JP2015052617A - ２型糖尿病の予防に対して一貫した改善をもたらすタンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物バイオマーカー - Google Patents

２型糖尿病の予防に対して一貫した改善をもたらすタンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物バイオマーカー Download PDF

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Abstract

【課題】２型糖尿病の予防に対して一貫した改善をもたらすタンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物バイオマーカーの提供。【解決手段】本発明は、タンパク質および脂質代謝物バイオマーカーを含めた糖尿病に関連するバイオマーカー、個体が糖尿病を発生するリスクを決定するためにバイオマーカーを使用する方法、ならびに糖尿病および他の前糖尿病性状態を発生するリスクがある人を同定するために集団をスクリーニングする方法に関する。一実施形態では、本方法の取得するステップは、少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーを測定することを含む。さらにこれらの方法は、バイオマーカーの測定の前に個体から少なくとも１つの生物学的試料を得るステップをさらに含み得る。別の実施形態では、バイオマーカー測定データを取得するステップは、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルの測定値の代表的なデータを既存の記録から取得することを含む。【選択図】なし

Description

本発明は、糖尿病に関連するバイオマーカー、個体が糖尿病を発生するリスクを決定するためにバイオマーカーを使用する方法、ならびに糖尿病および他の糖尿病性状態を発生するリスクがある人を同定するために集団をスクリーニングする方法に関する。
米国で１５００万人が２型糖尿病に罹患している。人間的および経済的な観点のどちらからも、糖尿病は現在この国における最も費用がかかる疾患のうちの１つである。糖尿病を処置するための医療および医療業務の費用は２００２年には９１８億ドルであったと推定されている。また、生殖力の損失、身体障害および時期尚早の死のさらに４０２億ドルもこの疾患に起因する。毎年１００万件の新規症例が診断されており、多くの人々は、心疾患、脳卒中および腎臓病が含まれるその生命にかかわる合併症のうちの１つを発生するまで、自分がこの疾患に罹患していることを知らない。
糖尿病は、肥満症、年齢、座りっぱなしの生活習慣、高血圧、およびインスリン作用を遮断するまたはインスリン作用を拮抗する薬物の使用を含めた、遺伝的要因および生活習慣の要因のどちらにも起因すると考えられている。その結果、予測的診断の非存在下では、疾患を発生する個体の性向を正確に評価するために単一の要因を信頼して使用することはできない。２型糖尿病は、典型的には、空腹時血漿グルコース、２時間血漿グルコースまたはランダム血漿グルコースを測定することによって診断される（症状が存在する場合）。初期２型糖尿病に罹患している人は通常無症候性であり、自分が病気であることを認識していない場合がある。彼らは症状が発生する前に管理されていない糖尿病に罹患しながら長年の間生存し得る。それが実際に発生した際、これらの症状は、しばしば生命にかかわる合併症に関連する。疾患の初期における処置または生活習慣の変化は、糖尿病およびその関連する合併症の発生を遅延させる、および場合によっては予防さえすることができる。
前糖尿病の処置は、一部の個体において、特に初期疾患において、疾患を遅くするまたは逆行させることができる。高いリスクがある人における生活習慣の介入またはたとえばメトホルミンを用いた処置は、糖尿病の発生率をそれぞれ５８％および３１％低下させることができる。したがって、初期疾患の進行を監視し、処置の有効性を決定するための、監視が容易（ｓｉｎｐｌｅ）な方法は、疾患の処置および結果を大きく改善させるであろう。
２型糖尿病（非インスリン依存性糖尿病または成人発症糖尿病）はインスリンに対する非感受性から生じ、世界中で糖尿病の９０％を占める。妊娠糖尿病とは、妊娠中に起こる血糖制御の損失（高血糖症）である。２型糖尿病はインスリン作用およびインスリン分泌の障害によって特徴付けられており、これらはどちらも主な特長であり得る。２型糖尿病患者は、絶対的よりもむしろ相対的なインスリン欠乏で特徴付けられており、インスリン耐性である。少なくとも初期では、かつしばしばその寿命の間ずっと、これらの個体は生存するために追加のインスリン処置を必要としない。２型糖尿病は糖尿病の全症例の９０〜９５％を占めており、高血糖症がしばしば糖尿病の注目すべき症状を誘発するために十分に重篤でない、または症状が単純に認識されないことが原因で、長年の間診断されずにいる可能性がある。２型糖尿病に罹患している患者の大多数は肥満であり、肥満症自体がインスリン耐性を引き起こすまたは悪化させ得る。伝統的な体重基準によって肥満ではない者の多くは、主に腹部に分布された体脂肪の百分率の増加（内臓脂肪）を有し得る。この形態の糖尿病に罹患している患者は正常または上昇しているように見えるインスリンレベルを有し得る一方で、これらの糖尿病患者における高い血糖値は、そのベータ細胞機能が正常であった場合はさらに高いインスリン値をもたらすと予想される。したがって、インスリン分泌は、しばしばインスリン抵抗を補償するためには不完全かつ不十分である。他方で、一部の高血糖の個体は、本質的に正常なインスリン作用を有するが、顕著なインスリン分泌障害を有する。
