JP2015174823A - 生体材料の保存方法、生体材料の生産方法、生体材料、移植材料、移植方法および生体材料の保存装置 - Google Patents
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本発明の生体材料の保存方法は、前述のように、医療用ガスおよび保存液のエアロゾル雰囲気下で、生体材料を保存する保存工程を含むことを特徴とする。本発明の保存方法は、前記保存液のエアロゾル雰囲気下で、前記生体材料を保存することが特徴であり、その他の条件および工程は、特に制限されない。本発明の保存方法は、後述する本発明の保存装置を用いることで、簡便に実施することができる。
本発明の生体材料の生産方法は、前述のように、生産された生体材料を保存する材料保存工程を含み、前記材料保存工程が、前記本発明の保存方法で実施されることを特徴とする。本発明の生産方法は、前記材料保存工程が、前記本発明の保存方法で実施されることが特徴であり、その他の条件および工程は、特に制限されない。本発明の生産方法によれば、後述する本発明の生体材料を生産できる。なお、本発明の生産方法は、前記本発明の保存方法の説明を援用できる。
参考文献1:「臓器移植実験マニュアル ラット・マウスを用いた移植、虚血再灌流障害モデル」、(株)秀潤社、監修:野澤眞澄、 編集:田中弥生、1999年
参考文献2:Naoyuki Hatayama et.al.,Cell Transplantation,2012,Vol.21,pp.609−615
本発明の生体材料は、前述のように、前記本発明の生産方法で生産されたことを特徴とする。本発明の生体材料は、前記本発明の生産方法で生産されたことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の生体材料は、例えば、後述する本発明の移植方法に使用できる。なお、本発明の生体材料は、前記本発明の保存方法および生産方法の説明を援用できる。
本発明の移植材料は、前述のように、前記本発明の保存方法で保存された生体材料を含むことを特徴とする。本発明の移植材料は、前記本発明の保存方法で保存された生体材料を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の移植材料は、例えば、後述する本発明の移植方法に使用できる。なお、本発明の移植材料は、前記本発明の保存方法、生産方法等の説明を援用できる。
本発明の移植方法は、前述のように、前記本発明の生体材料および前記本発明の移植材料の少なくとも一方(以下、「保存後の生体材料」という。)を、動物に移植する移植工程を含むことを特徴とする。本発明の移植方法は、前記保存後の生体材料を使用することが特徴であり、その他の条件および工程は特に制限されない。なお、本発明の移植方法は、前記本発明の保存方法、生産方法等の説明を援用できる。
本発明の生体材料の保存装置は、前述のように、保存室、エアロゾル供給手段および医療用ガス供給手段を含み、前記エアロゾル供給手段により、前記保存室内に保存液のエアロゾルが供給され、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内に医療用ガスが供給されることを特徴とする。本発明の保存装置は、前記エアロゾル供給手段を含み、これにより前記保存室内に保存液のエアロゾルが供給されることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の保存装置によれば、例えば、前記本発明の保存方法等を簡便に行うことができる。なお、本発明の保存装置は、前記本発明の保存方法、生産方法等の説明を援用できる。
図1は、本実施形態の保存装置の透視斜視図である。図1において、実線は、本実施形態の各部の外側形状を表し、破線は、保存室1および医療用ガス供給手段3の保存室1内側の形状を示す。図1に示すように、本実施形態の保存装置10は、保存室1、エアロゾル供給手段2および医療用ガス供給手段3を主要な構成として含む。保存室1は、保存容器4および蓋5を含み、蓋5は、保存容器4の上部に着脱可能に設置されている。図1に示すように、本実施形態において、エアロゾル供給手段2は、保存室1内に設置され、医療用ガス供給手段3は、保存室1内に医療用ガスを供給可能なように蓋5に接続されている。なお、エアロゾル供給手段2から出ている雲状の記載は、エアロゾル供給手段2から前記保存液のエアロゾルが供給されている状態を模式的に示したものであり、本発明を何ら制限しない。
