JP2015192662A - トリアシルグリセロールリパーゼ変異植物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】特定な配列のアミノ酸配列からなるイネトリアシルグリセロールリパーゼ、又は、その他種オルソログ等をおいて、該トリアシルグリセロールリパーゼの活性が欠失した又は抑制された変異型トリアシルグリセロールリパーゼをコードする変異遺伝子を有するイネ科植物。
【選択図】なし
Description
(2)前記変異型TAGリパーゼが(i)前記(a)の配列番号1に示すアミノ酸配列において52位のバリン、160位のグリシン、162位のセリン、164位のグリシン、168位のアラニン、179位のグリシン及び247位のトレオニンのいずれか一以上のアミノ酸が欠失又は置換された変異、又は(ii)前記(b)若しくは(c)に示すアミノ酸配列において(i)に示す各アミノ酸に相当するアミノ酸が欠失又は置換された変異を少なくとも有する、(1)に記載の植物。
(3)前記(i)に示す164位のグリシン又は前記(ii)に示す164位のグリシンに相当するグリシンがセリンに置換されている、(2)に記載の植物。
(4)配列番号1に示すアミノ酸配列からなるTAGリパーゼをコードする遺伝子が配列番号2に示す塩基配列からなる、(1)〜(3)のいずれかに記載の植物。
(5)前記変異遺伝子が配列番号2に示す塩基配列において490位のグアニンからアデニンへの置換に基づく、(4)に記載の植物。
(7)前記遺伝子の発現が前記遺伝子産物を標的とするRNA干渉、アンチセンス核酸、核酸酵素又はU1アダプターによって抑制される、(6)に記載の植物。
(8)前記RNA干渉がsiRNA又はshRNAを用いる、(7)に記載の植物。
(9)前記siRNA又はshRNAをコードするDNAを発現可能な状態で包含する発現ベクターを含む、(8)に記載の植物。
(11)前記イネ科植物がイネである、(10)に記載の植物。
(12)前記(1)〜(11)に記載の植物、その後代又はその交雑体由来の種子又は果実。
(13)前記(12)に記載の種子、果実、又はその一部から得られる植物油。
(14)植物がイネであり、米糠及び/又は胚芽から得られる、(13)に記載の植物油。
1−1.概要
本発明の第1の態様は、トリアシルグリセロール(TAG)リパーゼ変異植物である。本態様の植物細胞内に含まれるTAGは、TAGリパーゼによる分解が喪失又は抑制されている。そのため製油時の歩留まりを高めることが可能となる。
本態様のTAGリパーゼ変異植物は、変異型TAGリパーゼをコードする遺伝子を有する。当該遺伝子の変異により、この植物は、TAGリパーゼの活性が欠失しているか又は抑制されている。
(1)TAGリパーゼ遺伝子への変異導入
野生型TAGリパーゼ遺伝子への変異の導入は、当該分野で公知の遺伝子変異導入技術を用いることができる。例えば、TAGリパーゼ遺伝子の活性ドメインや保存領域に1〜数個の塩基の欠失、付加及び/又は置換を導入する場合には、TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)(Cermak T, et al., 2011, Nucleic Acids Res 39: e82)、ZFN(Zinc Finger Nuclease)(Kim, Y.-G., et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1156-1160.)、又はCRISPR/Cas9システム(Cong, L. et al., 2013, Science, 339, 819-823.)のようなゲノム編集技術を用いればよい。これらの技術は、目的とする植物ゲノム上の所望の配列を切断して変異を導入することができる。例えば、イネに対してTALENを用いる場合であれば、配列番号2に示す塩基配列からなるイネTAGリパーゼ遺伝子において480位から504位までの塩基(活性ドメインをコードする塩基に相当する)を標的とするDNA塩基配列認識部位(リピート部位)を構築し、TALEN発現ベクター内に挿入する。続いて、調製したTALEN発現ベクターからin vitro転写法によってTALEN mRNAを合成した後、イネに常法を用いて導入すればよい。
