組み換え糸状ファージg3pタンパク質(g3pのフラグメント、変種、及び変異体を含む)に言及する。用語は、任意の具体的な糸状バクテリオファージg3pに限定すると解されるべきではない。例示のため、用語「g3p」は、配列番号:1、及び図2に示される関連タンパク質を含む。
糸状バクテリオファージは、グラム陰性細菌(例えば、エシェリキア・コリ(E. coli))に感染する関連ウイルスの群である。例えば、Rasched and Oberer, Microbiology Reviews (1986) Dec:401−427を参照。糸状バクテリオファージの例は、Ffファミリーのファージ(すなわち、少なくともM13、f1、及びfd)、及びIファミリーのファージ(すなわち、少なくともI22、Ike、If1)を含むが、これらに限定されない。
配列番号:1は、取り除かれた18個のアミノ酸シグナルペプチドを有するGenBank NP−510891.1であり、従って、アミノ酸番号は成熟型g3pについてである。シグナルペプチドは一般に任意の発現ベクターに含まれ、シグナルペプチドを含む未成熟型g3pは、文脈が特に排除されることを明確にしない限り、本発明の種々の実施態様の範囲内に含まれる。配列番号:1は、ただ参照配列として提供される。それは決して本発明を制限することを意図しない。
言及される通り、g3pは、N1−N2複合体を形成するために相互作用する2個のアミノ末端ドメインN1及びN2、及び1個のカルボキシ末端ドメインN3(「CT」とも呼ばれる)を有する。Ffファージなら、N1ドメインは成熟型g3pの残基1〜67を含み、N2ドメインは成熟型g3pの残基87〜217を含む。残基87〜123は、N1とN2の間での会合及び閉合を可能にするヒンジを形成する。時に、ヒンジはN2の一部と考えられ、一方他の例では別個のエレメントとして処理される。N1及びN2はまた、可動性グリシンリッチなリンカー配列により結合される。N1において、Cys7とCys36の間、及びCys46とCys53の間の2つのジスルフィド架橋が存在する。Cys188とCys201の間のN2における単一のジスルフィド架橋が存在する。N3/CTドメインは残基257〜406を含む(Hollinger, 1999; Marvin, 1998)。カルボキシ末端ドメインにおいて、Cys354とCys371の間のジスルフィド架橋が存在する(Marvin, 1998)。g3pにおいてドメイン間ジスルフィド架橋は存在しない。
fd、f1、M13、Ike、I2−2、及びIf1由来のN2の1次構造アライメントは、図26として示される。fdのアミノ酸は配列番号:14に、f1は配列番号:15に、M13は配列番号:16に、Ikeは配列番号:17に、I2−2は配列番号:18に、If1は配列番号:19に示される。この図及びアライメントをガイドとして用いて、本発明の1つの実施態様は、任意のアミロイド結合フラグメントを含む、N2ポリペプチド、N2ポリペプチド変異体、及びN2ポリペプチド変種を包含する(配列番号:14、15、16、17、18、又は19のアミノ酸を含む)。
fd、f1、及びM13の1次構造アライメントは図2Aとして、Ike、I2−2、及びIf1は図2Bとして示される。このアライメントをガイドとして用いて、本発明の1つの実施態様は、図2の配列に関連して同定される通り、fd、f1、及びM13間、又はI2−2、Ide、及びIf1間で保存されるアミノ酸配列を含む、N1N2ポリペプチド、ポリペプチド変異体、又はポリペプチド変種を包含する。他の実施態様において、N1N2ポリペプチドは、アミロイドに結合する能力を保持し、配列番号:1、2、3、5、又は6のいずれか1つのアミノ酸配列で整列させたとき、わずか75、50、40、30、25、20、15、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個のアミノ酸相違を含むアミノ酸配列を有するN1N2ポリペプチド変異体又は変種である。
1つの態様において、本発明は融合タンパク質に関する。融合タンパク質は、g3p、g3pのアミロイド結合フラグメント、TolA結合分子、又はTolA阻害剤を含む。変異体又は変種g3p、又はg3pフラグメントを含む融合タンパク質は完全に包含される。融合タンパク質は、通常関連しない少なくとも1個の追加のタンパク質又はタンパク質ドメインに結びつき、融合し、共役結合し、結合し、又は関連する。1つの実施態様において、融合タンパク質は、第2のドメインに結合したg3pタンパク質を含むg3p融合タンパク質である。別の実施態様において、融合タンパク質は、第2のドメインに結合したg3pタンパク質のアミロイド結合フラグメントである。別の実施態様において、融合タンパク質はN1N2融合タンパク質であり、g3pタンパク質のN1及びN2ドメインを含むが、CTドメインを含まない。なお別の実施態様において、融合タンパク質はN2融合タンパク質であり、g3pタンパク質のN2ドメインを含むが、N1又はCTドメインを含まない。示される通り、本発明のいくつかの態様は、変異体又は変種g3pタンパク質又はそのアミロイド結合フラグメント、及びアミロイド線維に結合する変異体又は変種N1N2又はN2ドメインに関する。従って、これらの変異体又は変種形態を含む融合タンパク質はまた本発明の一部である。
別の態様において、本発明は、ファージにより発現されるg3pのコピー数を、野生型糸状バクテリオファージにおいて典型的に見出される3〜5コピーより多くまで増大するよう修飾されたバクテリオファージに関する。1つの実施態様において、増大した数のg3pを発現するファージは、天然に存在する変種から選択され得る。別の実施態様において、組み換え技術を用いて、g3pのコピー数が増大される。
別の態様において、本発明は、変異体g3pタンパク質、及びその変異体アミロイド結合フラグメントに関する。融合タンパク質及び変異体g3pタンパク質及びアミロイド結合フラグメントを含むファージもまた、本発明の一部である。変異体g3p及びその変異体アミロイド結合フラグメントは、本出願に記載される医薬組成物の治療上の有効性に寄与する特性のため、産生されるか、又は選択され得る。例えば、g3p又はそのアミロイド結合フラグメントは、組み換え的に変異誘発されるか、又はM13のg3pに関連する以下の特性の1つ以上を有するよう選択される:アミロイド結合の親和性の増大、ヒンジTMの低減、親和性の増大(結合活性が、g3pが1個より多いアミロイド結合部位を含む全ての利用可能なアミロイド結合の和を記載するために用いられる点で、結合活性は親和性と区別される)、アミロイド凝集体を脱凝集させる能力の増大、又はアミロイド原線維の凝集を防ぐ能力の増大。或は、又は加えて、変異体g3p又はその変異体アミロイドフラグメントは、本明細書中の他の箇所に記載される他の有用な特性を取り込み得る。
