JP2015159803A - 冷凍品が解凍された回数を判別するための核酸及び該核酸を用いた冷凍品が解凍された回数を判別する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(I)冷凍品が解凍された回数を判別するための核酸。
(II)以下の(a)〜(d)のいずれかである、(I)の核酸。
(a)配列番号1記載の塩基配列を含む核酸
(b)配列番号1記載の塩基配列を含む核酸と相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸
(c)配列番号1記載の塩基配列中において1若しくは数個の塩基が欠失、置換又は付加した塩基配列を含む核酸
(d)配列番号1記載の塩基配列と80%以上の同一性を有する核酸
(III)核酸の長さが50mer以上である(I)又は(II)の核酸。
(IV)核酸の長さが150mer以下である(I)から(III)のいずれかの核酸。
(V)以下の工程を行うことにより、冷凍品が解凍された回数を判別する方法。
(1)一度も冷凍されていない(I)から(IV)のいずれかの核酸並びに予め1回以上冷凍及び解凍を繰り返した当該核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析して、当該核酸由来のピーク面積比を用いた検量線を作成する工程
(2)一度も冷凍されていない(I)から(IV)のいずれかの判別用核酸を冷凍の対象となる物と共に冷凍する工程
(3)(2)工程で冷凍された当該核酸を解凍する工程
(4)(3)工程で解凍された当該核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析して、当該核酸由来のピーク面積比を求める工程
(5)(1)工程で作成した検量線を用いて、(4)工程で求めたピーク面積比から当該核酸が解凍された回数を求め、冷凍品が解凍された回数として判別する工程
(VI)一度も冷凍されていない核酸の代りに、冷凍及び解凍された回数が判明している核酸を用いる(V)の方法。
以下、本発明について説明する。
GCAGGGGCAATGGAGACCCTGGAGGCGGAGATGGGGGCAAGACGGAGAAAGACAGTCAAGAATGG(配列番号1)
本発明の判別用核酸は上記配列に限定されるものではなく、配列番号1記載の塩基配列と約80%以上、好ましくは約85%以上、より好ましくは約90%以上、さらに好ましくは約95%以上、特に好ましくは約97%以上、さらに特に好ましくは約98%以上、最も好ましくは約99%以上の同一性を有する塩基配列を有する核酸も、それが判別に利用可能な限り、本発明の核酸に含まれる。
(1)一度も冷凍されていない判別用核酸並びに予め1回以上冷凍及び解凍を繰り返した当該核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析して、当該核酸由来のピーク面積比を用いた検量線を作成する工程
(2)一度も冷凍されていない判別用核酸を冷凍の対象となる物と共に冷凍する工程
(3)(2)工程で冷凍された当該核酸を解凍する工程
(4)(3)工程で解凍された当該核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析して、当該核酸由来のピーク面積比を求める工程
(5)(1)工程で作成した検量線を用いて、(4)工程で求めたピーク面積比から当該核酸が解凍された回数を求め、冷凍品が解凍された回数として判別する工程
判別用核酸を予め1回以上、冷凍及び解凍を繰り返し、解凍する毎に判別用核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析し、当該核酸由来のピーク面積比を求める。横軸に冷凍及び解凍の回数をとり、縦軸にピーク面積比をとることにより検量線を作成する。
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用い、下記の分析方法により測定した。
<核酸由来のピーク面積比の分析>
試料調製方法: 試料(20pmol/μL) 9μLを水100μLに溶解
装置: Gilson HPLC
カラムオーブン なし
UV Gilson UV/VIS-151
ポンプ Gilson Model305
インテグレーター Gilson 712 system controller software
カラム: Wakosil-DNA 4.6mm×150mm(w)
キャリヤー: (A)0.1M TEAA,pH7.0 (B)100% Acetonitrile
カラム温度: 室温
流速: 1mL/min
波長: 254nm
検出限界値: 0.001-2.0 AU(Sensitivity Range)
<調整例1:オリゴDNAの合成>
DNA合成業者(株式会社ベックス)に依頼し、配列番号1〜8記載の1本鎖核酸を各々合成した。DNA合成後、脱保護、DNAの回収は定法により行った。
GCAGGGGCAATGGAGACCCTGGAGGCGGAGATGGGGGCAAGACGGAGAAAGACAGTCAAGAATGG(配列番号1)