変異型TAGリパーゼ遺伝子を植物細胞内に導入する方法、すなわち植物細胞の形質転換方法は、当該分野で公知の任意の適当な方法を用いればよい。好適な形質転換方法として、変異型TAGリパーゼ遺伝子が発現ベクターに包含されている場合、プロトプラスト法、パーティクルガン法又はアグロバクテリウム法等を用いることができる。
花粉等の植物器官・植物組織、これらの切片、未分化のカルス、これを酵素処理して細胞
壁を除いたプロトプラスト等の植物培養細胞のいずれであってもよい。また、in planta
法の場合、吸水種子や植物体全体を利用できる。
(1)及び(2)で変異型TAGリパーゼ遺伝子を導入した植物では、変異型TAGリパーゼ遺伝子がヘテロ接合型となっている。当該変異型TAGリパーゼ遺伝子が劣性遺伝子の場合、変異遺伝子に基づく形質を表現型として顕在化させるため、必要に応じて、変異型TAGリパーゼ遺伝子のホモ接合型個体を得てもよい。ホモ接合型個体は、同系交配(自家受粉)を行い、M1又はM2世代をTAGリパーゼ遺伝子の変異に基づいて選抜して得ることができる。例えば、M1個体の種子を得た後、それを播種して、株別に育苗し、M1個体の一部(例えば、葉の一部)を採取して、ゲノムを調製し、TAGリパーゼ遺伝子の変異を導入した領域をサイクルシークエンス法等で検証すればよい。上述したように、TAGリパーゼ遺伝子上の特定の位置における塩基置換については、CAPS法により検証することも可能である。
本態様のTAGリパーゼ変異植物は、野生型植物と比較して植物体におけるトリアシルグリセロールリパーゼの活性が欠失しているか、又は抑制されている。植物細胞内のオイルボディ等に貯蔵されるTAGは、TAGリパーゼによる加水分解を受けることなく、保持され得る。
2−1.概要
本発明の第2の態様は、TAGリパーゼ遺伝子発現抑制植物である。本態様の植物では、内因性のTAGリパーゼ遺伝子の発現が抑制されている。そのため、植物細胞内に含まれるTAGは、加水分解が著しく抑制され、分解産物である遊離脂肪酸の発生が抑制される。その結果、本態様の植物を原料とした製油時の歩留まりを高めることが可能となる。
本態様の植物は、遺伝子発現抑制分子によってTAGリパーゼをコードする遺伝子の発現が抑制されている。
「遺伝子発現抑制分子」とは、標的遺伝子の転写後、その遺伝子転写産物であるmRNA(以下、「標的mRNA」とする)が翻訳されるまでの間に、その標的遺伝子の発現を抑制することのできる分子をいう。ここでいう「標的遺伝子」とは、第1態様で詳述した各植物の野生型TAGリパーゼ遺伝子である。
「RNA干渉剤」とは、生体内においてRNA干渉(RNA inteference:RNAi)を誘導する物質をいう。RNA干渉とは、標的とする遺伝子転写産物の分解を介してその遺伝子の発現を抑制する配列特異的な転写後遺伝子サイレンシングである。本明細書におけるRNA干渉剤は、TAGリパーゼ遺伝子の転写産物に対して特異的なRNA干渉を誘導することのできるRNA分子をいう。例えば、siRNA、又はshRNAが挙げられる。RNA干渉については、例えば、Bass B.L., 2000, Cell, 101, 235-238;Sharp P.A., 2001, Genes Dev., 15 ,485-490;Zamore P.D., 2002, Science, 296, 1265-1269;Dernburg ,A.F. & Karpen, G.H., 2002, Cell, 111,159-162に詳述されている。以下、各RNA干渉剤について詳細に説明をする。
「siRNA」(短分子干渉RNA:small interference RNA)とは、標的遺伝子の塩基配列の一部に相当する塩基配列で構成されるセンス鎖(パッセンジャー鎖)、及びそのアンチセンス鎖(ガイド鎖)からなる小分子二本鎖RNAである。siRNAは、真核細胞に導入することによってRNA干渉を誘導することができる(Fire A. et al.,1998,Nature,391, 806-811)。