本発明の別の態様において、N1N2ドメイン及びN2ドメイン、並びに分子、ポリペプチド、及びそれを含む融合タンパク質を含むが、これらに限定されない、g3p及びそのアミロイド結合フラグメント(前述のもののいずれかの変異体及び変種)は、アミロイド結合を保存するが、更なる特性をもたらす分子スキャフォールドをもたらす他の有機又は無機担体と組み合わされ得る。
一般的に、g3pタンパク質又はそのアミロイド結合フラグメント(並びにその変異体及び変種、及び前述のいずれかを含む化合物、ポリペプチド、及び融合タンパク質)をコードするDNAは、通常の組み換えDNA技術(例えば、g3p遺伝子のクローニング、直接的DNA合成、又は例えばM13配列をプローブとして用いて対応するDNAをライブラリーから単離すること)を用いて調製される(例えば、Sambrook et al. 1989, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. and Ausubel et al. 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y.を参照)。
いくつかの実施態様において、アミロイドの脱凝集は、チオフラビンT蛍光(ThT)アッセイを用いてモニタリングされ得る。
インビトロアッセイにおいて示され得る、活性(例えば、アミロイドの増大した結合親和性、又はTMの低下)に加え、本発明の組成物はまた、いくつかのインビボアッセイの1つにおいて、アミロイドを低減し得る。インビボでのアミロイド低減を測定する1つの方法は、処置前及び後のイメージング剤フロルベタピル(F18−AV−45、Eli Lilly)でのポジトロン放出断層撮影(PET)を用いて、β−アミロイドの数及び/又は分布を比較する。もちろん、更なるバイオマーカーが同定されるなら、それらを用いて、アミロイドの低減を測定し得る。
別の態様において、本発明は、本発明の上述の剤のいずれかを含む医薬的に許容される組成物を提供する(すなわち、(a)g3p、g3pのアミロイド結合フラグメント、又はその変異体又は変種;(b)化合物、ポリペプチド、g3pを含む融合タンパク質、g3pのアミロイド結合フラグメント、又はその変異体又は変種;(c)野生型ファージと比較して、増大した数のコピーのg3pを生じる糸状バクテリオファージ;(d)g3p、g3pのアミロイド結合フラグメント、その変異体又は変種、又はg3p、g3pのアミロイド結合フラグメント、又はその変異体又は変種を含む化合物、ポリペプチド、及び融合タンパク質を生じるアミロイド結合ディスプレービークル;又は(e)g3pの変種、g3pのアミロイド結合フラグメント(ディスプレーされたg3pタンパク質の一部としてではない)、かかる結合フラグメントの変異体又は変種、又は融合タンパク質、又はg3p、g3pのアミロイド結合フラグメント、又はその変異体又は変種を含む他の異種性ポリペプチを生じる修飾糸状ファージ)。
示される通り、糸状バクテリオファージM13、及び関連糸状ファージは、タンパク質ミスフォールディング病の動物モデルにおける有用性を有する。米国特許公報第2011/0142803号(本明細書において引用により全体として取り込まれる)を参照。特に、糸状バクテリオファージが、脳において既に形成されたアミロイドを脱凝集させる能力を有することが発見された。アミロイドの除去は、脳中の誤って折り畳まれた及び/又は凝集タンパク質により特徴付けられる様々な疾患と関連する症状を低減するか、その進行を遅延させるか、又は逆転さえすると予測される。例えば、国際公開公報第2006083795号及び国際公開公報第2010060073号(本明細書において引用により全体として取り込まれる)を参照。
本発明の別の態様において、g3p融合タンパク質を含む本明細書に記載のg3p及びTolA組成物は、本明細書に記載の種々の疾患と関連する診断上の適用において用いられる。例えば、本発明の組成物の結合は、インビボ又はインビトロのいずれかでイメージング剤として用いられるとき、記載のタンパク質ミスフォールディング病の1つの診断の一部であり得る。
抗凝集剤としての糸状ファージの証明された治療上の有効性は、作用の任意の具体的なメカニズムに付随しないが、メカニズムを理解することは、より高い治療上の有効性を伴ったファージ設計を可能にする。加えて、それは、更なる抗凝集剤を調製するための基礎として作用する。
M13のAβ原線維対Aβモノマーへの結合を、表面プラズモン共鳴(SPR)により示した。
fAβ42へのM13結合も用量依存性である。図4Aにおいて、2つのファージ用量の増加モル量のfAβ42との結合を比較した。このM13−アミロイド線維結合アッセイにおいて、M13−Alexa488をAβ(fAβ)と2〜3時間混合して、複合体を形成させ、次に、複合体を7500rpmで10分間の遠心分離により沈殿させた。ペレット中の蛍光は、アミロイドへのM13結合に比例した。このアッセイは、ファージのfAβへの結合の定量的測定、及び結合に対する他の剤のファージと競合する能力の評価系を提供する。図4Bは、M13結合競合のKDが、表面プラズモン共鳴を用いて結合について観察したものと同様であることを示す。
M13ファージを90℃で10分間加熱したとき、結合に対して競合するその能力は、本質的に無効になる。図5は、アミロイド線維競合結合アッセイにおいて加熱処理(四角)対天然構造(丸)M13を用いた結合競合結果を示す。
M13はアミロイド線維を強力に脱凝集する。図6は、fAβを用いたチオフラビンT(ThT)蛍光アッセイを示す。M13の存在下で、fAβ42は脱凝集する。
