JP2015061885A - Ａ型インフルエンザウィルス感染の治療のための薬剤としてのｅｐ２およびｅｐ４作動薬 - Google Patents

Abstract

【課題】Ａ型インフルエンザウィルスに関連した疾患治療のための治療薬の提供。
【解決手段】Ａ型インフルエンザウィルスに関連する疾患の治療を必要とする患者における当該治療のための医薬組成物であって、ＥＰ２作動薬、ＥＰ４作動薬、混合型ＥＰ２−ＥＰ４作動薬およびその混合物、または薬学的に許容される塩、もしくはそのシクロデキストリン包接体からなる群から選択される治療薬を含む、前記組成物。
【選択図】なし

Description

本発明は、Ｈ５Ｎ１型およびその変異体のような、Ａ型インフルエンザウィルスと関連のあるヒトの呼吸器疾患治療のための治療薬としてのＥＰ２および／またはＥＰ４作動薬の使用に関する。

発明の背景
プロスタグランジンの効果は、細胞表面上にあるＧタンパク質共役受容体によって仲介される。プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）は、機能的に異なる受容体サブタイプ、すなわちＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３およびＥＰ４受容体であって、それらの全てはＰＧＥ₂と反応するが、その作用が異なる受容体サブタイプ、と結合することを通じて、幅広い種類の細胞効果を有するため、特に興味深い。

樹状細胞（ＤＣ）は、免疫系の中で最も強力な抗原提示細胞である。リンパ節にある成熟した抗原保有ＤＣによるサイトカインの産生は、それらが末梢組織で活性化している間、ＰＧＥ₂に強く影響を受ける。ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αのような炎症性サイトカインは、ＩＬ−１２を分泌する抗原保有ＤＣを活性化し、そして、１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）サイトカイン発現偏位細胞（ｂｉａｓｅｄ ｃｅｌｌｓ）の発達を促進する。対照的に、ＰＧＥ₂の存在下で活性化されたＤＣは、障害性のＩＬ−１２産生を示し、そして、２型ヘルパーＴ（Ｔｈ２）サイトカイン発現偏位細胞の発達を促進する（Ｈｉｌｋｅｎｓ ＣＭ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：１７２２−２７（１９９６））。末梢組織においてＤＣが活性化している間に確立された、ＰＧＥ₂に対する応答における、ＩＬ１２を産生する能力の違いは、サイトカインおよびＰＧＥ₂を除去しても変わらない。

サイトカインの産生の増加は、ウィルスと戦うことを助けるための、身体における正常な反応である、炎症を引き起こす。しかし、サイトカインの産生が、長引き、または過剰になると、それは、気管で炎症を引き起こし、呼吸をするのが困難になり、次には肺炎および急性呼吸窮迫症となり得る；そしてそれは、他の器官に損傷を与え、深刻な、生命を脅かす合併症となり得る。

アジアにおける鳥インフルエンザの近年の大流行に関連するＡ型インフルエンザＨ５Ｎ１亜型ウィルスは、インビトロの初代ヒト肺胞細胞（ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ａｌｖｅｏｌａｒ）およびヒト気管支上皮細胞において、より一般的で、あまり毒性の強くないＨ１Ｎ１型ヒトインフルエンザウィルスと比較して、炎症性サイトカインおよびケモカインの、より強いインデューサーであることが実証された。Ｈ５Ｎ１型に感染したヒト細胞におけるサイトカインおよびケモカインのレベルは、Ｈ１Ｎ１型に感染したヒト細胞よりも、３倍から１０倍超高かった（Ｎ ＣＷ Ｃｈａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００５，６：１３５；ａｒｔｉｃｌｅ ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ−ｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔ／６／１／１３５）。

これらの試験データは、鳥インフルエンザに苦しむ患者において見られる、サイトカインおよびケモカインのレベルの高さと関連があり、サイトカインおよび／またはケモカインの高い誘導は、ヒトＨ５Ｎ１型性疾患の発症に関与しているらしいことを示している。鳥インフルエンザに対して、標準的な、ステロイドを用いた抗炎症療法は、あまり治療価値がなかった。タミフルは、Ｈ５Ｎ１型インフルエンザウィルスに感染したマウスがタミフルで処置したときに生存したという点で、効果を示した。ヒトが、Ｈ５Ｎ１型に感染した場合において、タミフルは、生存の可能性を改善するかもしれないが、臨床データは、わずかである。鳥インフルエンザに罹患している患者に対する、タミフルを用いた治療の安全性についての関心が生じている。

したがって、過剰に刺激されたサイトカインおよびケモカイン、とくにＴＮＦα、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）およびインターフェロンガンマの放出を阻害する治療薬を有することは望ましい。ヒトＨ５Ｎ１型ウィルス、および他のＡ型インフルエンザ亜型ウィルスであって同時に、患者によって十分に寛容されるウィルスと関連する疾患を治療する治療薬を有することもまた、望ましい。

欧州特許第１３０６０８７号明細書には、勃起不全の治療に使用されるＥＰ２受容体作動薬について記述されている。同様の構造的分類が、欧州特許第８６０４３０号明細書に記載されており、そして、免疫不全、喘息、および妊娠中絶の治療のための医薬の製造のための使用が、クレームされている。国際公開第０４／３２９６５号には、虚血による臓器機能不全によって引き起こされる疾患の治療および予防のために使用されるＥＰ２受容体作動薬について記述されている。国際公開第０４／００９１１７号には、子宮収縮によって引き起こされる疾患、たとえば生理痛の治療のためのＥＰ２およびＥＰ４受容体作動薬について記述されている。国際公開第０３／０７４４８３号および国際公開第０３／００９８７２号には、ＥＰ２およびＥＰ４と等しく結合する作動薬について記述されている（小野薬品工業）。ＥＰ２受容体作動薬およびＥＰ４受容体作動薬については、骨粗しょう症の治療に関連して（国際公開第９９／１９３００号、米国特許出願公開第２００３／０１６６６３１号、国際公開第０３／７７９１０号、国際公開第０３／４５３７１号、国際公開第０３／７４４８３号、および国際公開第０３／０９８７２号）、および緑内障の治療に関連して（国際公開第０４／３７８１３号、国際公開第０４／３７７８６号、国際公開第０４／１９９３８号、国際公開第０３／１０３７７２号、国際公開第０３／１０３６６４号、米国特許第６７４７０３７号明細書、米国特許第６４１０５９１号明細書、国際公開第０３／４０１２３号、国際公開第０３／４７５１３号、および国際公開第０３／４７４１７号）頻繁に記述されている。国際公開第０４／１２６５６号では、炎症に関連するＥＰ２作動薬についてクレームしている。国際公開第０３／７７９１９号では、不妊治療のためのＥＰ４受容体作動薬についてクレームしている。