本実施形態の保存装置は、さらに、生体材料吊り下げ手段6および圧力制御手段7を含む。図2は、本実施形態の保存装置の透視斜視図である。図2において、実線は、本実施形態の各部の外側形状を表し、破線は、保存室1ならびに医療用ガス供給手段3および圧力制御手段7の保存室1内側の形状を示し図1と同一部分には、同一の符号を付している。図2に示すように、本実施形態の保存装置20は、さらに生体材料吊り下げ手段6および圧力制御手段7を含み、生体材料吊り下げ手段6は、保存室1内に設置され、圧力制御手段7は、保存室1内の圧力を制御可能に蓋5に接続されている。本実施形態において、保存装置20は、生体材料吊り下げ手段6および圧力制御手段7を含むが、保存装置20は、これに限定されず、生体材料吊り下げ手段6および圧力制御手段7のいずれか一方のみを含んでもよい。この点を除いて、本実施形態の保存装置20は、図1に示す保存装置10と同様の構成を有する。本実施形態の保存装置20は、生体材料吊り下げ手段6を備えることで、例えば、保存時の前記生体材料と、保存室1内の医療用ガスおよび保存液のエアロゾルとの接触面積を増加させることができる。このため、本実施形態の保存装置20によれば、例えば、保存中の前記生体材料の吸水および脱水による損傷を低減することができ、これにより前記生体材料を、より長期間にわたり、機能を維持させた状態で保存できる。また、本実施形態の保存装置20は、圧力制御手段7を備えることで、例えば、保存中の保存室1内の圧力を一定に制御することができる。このため、保存中の前記生体材料の圧力の変動による損傷を低減することができ、これにより前記生体材料を、より長期間にわたり、機能を維持させた状態で保存できる。
一酸化炭素および酸素の混合ガス、ならびに細胞外液のエアロゾルの雰囲気下で、ラットの心臓を48時間保存し、保存後の心臓が機能することを確認した。
6週齢のLEW/SsN Slc雄ラット(n=5)に、50mg/kg(薬剤/体重)となるようペントバルビタール(共立製薬社製)を投与し、深麻酔を行った。つぎに、前記ラットから心臓を摘出した。さらに、前記心臓の大動脈および肺動脈を切開後、保存液である5%グルコースを含む細胞外液(商品名:ラクテックD輸液、大塚製薬社製)を注入して血液を除き、これを保存前の心臓とした。そして、前記保存前の心臓の重量を測定した。
保存装置は、前記図2の保存装置を用いた。前記保存装置は、予め前記エアロゾル供給手段により前記保存室内に前記保存液のエアロゾルを供給し、且つ4℃の冷蔵庫内で保冷した。つぎに、前記保存前の心臓を前記保存容器内の前記生体材料吊り下げ手段に吊り下げた。さらに、前記保存容器を前記蓋により密閉し、前記4℃の冷蔵庫内で48時間保存した。また、前記保存中は、前記エアロゾル供給手段により前記保存室内にエアロゾルを供給し、且つ、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の一酸化炭素の分圧(PCO)が、0.15MPa、酸素の分圧(PO2)が、0.2MPaとなるように一酸化炭素および酸素を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、100%であった。
前記48時間保存後の心臓を、前記保存容器内の前記生体材料吊り下げ手段から回収し、重量を測定した。そして、前記保存後の心臓について、心機能測定装置(ランゲンドルフ灌流装置、バイオリサーチセンター社製)を用いて、左室圧(LVP)を測定した。また、比較例1〜8は、図3および後述する条件において、前記保存前の心臓を、前記4℃の冷蔵庫内で48時間保存した以外は同様にして、重量および左室圧を測定した。さらに、コントロールとして、前記保存前の心臓を用いた以外は同様にして、左室圧を測定した。
図3(A)に示すように、比較例1(n=12)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段に代えて、50mLの水(DW)が入ったフラスコを前記保存室内に設置した。また、比較例1は、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の一酸化炭素の分圧が、0.4MPa、酸素の分圧が、0.3MPaとなるように一酸化炭素および酸素を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、96.3%であった。
図3(B)に示すように、比較例2(n=5)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段を設置しなかった。また、比較例2は、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の一酸化炭素の分圧が、0.4MPa、酸素の分圧が、0.3MPaとなるように一酸化炭素および酸素を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、61%であった。