g3pがM13−β−アミロイド相互作用に必要であるかどうかを直接試験するために、g3pを、Aβ結合に対する再度折り畳まれたファージと比較したArgC(M13Δg3p)及びM13Δg3pファージでのタンパク分解処理によりファージから取り除いた。バチルスのタンパク質分解酵素であるArgCでの処理は、g3pサブユニットをファージから選択的に取り除く。結果を図9Aに示す。再度折り畳まれたM13は、競合結合アッセイにおいて野生型M13と低減したレベルにも関わらず依然競合する。しかしながら、15倍のM13Δg3pでさえ、仮に野生型M13としても、不十分に競合した。この野生型M13と競合しない能力は、M13Δg3pファージにおける感染性の消失と一致する。図9B。ArgC処理はまた、脱凝集活性の消失を引き起こした。図9C。
g3pのN1とN2ドメイン間のヒンジを開合する能力に影響する変異は、これらの変異を生じるファージの、Aβへの結合に対して野生型M13と競合する能力に作用する。Eckert & Schmid, 2007は、この仮説を試験するために用いたいくつかの変種ファージを記載している。変異体「AAA」(「3A」としても知られる)は、線毛結合を損ない、N2ドメインの安定性を低減する。AAAは、g3pにおける以下の変異:W181A、F190A、及びF194Aを有する。IIHYは、変異T13I、T101I、Q129H、及びD209Yを含有し、そしてそれはN2ドメインを安定化し、TMを増大する。
g3pフラグメントがアミロイドに結合する能力を保持するかどうかを評価するために、N1及びN2を含むg3pフラグメントを調製し、表面プラズモン共鳴(SPR)により、Aβ原線維対Aβモノマーを結合する能力について評価した。結果は、rs−g3p(N1N2)がAβ原線維に優先的に結合し、Aβモノマーに結合しないことを示す。4μM rs−g3p(N1N2)を用いた表面プラズモン共鳴研究を図13に報告し、そしてそれは、rs−g3p(N1N2)結合のKDが約160nMであることを示す。この高い親和性相互作用は、特異的結合プロセスが、rs−g3p(N1N2)とアミロイド線維との間で生じることを示す。
g3pフラグメントがアミロイド線維を脱凝集するかどうかを試験するために、rs−g3p(N1N2)を、予め形成させたfAβ42原線維を脱凝集する能力について、ThT蛍光アッセイにおいて試験した。結果は、rs−g3p(N1N2)がfAβ42を強力に脱凝集することを示す。図14Aは、rs−g3p(N1N2)がfAβ42を用量に依存した方法で脱凝集するという、この実験の結果を示す。図14Bは、約20nMであるIC50を示す。
g3pが、α−シヌクレイン線維アセンブリーを阻害し得るかどうか、及び原子価(すなわち、g3pのコピー数)が役割を果たすかどうかを決定するために、5量体g3p(5コピーのg3p)及びモノマーg3p(1コピーのg3p)のα−シヌクレイン活性を阻害する能力を試験するアッセイを行った。結果は、g3pがα−シヌクレイン線維アセンブリーを阻害し、5量体g3pがこの活性でモノマーg3pより有効であることを示す。図16を参照。
g3p原子価がアミロイドへのg3p結合の能力において役割を果たすかどうかを評価するために、rs−g3p(N1N2)(「rs−g3p(N1N2)−Ig融合」)について2価であるIg融合タンパク質を作成し、Aβ線維に結合する能力について5価のM13と比較した。図17に示す通り、rs−g3p(N1N2)−Ig融合は、M13と同様の親和性かつrs−g3p(N1N2)のみより強力にAβに結合し、このことは、g3pの原子価が重要であり得ることを示している。同様の結果を競合アッセイの繰り返しで得た。図18。図18において、四角形は、コンストラクト2(M13)を表し;三角形はコンストラクト3(rs−g3p(N1N2))を表し;上下逆の三角形はコンストラクト4(rs−g3p(N1N2)−Ig融合)を表し;菱形はr−IgG4Fcネガティブコントロールを表す。
アミロイドに結合し、脱凝集させるg3pの能力に対する原子価の役割を更に評価するため、g3p(N1N2)に結合したテトラマーストレプトアビジンを、rs−g3p(N1N2)をビオチン−Lys−NTAとNiSO4の存在下で合わせることにより調製した。MWCO 3KDaメンブレンを用いて、過剰のリガンドを取り除いた。ストレプトアビジンを加え、過剰のrs−g3p(N1N2)−ビオチンをMWCO 100 KDaメンブレンを用いて取り除いた。得られたg3pコンストラクト、ストレプトアビジン−[ビオチン−g3p(N1N2)]は、4つのrs−g3p(N1N2)部分を有する。ストレプトアビジン−[ビオチン−g3p(N1N2)]を、結合アッセイにおいて、rs−g3p(N1N2)(「コンストラクト3」)と比較した。図20。テトラマーストレプトアビジン−[ビオチン−g3p(N1N2)]は、モノマーrs−g3p(N1N2)より強力にfAβに結合し、これは、原子価が結合の効力に重要であることを更に示す。図20。しかしながら、モノマーrs−g3p(N1N2)でさえ治療上許容されるレベルでfAβに結合する。
アルツハイマー病の研究のための周知のマウスモデル(Hsiao et al., Science (1996) 274:99−102; Duyckaerts et al., Acta Neuropathol (2008) 115:5−38)を用いて、オスTg2576マウスを500日より長く加齢させ、N1N2−Ig融合(7.8μg/注射でのコンストラクト5、及び8.2μg/注射でのコンストラクト6)又はネガティブコントロールとしての食塩水の2種の異なる調製物を海馬に両側性に注射(2μL/注射)し、7日目に屠殺した。脳組織を回収し、薄切し、抗アミロイドベータモノクローナル抗体(82E1; MyBioSourceのカタログ番号MBS490005−IJ10323)を用いて、プラーク負荷定量について染色した。図28に示す通り、両N1N2−Ig融合タンパク質は、食塩水で処置したマウスと比較して、海馬において測定したプラーク負荷を有意に低減した。図29に示す通り、両N1N2−Ig融合タンパク質は、食塩水で処置したマウスと比較して、大脳皮質において測定したプラーク負荷を有意に低減した。