発明の概要
本発明は、ウィルス性疾患に対する治療薬に有用である薬剤に関する。より具体的には、前記発明は、Ａ型インフルエンザウィルスに関連する疾患の治療法に関するものであり、そしてとくに、Ａ型インフルエンザＨ５Ｎ１亜型ウィルスに関する。前記方法は、ＥＰ２作動薬、ＥＰ４作動薬、混合型ＥＰ２／ＥＰ４作動薬、またはそれらの混合物（それらの全ては、本明細書において以下の用語「ＥＰ２およびＥＰ４作動薬」、「ＥＰ２および／またはＥＰ４作動薬」および「ＥＰ作動薬」に含まれる）の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む。

発明の詳細な説明
本発明において有用なＥＰ２、ＥＰ４および混合型ＥＰ２／ＥＰ４作動薬は、Ａ型インフルエンザウィルスによる、および好ましい実施形態としては、Ａ型インフルエンザＨ５Ｎ１亜型ウィルスによる感染に対する応答である、サイトカインおよび／またはケモカインの放出を阻害する全てのものを含む。そのような阻害は、当業者によって、当技術分野で周知の手法または本明細書で教示されているような手法により、過度の実験を要することなく、決定され得る。

本発明における好ましい実施形態において、前記作動薬は、５−シアノ−プロスタサイクリン誘導体から選択される。５−シアノ−プロスタサイクリン誘導体、およびそれらの薬理効果のいくつかは、米国特許第４２１９４７９号明細書および米国特許第４０４９５８２号明細書からわかり、それらの全ての開示は、参照により本明細書に組み込まれる。これらの化合物は、ＥＰ２およびＥＰ４作動薬活性を示す（混合型ＥＰ２／ＥＰ４作動薬）と考えられている。これらの化合物、およびその薬学的に許容される塩の製造は、上記米国特許明細書に詳細に記載されている。５−シアノ−プロスタサイクリン誘導体はまた、本発明の範囲内に含まれる；それらは、米国特許第５０１００６５号明細書に開示、およびクレームされており、そしてそれらの全ての開示は、参照により本明細書に組み込まれる。上記の５−シアノ−プロスタサイクリン誘導体は、以前に、ウィルス性疾患の治療または予防に効果があるとして開示されておらず、そしてこの新規の薬学的特性はまた、前記米国特許明細書に記載されている効果とは直接的な関連がない。

本発明における好ましい実施形態において、本発明のウィルス性疾患の治療に有用な５−シアノプロスタサイクリン誘導体は、ニレプロスト、５−シアノ−１５−メチルプロスタサイクリンである。

上記の５−シアノプロスタサイクリン誘導体は、Ｔｈ−２サイトカインの発現を保持しながら、Ｔｈ−１サイトカインの放出を阻害し、そして、Ｔｈ−１応答から離れて、Ｔｈ−２応答へのＴ細胞救援の分極を亢進する。このことは、それらをウィルス、および特に、Ａ型インフルエンザＨ５Ｎ１亜型ウィルスに関連のある疾患の治療のための医薬として好ましいものとする。このことは、それらが、天然のプロスタグランジンとは、改善された特異性、より持続性の高い効果、およびより高い安定性よって区別されるため、特に正しい。加えて、これらの化合物は、第一相臨床試験において、ヒトによって良好に寛容され、血圧低下作用がないことが明らかとされており、そしてそのことが、それらを医薬およびインフルエンザ治療薬としてさらにふさわしいものとする。

本発明における、第二の好ましい実施形態において、ＥＰ２作動薬は、例えば、米国特許第４４２３０６７号明細書、米国特許第４４７４８０２号明細書、米国特許第４６９２４６４号明細書、米国特許第４７０８９６３号明細書、米国特許５０１３７５８第号明細書および／またはカナダ特許第１２４８５２５号明細書に合成法とともに開示されている、特定のプロスタサイクリンおよびカルバサイクリンから選択される。これらのプロスタサイクリンおよびカルバサイクリン誘導体は、以前に、ウィルス性疾患の治療または予防に効果があるとして開示されておらず、そしてこの新規の薬学的特性はまた、前記米国特許明細書に記載されている効果とは直接的な関連がない。

本発明における好ましい実施形態において、本発明における、ウィルス性疾患の治療に有用なプロスタサイクリンまたはカルバサイクリンは、イロプロスト、シカプロスト、エプタロプロスト、ベラプロストおよびシプロステンから選択される。より好ましい実施形態において、プロスタサイクリン類縁体は、ベラプロスト、すなわち（＋／−）−（１Ｒ^*，２Ｒ^*，３ａｓ^*，８ｂＳ^*）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ^*）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブチレートである。