前糖尿病患者は、しばしば正常と明白な糖尿病レベルとの間の空腹時血糖値を有する。異常なグルコース負荷または「耐糖能異常」は、個体が糖尿病に向かう道を歩んでいることの指標である可能性があり、その検出には２時間経口グルコース負荷試験の使用が必要である。しかし、耐糖能異常は、それ自体では完全に無症候性であり、いかなる機能的身体障害にも関連していないことが示されている。実際、インスリン分泌は、典型的には純粋なグルコース負荷に対する応答よりも混合食に対する応答で高く、その結果、耐糖能異常を有するほとんどの人は、診断的グルコース負荷試験を受けた際以外、毎日の生活において高血糖であることは、起こるとしても稀である。したがって、耐糖能異常の重要性は、もっぱら将来の疾患のリスクが増加した人を同定するその能力に存在する（Ｓｔｅｒｎら、２００２年）。
糖尿病は、一般に、終夜絶食後の血糖値（空腹時血漿グルコースレベル）の決定または絶食後の血糖値の決定、次いで、グルコースの摂取およびグルコース投与の２時間後の血糖測定（グルコース負荷試験）によって、診断される。Ｓｔｅｒｎおよび同僚によって実施された研究では（非特許文献１）、２型糖尿病への将来の転換の予測子としての耐糖能異常の感度および偽陽性率はそれぞれ５０．９％および１０．２％であり、受信者動作特性曲線下面積は７７．５％であり（７４．３〜８０．７％の９５％信頼区間）、Ｐ値（Ｈｏｓｍｅｒ−Ｌｅｍｅｓｈｏｗ適合度を使用して計算）は０．２０であった。２時間グルコース負荷試験に関連する不便および試験の費用が原因で、この試験は日常的な臨床診療ではめったに使用されない。さらに、その糖尿病が経口グルコース負荷試験のみに基づいて診断された患者は、経過観察で正常への復帰変異率が高く、実際に偽陽性診断を表し得る（非特許文献２）。Ｓｔｅｒｎらは、そのような事例は、慣用の空腹時または臨床的な診断基準を満たす人と比較して、７〜８年間の経過観察後に非糖尿病性状態へと復帰変異する可能性が約５倍高いと報告している。
グルコースおよびＨＢＡ１ｃ以外に、いくつかの単一時点のバイオマーカーの測定が、将来の糖尿病のリスク評価の使用に試みられている。特許文献１は、どちらも全身性炎症のマーカーであるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）を提案しており、これらは、単独で、およびＨＢＡ１ｃを測定する補助剤として使用される。しかし、臨床的性能に関する実用的な理由、具体的には乏しい特異度および高い偽陽性率のために、これらの試験は採用されていない。
耐糖能異常を有する人は、しばしば一般的な動脈血管疾患の危険因子（たとえば、異常脂質血症および高血圧）のうちの少なくとも１つ以上を有することが判明する。このクラスタリングは、一部の研究者によって「Ｘ症候群」または「代謝症候群」と呼ばれており、糖尿病性または前糖尿病性状態の指標となる場合がある。クラスターのそれぞれの成分は、単独では動脈血管および糖尿病の疾患のリスクの増加を伝達するが、一緒になった組合せとしては、これらははるかにより有意となる。このことは、高血糖症および代謝症候群の他の特長を有する人の管理は、血糖制御だけに集中するのでなく、他の動脈血管疾患の危険因子を低下させるための戦略も含めるべきであることを意味する。さらに、そのような危険因子は糖尿病または前糖尿病に非特異的であり、それ自体では糖尿病または糖尿病性状態の診断の基礎ではない。
また、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態のリスク予測には、歴史的コホートを参照として、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を発生する被験体の絶対的リスクを評価および推定する、多変量のリスク予測アルゴリズムおよび計算された指標も包含されることができる。そのような予測的数学アルゴリズムおよび計算された指標を使用したリスク評価は、次第に診断的な試験および処置の指針内に組み込まれており、とりわけ代表的な集団からの多段階の層別試料から得られて妥当性確認された指標が包含される。複数の慣用の糖尿病の危険因子が予測モデル内に組み込まれている。そのようなアルゴリズムの注目すべき例には、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ研究（非特許文献３）、ならびに成人における高い血中コレステロールの検出、評価、および処置に関する全国コレステロール教育プログラム（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ）専門家パネル（成人処置パネルＩＩＩ）などのＦｒａｍｉｎｇｈａｍ研究の改変が含まれる。