Aβオリゴマーは、神経細胞において、ある種の毒性酵素の放出を引き起こす。酵素をアッセイして、化合物がAβオリゴマーにより誘導される細胞毒性を阻害し得るかどうかを決定することができる。図32は、M13(コンストラクト2)及びrs−g3p(N1N2)−hIgG1−Fc(コンストラクト6)は、N2a細胞に対するオリゴマーにより誘導される毒性を阻害することを示す代表的なデータを示す。それ故、g3pフラグメントは、Aβオリゴマーにより誘導される細胞毒性の強力な阻害剤である。
g3pフラグメントがタウに結合するかどうかを評価するために、N1及びN2を含むg3pフラグメント−Ig融合タンパク質を調製し、表面プラズモン共鳴(SPR)によりftauを結合する能力について評価した。図35は、rs−g3p(N1N2)−hIgG4−Fc(コンストラクト4)がftauに強力に結合することを示す1つの代表的SPRアッセイの結果を示す。
プリオン病は、正常の細胞プリオンタンパク質(PrPc)のタンパク質分解酵素抵抗性病理形態PrPScへの変換により特徴付けられる。PrPScは、タンパク質分解酵素抵抗性に基づきPrPcと区別される:タンパク質分解酵素は、PrPScを部分的に低減して、分子量19〜21kDaの未グリコシル化形態を有するタンパク質分解酵素抵抗性C末端コアフラグメント(PrPres)を形成した。PrPScの阻害、逆転、及び低減は、いくつかの神経変性疾患の処置への価値ある治療上のアプローチを構成する。
Claims (59)
- アミロイドに結合するポリペプチドを含む医薬組成物であって、前記ポリペプチドが、少なくとも1個の遺伝子3タンパク質(g3p)又はそのアミロイド結合フラグメント、及び医薬的に許容される担体を含み、ここで、前記組成物がバクテリオファージを含まない、医薬組成物。
- 前記ポリペプチドがg3pのN2ドメインのアミロイド結合フラグメントを含む、請求項1記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドがg3pの全N2ドメインを含む、請求項2記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドがg3pのN1ドメインのフラグメントを更に含む、請求項2または3に記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドがg3pの全N1ドメインを更に含む、請求項2または3に記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドがg3pを含む、請求項1〜5のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドが、前記ポリペプチドに共有結合又は非共有結合のいずれかで結合した担体を更に含む、請求項1〜6のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチド中に存在する少なくとも1個のg3p又はそのアミロイド結合フラグメントのアミノ酸配列が、野生型g3pの対応する部分のアミノ酸配列と同一である、請求項1〜7のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチド中に存在する少なくとも1個のg3p又はそのアミロイド結合フラグメントが、変異体g3pである、請求項1〜8のいずれか1項記載の医薬組成物。
- g3p又はそのアミロイド結合フラグメントのアミノ酸配列が、配列番号:1〜20のいずれか1つの対応する部分と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、又は100%同一である、請求項1〜9のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドがg3pのN1及びN2ドメインを含み、N2のヒンジ領域が、ヒンジTmが野生型M13ファージのヒンジTmより低くなるよう、変異誘発され、前記ポリペプチドがM13より高い親和性でアミロイドに結合する、請求項9又は10記載の医薬組成物。
- アミロイドに結合する第1のドメインを含む融合タンパク質であって、第1のドメインが、少なくとも1個のg3p又はそのアミロイド結合フラグメント;及び第2のドメインを含む、融合タンパク質。
- 前記第1のドメインがg3pのN2ドメインのアミロイド結合フラグメントを含む、請求項12記載の融合タンパク質。
- 前記第1のドメインが全N2ドメインを含む、請求項12又は13記載の融合タンパク質。
- 前記第1のドメインがg3pのN1ドメインのフラグメントを更に含む、請求項13又は14記載の融合タンパク質。
- 前記第1のドメインがg3pの全N1ドメインを更に含む、請求項13又は14記載の融合タンパク質。
- 前記第1のドメイン中に存在する少なくとも1個のg3p又はそのアミロイド結合フラグメントのアミノ酸配列が、野生型g3pの対応する部分のアミノ酸配列と同一である、請求項12〜16のいずれか1項記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質中に存在する少なくとも1個のg3p又はそのアミロイド結合フラグメントが変異体又は変種g3pである、請求項12〜17のいずれか1項記載の融合タンパク質。
- 前記第1のドメインが、アミロイドに結合する能力を保持し、配列番号:1〜20のいずれか1つのアミノ酸配列の対応する部分で整列させたとき、わずか75、50、40、30、25、20、15、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個のアミノ酸相違を含むアミノ酸配列を有するg3pの変異体又は変種、又はそのフラグメントを含む、請求項18記載の融合タンパク質。
- 前記第1のドメインが、g3pのN1及びN2ドメインフラグメントを含み、N1及びN2ドメインの少なくとも1つが、アミロイドに結合するフラグメントの能力を破壊しない変異を含み、N1及びN2ドメインフラグメントが、配列番号:1〜20のいずれか1つの対応するアミノ酸で整列させたとき、わずか75、50、40、30、25、20、15、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個のアミノ酸相違を含むアミノ酸配列を有する、請求項18記載の融合タンパク質。
- 前記第2のドメインが免疫グロブリン定常領域を含む、請求項12〜20のいずれか1項記載の融合タンパク質。