「shRNA」(short hairpin RNA)とは、前記siRNAを構成する二本鎖RNAの各一末端がスペーサ配列で連結されて一本鎖となったRNA分子をいう。したがって、shRNAは、分子内でセンス領域とアンチセンス領域が互いに塩基対合してステム構造を形成し、さらにスペーサ配列がループ構造をとることによって、分子全体としてヘアピン型のステム−ループ構造を有する。shRNAが細胞内に導入されると、ループ構造部分が切断されて二本鎖RNA分子、すなわちsiRNAが生成される。生じたsiRNAは、前項で述べたsiRNAと同様のRNA干渉機構によって標的遺伝子の発現を抑制することができる。
「アンチセンス核酸」とは、標的遺伝子の転写産物であるmRNAを標的とし、その塩基配列の全部又は一部に対して相補的な塩基配列を有し、標的mRNAにハイブリダイズしてその翻訳を阻害する核酸分子である。核酸は、主としてDNAで構成されるが、例えば、PNAやLNAのような核酸類似体やRNAも含むことができる。本態様における遺伝子発現抑制分子としてのアンチセンス核酸は、TAGリパーゼmRNAに相補的な塩基配列を有する。アンチセンス核酸の塩基長は、特に限定はしないが、通常は15〜40塩基、好ましくは17〜25塩基の長さで足りる。
アンチセンス核酸は、当該分野における公知の核酸合成技術を用いて作製することができる。例えば、前述のGreen, M.R. and Sambrook, J.(2012)を参照されたい。
「核酸酵素」とは、触媒活性を有する核酸分子であって、標的遺伝子の転写産物であるmRNAを基質として、その特定部位を切断する触媒機能を有する。核酸酵素には、DNAで構成されるデオキシリボザイム、及びリボ酵素とも呼ばれRNAで構成されるリボザイムが知られているが、本明細書における核酸酵素は、いずれであってもよい。デオキシリボザイム及びリボザイムは、いずれも構成塩基に化学修飾核酸、人工核酸及び/又は核酸類似体を一部に含むことができる。
「U1アダプター」とは、標的遺伝子のmRNA前駆体における3'末エクソンに相補的な5'側の「標的ドメイン」と、U1 snRNAの5’領域に相補的な配列を有する3'側の「U1ドメイン」を含む二機能性の約25塩基からなる一本鎖核酸である(Goraczniak R. et al., 2009, Nat Biotechnol., Vol 27, p257-263,)。生体内にU1アダプターを導入すると、U1 snRNAを含むU1核内低分子リボ核蛋白質(U1 snRNP)が標的遺伝子のmRNA前駆体におけるポリAシグナル周辺に結合し、該mRNAのポリアデニル化を特異的に阻害する。その結果、標的遺伝子のmRNA前駆体が不安定化し、その後、核内で分解されることによって、遺伝子のサイレンシングが生じる。
本態様の植物は、前記遺伝子発現抑制分子をコードするDNAを発現可能な状態で包含する発現ベクターを含むことができる。遺伝子発現抑制分子をコードするDNAを含む発現ベクターの種類は、特に限定はしないが、植物用プラスミド又は植物用ウイルスが好ましい。例えば、アグロバクテリウムを介して植物に目的遺伝子を導入することができるpBI系(例えば、pBI121、pBI101、pBI101.2、pBI101.3、pBIG2113)若しくはpRI系等のバイナリーベクターの植物プラスミドやカリフラワーモザイクウイルス(CaMV)、インゲンマメゴールデンモザイクウイルス(BGMV)、タバコモザイクウイルス(TMV)等のウイルスを利用することができる。さらに、pUC18系、pUC19系、pUC9系等の大腸菌と植物のシャトルベクターであってもよい。これらの発現ベクターは、各ライフサイエンスメーカーから市販されており、それらを利用することもできる。「発現可能な状態で包含する」とは、発現ベクターに含まれる遺伝子発現抑制分子が植物細胞内で発現可能なように、プロモーターとターミネーターの制御下に配置されていることをいう。
3−1.概要
本発明の第3の態様は、第1態様に記載のTAGリパーゼ変異植物及び第2態様に記載のTAGリパーゼ遺伝子発現抑制植物、その後代又はその交雑体に由来する種子、果実又はその一部(以下、しばしば「種子等」と表記する)である。本発明の種子等は、TAGリパーゼの不活性化処理、あるいはTAGリパーゼ阻害剤を添加することなく、TAGリパーゼの活性を欠失又は抑制することができる。
