WO2010049996A1 - 哺乳動物の臓器の保存方法 - Google Patents

哺乳動物の臓器の保存方法 Download PDF

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WO2010049996A1
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carbon monoxide
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邦博 関
優 吉田
直之 畑山
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株式会社レゾナンスクラブ
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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids

Definitions

  • the present invention relates to a method for preserving a mammalian organ. More particularly, the present invention relates to a method for preserving mammalian organs in vitro.
  • the maximum period from extraction from a donor to transplantation to a recipient is limited to 4 hours in the heart, for example. If these storage periods can be extended, it becomes possible to stock the excised organs, which can contribute to the expectation of a larger number of recipients.
  • the conventional preservation method of animal organs is 4 to 24 hours when stored at low temperature, 6 to 18 hours when using University of Winsconsin Solution (UW solution), UW solution and perfluorocarbon.
  • UW solution University of Winsconsin Solution
  • UW solution University of Winsconsin Solution
  • perfluorocarbon a substance that was used to preserve a preserved organ.
  • transplantation was successful for up to 48 hours (4 out of 5), and the survival time after ectopic heart transplantation using this preserved organ was 6 weeks.
  • the organ is exposed to a low temperature of 4 ° C or ischemic damage, the cell membrane is damaged, so that tissue cells cannot be revived, and the longer the storage time, the more serious thrombosis and functional disorder increase It has irreversible possibilities and has a qualitative limit on its shelf life.
  • Patent Document 1 it is possible to store for 10 to 20 days by dehydrating an excised organ immersed in a trehalose solution with a dehydrating agent such as silica gel or molecular sieve, immersing it in perfluorocarbon, and storing it in a refrigerator. It is described that there is.
  • a dehydrating agent such as silica gel or molecular sieve
  • blood is removed by perfusing a Krebs-Henseleit (KH) solution obtained by aeration of a mixed gas into an excised organ, and the mixed gas (oxygen gas 95%-carbon dioxide gas 5%) is removed from the removed blood.
  • KH Krebs-Henseleit
  • the object of the present invention is that these organs can be stored for a long period of time with a high probability of resuscitation without performing complicated operations such as dehydrating and drying the isolated organs such as the heart and kidney. It is an object of the present invention to provide a method for preserving an isolated organ that can be used effectively.
  • the organ preserved by the organ preservation method of the mammal according to the present invention for example, the heart is excellent in that it is possible to record the heart rate even when ectopic heart transplantation is performed after 24 to 48 hours of preservation. Achieve results. Therefore, it can be said that the method of the present invention is a revolutionary method for reliably preserving mammalian organs. Such a method can be applied to various organs such as the liver, kidney, spleen, pancreas and lung in addition to the heart.
  • each organ from the mammal is performed by a normal surgical operation.
  • the perfusate used for perfusion and blood removal of the isolated organ includes physiological saline (0.9% NaCl) supplemented with an antithrombotic agent such as heparin, University of Winsconsin Solution (UWS), Krebs-Henseleit solution (KH solution) ) And the like, and preferably an antithrombotic drug-added physiological saline.
  • This physiological saline is used even at room temperature, but it is preferably used after cooling to 2 to 10 ° C., preferably 2 to 4 ° C., which is an organ storage temperature.
  • blood removal is performed by inserting a catheter into the aorta of the isolated organ, attaching it to a Langendorff perfusion device, and perfusing the perfusate for 5 to 10 minutes, preferably 10 minutes.
  • the cavity of the removed organ is filled with a physiological salt solution such as UWS or KH solution.
  • This physiological salt solution is preferably cooled to 2 to 10 ° C, preferably 2 to 4 ° C, which is the preservation temperature of the organs, to prevent anticoagulant drugs such as antibiotics and blood coagulation to prevent corrosion Warfarin is added for the purpose.
  • anticoagulant drugs such as antibiotics and blood coagulation to prevent corrosion Warfarin is added for the purpose.
  • the activity of the organ can be stopped by lowering the temperature of the organ.
