JP2015125326A - 画像形成方法、及び、画像形成装置 - Google Patents
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Abstract
Description
3次元的な構造を有する生体試料は、無色透明ではあるが、その内部組成の違いなどにより透過する光の位相を変化させるという性質を有している。このことから、生体試料は3次元に連続的に変化する位相分布を有する位相物体であると看做すことができる。このため、生体試料の3次元的な位相分布を得ることができれば、その3次元構造を知ることができる。
以下では、このような新たな課題を改善して、生体試料の観察領域内の位相分布を精度良く求める方法について、図1を参照しながら説明する。
以下、上述した位相計測方法及び異種合成画像形成方法の実施例について具体的に説明する。なお、実施例1から実施例3までは、位相分布画像を形成した装置とは別の装置によって生体試料の生化学的な現象を可視化した画像を取得した例であり、実施例4から実施例9は、これらの画像を同一の装置で取得した例である。
次に、以上のように構成された顕微鏡システム100による位相計測方法について具体的に説明する。
Def1={I1(θ)−I1(−θ)}/{I1(θ)+I1(−θ)−I1(0)}
Def2={I2(θ)−I2(−θ)}/{I2(θ)+I2(−θ)−I2(0)}
Ph1=PhS1+PhG1
Ph2=PhS2+PhG2
2、63 光源
3、62、92 レンズ
4 視野絞り
5 像コントラスト変化ユニット
5a、33、34 偏光板
5b、36 λ/4板
6、10 ノマルスキープリズム
7 コンデンサレンズ
8 ステージ
9 対物レンズ
11 検光子
12 結像レンズ
13、84 CCDカメラ
20 コンピュータ
21、22、23、24、26、27、28 駆動機構
25 モニタ
30 位相変調手段
31、32 LED光源
33a、34a 振動方向
35 ビームスプリッタ
40 検出手段
41、42、74、75 PMT
50、60、94 照明手段
51、91、95 レーザ光源
52 ビーム走査装置
53 リレーレンズ
54 ミラー
61、85 蛍光キューブ
70、80 照明兼検出手段
71 ダイクロイックミラー
72 共焦点レンズ
73 共焦点絞り
81、83 集光レンズ
82 共焦点ディスク
90 シート照明手段
93 波長選択フィルター
96 光ファイバー
100、101、102、103、105、108、110、111、112 顕微鏡システム
S 生体試料
Claims (15)
- 位相分布を像強度分布に変換する顕微鏡によって形成される生体試料の光学像を像コントラストを変化させながら取り込み、像コントラストの異なる複数枚の画像を形成する像コントラスト画像形成工程と、
前記複数枚の画像に基づいて前記生体試料の位相分布に対応する成分と前記生体試料の位相分布以外に対応する成分とを算出して、前記位相分布に対応する成分を前記生体試料の位相分布以外に対応する成分で割り算することで規格化された位相成分画像を形成する位相成分画像形成工程と、
前記位相成分画像を、画像の空間周波数により複数の周波数成分に分解する空間周波数分解工程と、
前記周波数成分の各々に対して各々に対応する光学的応答特性を用いてデコンボリューション処理を行い、前記生体試料の内部で屈折した光によって形成された屈折成分の位相分布と前記生体試料の内部の構造で回折した光によって形成された構造成分の位相分布を算出する位相分布算出工程と、
前記屈折成分の位相分布と前記構造成分の位相分布を合成して前記生体試料の位相分布を算出し、算出した前記生体試料の位相分布から位相分布画像を形成する生体試料の位相分布合成工程と、
前記位相分布合成工程で形成された前記生体試料の位相分布画像と、前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記生体試料の生化学的な現象及び/又は物理学的な現象を可視化した前記生体試料の画像とを合成する異種画像合成工程と、を有する
ことを特徴とする生体試料の画像形成方法。 - 請求項1に記載の画像形成方法において、
前記顕微鏡は、観察物体の位相分布を像強度分布として撮像する微分干渉顕微鏡であり、さらに、
前記顕微鏡のシァー方向を切り替える工程と、
切り替え前後の2方向のシァー方向で算出された前記生体試料の2つの位相分布を合成する工程と、を有する
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項1または請求項2に記載の画像形成方法において、さらに、
観察面に対するデフォーカス状態での光学的応答特性を用いて前記構造成分にデコンボリューション処理を行って前記構造成分の第2の位相分布を算出する第2位相分布算出工程と、
前記構造成分の第2の位相分布と前記観察面に対する合焦状態での光学的応答特性を用いて算出された前記構造成分の位相分布とを比較する位相分布比較工程と、
位相分布の比較結果に基づいて、前記構造成分の位相分布から前記デフォーカスによるボケが生じた位相分布を取り除くボケ位相分布除去工程と、を有し、
前記生体試料の位相分布合成工程は、前記構造成分の位相分布から前記デフォーカスによるボケが生じた位相分布が取り除かれた位相分布と、前記屈折成分の位相分布とを合成する
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項1乃至請求項3のいずれか1項に記載の画像形成方法において、さらに、
観察面に対して焦点面を光軸方向に変化させる焦点面変更工程と、
各焦点面で算出された前記構造成分の位相分布を比較して、前記観察面の上下に存在する前記生体試料の構造から前記観察面に漏れこむ位相分布を識別する漏れ位相分布識別工程と、
識別された位相分布を前記構造成分の位相分布から取り除く漏れ位相分布除去工程と、を有する