- 前記免疫グロブリン定常領域がFcフラグメントである、請求項21記載の融合タンパク質。
- 前記Fcフラグメントが、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、及びIgMのFcフラグメントから選択される、請求項22記載の融合タンパク質。
- 配列番号:9、配列番号:11、又は配列番号:13に少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも98%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項12記載の融合タンパク質。
- 配列番号:9、配列番号:11、又は配列番号:13と同一であるアミノ酸配列を含む、請求項24記載の融合タンパク質。
- 請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質を含む、医薬組成物。
- 変異体又は変種g3pを発現する単離糸状ファージを含む、医薬組成物。
- 変異体又は変種g3pのアミノ酸配列が、配列番号:1と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも98%同一である、請求項27記載の医薬組成物。
- 5以上のコピーのg3p、又は5以上のコピーの変異体又は変種g3pを発現する単離糸状ファージを含む、医薬組成物。
- 必要とする患者において、アミロイドの低減、アミロイド形成の阻害、アミロイド凝集の阻害、又は毒性オリゴマーの形成の除去及び/又は予防において使用するための、請求項1〜11又は26〜29のいずれか1項記載の医薬組成物、又は請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質。
- 早発型アルツハイマー病、後発型アルツハイマー病、及び発症前アルツハイマー病を含むアルツハイマー病;パーキンソン病;SAAアミロイド症;シスタチンC;遺伝性アイスランド症候群;老衰;多発性骨髄腫;クールー病、クロイツフェルト・ヤコブ病(CJD)、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病(GSS)、致死性家族性不眠症(FFI)、スクレイピー、及びウシ海綿状脳症(BSE)を含むプリオン病;筋萎縮性側索硬化症(ALS);脊髄小脳失調症(SCA1、SCA3、SCA6、又はSCA7);ハンチントン病;歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症;球脊髄性筋萎縮症;遺伝性脳アミロイド血管症;家族性アミロイドーシス;前頭側頭葉型認知症;イギリス型/デンマーク型認知症;及び家族性脳症から選択される疾患又は状態の処置において用いるための、請求項1〜11又は26〜29のいずれか1項記載の医薬組成物、又は請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質。
- 患者が、バイオマーカーがポジトロン放出断層撮影においてイメージング剤として用いられるとき、バイオマーカーフロルベタピルに対して陽性である、請求項30又は31記載の医薬組成物。
- 疾患又は状態がパーキンソン病、アルツハイマー病、又はハンチントン病である、請求項30〜32のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 疾患又は状態がアルツハイマー病である、請求項33記載の医薬組成物。
- 疾患又は状態がプリオン病である、請求項31記載の医薬組成物。
- プリオン病が、クロイツフェルト・ヤコブ病、クールー病、致死性家族性不眠症、及びゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群から選択される、請求項35記載の医薬組成物。
- 必要とする患者におけるアミロイドの低減方法であって、患者に有効量の請求項1〜11又は26〜29のいずれか1項記載の医薬組成物、又は請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質を投与することを含む、方法。
- 患者が、アミロイドの存在と関連する神経変性疾患の症状を示している、請求項37記載の方法。
- 患者が、バイオマーカーがポジトロン放出断層撮影においてイメージング剤として用いられるとき、バイオマーカーフロルベタピルに対して陽性である、請求項37又は38記載の方法。
- 神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、又はハンチントン病である、請求項37〜39のいずれか1項記載の方法。
- 神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項40記載の方法。
- 患者が、プリオンにより仲介される疾患の症状を示している、請求項37記載の方法。
- プリオンにより仲介される疾患が、クロイツフェルト・ヤコブ病、クールー病、致死性家族性不眠症、又はゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群から選択される、請求項42記載の方法。
- アミロイドに結合するポリペプチドをコードする核酸であって、ポリペプチドがg3p又はそのアミロイド結合フラグメントを含み、ポリペプチドが配列番号:1に対してg3p又はそのアミロイド結合フラグメント中に1個以上の変異を含み、変異がQ129H、G153D、W181A、F190A、及びF194Aからなる群より非限定的に選択される、核酸。
- ポリペプチドが、g3pのN2ドメインのアミロイド結合フラグメントを含む、請求項44記載の核酸。
- 請求項44又は45記載の核酸を含む、ベクター。
- 請求項46記載のベクターを含む、宿主細胞。
- アミロイドに結合するポリペプチドの製造方法であって、ポリペプチドがg3p又はそのアミロイド結合フラグメントを含み、ポリペプチドが配列番号:1に対してN2中に1個以上の変異を含み、変異がQ129H、G153D、W181A、F190A、及びF194Aからなる群より非限定的に選択され、請求項46記載のベクター中の核酸によりコードされるポリペプチドを発現させ、発現したタンパク質を単離する、を含む方法。