  • Such organs are oxygen and one gas under conditions of temperature 2-10 ° C., preferably 2-4 ° C., relative humidity 50-95%, preferably 80-95%, absolute pressure 1500-8000 hPa, preferably 1800-7500 hPa. It is stored in the presence of a mixed gas consisting of carbon oxide gas. Organs preserved under such pressure exhibit the effect that preservation and resuscitation transplantation of organs becomes possible because oxygen gas and carbon monoxide gas dissolve in the organs to structure the cells.
  • organ preservation is performed under a pressure lower than the above absolute pressure, the limit of the storage time is 24 hours or less, whereas if organ preservation is performed at a pressure higher than this, decompression sickness is caused. Therefore, it is not preferable.
  • the partial pressures of oxygen gas are 1300 to 1700 hPa and carbon monoxide gas is 700 to 300 hPa, or oxygen gas is 2000 to 5000 hPa and carbon monoxide gas is 5000 to 3000 hPa.
  • Organs stored in the presence of a high-pressure gas mixture consisting of such partial pressures show particularly excellent resuscitation rates.
  • carbon monoxide gas is very toxic, and in humans, even if the concentration of carbon monoxide gas in the atmosphere is 0.01% (100ppm), poisoning occurs, and when it reaches 0.08-0.12%, coma, It is a gas that can lead to respiratory failure and heart failure.
  • concentration of carbon monoxide gas is 0.08%, 50% of blood hemoglobin is COHb, and when the concentration is 0.15%, the possibility of death is short. It is known to die on time.
  • the preserved organ is immersed in a physiological saline supplemented with an antithrombotic drug such as heparin for about 1 to 10 minutes, revived, and then transplanted to the same, same or different mammals.
  • an antithrombotic drug such as heparin
  • resuscitation refers to a phenomenon in which biological life activity is observed.
  • Verification of resuscitation of isolated organs includes electrophysiological methods, tissue anatomical methods, transplantation methods that are actually transplanted and verified.
  • electrophysiological methods using electrocardiograms
  • Example 1 Five male 6-week-old donor rats LEW / SsN Slc artificially bred to US NIH experimental animal standards were anesthetized with diethyl ether inhalation, and then saline (0.9% NaCl) supplemented with 100 units of heparin sodium ) 1.0ml was administered intravenously. Next, the surgical site was shaved, disinfected with 75% ethanol, and then thoracotomy was performed with a midline incision. Further, the left and right ribs were opened on the dorsal side, the chest wall was inverted to the head, and the heart was exposed.
  • the heart After removing the heart, it was transferred to a petri dish filled with the heparin-added physiological saline, and the ascending aorta and pulmonary artery were dissected as long as possible, and then the heart was perfused and removed from the ascending aortic stump using the heparin-added physiological saline. . Thereafter, the upper aorta and the lower aorta were ligated and separated.
  • the recipient rat was anesthetized with diethyl ether, then the right neck was shaved extensively, disinfected with 75% ethanol, and a longitudinal incision was made about 3 cm.
  • the subcutaneous connective tissue was burned down with an electric scalpel, the external jugular vein and the common carotid artery were exposed long, the central side of the external jugular vein was blocked with a microclip, and the peripheral side of the external jugular vein was ligated and cut off.
  • the central side of the common carotid artery was ligated and cut off.
  • the blood vessel lumen was bled with the heparinized physiological saline.
  • the organ taken out from the chamber was immersed in the heparinized physiological saline for 1 minute, and then, as shown in FIG. Ectopic heart transplantation is performed so that the common carotid artery and aorta, and the external jugular vein and pulmonary artery are anastomosed to the right neck, and the microclips of the external jugular vein and common carotid artery are removed and blood is passed through to the transplanted heart. The blood flow of the cervix was resumed, and it was confirmed by electrocardiogram whether or not the activity of the donor heart was started.
  • Example 4 Comparative Example 4 In Example 1, when air 2000 hPa was used instead of the mixed gas, resuscitation was not observed in both the ventricle and the atrium in all five rats 10 weeks after transplantation.