本発明のさらにもう一つの実施形態において、ＥＰ２作動薬は、一般式Ｉ：

［式中、
Ｒ¹は、ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＲ²、ＣＯＮＨＲ²または−ＣＯＮＨＲ³基であり、
Ｒ²は、水素、
直鎖または分岐鎖の、場合により一価から多価不飽和の、場合によりハロゲン、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ、置換Ｃ₃〜Ｃ₁₀アリール、場合により置換Ｃ₃〜Ｃ₁₀アロイル、場合により、置換ジ−Ｃ₁〜Ｃ₅アルキルアミノまたは場合により置換トリ−Ｃ₁〜Ｃ₅アルキルアミノによって一置換から多置換されたＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル基、
場合によりＣ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されたＣ₃〜Ｃ₁₀シクロアルキル、
３位および４位をフッ素、塩素、アルコキシ、またはトリフルオロメチル、あるいは４位をヒドロキシ、ハロゲン、フェニル、一もしくはそれ以上のＣ₁〜Ｃ₄アルキル基、クロロメチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、カルボキシ、ヒドロキシまたはＣ₁〜Ｃ₄アルコキシによって置換されていてもよい、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルで、場合により置換されたＣ₃〜Ｃ₁₀アリール、
または、Ｃ₃〜Ｃ₇ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ³は、Ｃ₁〜Ｃ₁₅カルボン酸またはＣ₁〜Ｃ₁₅スルホン酸であり、
Ａは、シス−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基であり、
Ｂがは、トランス−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基であり、
Ｗは、Ｃ₂〜Ｃ₆アルキレンであり、
Ｒ⁴は、ヒドロキシ基、Ｏ−Ｒ⁶基またはＯ−Ｒ⁷基であり、ここでＲ⁶は、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、トリメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、またはトリベンジルシリル基であり、Ｒ⁷は、Ｃ₁〜Ｃ₁₅カルボン酸であり、
Ｒ⁵は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₀アルキル、またはＣ₁〜Ｃ₁₀アルケニル基であり、
ｎは、１〜４である。］
で表される、９−クロロ−１５−デオキシプロスタグランジン誘導体、および生理学的に許容される塩基を用いたその塩、ならびにそのシクロデキストリン包接体から選択される。

アルキル基とは、１〜１０個の炭素原子を有する、直鎖、または分岐鎖アルキル基であって、飽和および不飽和アルキル基のことである。挙げられる例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、ブテニル、イソブテニル、プロペニル、ペンテニル、ベンジル、ｍ−およびｐ−クロロベンジル基である。アルキル基は、場合により、ハロゲン原子（たとえば、フッ素、塩素、臭素）、アルコキシ基（たとえば、メトキシ、エトキシ、またはプロポキシ）、置換アリールまたはアロイル基（たとえば、フェニル）、または、ジアルキルアミノ（たとえば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジメチルアミノプロピル、またはトリアルキルアンモニウム）によって一置換から多置換されていてもよく、一置換が好ましい。

好適なアリール基は、置換アリール基、および、限定されるものではないが、フェニル、１−ナフチルおよび２−ナフチルのような、無置換アリール基の両方である。置換基は、たとえば、１〜３個のハロゲン原子、フェニル基、１〜４個の炭素原子をそれぞれ有する１〜３個のアルキル基、クロロメチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、カルボキシ、ヒドロキシル、または１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基から選択されてもよい。

シクロアルキル基は、当該環中に３〜１０個の炭素原子を含む。当該環は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基で置換されていてもよい。シクロアルキル基の具体例は、限定されるものではないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロヘキシル、およびアダマンチルを含む。

好適な複素環基は、少なくとも一つのヘテロ原子、好ましくは窒素、酸素または硫黄を含む、５および６員環である。具体例は、限定されるものではないが、２−フリル、２−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、オキサゾリル、チアゾリル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、３−フリル、３−チエニル、および２−テトラゾリルである。

生理学的に許容される酸残基が、酸残基として好適である。好ましい酸は、脂肪族、環状脂肪族、芳香族および複素環に属する、１〜１５個の炭素原子を有する、有機カルボン酸およびスルホン酸である。置換基で挙げられる例は、Ｃ₁〜Ｃ₁₅アルキル、ヒドロキシ、Ｃ₁〜Ｃ₁₅アルコキシ、オキソ基、アミノ基およびハロゲン原子である。言及されてもよいカルボン酸の具体例は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、カプロン酸、オエナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシリル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、トリメチル酢酸、ジエチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、シクロプロピル酢酸、シクロペンチル酢酸、シクロヘキシル酢酸、シクロプロパンカルボン酸、シクロヘキサンカルボン酸、フェニル酢酸、フェノキシ酢酸、メトキシ酢酸、エトキシ酢酸、モノ、ジ、およびトリクロロ酢酸、アミノ酢酸、ジエチルアミノ酢酸、ピペリジノ酢酸、モルホリノ酢酸、乳酸、コハク酸、アジピン酸、安息香酸、ハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、またはカルボキシ基で置換された安息香酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、フラン−２−カルボン酸、およびシクロペンチルプロピオン酸である。好適なスルホン酸の具体例は、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、イソプロパンスルホン酸、β−クロロエタンスルホン酸、ブタンスルホン酸、シクロペンタンスルホン酸、シクロヘキサンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（β−クロロエチル）アミノスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ジイソブチルアミノスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノスルホン酸、ピロリジノスルホン酸、ピペリジノスルホン酸、ピペラジノスルホン酸、Ｎ−メチルピペラジノスルホン酸およびモルホリノスルホン酸である。

ヒドロキシ基は、たとえば、エーテル化またはエステル化により官能基修飾されてもよい。

好適なエーテル残基は、当業者に知られた残基である。たとえば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、トリメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、またはトリベンジルシリル基のような、容易に除去されるようなエーテル残基が好ましい。

好適なアシル基は、Ｒ⁷で言及されたカルボン酸である。名前で例を挙げれば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、およびベンゾイルである。

生理学的に許容される塩の形成のために、当業者に公知の無機および有機塩基が、塩の形成には好適である。挙げられる例は、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物、水酸化カルシウムのようなアルカリ土類金属水酸化物、アンモニア、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、モルホリン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミンのようなアミンなどである。

特に有効であると判明している、一般式Ｉの化合物は、
Ｒ¹が、ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＲ²、−ＣＯＮＨＲ²、または−ＣＯＮＨＲ³基であり、
Ｒ²が、水素、
直鎖または分岐鎖の、場合により一価から多価不飽和の、場合により、フッ素、塩素、または臭素により、Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ、置換Ｃ₃〜Ｃ₁₀アリール、または、場合により置換Ｃ₃〜Ｃ₁₀アロイル、置換ジ−Ｃ₁〜Ｃ₅アルキルアミノもしくは置換トリ−Ｃ₁〜Ｃ₅アルキルアミノにより一置換されたＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル基、
場合により、Ｃ₁〜Ｃ₄アルキルで置換されたＣ₅〜Ｃ₆シクロアルキル、
３位または４位をフッ素、塩素、アルコキシ、またはトリフルオロメチルで、あるいは４位をヒドロキシで置換されていてもよい、フェニルで場合により置換された、Ｃ₃〜Ｃ₁₀アリール基、
窒素、酸素または硫黄により、１回またはそれ以上中断されていてもよい、Ｃ₅〜Ｃ₆ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ³が、Ｃ₁〜Ｃ₁₀カルボン酸またはＣ₁〜Ｃ₁₀スルホン酸であり、
Ａが、シス−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基であり、
Ｂが、トランス−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基であり、
Ｗが、Ｃ₂〜Ｃ₆アルキレンであり、
Ｒ⁴が、ヒドロキシ基であり、
Ｒ⁵が、水素、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、またはＣ₁〜Ｃ₁₀アルケニル基であり、そして、
ｎが、１〜４であり、好ましくは２〜３である、化合物である。