図3(C)に示すように、比較例3(n=6)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段に代えて、50mLの水が入ったフラスコを前記保存室内に設置した。また、比較例3は、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の一酸化炭素の分圧が、0.0571MPa、酸素の分圧が、0.0429MPaとなるように一酸化炭素および酸素を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、96.33%であった。
図3(D)に示すように、比較例4(n=5)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段に代えて、50mLの水が入ったフラスコを前記保存室内に設置した。また、比較例4は、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の空気の分圧(PAir)が、0.1MPaとなるように空気を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、96.17%であった。
図3(E)に示すように、比較例5(n=5)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段および前記生体材料吊り下げ手段に代えて、50mLのUniversity of Wisconsin(UW)液が入ったフラスコを前記保存室内に設置した。また、比較例5は、前記フラスコ内のUW液に前記保存前の心臓を浸漬し、さらに、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の空気の分圧が、0.1MPaとなるように空気を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、96.33%であった。
図3(F)に示すように、比較例6(n=5)は、前記保存装置を用いず、また、予め4℃で5分間一酸化炭素ガスを用いて泡立てることにより、一酸化炭素を溶解させた50mLのUW液(UW with CO)が入ったフラスコを前記冷蔵庫内に設置した。そして、比較例6は、前記フラスコ内のUW液に前記保存前の心臓を浸漬し、0.1MPaの大気圧下で静置した。
図3(G)に示すように、比較例7(n=6)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段および前記生体材料吊り下げ手段に代えて、50mLのUW液が入ったフラスコを前記保存室内に設置した。また、比較例7は、前記フラスコ内のUW液に前記保存前の心臓を浸漬し、さらに、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の一酸化炭素の分圧が、0.4MPa、酸素の分圧が、0.3MPaとなるように一酸化炭素および酸素を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、96.2%であった。
図3(H)に示すように、比較例8(n=5)は、前記保存装置において、前記エアロゾル供給手段および前記生体材料吊り下げ手段に代えて、50mLの前記5%グルコースを含む細胞外液(EF)が入ったフラスコを前記保存室内に設置した。また、比較例8は、前記フラスコ内に前記保存前の心臓を浸漬し、さらに、前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内の空気の分圧が、0.1MPaとなるように空気を供給した。また、保存中の前記保存室内の湿度は、100%であった。
2 エアロゾル供給手段
3 医療用ガス供給手段
4 保存容器
5 蓋
6 生体材料吊り下げ手段
7 圧力制御手段
10、20 保存装置
Claims (23)
- 医療用ガスおよび保存液のエアロゾル雰囲気下で、生体材料を保存する保存工程を含むことを特徴とする、生体材料の保存方法。
- 前記生体材料が、生体の一部、臓器、および細胞からなる群から選択された少なくとも1つである、請求項1記載の保存方法。
- 前記保存液が、生理的食塩水、University of Wisconsin(UW)液、histidine−tryptophan−ketoglutarate(HTK)液、Celsoir液、ET−Kyoto液、細胞外液(輸液)、IGL−1液、Polysol液およびEuro−Collins液からなる群から選択された少なくとも1つを含む、請求項1または2記載の保存方法。