  • the organ preservation method according to the present invention enables long-term preservation of organs in a state in which the organs after preservation can function without performing complicated operations such as dehydrating and drying the organs such as the heart and kidneys. Since the organ preserve

Abstract

　哺乳動物の臓器を温度2～10°C、相対湿度80～95％、絶対圧力1500～8000hPa、酸素ガスおよび一酸化炭素ガスからなる混合ガスの存在下、好ましくは酸素ガス1300～1700hPa、一酸化炭素ガス700～300hPaまたは酸素ガス2000～5000hPa、一酸化炭素ガス5000～3000hPaの条件下で保存することにより、心臓、腎臓などの摘出臓器を脱水して乾燥するといった煩雑な操作を行うことなく、これらの臓器を高い蘇生の確率で長期間保存することができ、かかる臓器を移植に有効に用いることを可能とする。

Description

哺乳動物の臓器の保存方法
　本発明は、哺乳動物の臓器の保存方法に関する。さらに詳しくは、生体外での哺乳動物の臓器の保存方法に関する。
　心臓、腎臓、肝臓などが機能不全になると、薬物治療、手術治療、人工透析治療を施すが、症状が重篤になるとそれらの処置では解決されない。そこで、他人の臓器を移植する、いわゆる臨床移植治療が行われるが、臓器提供者(ドナー、donor)の不足により、臓器受領者(レシピエント、recipient)にとって臓器が十分供給されているわけではない。また、臓器移植手術後免疫調節不全を発症するため、移植する臓器の品質、親和性が重要な課題となっている。
　現在行われている臓器移植手術に用いられている人の移植臓器の場合、ドナーから摘出してからレシピエントへ移植するまでの最大期間は、例えば心臓では4時間が限度とされている。これらの保存期間を延長することができれば、摘出臓器をストックすることが可能となるため、より多数のレシピエントの期待に貢献することができる。
　従来の動物臓器の保存方法は、低温保存では保存限界が4～24時間であり、University of Winsconsin Solution(UW液)を使用した場合は6～18時間が限度であり、またUW液、パーフルオロカーボン液および酸素を用いた場合、移植に成功したのは最大48時間(5匹中4匹)であり、この保存臓器を用いた異所性心移植後の生存期間は6週間であった。冷蔵保存は、臓器が4℃の低温あるいは虚血障害に曝されると、細胞膜に損害が与えられるため、組織細胞が蘇生できず、保存時間が長引くほど深刻な血栓や機能障害が急増するという可能性を不可逆的に有し、その保存期間には質的な限界を有している。
J.Thorac.Cardiovasc.Surg.107,460-471,1994 Transplant Proc.21,1350,1989、Ann.Thorac.Surg.49,932,1990 Transplantation,59,699-701,1995
　一方、特許文献１には、トレハロース液に浸漬させた摘出臓器をシリカゲル、モレキュラーシーブなどの脱水剤で脱水処理し、パーフルオロカーボンに浸漬し、冷蔵保存することにより10～20日間の保存が可能であると記載されている。また、特許文献２には、摘出臓器に混合気体を曝気したKrebs-Henseleit(KH)液を潅流することにより脱血し、脱血した臓器に混合気体(酸素ガス95％-炭酸ガス5％)を送って水分除去率25～60％まで脱水した後、パーフルオロカーボン液に浸漬し、次いで所定期間冷蔵庫保存したものを蘇生させる方法が記載されており、この方法では24時間保存した臓器が蘇生している。
特開２０００－７２６０１号公報 ＷＯ　２００２／０６９７０２
　しかし、これらの方法では臓器の水分が一定以上、例えば心臓にあっては30％以上喪失してしまうと、極端に蘇生率が低下してしまうといった問題があり、また操作上も煩雑で高度なテクニックを要するものであった。