顕著に有効であると判明している、一般式Ｉの化合物は、
Ｒ¹が、ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＯＯＲ²、−ＣＯＮＨＲ²、または−ＣＯＮＨＲ³基であり、
Ｒ²が、水素、または場合によりフェニルで置換されているＣ₁〜Ｃ₄アルキル、
Ｃ₅〜Ｃ₆シクロアルキル、
場合によりフェニルで置換されているＣ₃〜Ｃ₆アリールであり、
Ｒ³が、Ｃ₁〜Ｃ₆カルボン酸またはＣ₁〜Ｃ₆スルホン酸であり、
Ａが、シス−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基であり、
Ｂが、トランス−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−基であり、
Ｗが、Ｃ₂−アルキレンであり、
Ｒ⁴が、ヒドロキシ基であり、
Ｒ⁵が、水素、飽和Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、またはＣ₁〜Ｃ₅アルケニルであり、そして、
ｎが、１〜４であり、好ましくは２〜３であり、より好ましくは２である、化合物である。

本発明における好ましい実施形態において、本発明における、自己免疫疾患の治療に有用なＥＰ２作動薬は、９−クロロ−１５−デオキシプロスタグランジン誘導体、（５Ｚ，１３Ｅ）−（９Ｒ，１１Ｒ）−９−クロロ−１１−ヒドロキシ−１７，１７−テトラメチレン−２０−ノル−５，１３−プロスタジエン酸である。

上記の一般式Ｉのプロスタン誘導体は、一般式II：

［式中、Ｒ¹は、−ＣＯＯＲ²、−ＣＯＮＨＲ³であり、そして、ＡおよびＲ⁴は、上記で定義されたとおりであり、Ｒ⁴における遊離のＯＨ基は保護されている。］
のアルデヒドと、一般式III：

のスルホンのカルバニオンとの反応により調製される。

得られたヒドロキシスルホンをアセチル化した後、還元的脱離によりオレフィンを得、そして、必要に応じて、全ての過程において保護されているヒドロキシ基の脱保護を行い、そして、必要に応じて、エステル化、エーテル化および／または二重結合の水素化、および／またはエステル化されたカルボキシ基（Ｒ¹＝ＣＯＯＲ²）および／または遊離のカルボキシ基（Ｒ²がＨである、ＣＯＯＲ²）のエステル化、および／または、遊離のカルボキシ基（Ｒ²がＨである、ＣＯＯＲ²）のアミド（Ｒ¹＝ＣＯＮＲ²）への変換、および／または、遊離の、もしくはエステル化されたカルボキシ基の還元（Ｒ¹＝ＣＯＮＲ³）を行う。

一般式IIのアルデヒドと、スルホンIIIから生じたカルバニオンとの反応は、それ自体知られている方法で、テトラヒドロフランまたはジエチルエーテルのような不活性溶媒を用いて、−１００℃〜２４℃の間の温度で、好ましくは−１００℃〜−７０℃の間の温度で行う。スルホンIIIのカルバニオンは、たとえば、ブチルリチウム、メチルリチウム、カリウム ｔｅｒｔ−ブトキシド、水素化ナトリウム、リチウムジイソプロピルアミド、好ましくはブチルリチウムのような塩基を用いて、従来法により発生させる。カルバニオンの形成は、−７８℃〜２５℃で、好ましくは−７８℃で行われる。

生成したヒドロキシ基のアセチル化は、無水酢酸を用いて、好適には、たとえばピリジンのような塩基の存在下、−７８℃〜２５℃の間で、周知の手法により行われる。

一般式Ｉのトランス−オレフィンを得るための、中間体であるアセトキシスルホンの還元的脱離は、メタノール中、マグネシウム粉末を用いて、触媒量のクロロトリメチルシランを用いて行われる。反応は、０℃〜６０℃の間で、好ましくは１５℃〜２５℃の間で行われる。別法として、還元的脱離はまた、ナトリウムアマルガムを用いて行われ得る。

Ｒ¹が−ＣＨ₂ＯＨである、一般式Ｉの化合物を得るための還元は、エステルまたはカルボン酸を還元するのに好適な還元剤、たとえば、水素化アルミニウムリチウム、水素化ジイソブチルアルミニウムなどを用いて行われる。好適な溶媒は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、トルエンなどである。還元は、−３０℃から使用される溶媒の沸点までの温度で、好ましくは０℃から３０℃の温度で行われる。

官能基修飾されたヒドロキシ基は、周知の方法により脱保護される。たとえば、テトラヒドロピラニル基のようなヒドロキシ基の保護基の脱保護は、とりわけ、シュウ酸、酢酸、プロピオン酸のような有機酸の水溶液中で、または、塩酸のような無機酸の水溶液中で行われる。溶解性を改善させるために、水混和性の不活性有機溶媒を加えることは好ましい。好適な有機溶媒の例は、メタノールおよびエタノールのようなアルコール、ならびにジメトキシエタン、ジオキサン、およびテトラヒドロフランのようなエーテルである。テトラヒドロフランが、好ましくは使用される。脱離は、好ましくは、２０℃〜８０℃の間の温度で行われる。

アシル基は、たとえば、アルカリ金属、またはアルカリ土類金属の炭酸塩あるいは水酸化物を用いて、アルコール中またはアルコール水溶液中で加水分解される。好適なアルコールは、たとえば、メタノール、エタノール、ブタノールなどのような脂肪族性アルコールであり、好ましくは、メタノールである。言及されてもよいアルカリ金属炭酸塩および水酸化物は、カリウム塩およびナトリウム塩である。カリウム塩が、好ましい。