- ポリペプチドが、g3pのN2ドメインのアミロイド結合フラグメントを含む、請求項48記載の方法。
- 請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質をコードする核酸。
- 請求項50記載の核酸を含む、ベクター。
- 請求項51記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質の製造方法であって、請求項51記載のベクター中の核酸によりコードされる融合タンパク質を発現させ、発現した融合タンパク質を単離する、を含む方法。
- 組成物中のポリペプチド又は融合タンパク質が更に検出可能な標識を含む、請求項1〜11のいずれか1項記載の医薬組成物、又は請求項12〜25のいずれか1項記載の融合タンパク質。
- 標識が、18F、11C、又は123Iから選択される放射性標識である、請求項54記載の医薬組成物又は融合タンパク質。
- a)患者に請求項54記載の医薬組成物又は融合タンパク質を投与し;
b)標識を検出する
工程を含む、患者におけるアミロイドの検出方法。 - 標識がポジトロン放出断層撮影(PET)により検出される、請求項56記載の方法。
- 請求項54又は55記載の組成物を含む、イメージング剤。
- 患者におけるアミロイドと関連する疾患又は異常の診断方法であって、
a)患者に請求項58記載のイメージング剤を投与し;
b)存在するアミロイドのいずれかに前記イメージング剤を結合させ;
c)アミロイドに結合したイメージング剤を検出し;
d)イメージング剤が検出された場合に、アミロイドと関連する疾患又は異常を診断する
工程を含む、方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016526044A (ja) * | 2013-05-28 | 2016-09-01 | ニューロファージ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 低減された免疫原性を有する修飾されたバクテリオファージg3pアミノ酸配列を含むポリペプチド |
JP2021527407A (ja) * | 2018-06-15 | 2021-10-14 | プロクララ バイオサイエンシーズ, インコーポレイテッド | 全般的アミロイド相互作用モチーフ(gaim) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX362175B (es) | 2011-11-29 | 2019-01-07 | Proclara Biosciences Inc | Composiciones de proteina del gen 3 de bacteriofago y sus usos como agentes de union amiloides. |
LT2906235T (lt) | 2012-10-02 | 2017-10-25 | Proclara Biosciences, Inc. | Bakteriofago sulietų baltymų p3, kaip amiloido rišamųjų agentų, naudojimas |
TW201632542A (zh) * | 2014-12-03 | 2016-09-16 | 神經噬菌體製藥股份有限公司 | 包含缺乏醣基化信號之修飾噬菌體g3p胺基酸序列的多肽 |
ES2751378T3 (es) * | 2015-11-25 | 2020-03-31 | Lilly Co Eli | Vectores fagos de presentación y procedimientos de uso |
EP3448874A4 (en) | 2016-04-29 | 2020-04-22 | Voyager Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS FOR TREATING A DISEASE |
ES2952734T3 (es) * | 2017-07-14 | 2023-11-03 | Gce Holding Ab | Medidor electrónico |
WO2024119183A1 (en) | 2022-12-02 | 2024-06-06 | Alzheon, Inc. | Methods for treating neurodegenerative disorders with tramiprosate |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008528688A (ja) * | 2005-02-01 | 2008-07-31 | ラモット アット テル−アビブ ユニバーシティ リミティド | アミロイド沈着に付随する炎症および活性化されたマイクログリアにかかわる脳の炎症の処置法 |
WO2010060073A2 (en) * | 2008-11-24 | 2010-05-27 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Method for treating parkinson's disease |
US20110182948A1 (en) * | 2008-05-22 | 2011-07-28 | Beka Solomon | Method for treating disease characterized by plaque |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3941763A (en) | 1975-03-28 | 1976-03-02 | American Home Products Corporation | PGlu-D-Met-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 and intermediates |
US4215051A (en) | 1979-08-29 | 1980-07-29 | Standard Oil Company (Indiana) | Formation, purification and recovery of phthalic anhydride |