　本発明の目的は、心臓、腎臓などの摘出臓器を脱水して乾燥するといった煩雑な操作を行うことなく、これらの臓器を高い蘇生の確率で長期間保存することができ、かかる臓器を移植に有効に用いることを可能とする摘出臓器の保存方法を提供することにある。
　本発明の目的は、哺乳動物の臓器を温度2～10℃、相対湿度80～95％、絶対圧力1500～8000hPaの条件下、酸素ガスおよび一酸化炭素ガスからなる混合ガスの存在下で保存することによって達成される。
　本発明に係る哺乳動物の臓器保存方法により保存された臓器、例えば心臓は24～48時間保存後に異所性心移植を行った場合にあっても心拍を記録することを可能にするといったすぐれた成果を奏する。従って、本発明方法は哺乳動物の臓器を確実に保存するための画期的な方法であるといえる。かかる方法は心臓のほか、肝臓、腎臓、脾臓、膵臓、肺などの各種臓器にも適用することができる。
高圧チャンバー内に保存されている臓器の一態様を示す図である 頸部異所性心移植の循環動態を示す図である PO2=1600hPaとPCO=400hPaの混合ガスで24時間保存した摘出心臓を、異所性心移植後10週目のドナー心臓の心電図を示す図である PO2=1400hPaとPCO=600hPaの混合ガスで24時間保存した摘出心臓を、異所性心移植後10週目のドナー心臓の心電図を示す図である PO2=3000hPaとPCO=4000hPaの混合ガスで24時間保存した摘出心臓を、異所性心移植後10週目のドナー心臓の心電図を示す図である
　哺乳動物からの各臓器の摘出は、通常の外科的手術によって行われる。一般に、血液は気体に触れたり低温に曝されると固まって血栓を生じ、これが蘇生の妨げとなるので、摘出された臓器は洗浄および脱血される。摘出臓器を潅流脱血するために使用される潅流液としては、ヘパリンなどの抗血栓薬を添加した生理食塩水(0.9％NaCl)、University of Winsconsin Solution(UWS)、Krebs-Henseleit液(KH液)等の生理的塩類溶液が、好ましくは抗血栓薬添加生理食塩水が用いられる。この生理食塩水は、常温でも用いられるが、好ましくは臓器の保存温度となる2～10℃、好ましくは2～4℃に冷却して用いられる。潅流は、摘出臓器の大動脈にカテーテルを挿入し、ランゲンドルフ(Langendorff)式潅流装置に装着し、5～10分間、好ましくは10分間潅流液を潅流することにより脱血を行う。
　生理食塩水を用いての潅流脱血を行った場合には、摘出臓器の腔内はUWS、KH液等の生理的塩類溶液で満たされる。この生理的塩類溶液は、好ましくは臓器の保存温度となる2～10℃、好ましくは2～4℃に冷却し、腐食を防止するために抗生物質など防腐効果薬剤や、血液の凝固を防ぐことを目的としてワーファリンが添加される。これによって臓器の温度を下げることで、臓器の活動を停止させることができる。
　かかる臓器は、温度2～10℃、好ましくは2～4℃、相対湿度50～95％、好ましくは80～95％、絶対圧力1500～8000hPa、好ましくは1800～7500hPaの条件下、酸素ガスおよび一酸化炭素ガスからなる混合ガスの存在下で保存される。かかる圧力下で保存された臓器は、酸素ガスや一酸化炭素ガスが臓器に溶解し細胞内を構造化させるため、臓器の保存蘇生移植が可能となるといった効果を奏する。ここで、上記絶対圧力よりも低い圧力下で臓器の保存が行われると、保存可能時間の限界が24時間以下となり、一方これより高い圧力で臓器の保存が行われると、減圧症に罹患するためとなるため好ましくない。
　混合ガスとしては、好ましくはそれぞれの分圧が酸素ガスは1300～1700hPa、一酸化炭素ガス700～300hPaのもの、あるいは酸素ガスは2000～5000hPa、一酸化炭素ガス5000～3000hPaのものが用いられる。かかる分圧からなる高圧混合ガス存在下で保存された臓器は、特にすぐれた蘇生率を示す。ここで、一酸化炭素ガスは、毒性が非常に強く、ヒトでは一酸化炭素ガスの大気中濃度が0.01％(100ppm)であっても中毒症状が発現し、0.08～0.12％になると、昏睡、呼吸不全、心不全につながることがあるガスであり、一酸化炭素ガス濃度が0.08％の時には血中ヘモグロビンの50％はCOHbとなり、さらに濃度が0.15％になると死亡する可能性が、0.19％では短時間に死亡することが知られている。