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項1乃至請求項4のいずれか1項に記載の画像形成方法において、
異種画像合成工程は、
前記位相分布画像の座標情報と前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像の座標情報とに基づいて画像間の位置合わせを行う工程と、
位置合わせが行われた前記位相分布画像と前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像とを合成する工程と、を有する
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項1乃至請求項4のいずれか1項に記載の画像形成方法において、
異種画像合成工程は、
前記位相分布画像の座標情報及び角度情報と前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像の座標情報及び角度情報とに基づいて画像間の位置合わせを行う工程と、
位置合わせが行われた前記位相分布画像と前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像とを合成する工程と、を有する
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項5または請求項6に記載の画像形成方法において、
異種画像合成工程は、さらに、前記位相分布画像の倍率情報と前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像の倍率情報とに基づいて画像間の倍率合わせを行う工程を有する
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項1乃至請求項7のいずれか1項に記載の画像形成方法において、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像は、前記生体標本が発光した光に基づいて形成される画像である
ことを特徴とする画像形成方法。 - 請求項8に記載の画像形成方法において、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像は、前記生体標本の蛍光画像である
ことを特徴とする画像形成方法。 - 生体試料の位相分布を像強度分布に変換する顕微鏡であって、前記像強度分布の像コントラストを変化させる像コントラスト変化ユニットを有する顕微鏡と、
像コントラストの異なる複数枚の画像を取得するように、前記像コントラスト変化ユニットを制御する制御ユニットと、
請求項1に記載の位相分布計測方法により、前記制御ユニットによる制御により取得された前記複数枚の画像から前記生体試料の位相分布を算出し、算出した前記生体試料の位相分布から位相分布画像を形成する演算ユニットと、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記生体試料の生化学的な現象及び/又は物理学的な現象を可視化した前記生体試料の画像と、前記演算ユニットで形成された前記生体試料の位相分布画像と、を合成する合成ユニットと、を有する
ことを特徴とする画像形成装置。 - 生体試料の位相分布を像強度分布に変換する顕微鏡であって、前記像強度分布の像コントラストを変化させる像コントラスト変化ユニットを有する顕微鏡と、
像コントラストの異なる複数枚の画像を取得するように、前記像コントラスト変化ユニットを制御する制御ユニットと、
請求項5に記載の位相分布計測方法により、前記制御ユニットによる制御により取得された前記複数枚の画像から前記生体試料の位相分布を算出し、算出した前記生体試料の位相分布から位相分布画像を形成する演算ユニットと、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記生体試料の生化学的な現象及び/又は物理学的な現象を可視化した前記生体試料の画像と、前記演算ユニットで形成された前記生体試料の位相分布画像と、を合成する合成ユニットと、を有する
ことを特徴とする画像形成装置。 - 生体試料の位相分布を像強度分布に変換する顕微鏡であって、前記像強度分布の像コントラストを変化させる像コントラスト変化ユニットを有する顕微鏡と、
像コントラストの異なる複数枚の画像を取得するように、前記像コントラスト変化ユニットを制御する制御ユニットと、
請求項9に記載の位相分布計測方法により、前記制御ユニットによる制御により取得された前記複数枚の画像から、前記観察面の上下に存在する前記生体試料の構造から漏れこむ位相分布を取り除いた前記生体試料の位相分布を算出し、算出した前記生体試料の位相分布から位相分布画像を形成する演算ユニットと、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記生体試料の生化学的な現象及び/又は物理学的な現象を可視化した前記生体試料の画像と、前記演算ユニットで形成された前記生体試料の位相分布画像と、を合成する合成ユニットと、を有する
ことを特徴とする画像形成装置。 - 請求項10乃至請求項12のいずれか1項に記載の画像形成装置において、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像は、前記顕微鏡で取得される
ことを特徴とする画像形成装置。 - 請求項13に記載の画像形成装置において、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像は、前記生体標本が発光した光に基づいて形成される画像である
ことを特徴とする画像形成装置。 - 請求項14に記載の画像形成装置において、
前記位相分布画像とは異なる方法で取得された前記画像は、前記生体標本の蛍光画像である
ことを特徴とする画像形成装置。
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