好適なアルカリ土類炭酸塩および水酸化物は、炭酸カルシウム、水酸化カルシウムおよび炭酸バリウムである。反応は、−１０℃〜＋７０℃、好ましくは＋２５℃で行われる。

Ｒ¹におけるエステル基−ＣＯＯＲ²（たとえばＲ²が１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基である）は、当業者により知られた手法により導入される。１−カルボキシ化合物は、たとえば、ジアゾ炭化水素を用いて、周知の方法により反応させられる。ジアゾ炭化水素を用いたエステル化は、たとえば、ジアゾ炭化水素溶液の不活性溶媒の溶液、好ましくはジエチルエーテルの溶液を、１−カルボキシ化合物の上記と同様の溶媒の溶液、または異なる不活性溶媒の溶液、たとえば塩化メチレンとの溶液と混合することにより行われる。当該反応が、１〜３０分間で完結したのち、溶媒が除去され、そして従来法により精製される。ジアゾアルカンは、周知のものであるか、または周知の手法により調製され得るかのいずれかである（Ｏｒｇ．Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ Ｖｏｌ．８，３８９〜３９４ページ（１９５４））。

Ｒ²が、置換されている、または無置換のアリール基である、Ｒ¹におけるエステル基−ＣＯＯＲ²は、当業者にとって周知の手法により導入される。たとえば、１−カルボキシ化合物は、適当なアリールヒドロキシ化合物およびジシクロヘキシルカルボジイミドを用いて、好適な塩基、たとえばピリジン、ＤＭＡＰ、トリエチルアミンの存在下、不活性溶媒中で反応させられる。好適な溶媒は、塩化メチレン、塩化エチレン、クロロホルム、酢酸エチル、テトラヒドロフランであり、好ましくはクロロホルムである。反応は、−３０℃〜＋５０℃の間の温度で、好ましくは１０℃で行われる。

初期生成物にあるＣ＝Ｃ二重結合を還元しようとするならば、水素化が、それ自体周知の手法により行われる。

５、６位の二重結合の水素化は、低温で、好ましくは約−２０℃で、水素雰囲気下、貴金属触媒の存在下、周知の手法により行われる。好適な触媒の例は、１０％パラジウム炭素である。５、６位の二重結合および１３、１４位の二重結合の両方を水素化する場合には、より高い温度が使用され、好ましくは約２０℃である。

Ｒ²が水素原子である、一般式Ｉのプロスタグランジン誘導体は、好適な量の適当な無機塩基を用いて中和することにより、塩に変換され得る。たとえば、化学量論量の塩基を含む水に、適当なプロスタグランジン酸を溶解し、その後、水を濃縮し、または水混和性の溶媒、たとえばアルコールまたはアセトンが加えられることで、固体有機塩を生じる。

アミン塩は、たとえばプロスタグランジン酸を、好適な溶媒、たとえばエタノール、アセトン、ジエチルエーテル、アセトニトリル、またはベンゼン中に溶解し、そして少なくとも化学量論量のアミンをこの溶液に加えることで、従来法により調製される。これは、通常、固形の塩を生じるか、または溶媒の濃縮後、通常の方法により単離される。

Ｒ¹におけるアミド基、−ＣＯＮＨＲ³は、当業者に知られた手法によって導入される。一般式Ｉ（Ｒ²＝Ｈ）のカルボン酸は、はじめに、たとえばトリエチルアミンのような三級アミンの存在下、イソブチルクロロホルメートを用いて混合酸無水物へと変換される。混合酸無水物と、適当なアミンのアルカリ金属塩、またはアンモニア（Ｒ³＝Ｈ）との反応は、不活性溶媒、またはたとえば、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジメチルホルムアミド、ヘキサメチルリン酸トリアミドのような溶媒の混合物中で、−３０℃〜＋６０℃、好ましくは０℃〜３０℃の間の温度で行う。

Ｒ¹におけるアミド基−ＣＯＮＨＲ³を導入するさらなる選択肢は、一般式Ｉ（Ｒ²＝Ｈ）の１−カルボン酸であって、場合により遊離の水酸基が中間保護されている前記カルボン酸と、一般式IV：

［式中、Ｒ³は、上で示した意味である。］
の化合物を反応させることからなる。

一般式Ｉ（Ｒ²＝Ｈ）の化合物と、一般式IVのイソシアネートとの反応は、必要に応じて、たとえば、トリエチルアミンのような三級アミンまたはピリジンを加えることで行われる。前記反応は、無溶媒か、または不活性溶媒、好ましくはアセトニトリル、テトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルアセタミド、塩化メチレン、ジエチルエーテル、トルエン中で、−８０℃〜１００℃の間の温度で、好ましくは０℃〜３０℃で行われ得る。

出発物質が、プロスタン残基中にＯＨ基を含むならば、これらのＯＨ基もまた、反応される。所望の最終生成物が、プロスタン残基に遊離の水酸基を含むのならば、好ましくは容易に除去され得るエーテルまたはアシル基によって中間保護された出発原料から合成を始めることが好適である。

出発原料として使用される一般式IIのアルデヒドは、周知であるか、またはたとえば、好ましくはＲ¹が−ＣＯＯＣＨ₃である、一般式Ｖの９−ハロプロスタグランジンの１３、１４位の二重結合を、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドおよびチタン（IV）イソプロポキシドを用いて、−２０℃で、周知の手法による選択的エポキシ化により調製され得る。

続いて、ジエチルエーテル中で過ヨウ素酸を用いたエポキシドの開裂、および、必要に応じて、１１位のヒドロキシ基の、たとえばジヒドロピランを用いた保護により、一般式IIのアルデヒドを得る。

出発原料として使用される一般式IIIのスルホンは、ｎが上で示した意味である、一般式VIIのシクロアルキルカルボン酸から、一般式VIIIのアルキルハライド（Ｒ⁵が上で示した意味であり、そしてハロゲンが、ヨウ素、塩素または臭素であり得る）を用いたアルキル化によって調製され得る。