　本発明では、かかる人体に対して毒性の強い一酸化炭素ガスを臓器保存に用いることにより、哺乳動物の摘出臓器を確実に保存するための画期的な方法が提供される。一酸化炭素ガスが臓器保存に有効である理由としては、嫌気性や好気性のバクテリアが繁殖できないため、細胞、組織、臓器が腐敗することがないことが理由の一つとして考えられるが、後記比較例１にも示される通り、一酸化炭素ガス100％では、臓器の保存は難しいことから、酸素ガスと併用することが重要であると考えられる。
　保存された臓器は、1～10分間程度前記ヘパリンなどの抗血栓薬を添加した生理食塩水に浸漬して蘇生後、同一、同種または異種の哺乳動物に移植される。ここで「蘇生」とは、生物学的な生命活動が認められる現象をいう。
　摘出臓器の蘇生に関する検証は、電気生理学的手法、組織解剖学的手法、実際に移植して検証する移植法などがあり、例えば心臓の場合には心電図を用いた電気生理学的手法や、異所性心移植によりレシピエントラットの生存日数などにより、また腎臓の場合には保存臓器を動物に移植し、移植された動物の尿蛋白量を測定することにより、保存期間の適否を確認することができる。
　本発明の方法に使用することができる臓器としては、例えば心臓のほか肝臓、腎臓、脾臓、膵臓、肺などが挙げられる。
　以下に本発明の実施例について記載するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
　実施例１
　アメリカNIHの実験動物基準に合わせて人工繁殖した6週齢のドナーラットLEW/SsN Slcのオス5匹にジエチルエーテル吸入麻酔を行った後、ヘパリンナトリウム100単位を添加した生理食塩水(0.9％ NaCl)1.0mlを静脈投与した。次いで、術部を剃毛し、75％エタノールで消毒後、正中切開にて開胸し、さらに左右肋骨部を背側に切開して胸壁を頭部へ反転させ、心臓部を露出させた。心臓を摘出後、前記ヘパリン添加生理食塩水で満たしたシャーレに移し、上行大動脈、肺動脈をできるだけ長めに切離後、前記ヘパリン添加生理食塩水を用いて上行大動脈断端より心臓を灌流脱血した。その後、上大動脈、下大動脈を結紮切離した。肺静脈と気管支を一塊として結紮後、肺を除去したドナー摘出心臓の重量を測定した後、ラットの摘出心臓の心腔内に4℃のKH液(Krebs-Henseleit液)を満たし、PO2=1600hPaとPCO=400hPaの混合ガスで加圧した2ATAの高圧チェンバー内に保存後、4℃で24時間保存した。このとき、KH液には、モダシン0.05％、ミノマイシン0.05％およびワーファリン0.5mg／500mlが溶解されて用いられた。また、図１に示されるように、高圧チェンバー内には蒸留水を満たしたビーカーが置かれ、チェンバー内湿度を90％以上に保持した。
　摘出心臓の保存終了前に、レシピエントラットにジエチルエーテル吸入麻酔を行った後、右頚部を広く剃毛し、75％エタノールで消毒した後、約3cm程縦切開を行った。皮下の結合組織を電気メスで焼落して、外頚静脈、総頚動脈を長く露出させ、外頚静脈の中枢側をマイクロクリップで遮断後、外頚静脈の末梢側を結紮切離した。次に、総頚動脈の中枢側をマイクロクリップで遮断後、総頚動脈の中枢側を結紮切離した。外頚静脈、総頚動脈のサイズに合ったカフをそれぞれ装着後、前記ヘパリン添加生理食塩水で血管内腔を脱血した。
　摘出心臓の保存時間終了後、チャンバー内より取り出した臓器を前記ヘパリン添加生理的食塩水に1分間浸漬した後、図２に示すように、摘出保存心臓を予め上記処置を行ったレシピエントラットの右頚部に、総頚動脈と大動脈、外頚静脈と肺動脈をそれぞれ端々吻合するように異所性心移植を実施し、外頚静脈、総頚動脈のマイクロクリップをはずして血液を通し、移植した心臓への血流を再開させ、ドナー心臓の活動が開始するかどうかを心電図により確認した後、頚部の切開皮膚を縫合した。
　移植手術後、レシピエントラットに前記ヘパリン添加生理食塩水1.0mlを静脈投与し、移植心臓の血栓予防を行った。その後、レシピエントラットに抗生物質を溶解させた飲用水を与え、飼育室にて事後観察を行い、１週間ごとに移植心臓の心電図を記録し、10週間後、ドナーラットの心臓の拍動を心電図で記録した。心電図の一例は、図３に示される。ここで、5例すべてのラットにおいて、心室・心房の蘇生が確認された。なお、心電図はドナー心臓の左心室と大動脈開口部に心電図記録用電極を装着し、双曲誘導で生体アンプ(NEC三榮製Bioview-E)を用いて記録した。