他の糖尿病のリスク予測アルゴリズムには、それだけには限定されないが、その内容が本明細書中に参考として明白に組み込まれている、サンアントニオ心臓研究（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６）、アルキメデス（非特許文献７；非特許文献８）、フィンランド人に基づいた糖尿病リスクスコア（非特許文献９）、ならびにＥｌｙ研究（非特許文献１０）が含まれる。
糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態のリスクを評価するために使用されている数々の研究およびアルゴリズムにもかかわらず、そのようなリスクまたは状態を評価するための正確な方法の必要性が存在する。さらに、関連する実用性の問題およびリスクの計算の困難が原因で、そのような手法は、前糖尿病患者または診断未確定の初期糖尿病患者に最初に遭遇する可能性が最も高い一次医療の医師によってあまり採用されていない。明らかに、将来の糖尿病のリスクを評価するためのより実用的な方法の必要性が残っている。
糖尿病などの血糖障害が検出される前に前糖尿病が１０年以上存在する場合があることは、十分に文書化されている。アカルボース、メトホルミン、トログリタゾンおよびロシグリタゾンなどの薬物を用いた前糖尿病患者の処置は、糖尿病を延期または予防することができるが、わずかな前糖尿病患者しか処置されていない。１つの主な理由は、上述のように、個体が糖尿病を発生する実際のリスクを決定するための単純かつ明白な臨床検査が存在しないことである。さらに、糖尿病のリスクがあることが知られている個体においてさえも、血糖コントロールが依然として主要な治療的監視のエンドポイントであり、明白な糖尿病の予測および診断におけるその使用と同じ制限を受ける。したがって、まだ糖尿病患者ではないが、糖尿病を発生する顕著なリスクがあるこれらの個体を同定、診断、および処置する方法の必要性が、当分野で依然として存在する。
Ｔｅｔｈｙｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅはタンパク質バイオマーカー（ｂｉｏｍａｒｋｅｓ）に基づいた糖尿病の予測試験を開発し続けており、たとえば特許文献２を参照されたい。
２型糖尿病および脂質代謝
２型糖尿病の発生には複数の機構が存在する。インスリン耐性の発生に関与するすべての遺伝的原因および環境因子は知られていないが、脂質代謝障害が２型糖尿病の発生において重要な役割を果たすことが示されている。増加した空腹時血漿脂肪酸は多くの集団において肥満症およびインスリン耐性の発生と相関しており、２型糖尿病の発生の独立した予測子である。
増加した血漿脂肪酸およびインスリン耐性の発生の１つの仮説は、脂肪組織から開始する。肥大した脂肪細胞が炎症性サイトカインを血漿内に放出し、これがフィードバックされてインスリンに対する脂肪および他の組織の応答を変更させる。脂肪細胞がインスリン耐性になるにつれて、これらはインスリンに応答して脂肪分解を抑制することができなくなる。また、これらの脂肪細胞はさらなる脂肪を貯蔵することもできず、その結果、食事後の脂肪酸の取り込みが低下し、血漿中に過剰な脂肪酸をもたらす。脂肪組織によって放出された圧倒的な量の脂肪酸は、血漿レベルを慢性的に増加させ、脂質を肝臓、筋肉、および膵臓を含めた他の組織へとそらす。
肝臓中では、増加した脂肪酸は肝臓からの糖新生およびグルコース産出を刺激する。慢性的な高インスリン血症および高い血漿グルコース濃度は、肝臓での脂肪酸の新規産生を刺激する。新規産生された実際の脂肪酸の量は少ないが、脂肪酸の産生を増加させる状態は、肝臓の脂肪酸の酸化も減少させる。これは、より高いトリグリセリドのエステル化率ならびに超低密度リポタンパク質の合成および分泌のためのトリグリセリドの利用可能性の増加をもたらす。追加の利用可能な基質と共に、インスリンに対する肝細胞応答性の減少も、超低密度リポタンパク質の放出を増加させ得る。肝臓から放出された追加のリポタンパク質脂質はリパーゼ活性の基質となり、遊離脂肪酸を血漿内へ放出し、正のフィードバックループを生じる。
筋肉中では、増加した遊離脂肪酸および筋肉内脂質は、グルコース代謝障害と強く相関している。筋肉は、グルコースの取り込みを減少させ、したがって空腹時および食後の血漿グルコース濃度を増加させることによって、慢性的に増加した血漿脂肪酸に応答する。また、筋組織は、脂肪酸の取り込みを増加させ、酸化を減少させる場合もあり、これは筋肉内脂質の増加をもたらす。筋肉の酸化能力の減少はミトコンドリアの機能不全が原因であるが、これがインスリン耐性状態によって引き起こされているのか、その原因となっているのかは知られていない。