アセトン中、ヨウ化メチルおよび炭酸カリウムを用いたIXのエステル化の後、得られたメチルエステルをジエチルエーテル中、水素化アルミニウムリチウムを用いてアルコールへと還元する。ジメチルスルホキシドおよび塩化メチレンの混合液中で、トリエチルアミンの存在下、ＳＯ₂−ピリジンコンプレックスを用いたアルコールの酸化により、一般式Ｘのアルデヒドを得る。続いて、ウィッティッヒ−ホーナー反応を行い、必要に応じて、ＸＩを得るために二重結合を水素化し、その後の水素化ジイソブチルアルミニウムを用いた還元により、一般式ＸIIのアルコールへと導く。しかし、二重結合の水素化はまた、二重結合であるＷを有するエステルＸＩの、Ｗを有するアルコールＸIIへの還元の後で行われ得る。

続いて、ヒドロキシ基の変換が、中間体のトシル化の後に、トルエン中でチオフェノールを用いた反応により、行われる。この過程で得られたチオエーテルＸIIIは、最終的に、メタノール水溶液中で酸化され、一般式IIIのスルホンとなる。

本発明のさらなる実施形態において、ＥＰ２およびＥＰ４作動薬は、小野薬品、メルクおよびファイザーにより報告されたものから選択される。

本発明において有用な、薬理学的に活性のあるＥＰ２およびＥＰ４作動薬は、Ａ型インフルエンザウィルス、および特にＨ５Ｎ１型ウィルスと関連する疾患の治療のための薬剤の製造のために、製剤学における従来法に従って製造され得る。医薬組成物は、有効量（すなわち、Ａ型インフルエンザウィルス性疾患を治療するために有効である量）のＥＰ作動薬、および一またはそれ以上に薬学的に許容される賦形剤を含む。

好適な賦形剤は、限定されるものではないが、腸内投与、非経口的投与、または局所性投与に好適な、活性物質と有害反応を起こさない、薬学的に、有機化学的に、または無機化学的に不活性な担体物質を含む。好適な、薬学的に許容され得る担体は、限定されるものではないが、水、塩溶液、アルコール、ゼラチン、アラビアゴム、乳酸塩、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルケングリコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシル−メチルセルロース、ケイ酸、粘性パラフィン、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリドなどを含む。前記医薬品は、たとえば錠剤、コーティング錠、坐薬、またはカプセル剤のような固形か、あるいは、たとえば液剤、懸濁剤、または乳剤のような液状であってもよい。それらはさらに、必要に応じて、滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を変化させる塩、緩衝剤、着色剤、香味剤および／または芳香剤などのような、活性物質と有害反応を起こさない、助剤を含んでもよい。好適な医薬組成物の例には、以下のものを含む。

エアロゾル溶液は、吸入による送達のために、便宜的に製造される。

タルク、および／または炭化水素担体、または、たとえばラクトース、とうもろこしデンプン、もしくはジャガイモデンプンのような結合剤を有する錠剤、コーティング錠、あるいはカプセル剤が、経口用に特に適している。使用はまた、たとえば、必要に応じて甘味料が加えられた流体のような、液状で可能である。

滅菌された、注射用の、水性または油性の溶液が、懸濁剤、乳剤または坐薬を含む植込錠（ｉｍｐｌａｎｔｓ）と同様に、非経口投与に使用される。アンプルは、便利な単位用量である。徐放性組成物は、活性化合物が、異なる分解性被膜、たとえばマイクロカプセル、多層コーティングなどを用いて保護されたものを含む形で調合され得る。

同様に使用され得る担体系は、胆汁酸の塩または動物性もしくは植物性のリン脂質のみならずそれらの混合物のような、界面活性の賦形剤、およびリポソームまたはその成分である。経皮パッチもまた、送達手段として使用され得る。

ＥＰ２および／またはＥＰ４治療薬の投与量は、Ａ型インフルエンザ疾患を治療するために有効な量である。活性成分の有効量は、投与経路、年齢、患者の体重、治療されるべき疾患の性質および重症度、ならびに同様の要素によって変化してもよい。有効量は、当業者に周知の手法により決定され得る。一日量は、一般的に、約０．１〜２００μｇ／ｋｇ／日であって、好ましくは約０．５〜１０μｇ／ｋｇ／日であって、ヒト患者への投与の際、それは一度に投与される単回投与の量か、または一日２回もしくはそれ以上に分けた量であり得る。

ＥＰ２および／またはＥＰ４作動薬は、限定されるものではないが、オセルタミビル（タミフル（商標））およびザナミビル（リレンザ（商標））のような、他の抗ウィルス化合物または抗炎症性化合物との併用で送達されてもよい。当該化合物は、同時に、または別の製剤の形で連続的に患者へ送達されてもよく、あるいはそれらは、併用されて、そして、単剤として送達されてもよい。

さらなる詳述がなくとも、当業者は、前述の説明を用いて、本発明を最大限利用し得ると考えられる。したがって、以下の特定の実施形態は、単なる例にすぎず、残りの開示部分を限定するものと絶対に解釈されるべきではない。

実施例１：Ｔｈ−１細胞によるサイトカインの放出の、ニレプロストによる阻害の実証
原理：
抗原提示細胞、およびＴ細胞受容体を介した抗原による、ヒトＴリンパ球の活性化は、レクチン、コンカナバリンＡ（Ｃｏｎｃａｎａｖｉｌｉｎ Ａ）（ＣｏｎＡ）による実験条件で模倣される。ＣｏｎＡは、Ｔ細胞受容体と結合し、そして細胞が種々のサイトカインを放出するように刺激することが知られている。ＥＰ受容体へのニレプロストの結合は、種々のサイトカインの放出を阻害する。Ｔｈ−１細胞により放出されるサイトカインの一つが、ＩＦＮ−γである。ＩＦＮ−γの生化学的および生物学的活性は、広範囲にわたって文献に概説されている。

検出方法：
ヒトＩＦＮ−γは、１４３アミノ酸からなる、２量体の発現タンパク質である。ＩＦＮ−γ特異的な抗体に基づく酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）は、市販されている。スタンダードおよびサンプルを、マイクロプレートのウェルに、ピペットで入れた。ヒトＩＦＮ−γ特異的抗体を、前記ウェルに加えた。基質をウェルに加え、そして、ＩＦＮ−γの結合量に比例して着色が生じた。色強度を測定した。