AAGAAGAGAGCAGAGCGGGAACTGAGATCGAAATTGAAACCAGGTGGAAAGAGAGAGATAGGGTA(配列番号2)
TATGGCTCAGGAGGAAGAAGAGGAAGATCAAGGAAGAACTAGGAAACGGAAACAGAGTGGTCAGT(配列番号3)
TGCATTTTCACCCCACCCTTCCCCTCCTTCTCCCTTTTTATATCCCATTTTTATATCGATCTCTT(配列番号4)
CCCACTTCTCTTCATTATTCACTTCTTATTTTTGCCCACTCCCCACTCCTGCTTCCTGAGCTGAC(配列番号5)
GCCTTTTCTCTTCATATCTGCGGCCTATCTTTTCCCCTGACATACGTCTTTGTCCTTCTTTCCCA(配列番号6)
ATTACAACATCCAGAAGGAGTCAACCCTGCACCTGGTCCTTCGCCTGAGAGGTGGCATGCAGATC(配列番号7)
TAGCTGTTCACCTTGAAGACAGGCCTTAGTGTCACGCAGGTTTATTACAGTGGCATGATGGTGAC(配列番号8)
<実施例1>:冷凍品が解凍された有無
配列番号1〜8記載の1本鎖核酸を各々高速液体クロマトグラフィーで分析して、核酸由来のピーク面積比を求めた。その後、当該核酸を各々冷凍(−20℃、20時間)した。冷凍した当該核酸を各々解凍温度4℃、4時間で解凍した後、高速液体クロマトグラフィーで分析して、核酸由来のピーク面積比を各々求めた。各配列番号の核酸由来のピーク面積比の結果を表1に示す。
<実施例2>:冷凍品が解凍された回数の判別
配列番号1〜8記載の1本鎖核酸を各々高速液体クロマトグラフィーで分析して、核酸由来のピーク面積比を求めた。この各核酸を冷凍(−20℃、20時間)後、解凍(4℃、4時間)することを7回、14回、21回、28回繰り返した後、高速液体クロマトグラフィーで分析した。各核酸由来のピーク面積比の結果を表2及び図1に示す。
配列番号2:合成DNA
配列番号3:合成DNA
配列番号4:合成DNA
配列番号5:合成DNA
配列番号6:合成DNA
配列番号7:合成DNA
配列番号8:合成DNA
Claims (6)
- 冷凍品が解凍された回数を判別するための核酸。
- 以下の(a)〜(d)のいずれかである、請求項1記載の核酸。
(a)配列番号1記載の塩基配列を含む核酸
(b)配列番号1記載の塩基配列を含む核酸と相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸
(c)配列番号1記載の塩基配列中において1若しくは数個の塩基が欠失、置換又は付加した塩基配列を含む核酸
(d)配列番号1記載の塩基配列と80%以上の同一性を有する核酸 - 核酸の長さが50mer以上である請求項1又は2記載の核酸。
- 核酸の長さが150mer以下である請求項1から3のいずれかに記載の核酸。
- 以下の工程を行うことにより、冷凍品が解凍された回数を判別する方法。
(1)一度も冷凍されていない請求項1から4のいずれかに記載の核酸並びに予め1回以上冷凍及び解凍を繰り返した当該核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析して、当該核酸由来のピーク面積比を用いた検量線を作成する工程
(2)一度も冷凍されていない請求項1から4のいずれかに記載の核酸を冷凍の対象となる物と共に冷凍する工程
(3)(2)工程で冷凍された当該核酸を解凍する工程
(4)(3)工程で解凍された当該核酸を高速液体クロマトグラフィーで分析して、当該核酸由来のピーク面積比を求める工程
(5)(1)工程で作成した検量線を用いて、(4)工程で求めたピーク面積比から当該核酸が解凍された回数を求め、冷凍品が解凍された回数として判別する工程 - 一度も冷凍されていない核酸の代りに、冷凍及び解凍された回数が判明している核酸を用いる請求項5に記載の方法。
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JP2019027966A (ja) * | 2017-08-01 | 2019-02-21 | 株式会社日清製粉グループ本社 | 食品中の物質が受けた加熱処理の強度の判定方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003519461A (ja) * | 1996-07-11 | 2003-06-17 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 解凍を表示する方法および指示器 |
JP2005121477A (ja) * | 2003-10-16 | 2005-05-12 | Toppan Forms Co Ltd | 低温履歴インジケータ |
JP2007078372A (ja) * | 2005-09-09 | 2007-03-29 | Kao Corp | 温度履歴表示材料及びそれを用いた包装材料 |
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2014
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