末梢インスリン耐性は、顕性糖尿病の発生なしに存在することができる。２型糖尿病の発生は、膵臓β−細胞がインスリンの産出を増加させることによってインスリン耐性を補償することに失敗した場合に起こる。糖尿病への進行には、膵臓β−細胞の損失および残りの細胞によるインスリン分泌の基底速度の増加、ならびにこれらの細胞がグルコースに応答できないことが付随する。機能の損失および細胞死は、β−細胞の、高レベルの脂肪酸およびグルコースの両方への慢性的な曝露が原因である。筋肉と同様、高濃度の脂肪酸に曝露されたβ−細胞は、減少した脂質酸化および増加した細胞内トリグリセリドを有する。
２型糖尿病は、脂質代謝およびグルコース代謝の疾患である。インスリン耐性および２型糖尿病の発生には複数の機構が存在するが、脂質代謝の変更が共通のテーマである。脂質代謝が正確にどのように変更されるかは個体間および個体の群間に差異があるものの、障害性の脂質の貯蔵および代謝がインスリン耐性を有するすべての個体においてインスリン耐性の最初期に起こり、この疾患のマーカーとみなすことができる。脂質代謝物および全身の脂質代謝を監視することによって、インスリン耐性および２型糖尿病で起こる脂質の変更を定義し、患者群をその変化した脂質代謝に応じて分離し、誰が治療に応答するかを予測することが可能となり得る。インスリン耐性の発生またはインスリン感受性の診断を予測する一部の脂質が同定されている。しかし、インスリン耐性の予測または糖尿病性状態の診断を改善させる具体的な脂質の組合せは、以前に示されていない。
米国特許出願公開第２００３／０１００４８６号明細書 国際公開第２００７／０４４８６０号
Ｓｔｅｒｎら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２５巻：１８５１〜１８５６頁、（２００２年） Ｂｕｒｋｅら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２１巻：１２６６〜１２７０頁（１９９８年） Ｋａｎｎｅｌ， Ｗ．Ｂ．ら、（１９７６年）Ａｍ． Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｌ．、３８巻：４６〜５１頁 Ｓｔｅｒｎ， Ｍ．Ｐ．ら、（１９８４年）Ａｍ． Ｊ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．、１２０巻：８３４〜８５１頁 Ｓｔｅｒｎ， Ｍ．Ｐ．ら、（１９９３年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４２巻：７０６〜７１４頁 Ｂｕｒｋｅ， Ｊ．Ｐ．ら、（１９９９年）Ａｒｃｈ． Ｉｎｔｅｒｎ． Ｍｅｄ．、１５９巻：１４５０〜１４５６頁 Ｅｄｄｙ， Ｄ．Ｍ．およびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ， Ｌ．（２００３年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２６巻（１１号）：３０９３〜３１０１頁 Ｅｄｄｙ， Ｄ．Ｍ．およびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ， Ｌ．（２００３年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２６巻（１１号）：３１０２〜３１１０頁 Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ， Ｊ．およびＴｕｏｍｉｌｅｈｔｏ， Ｊ．（２００３年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２６巻（３号）：７２５〜７３１頁 Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｓ．Ｊ．ら、（２０００年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｔａｂ． Ｒｅｓ． Ｒｅｖ．、１６巻：１６４〜１７１頁
糖尿病を発生するリスクがある患者を分類、診断、および監視するために使用できる、より良好な試験方法が必要である。
本発明は、個体が糖尿病患者となるリスクを評価する、または糖尿病を発生するリスクがある集団のメンバーを同定するための、タンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物バイオマーカーを含めたバイオマーカーの使用、ならびに、そのようなリスクを計算する方法、個体にそのようなリスクを通知する方法、そのようなリスクを計算するための診断試験システムを提供する方法、および本明細書中に記載の様々な他の実施形態に関する。
本発明は、糖尿病性状態を発生するリスクを評価する方法であって、（ａ）個体のバイオマーカー測定データを取得するステップであって、バイオマーカー測定データが、個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含む、ステップと、（ｂ）モデルからの出力に基づいて個体が糖尿病性状態を発生するリスクを評価するステップであって、モデルが、バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップとを含む方法を提供する。