手順：
末梢血リンパ球を、ヒトドナーから、フィコール密度勾配遠心法を用いて単離し、残余の赤血球を選択的溶解により取り除いた。白血球を、１０％ウシ胎児血清を加えたＲＰＭＩ１６４０中で、約１０⁶細胞／ｍＬで培養した。細胞培養を、上記で記述した２μｇ／ｍｌのＣｏｎＡにより活性化した。ＣｏｎＡによる活性化の間、ニレプロストを種々の濃度に希釈して加えた。細胞を３７℃で約１８時間培養した。活性化の間に放出されたＩＦＮ−γを、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。

ニレプロストは、用量に応じて、Ｔリンパ球Ｔｈ−１細胞によるサイトカインの放出に対して、非常に高い阻害活性を示した。

実施例２：炎症性サイトカインの放出の阻害の実証
原理：
抗原提示細胞による、およびＴ細胞受容体を介した抗原による、ヒトＴリンパ球の活性化は、レクチンである、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）による実験条件で模倣される。ＣｏｎＡは、Ｔ細胞受容体と結合し、そして、細胞が種々のサイトカインを放出するように刺激することが知られている。ＥＰ受容体へのニレプロストの結合は、種々のサイトカインの放出を阻害する。阻害される炎症性サイトカインの一つが、ＴＮＦαである。ＴＮＦαの生化学的および生物学的活性は、広範囲にわたって文献に概説されている。

検出方法
ヒトＴＮＦαは、３量体の発現タンパク質である。ＴＮＦαに特異的な抗体に基づく、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）は、市販されている。スタンダードおよびサンプルを、マイクロプレートのウェルへ、ピペットで入れた。ヒトＴＮＦαに特異的な抗体を、前記ウェルに加えた。基質をウェルに加え、そして、ＴＮＦαの結合量に比例して着色が生じた。色強度を測定した。

手順：
末梢血リンパ球を、ヒトドナーからフィコール密度勾配遠心法を用いて単離し、残余の赤血球を選択的溶解により取り除いた。白血球を、１０％ウシ胎児血清を加えたＲＰＭＩ１６４０中で、約１０⁶細胞／ｍＬで培養した。細胞培養を、上記で記述した２μｇ／ｍｌのＣｏｎＡにより活性化した。ＣｏｎＡによる活性化の間、ニレプロストを種々の濃度に希釈して加えた。細胞を３７℃で約１８時間培養した。活性化の間に放出されたＴＮＦαを、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。

実施例３：細胞障害性ＣＤ８⁺リンパ球によるサイトカインの放出の阻害の実証.
原理：
抗原提示細胞、およびＴ細胞受容体を介した抗原による、ヒトＴリンパ球の活性化は、Ｔ細胞受容体のＣＤ３サブユニットへの抗体の付加、およびＣＤ２８共刺激受容体への抗体の付加による実験条件で模倣される。Ｔリンパ球への抗ＣＤ−３、抗ＣＤ−２８抗体の結合は、当該細胞が、種々のサイトカインの放出をするように刺激する。これらのサイトカインのいくつかは、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γおよびＧＭ−ＣＳＦである。これらのサイトカインの生化学的および生物学的活性は、広範囲にわたって文献に概説されている。ＥＰレセプターへのニレプロストの結合は、種々のＣＤ８⁺サイトカインの放出を阻害する。

検出方法：
ヒトのサイトカインに特異的な抗体に基づいた、マルチ−サイトカイン免疫吸着法（Ｍｕｌｔｉ−ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂａｎｔ ａｓｓａｙｓ）が、市販されている。スタンダードおよびサンプルを、サンプルチューブに、ピペットで入れた。サイトカイン特異的なモノクローナル抗体を、蛍光性のビーズセットへ共有結合により結合させ、それがサイトカインを補足する。相補的な、ビオチン化モノクローナルサイトカイン抗体により、免疫サンドイッチを完成させ、そして前記反応をストレプトアビジン−フィコエリスリンにより検出する。

手順：
ミルテニー社製のＣＤ１４ビーズにより、４人のドナーからＣＤ１４陰性の個体群を単離した。４つの個体群を、１０％ウシ胎児血清を加えたＲＰＭＩ１６４０中で一晩、別々のフラスコ中で、５×１０⁶／ｍＬｄで静置した。それまでの間、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、機能性抗体、イーバイオサイエンス（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ））を、４℃で、炭酸ナトリウム結合バッファー中、５μｇ／ｍＬで、１０ｃｍのプレートに結合した。次の日、細胞を混合し、そして、ミルテニー社製のＣＤ８単離キット（ネガティブ セレクション）を用いた、ＣＤ８細胞の単離のために、１×１０⁹個の細胞を分取した。生じた３．９×１０⁸個のＣＤ８細胞を、培地中で、４×１０⁶／ｍＬで再懸濁させ、１０ｃｍの、ＣＤ３−結合プレートへ加えた。溶解性の抗ＣＤ２８（２〜５μｇ／ｍＬ）および１μＭのニレプロストまたはビヒクルのみを、ＣＤ８細胞に加えた。培養を一晩続け、そしてサイトカインを上記に従って検出した。結果を下記に示す。

ニレプロストは、細胞障害性のＣＤ８⁺リンパ球によるサイトカインの放出に対して、非常に高い阻害活性を示した。

実施例４：ヒト単球由来の樹状細胞（ＤＣ）によるサイトカインの放出の、ニレプロストによる阻害の実証
原理：
樹状細胞（ＤＣ）は、最も強力な抗原提示細胞であり、免疫応答において中心的な役割を果たす。トル様受容体、ＴＬＲを介した刺激の後、ＤＣは、炎症性のサイトカインおよびケモカインを発現し、ならびに放出し、そして、ナイーブＴ細胞の活性化および増殖を誘導することがある。ＥＰ受容体へのニレプロストの結合は、ＴＬＲ４リガンド（ＬＰＳ）により刺激されたＩＬ−１２の放出を阻害する。したがって、ＣＤ４Ｔ細胞のＴｈ−２系統への分化を導く。

検出方法：
ＩＬ１２は、２つの遺伝的に関連性のないサブユニットがジスルフィド結合により結合された、７５ｋＤａの糖タンパク質ヘテロ二量体（ｐ７０）である。ＩＬ−１２ｐ７０に特異的な抗体に基づく酵素結合免疫吸着検定法は、市販されている。スタンダードおよびサンプルを、マイクロプレートのウェルへ、ピペットで入れた。ヒトＩＬ１２に特異的な抗体を、前記ウェルに加えた。基質をウェルに加え、そして、ＩＬ１２の結合量に比例して着色が生じた。当該色強度を測定した。