- 前記保存液のエアロゾルが、超音波式、液体噴霧式、ノズル噴霧式、スチーム式、気化式および遠心式からなる群から選択された少なくとも1つの方法により供給されたエアロゾルを含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記医療用ガスが、水素、一酸化窒素、一酸化炭素、二酸化炭素、硫化水素、酸素、オゾン、ヘリウム、キセノン、アルゴン、クリプトン、窒素、亜酸化窒素、空気、メタン、エタン、プロパン、フルオロメタン、ジフルオロメタン、四フッ化炭素および酸化エチレンからなる群から選択された少なくとも1つを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記医療用ガスが、一酸化炭素、二酸化炭素、酸素、およびヘリウムを含む混合ガス、酸素および亜酸化窒素を含む混合ガス、酸素およびキセノンを含む混合ガス、酸素およびアルゴンを含む混合ガス、酸素および一酸化窒素を含む混合ガス、または酸素および硫化水素を含む混合ガスである、請求項1から5のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記医療用ガスの分圧が、0.01〜0.7MPaの範囲である、請求項1から6記載の保存方法。
- 前記一酸化炭素の分圧が、0.01〜0.7MPaの範囲である、請求項5から7のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記酸素の分圧が、0.01〜0.7MPaの範囲である、請求項5から8のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記生体の一部が、四肢、指、顔面、骨、筋、毛根、歯および歯根膜からなる群から選択された少なくとも1つを含む、請求項2から9のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記臓器が、眼球、角膜、肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、膵臓、胆嚢、食道、胃、小腸、大腸、精巣、卵巣、中枢神経、末梢神経、血管および皮膚からなる群から選択された少なくとも1つを含む、請求項2から9のいずれか一項に記載の保存方法。
- 前記細胞が、精子、卵子、ES細胞、iPS細胞、刺激惹起性多能性獲得(STAP)細胞、細胞シート、赤血球、白血球、血小板および培養細胞からなる群から選択された少なくとも1つを含む、請求項2から9のいずれか一項に記載の保存方法。
- 生産された生体材料を保存する材料保存工程を含み、
前記材料保存工程が、請求項1から12のいずれか一項に記載の保存方法で実施されることを特徴とする、生体材料の生産方法。 - 請求項13記載の生産方法で生産されたことを特徴とする、生体材料。
- 請求項1から12のいずれか一項に記載の保存方法で保存された生体材料を含むことを特徴とする、移植材料。
- 請求項14記載の生体材料および請求項15記載の移植材料の少なくとも一方を、動物に移植する移植工程を含むことを特徴とする、移植方法。
- 保存室、エアロゾル供給手段および医療用ガス供給手段を含み、
前記エアロゾル供給手段により、前記保存室内に保存液のエアロゾルが供給され、
前記医療用ガス供給手段により、前記保存室内に医療用ガスが供給されることを特徴とする、生体材料の保存装置。 - 前記エアロゾル供給手段が、超音波式、液体噴霧式、ノズル噴霧式、スチーム式、気化式および遠心式からなる群から選択された少なくとも1つを含む、請求項17記載の保存装置。
- さらに、生体材料吊り下げ手段を含み、
前記生体材料吊り下げ手段は、前記保存室内に配置され、
前記生体材料吊り下げ手段により、生体材料が、前記保存室内に吊り下げられる、請求項17または18記載の保存装置。 - 前記エアロゾル供給手段が、前記保存室内に配置されている、請求項17から19のいずれか一項に記載の保存装置。
- さらに、エアロゾル供給制御手段を含み、
前記エアロゾル供給制御手段により、前記エアロゾル供給手段のエアロゾル供給量および供給時間の少なくとも一方が制御される、請求項17から20のいずれか一項に記載の保存装置。 - さらに、圧力制御手段を含み、
前記圧力制御手段により、前記保存室内の圧力が制御される、請求項17から21のいずれか一項に記載の保存装置。 - さらに、保冷手段を含み、
前記保冷手段により、前記保存室が保冷される、請求項17から22のいずれか一項に記載の保存装置。
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