一実施形態では、本方法の取得するステップは、少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーを測定することを含む。さらに、これらの方法は、バイオマーカーの測定の前に、個体から少なくとも１つの生物学的試料を得るステップをさらに含み得る。別の実施形態では、バイオマーカー測定データを取得するステップは、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルの測定値の代表的なデータを既存の記録から取得することを含む。
さらに、本発明は、評価ステップに、個体からのバイオマーカー測定データを、集団からの同じバイオマーカーのバイオマーカー測定データと比較し、比較から、個体が糖尿病性状態を発生するリスクを評価することが含まれる、前述の方法のうちの任意のものを提供する。
関連する実施形態では、前述の方法のうちの任意のものは、ステップ（ｂ）からのリスク評価をビジュアルディスプレイに表示させるステップをさらに含む。さらに、前述の方法のうちの任意のものは、リスク評価を紙に印刷または電子記憶媒体に記憶することをさらに含む。さらなる実施形態では、前述の方法のうちの任意のものは、前記個体または医療従事者に前記リスク評価を通知することをさらに含む。
また、本発明は、年齢、体型指数（ＢＭＩ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）、家族歴（ＦＨＸ）、過去の妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）、身長（ＨＴ（ｈｅｉｇｈｔ））、ヒップ周囲（Ｈｉｐ）、人種、性別、収縮期血圧（ＳＢＰ）、ウエスト周囲（Ｗａｉｓｔ）、および体重（ＷＴ（ｗｅｉｇｈｔ））からなる群から選択される少なくとも１つの臨床パラメータに関する個体の臨床的測定データを取得するステップをさらに含み、モデルが、バイオマーカー測定データおよび臨床的測定データの入力に基づいて実行される、前述の方法のうちの任意のものも提供する。
また、本発明は、糖尿病性状態を発生するリスクを評価する方法であって、（ａ）個体から単離した少なくとも１つの生物学的試料からバイオマーカーの測定値を取得するステップであって、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、（ｂ）モデルの出力から糖尿病性状態を発生するリスクを計算するステップであって、前記モデルへの入力が前記バイオマーカーの測定値を含み、前記モデルが、個体の集団の縦断的研究からのデータを当てはめることによって作成され、前記当てはめたデータが、前記選択された個体の集団における前記バイオマーカーのレベルおよび糖尿病への転換を含むステップとを含む方法も提供する。一実施形態では、取得するステップは、少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーを測定することを含む。
別の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｂ）からの計算されたリスクをビジュアルディスプレイに表示させることをさらに含む。さらなる実施形態では、前述の方法は、計算されたリスクを紙に印刷または電子記憶媒体に記憶することをさらに含む。さらに、前述の方法は、前記個体または医療従事者に前記リスク評価を通知することをさらに含み得る。
関連する実施形態では、前述の方法のうちの任意のものは、年齢、体型指数（ＢＭＩ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）、家族歴（ＦＨＸ）、過去の妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）、身長（ＨＴ）、ヒップ周囲（Ｈｉｐ）、人種、性別、収縮期血圧（ＳＢＰ）、ウエスト周囲（Ｗａｉｓｔ）、および体重（ＷＴ）からなる群から選択される少なくとも１つの臨床パラメータに関する個体の少なくとも１つの臨床的測定値を取得するステップをさらに含み、モデルへの入力は、前記少なくとも１つの臨床的測定値をさらに含む。
本発明の方法のうちの任意のもののバイオマーカー測定データまたはバイオマーカー測定値は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態に罹患していると以前に診断されていない個体から得てよい。あるいは、本発明の方法のうちの任意のもののバイオマーカー測定データまたはバイオマーカー測定値は、前糖尿病性状態に罹患している個体から得てよく、方法は、個体が糖尿病を発生するリスクを評価または計算する。バイオマーカー測定データまたはバイオマーカー測定値を取得した個体は妊娠していてもよい。