手順：
ヒト単球由来の樹状細胞を、ヒトドナーからフィコール密度勾配遠心法を用いて単離し、残余の赤血球を選択的溶解により取り除いた。ＣＤ１４マイクロビーズを、ＣＤ１４抗原の発現に基づく、ヒト細胞の分離のために使用した。樹状細胞を、ウシ胎児血清、２００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ（Ｌｅｕｋｉｎｅ）および１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４を加えたＲＰＭＩ１６４０中で、約１．５×１０⁶細胞／ｍＬで培養した。細胞を３日間かけて成長させ、それから培地を換えた。１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを、細胞を活性化させるために加えた。ＬＰＳによる刺激の間、１μＭのニレプロストおよび１μＭのＰＧＥ₂を加えた。細胞を、約１８時間、３７℃で培養した。活性化中に放出されたＩＬ−１２を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。結果を以下に示す。

ニレプロストは、ヒト単球由来の樹状細胞（ＤＣ）によるサイトカインの放出に対して、非常に高い阻害を示した。

実施例５：
ヒトドナーの単球由来の樹状細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４および２００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ存在下、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０中で６日間、培養した。当該細胞を、種々の活性化刺激剤（プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ₂）（１μＭ）、ビヒクルコントロール（ＤＭＳＯ）または検体（１μＭ）存在下で、１８時間、１０ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳ（シグマ），５μｇ／ｍＬ リコンビナントヒトＣＤ−４０リガンド（Ｒ＆Ｄ システムズ）、あるいは５μＭ ヒトＣｐＧ−ＤＮＡ（ハイカルト バイオテクノロジー（ＨｙＣｕｌｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））を用いて活性化した。個々のドナーの、細胞培養上清中のＴＮＦαのレベルを、市販のＥＬＩＳＡキットで測定した。検体（（５Ｚ，１３Ｅ）−（９Ｒ，１１Ｒ）−９−クロロ−１１−ヒドロキシ−１７，１７−テトラメチレン−２０−ノル−５，１３−プロスタジエン酸（検体１）および別のＥＰ作動薬（検体２）を用いた結果を、以下の表に示す）は、以下の表に示すとおり、培養上清中において測定されたサイトカインレベルの阻害へと導いた。

実施例６：ウィルスＲＮＡにより活性化された、ヒト単球由来の樹状細胞からのＴＮＦαの放出の、ニレプロストによる阻害の実証
検体（ニレプロスト）を、合成ウィルス性ＲＮＡにより活性化された、ヒト単球由来の樹状細胞からの、ＴＮＦαの放出を阻害するために使用した。細胞を、実施例４および実施例５で記載したとおりに、インビトロで培養した。細胞を、１マイクロモーラーの検体の存在下または非存在下において、２μｇ／ｍＬのポリ（Ｉ：Ｃ）、すなわち二重鎖ＲＮＡの合成誘導体（Ａ型インフルエンザウィルスの構成要素）を用いて活性化し、１８時間培養した。細胞培養上清のＴＮＦαのレベルを、市販のＥＬＩＳＡキットにより測定した。検体（ニレプロスト）は、ポリ（Ｉ：Ｃ）により誘導されたＴＮＦαの著しい減少を引き起こした。

実施例７：ウィルスＲＮＡにより活性化されたヒト末梢血リンパ球から放出されたＴＮＦαの、ベラプロストによる阻害の実証
実施例６の手順に従って、ヒト末梢血リンパ球を単離し、培養し、それらをポリ（Ｉ：Ｃ）を用いて活性化した後、さらに培養した。細胞培養上清中のＴＮＦαのレベルを、ＥＬＩＳＡキットにより測定した。検体（ベラプロスト）は、以下の表に示すとおり、ポリ（Ｉ：Ｃ）によって誘導されるＴＮＦαの著しい減少を引き起こした。

実施例８：ニレプロストの、経口投与後におけるヒトに対する耐性
試験Ａ：耐性および薬物動態
１４人のボランティアに、ニレプロストを２、４、８、１６、３２または６５μｇ、単回経口投与した。以下のパラメーターを試験した：血圧、心拍、臨床化学、血小板凝集能、およびＥＣＧ。
高用量における腸貯留以外の所見は認められず、このことは、ニレプロストが良好な耐性を有することを示している。

試験Ｂ：３７５μｇまでの単回投与
１２人の志願者に、ニレプロストを５０、７５、１１２、２５５、または３７５μｇ、単回経口投与した。以下のパラメーターが、調査された：血圧、心拍、ＥＣＧ、肺機能、臨床化学および血液学、血小板凝集能、ならびに糞便。
高用量（２５５μｇ、および３７５μｇ）における「無痛の下痢」以外の所見は認められず、このことは、ニレプロストの耐性を示している。

Claims (8)

1. Ａ型インフルエンザウィルスに関連する疾患の治療を必要とする患者における、当該疾患の治療のための医薬組成物であって、ベラプロスト、もしくは薬学的に許容されるその塩、またはそれらのシクロデキストリン包接体を含む、前記組成物。
2. 前記Ａ型インフルエンザウィルスが、Ｈ５Ｎ１型、またはその変異体である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記ベラプロストが、ヒト肺胞細胞及び気管支上皮細胞における、炎症性サイトカインおよび／またはケモカインの放出を阻害する、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 前記ベラプロストが、ヒト末梢血リンパ球における、炎症性サイトカインおよび／またはケモカインの放出を阻害する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
5. Ａ型インフルエンザウィルス感染の治療を必要とする患者における、当該治療のための医薬の製造における、ベラプロスト、もしくは薬学的に許容されるその塩、またはそれらのシクロデキストリン包接体の使用。
6. 前記Ａ型インフルエンザウィルスが、Ｈ５Ｎ１型、またはその変異体である、請求項５に記載の使用。
7. 前記ベラプロストが、ヒト肺胞細胞及び気管支上皮細胞における、炎症性サイトカインおよび／またはケモカインの放出を阻害する、請求項５又は６に記載の使用。
8. 前記ベラプロストが、ヒト末梢血リンパ球における、炎症性サイトカインおよび／またはケモカインの放出を阻害する、請求項５〜７のいずれか１項に記載の使用。