DE3572982D1 (en) | 1984-03-06 | 1989-10-19 | Takeda Chemical Industries Ltd | Chemically modified lymphokine and production thereof |
CA2006596C (en) | 1988-12-22 | 2000-09-05 | Rika Ishikawa | Chemically-modified g-csf |
EP1132471A3 (de) | 1989-09-12 | 2001-11-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | TNF-bindende Proteine |
US6552170B1 (en) | 1990-04-06 | 2003-04-22 | Amgen Inc. | PEGylation reagents and compounds formed therewith |
US5252714A (en) | 1990-11-28 | 1993-10-12 | The University Of Alabama In Huntsville | Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde |
CA2288429C (en) | 1991-03-15 | 2006-04-25 | Synergen, Inc. | Pegylation of polypeptides |
FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
ATE311895T1 (de) | 1992-05-26 | 2005-12-15 | Immunex Corp | Neue zytokine die cd30 binden |
EP1724282B1 (en) | 1997-05-21 | 2013-05-15 | Merck Patent GmbH | Method for the production of non-immunogenic proteins |
CA2342967A1 (en) | 1998-12-08 | 2000-06-15 | Biovation Limited | Modifying protein immunogenicity |
US20020052311A1 (en) | 1999-09-03 | 2002-05-02 | Beka Solomon | Methods and compostions for the treatment and/or diagnosis of neurological diseases and disorders |
US8022270B2 (en) | 2000-07-31 | 2011-09-20 | Biolex Therapeutics, Inc. | Expression of biologically active polypeptides in duckweed |
PL362324A1 (en) | 2001-02-19 | 2004-10-18 | Merck Patent Gmbh | Artificial fusion proteins with reduced immunogenicity |
BR0207945A (pt) | 2001-03-08 | 2004-07-27 | Merck Patent Ges Mit Beschroen | Fator estimulante de colÈnia de macrófagos granulócitos modificados (gm-csf) com reduzida imunogenicidade |
WO2004018694A2 (de) | 2002-08-20 | 2004-03-04 | Sungene Gmbh & Co. Kgaa | Verfahren zur herstellung von ketocarotinoiden in genetisch veränderten organismen |
DE10238846A1 (de) * | 2002-08-20 | 2004-03-04 | Nemod Immuntherapie Ag | Aktive Fusionsproteine und Verfahren zu ihrer Herstellung |
BRPI0619748B8 (pt) * | 2005-12-12 | 2021-05-25 | Ac Immune Sa | anticorpo monoclonal, polinucleotídeo, composição, mistura, uso de um anticorpo monoclonal ou uma parte funcional do mesmo, método para preparar uma composição farmacêutica, linhagem celular de hibridoma isolado, método de diagnóstico de uma doença ou condição associada a amilóide em um paciente, método para diagnosticar uma predisposição para uma doença ou condição, método para monitorar doença residual mínima, método para prever a responsividade de um paciente e kits de teste |
US20090317324A1 (en) | 2006-02-15 | 2009-12-24 | Ramot At Tel Aviv University | Filamentous bacteriophage displaying protein as a binder of antibodies and immunocomplexes for delivery to the brain |