本発明は、糖尿病性状態が、２型糖尿病、前糖尿病、代謝症候群、耐糖能異常、および空腹時高血糖からなる群から選択される、本発明の方法のうちの任意のものを提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの生物学的試料が全血、血清、または血漿を含む、本発明の方法のうちの任意のものも提供する。さらに、本発明は、前記バイオマーカー測定値のうちの少なくとも１つが、免疫アッセイおよび酵素活性アッセイからなる群から選択される方法によって得られる、本発明の方法のうちの任意のものを提供する。
別の実施形態では、本発明は、前記バイオマーカーを使用する方法の、糖尿病性状態の発生の予測における診断精度の度合を反映するＲＯＣ曲線下面積が、少なくとも０．７５、０．７６、０．７７、０．７８、０．７９、０．８０、０．８１、０．８２、０．８３、０．８４、または０．８５である、本発明の任意の方法を提供する。さらに、本発明は、前記バイオマーカーを使用する方法の、糖尿病性状態の発生の予測における診断精度の度合を反映するＲＯＣ曲線下面積が、バイオマーカーがグルコースおよびタンパク質バイオマーカーからなるが、脂質代謝物からはならない対応する方法よりも、少なくとも０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、または０．１５高い、本発明の任意の方法を提供する。
さらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物であるバイオマーカーの群を測定するための試薬を含むキットを提供する。さらに、本発明は、試薬のうちの１つが検出可能な標識を含むキットを提供する。さらに、本発明は、タンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物の試薬が固体支持体に付着しているキットを提供する。
また、本発明は、糖尿病性状態を発生するリスクを評価するためのコンピュータ実行可能命令を有するコンピュータ読取可能媒体であって、少なくとも（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物の測定値を表すバイオマーカー測定データを記憶するために、コンピュータ読取可能媒体に記憶され、プロセッサによって実行されるように適合されたルーチンと、バイオマーカー測定データを分析して糖尿病性状態を発生するリスクを評価するために、コンピュータ読取可能媒体に記憶され、プロセッサによって実行されるように適合されたルーチンとを含むコンピュータ読取可能媒体も提供する。
別の実施形態では、本発明は、糖尿病性状態を発生するリスクを評価するための医療診断試験システムであって、個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なバイオマーカー測定データを収集するように適合されたデータ収集ツールであって、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むデータ収集ツールと、糖尿病性状態を発生するリスクとバイオマーカーの測定値との間の相関の表示が生じるように適合された統計的分析エンジンを含む分析ツールであって、相関の表示が、実行されて結果を生じるように適合されている分析ツールと、結果を分析して、糖尿病性状態を発生する個体のリスクを決定し、結果を指標値として表すように適合された指標計算ツールとを含む医療診断試験システムを提供する。
また、本発明は、分析ツールが第１の統計的分析エンジンを含む第１の分析ツールを含み、システムが、相関を表すことができる複数の表示から、糖尿病性状態を発生するリスクとバイオマーカーの測定値との間の相関の表示を選択するように適合された第２の統計的分析エンジンを含む第２の分析ツールをさらに含む、医療診断試験システムも提供する。さらに、本発明のシステムは、指標値を含む報告書を作成するように適合された報告ツールをさらに含み得る。
別の実施形態では、本発明は、糖尿病性状態を発生するリスクを評価するためのモデルを開発する方法であって、バイオマーカー測定データを取得するステップであって、バイオマーカー測定データが、集団からのバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、集団のエンドポイントが含まれ、測定データを取得するための前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、集団の少なくともサブセットのバイオマーカー測定データをモデル内に入力するステップと、入力されたバイオマーカー測定データを使用してモデルをエンドポイントについて訓練して、糖尿病性状態を発生するリスクと個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値との間の相関の表示を導くステップとを含む方法を提供する。
また、本発明は、個体において糖尿病性状態の現状を評価する方法であって、バイオマーカー測定データを取得するステップであって、バイオマーカー測定データが、個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、モデルからの出力に基づいて個体において糖尿病性状態の現状を評価するステップであって、モデルが、バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップとを含む方法も提供する。