本態様の種子、果実又はその一部は、第1態様に記載のTAGリパーゼ変異植物又は第2態様に記載のTAGリパーゼ遺伝子発現抑制植物、その後代又はその交雑体に由来する。
本態様の種子等は、第1態様に記載のTAGリパーゼ変異植物又は第2態様に記載のTAGリパーゼ遺伝子発現抑制植物に由来するため、植物細胞内のTAGリパーゼが欠失しているか又は抑制されている。それ故、本態様の種子等は、植物細胞内の中性脂肪の加水分解を抑制することができる。
4−1.概要
本発明の第4の態様は、植物油である。本発明の植物油は、第3態様に記載の種子、果実、又はその一部から得られる。本発明の植物油は、原料の種子等におけるTAGリパーゼ活性の欠失又は抑制により、脂質酸化や異臭発生が生じにくい。
植物油は、第3態様に記載の種子等、すなわち第1態様に記載のTAGリパーゼ変異植物又は第2態様に記載のTAGリパーゼ遺伝子発現抑制植物に由来する種子等を原料とする。
本態様の植物油は、すなわち第1態様に記載のTAGリパーゼ変異植物又は第2態様に記載のTAGリパーゼ遺伝子発現抑制植物に由来する種子等を原料とするので、脂質酸化を生じにくく、また異臭も発生しにくい。
(目的)
本発明のTAGリパーゼ遺伝子変異植物を作出するために、イネを用いてこれまでに報告のない真のTAGリパーゼ遺伝子を単離、同定し、その遺伝子に変異を生じた結果、TAGリパーゼ活性が欠失した本発明の変異体TAGリパーゼ遺伝子変異イネを選抜する。
(1)リパーゼ/エステラーゼ酵素群の分離及び精製
TAGリパーゼは、エステル結合を切断するリパーゼ/エステラーゼ酵素群に属する。そこで、米油又はオリーブ油を基質として中性脂肪を分解する活性を指標に、日本晴の米糠画分に含まれるリパーゼ/エステラーゼ酵素を硫安沈殿した後、複数のカラムクロマトグラフィーを用いて分離、精製した。まず、日本晴の米糠1160gを、3倍量のヘキサンで3回脱脂した。脱脂した米糠に5倍量の緩衝液(25mM Tris-HCl, pH 7.6, 0.1mM EDTA, 0.1mM モノヨード酢酸, 0.1mM PMSF)を加え、ポリトロン粉砕機で磨砕した。磨砕液は、ガーゼでろ過した後に、10000rpmで20分間遠心をした。得られた上清に、20%飽和になるように硫酸アンモニウムを加え、20分間静置した後に、再度遠心をした。得られた上清を、充填剤にブチルセファロースを用いた疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけた。カラムは、直径5.2cm×長さ23cmのものを用いた。溶出は、25mM Tris-HCl(pH7.6)(20% 飽和硫安)、25mM Tris-HCl(pH7.6)(10% 飽和硫安)、25mM Tris-HCl(pH7.6)(5% 飽和硫安)、25mM Tris-HCl(pH7.6)(2% 飽和硫安)、25mM Tris-HCl(pH7.6)で行った。活性画分は、2つに分かれたので、溶出順にTL-1とTL-2とした。各々の活性画分を脱塩、濃縮後に充填剤にQセファロースを用いた陰イオン交換クロマトグラフィーを行った。カラムは、直径2.5cm×長さ10cmのものを用いた。溶出は、25mM Tris-HCl(pH8.0)、塩化ナトリウムの0.0〜1.0Mの濃度勾配溶出を行った。その結果、リパーゼ/エステラーゼ活性は、図3に示す3画分(TL-1a、TL-1b、TL-2)に分離された。TL-1aは総活性の20%、TL-1bは総活性の30%、TL-2は総活性の50%であった。
前記(1)においてへパリンクロマトグラフィーで精製したTL-1b及びTL-2画分中の精製したタンパク質をそれぞれ非変成ゲルの複数レーンに積載し、電気泳動で分離した。分離後に同一タンパク質を泳動した複数レーンのうち1レーンのゲルをCBB染色してタンパク質の位置を確認した後、染色レーンのゲルバンドと同一位置にある非染色レーンのゲルを切り出した。続いて、4メチルウンベリフェリルオレート(4MUO)を基質としてゲル中のタンパク質による分解活性を評価した。