WO2007094003A2 (en) | 2006-02-15 | 2007-08-23 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Viral display vehicles for treating multiple sclerosis |
WO2007109733A2 (en) * | 2006-03-21 | 2007-09-27 | The Johns Hopkins University | Diagnostic and prognostic markers and treatment strategies for multiple sclerosis |
WO2007114139A1 (ja) | 2006-04-06 | 2007-10-11 | Fumiaki Uchiyama | 新規繊維状ファージによるファージディスプレイ |
US20090324554A1 (en) | 2006-07-21 | 2009-12-31 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Method for inhibiting or treating a disease associated with intracellular formation of protein fibrillar or aggregates |
CA2666320A1 (en) | 2006-10-11 | 2008-04-17 | Antitope Limited | T cell epitope databases |
EP2303920A4 (en) * | 2008-07-25 | 2011-11-09 | Abbott Lab | SS-AMYLOID PEPTIDE ANALOGUES, OLIGOMERS THEREOF, PREPARATION METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING THE SAME OR OLIGOMERIC ANALOGUES, AND USES THEREOF |
EP2356231A2 (en) * | 2008-09-26 | 2011-08-17 | Wyeth LLC | Compatible display vector systems |
WO2011084714A2 (en) | 2009-12-17 | 2011-07-14 | Biogen Idec Ma Inc. | STABILIZED ANTI-TNF-ALPHA scFv MOLECULES OR ANTI-TWEAK scFv MOLECULES AND USES THEREOF |
US8856364B2 (en) | 2011-03-11 | 2014-10-07 | Google Inc. | Conducting opportunistic network updates on a mobile device |
KR20140051840A (ko) | 2011-03-11 | 2014-05-02 | 라모트 앳 텔-아비브 유니버시티 리미티드 | 신경변성 타우오패씨를 치료하는 방법 |
MX362175B (es) | 2011-11-29 | 2019-01-07 | Proclara Biosciences Inc | Composiciones de proteina del gen 3 de bacteriofago y sus usos como agentes de union amiloides. |
LT2906235T (lt) | 2012-10-02 | 2017-10-25 | Proclara Biosciences, Inc. | Bakteriofago sulietų baltymų p3, kaip amiloido rišamųjų agentų, naudojimas |
AU2014274253B2 (en) | 2013-05-28 | 2018-06-14 | Proclara Biosciences, Inc. | Polypeptides comprising a modified bacteriophage g3p amino acid sequence with reduced immunogenicity |
TW201632542A (zh) | 2014-12-03 | 2016-09-16 | 神經噬菌體製藥股份有限公司 | 包含缺乏醣基化信號之修飾噬菌體g3p胺基酸序列的多肽 |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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US20110182948A1 (en) * | 2008-05-22 | 2011-07-28 | Beka Solomon | Method for treating disease characterized by plaque |
WO2010060073A2 (en) * | 2008-11-24 | 2010-05-27 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Method for treating parkinson's disease |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016526044A (ja) * | 2013-05-28 | 2016-09-01 | ニューロファージ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 低減された免疫原性を有する修飾されたバクテリオファージg3pアミノ酸配列を含むポリペプチド |
JP2021527407A (ja) * | 2018-06-15 | 2021-10-14 | プロクララ バイオサイエンシーズ, インコーポレイテッド | 全般的アミロイド相互作用モチーフ(gaim) |
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