別の実施形態では、本発明は、個体において糖尿病性疾患の代替エンドポイントを評価する方法であって、バイオマーカー測定データを取得するステップであって、バイオマーカー測定データが、個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、モデルからの出力に基づいて個体において糖尿病性疾患の代替エンドポイントを評価するステップであって、モデルが、バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップとを含む方法を提供する。
一実施形態では、本発明の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムには、前記バイオマーカーが表１からの少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のタンパク質バイオマーカーを含むものが含まれる。
他の実施形態では、本発明の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムには、前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーがアディポネクチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＨｂＡ１ｃ、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、インスリン、ＩＬ２ＲＡ、フェリチン、およびＬＥＰからなる群から選択されるものが含まれる。
さらに、本発明の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムには、前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーがアディポネクチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＩＬ２ＲＡ、フェリチン、インスリン、およびＨｂＡ１ｃからなる群から選択されるものが含まれる。
別の実施形態では、本発明の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムには、前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーにインスリンおよびＨｂＡ１ｃから選択される少なくとも１つの血糖指数マーカーが含まれるものが含まれる。
また、本発明は、前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーがアディポネクチン、インスリン、およびＣ反応性タンパク質を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
また、本発明は、前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーがアディポネクチン、ＣＲＰおよびＨｂＡ１ｃを含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
別の実施形態では、本発明は、前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーが図８〜２６の任意の１つの組合せから選択される、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムを提供する。
また、本発明は、前記少なくとも３個のタンパク質マーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物が図２７〜３５の任意の１つの組合せから選択される、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
本発明の一実施形態では、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体またはシステムは、前記バイオマーカーが表２からの少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の脂質代謝物を含むものである。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物が少なくとも１つのコレステロールエステルを含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