　実施例２
　実施例１において、ラット8匹を用い、また混合ガスとしてPO2=1400hPaとPCO=600hPaのものが用いられたところ、8例中5例において移植10週間後における心室・心房の蘇生が心電図により確認された。心電図の一例は、図４に示される。
　実施例３
　実施例１において、混合ガスとしてPO2=3000hPaとPCO=4000hPaのものが用いられ、また保存時間を48時間に変更して、異所性心移植を実施したところ、5例すべてにおいて移植10週間後における心室・心房の蘇生が心電図により確認された。心電図の一例は、図５に示される。
　実施例４
　実施例１において、混合ガスとしてPO2=3500hPaとPCO=3500hPaのものが用いられ、また保存時間を48時間に変更して、異所性心移植を実施したところ、5例すべてにおいて移植10週間後における心室・心房の蘇生が心電図により確認された。
　比較例１
　実施例１において、混合ガスの代わりにPCO=2000hPaが用いられたところ、移植10週間後において、心室・心房の蘇生がみられたラットは0匹、心房のみの蘇生がみられたラットは、1匹であり、残り4匹については心室・心房ともに蘇生はみられなかった。
　比較例２
　実施例１において、混合ガスの代わりにPO2=2000hPaが用いられたところ、移植10週間後においては、5匹すべてのラットで心室・心房ともに蘇生はみられなかった。
　比較例３
　実施例１において、混合ガスの代わりにPHe=2000hPaが用いられたところ、移植10週間後においては、5匹すべてのラットで心室・心房ともに蘇生はみられなかった。
　比較例４
　実施例１において、混合ガスの代わりに空気2000hPaが用いられたところ、移植10週間後においては、5匹すべてのラットで心室・心房ともに蘇生はみられなかった。
　比較例５
　実施例１において、混合ガスとしてPHe=1400hPaとPCO=600hPaのものが用いられたところ、移植10週間後において、4例で心房のみ蘇生が確認され、1例については心室・心房ともに蘇生はみられなかった。
　比較例６
　実施例１において、混合ガスとしてPCO2=1400hPaとPCO=600hPaのものが用いられたところ、移植10週間後においては、5匹すべてのラットで心室・心房ともに蘇生はみられなかった。
　本発明に係る臓器の保存方法は、心臓、腎臓などの臓器を脱水して乾燥するといった煩雑な操作を行うことなく、保存後の臓器が機能可能な状態での臓器の長時間の保存を可能とするものであり、本発明の保存方法を用いて保存された臓器は同一、同種または異種の哺乳動物に移植できるので、臓器移植医療において極めて有用である。また、蘇生した臓器から、生きた組織や細胞を採取して薬理試験などに使用し得るとともに、疾病が発見される前に予備の臓器を保存しておくことで、発病後直ちに移植を受けることができるといった可能性をも有している。

Claims (6)

  1. 　哺乳動物の臓器を温度2～10℃、相対湿度80～95％、絶対圧力1500～8000hPaの条件下、酸素ガスおよび一酸化炭素ガスからなる混合ガスの存在下で保存することを特徴とする哺乳動物の臓器の保存方法。
  2. 　酸素ガスおよび一酸化炭素ガスの分圧が、酸素ガス1300～1700hPa、一酸化炭素ガス700～300hPaである請求項１記載の哺乳動物の臓器の保存方法。
  3. 　酸素ガスおよび一酸化炭素ガスの分圧が、酸素ガス2000～5000hPa、一酸化炭素ガス5000～3000hPaである請求項１記載の哺乳動物の臓器の保存方法。
  4. 　哺乳動物の臓器が、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、膵臓または肺である請求項１記載の哺乳動物の臓器の保存方法。
  5. 　哺乳動物の心臓として、抗血栓薬含有生理的食塩水を用いて灌流脱血した後、Krebs-Henseleit液で心腔内を満たした哺乳動物の心臓が用いられる請求項４記載の哺乳動物の臓器の保存方法。
  6. 　請求項１乃至５のいずれかに記載の方法により保存された臓器。
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