目的のTAGリパーゼ遺伝子は、種子及び胚で発現している。そこで、前記各候補遺伝子が種子や胚で発現しているか否かを、「遺伝子の発現プロファイル;The Ric e Expression Profile Database (RiceXPro)」により調査した(http://ricexpro.dna.affrc.go.jp/index.html)。その結果、TAGリパーゼ候補遺伝子のうち、TL-1b-C画分遺伝子は、胚では発現しておらず、また、TL-2-C画分遺伝子は、日本型イネに対応する遺伝子がないことが、それぞれ明らかになった。したがって、これら2つの遺伝子をTAGリパーゼ候補遺伝子から除外した。これにより、TL-1b画分ではTL-1b-A画分遺伝子及びTL-1b-B画分遺伝子が、TL-2画分ではTL-2-A画分遺伝子及びTL-2-B画分遺伝子が、TAGリパーゼ候補遺伝子として絞り込まれた。アミノ酸配列から推定される機能として、TL-1b-A画分及びTL-1b-B画分に含まれるタンパク質は、いずれもGDSLモチーフを有するリパーゼ/エステラーゼであり、TL-2-A画分に含まれるタンパク質は核酸代謝に関係するSimilar to mRNA-associated proteinであり、TL-2-B画分に含まれるタンパク質はclass3ファミリーに属するリパーゼである。このうちTL-2-A画分に含まれるタンパク質は、リパーゼやエステラーゼ又は加水分解酵素に特有なドメインを有さないことからTAGリパーゼの候補から除外した。
TAGリパーゼ候補遺伝子として絞り込んだTL-1b-A画分遺伝子、TL-1b-B画分遺伝子及びTL-2-B画分遺伝子の何れがイネTAGリパーゼ遺伝子であるかを明らかにするために、各画分の候補遺伝子の酵母発現系を作製し、TAGリパーゼ活性を評価した。
Os02g0286200遺伝子として単離、同定されたイネTAGリパーゼ遺伝子は、配列番号2で示す塩基配列からなり、また、この遺伝子にコードされるイネTAGリパーゼは、349アミノ酸からなる。
上記系統の中でTAG#6は、TAGリパーゼの活性ドメインとして知られるGxSxGモチーフ(xは任意のアミノ酸)において、164番目のアミノ酸「Gly(G)」が「Ser(S)」に置換した系統である。
(5)で選抜したTAGリパーゼ変異イネ系統でTAGリパーゼ活性が欠失しているか又は抑制されているかをTAG#6系統を用いて酵母発現系により検証した。
イネ野生型Os02g0286200及びその変異型TAG#6系統を用いてTAGリパーゼ活性が低下していることを検証した。
イネ野生型Os02g0286200及びその変異型TAG#6系統の玄米を搗精し、糠を得た。前記(1)に記載の方法に準じて糠を脱脂した後に、タンパク質を抽出した。その後、硫安を添加して20%飽和として、試料をブチルセファロースカラムにかけた。次に、段階的に硫安飽和度を低下させてタンパク質を溶出した。Os02g0286200遺伝子に関して野生型(日本晴)と変異型(TAG#6)のタンパク質をクロマトグラフィーにより分離し、溶出した画分のリパーゼ活性を検証した。
(目的)
実施例1で得られたイネOs02g0286200 TAGリパーゼの基質特異性について検証する。
(方法)
2〜10μgのイネ野生型及び変異型Os02g0286200 TAGリパーゼ、並びにコムギ野生型胚芽リパーゼを基質(4MUO、α−ナフチル酢酸、トリブチレン及び米油)と反応させ、その分解活性を検証した。
表2に結果を示す。この表では、イネ野生型Os02g0286200 TAGリパーゼの単位量当たりの酵素活性を1としたときの各リパーゼにおける比活性を示している。イネ野生型Os02g0286200は、米油を分解するTAGリパーゼ活性を有するのに対して、実施例1で得られたイネ変異型Os02g0286200 TAGリパーゼであるTAG#6系統及びコムギ野生型胚芽リパーゼには、TAGリパーゼ活性がほとんど認められなかった。
(目的)
実施例1で得られたイネOs02g0286200 TAGリパーゼの酵素化学的特性について検証する。
(方法)
米油又は6%トリオレインに1.5%アラビアガムを加えて超音波処理をしたエマルジョンを基質に実施例1で得られたイネOs02g0286200 TAGリパーゼ画分を加えて混合した反応溶液をインキュベート後に、米油から遊離脂肪酸を生成する酵素反応活性(リパーゼ活性)を、非エステル結合型脂肪酸キットNEFA C-テスト ワコー(WAKO)を用いて計測した。
至適pHについては、MES緩衝液とTris緩衝液を用いて、所定のpHの干渉液を調製し、各pH条件での酵素反応活性を測定した。
至適温度については、20、25、30、40及び50℃の各温度下で20分間インキュベートした後に、酵素反応活性を測定した。
タンパク質量とリパーゼ活性は、活性反応系でイネOs02g0286200 TAGリパーゼを0〜2.0mg/mLの量で添加した時の酵素反応活性を測定した。
図9に結果を示す。Aは至適pHを、Bは至適温度を、そしてCはタンパク質量とリパーゼ活性を示している。
Aより、至適pHは、7.5で、酸性(<pH6.0)又はアルカリ性(>pH9.0)で急激に酵素活性が失われることが明らかになった。
Bより、至適温度は、20〜30℃の範囲であり、それ以上の温度では失活することが明らかになった。
Cより、TAGリパーゼ量を増やすと、それに対応して遊離脂肪酸量が増大することが明らかになった。すなわち、TAGリパーゼの量依存的効果が認められた。
Claims (14)
- (a)配列番号1に示すアミノ酸配列、
(b)配列番号1に示すアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列、又は
(c)配列番号1に示すアミノ酸配列に対して80%以上の同一性を有するアミノ酸配列
からなるトリアシルグリセロールリパーゼにおいて、該トリアシルグリセロールリパーゼの活性が欠失した又は抑制された変異型トリアシルグリセロールリパーゼをコードする変異遺伝子を有する植物。 - 前記変異型トリアシルグリセロールリパーゼが
(i)前記(a)の配列番号1に示すアミノ酸配列において52位のバリン、160位のグリシン、162位のセリン、164位のグリシン、168位のアラニン、179位のグリシン及び247位のトレオニンのいずれか一以上のアミノ酸が欠失又は置換された変異、又は
(ii)前記(b)若しくは(c)に示すアミノ酸配列において(i)に示すアミノ酸に相当するアミノ酸が欠失又は置換された変異
を少なくとも有する、請求項1に記載の植物。 - 前記(i)に示す164位のグリシン、又は
前記(ii)に示す164位のグリシンに相当するグリシン
がセリンに置換されている、請求項2に記載の植物。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列からなるトリアシルグリセロールリパーゼをコードする遺伝子が配列番号2に示す塩基配列からなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の植物。
- 前記変異遺伝子が配列番号2に示す塩基配列において490位のグアニンからアデニンへの置換に基づく、請求項4に記載の植物。
- (a)配列番号1に示すアミノ酸配列、
(b)配列番号1に示すアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列、又は
(c)配列番号1に示すアミノ酸配列に対して80%以上の同一性を有するアミノ酸配列
からなるトリアシルグリセロールリパーゼをコードする遺伝子の発現が抑制された植物。 - 前記遺伝子の発現が前記遺伝子産物を標的とするRNA干渉、アンチセンス核酸、核酸酵素又はU1アダプターによって抑制される、請求項6に記載の植物。
- 前記RNA干渉がsiRNA又はshRNAを用いる、請求項7に記載の植物。
- 前記siRNA又はshRNAをコードするDNAを発現可能な状態で包含する発現ベクターを含む、請求項8に記載の植物。
- 前記植物がイネ科植物である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の植物。
- 前記イネ科植物がイネである、請求項10に記載の植物。
- 請求項1〜11に記載の植物、その後代又はその交雑体由来の種子又は果実。
- 請求項12に記載の種子、果実、又はその一部から得られる植物油。
- 植物がイネであり、米糠及び/又は胚芽から得られる、請求項13に記載の植物油。
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