別の実施形態では、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物が、ＡＣ６：０、ＡＣ８：０、ＡＣ１０：０、ＣＥ１６：０、ＣＥ１６：１ｎ７、ＣＥ１８：０、ＣＥ１８：３ｎ６、ＣＥ１８：１ｎ９、ＣＥ１８：２ｎ６、ＣＥ２０：３ｎ６、ＣＥ２０：４ｎ３、ＴＧＴＬ、ＤＧ１６：０、ＤＧ１８：０、ＤＧ１８：１ｎ９、ＤＧ１８：２ｎ６、ＤＧ１８：３ｎ３、ＤＧＴＬ、ＦＡ１６：０、ＦＡ１６：１ｎ７、ＦＡ１８：１ｎ９、ＦＡ１８：２ｎ６、ＦＡ２４：０、ＬＹ１６：１ｎ７、ＬＹ１８：１ｎ７、ＬＹ１８：１ｎ９、ＬＹ１８：２ｎ６、ＰＣ１６：１ｎ７、ＰＣ１８：２ｎ６、ＰＣ１８：３ｎ６、ＰＣ１８：１ｎ７、ＰＣ２０：３ｎ９、ＰＣ２２：４ｎ６、ＰＣ２２：５ｎ３、ＰＣｄｍ１８：０、ＰＣｄｍ１８：１ｎ９、ＰＣｄｍ１６：０、ＰＣ２０：３ｎ６、ＰＣ２０：４ｎ３、ＰＥｄｍ１８：１ｎ９、ＰＥ１６：１ｎ７、ＰＥ１８：２ｎ６、ＰＥ２０：２ｎ６、ＰＥ２２：０、ＰＥ２４：１ｎ９ ＰＥｄｍ１８：０、ＴＧ１６：０、ＴＧ１６：１ｎ７、ＴＧ１８：０、ＴＧ１８：１ｎ７、ＴＧ１８：１ｎ９、ＴＧ１８：２ｎ６およびＴＧ１８：３ｎ３からなる群から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムを提供する。
一実施形態では、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物が、ＣＥ１６：１ｎ７、ＣＥ２０：３ｎ６、ＣＥ１８：２ｎ６、ＣＥ１６：０、ＣＥ１８：１ｎ９、ＬＹ１８：２ｎ６、ＬＹ１８：１ｎ７およびＬＹ１８：１ｎ９からなる群から選択される、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムを提供する。
別の実施形態では、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１６：１ｎ７を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムを提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ２０：３ｎ６を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１８：２ｎ６を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１６：０を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１８：１ｎ９を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＬＹ１８：２ｎ６を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
また、本発明は、前記少なくとも１つの脂質代謝物がＬＹ１８：１ｎ７またはＬＹ１８：１ｎ９を含む、方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステムも提供する。
一実施形態では、本発明は、個体の糖尿病リスクスコアを表すリスクスコアのデータを取得するステップであって、糖尿病リスクスコアは、糖尿病性状態を発生するリスクを計算するための本発明の方法に従って計算するステップと、糖尿病の発症を遅延させるまたは予防するための治療レジメンの処方箋を表す処方箋処置データを、糖尿病リスクスコアによって糖尿病のリスクが上昇しているとして同定された個体に対して作成するステップとを含む、糖尿病を予防する方法を提供する。
関連する実施形態では、本発明は、本発明の任意の方法に従って、少なくとも１の被験体の、糖尿病性状態を発生するリスクを評価または計算するステップと、糖尿病性状態のリスクが上昇していると同定された被験体を、糖尿病の発症を遅延させるまたは予防するための治療レジメンで処置するステップとを含む、糖尿病を予防する方法を提供する。
糖尿病を予防するための前述の方法では、治療レジメンは、ＩＮＳ、ＩＮＳ類似体、血糖降下剤、抗炎症剤、脂質低下剤、カルシウムチャネル遮断剤、ベータ−アドレナリン作動性受容体遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグ、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、レニン阻害剤、リパーゼ阻害剤、アミリン類似体、ナトリウム−グルコース共輸送体２阻害剤、二重脂肪トリグリセリドリパーゼおよびＰＩ３キナーゼ活性化因子、神経ペプチドＹ受容体のアンタゴニスト、ヒトホルモン類似体、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、三重モノアミンオキシダーゼ再取り込み阻害剤、ノルエピネフリンおよびドーパミン再取り込みの阻害剤、１１ベータ−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型（１１ｂ−ＨＳＤ１）の阻害剤、コルチゾール合成の阻害剤、糖新生の阻害剤、グルコキナーゼ活性化因子、タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂのアンチセンス阻害剤、島新生治療（ｉｓｌｅｔ ｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｈｅｒａｐｙ）、およびベータヒスチンからなる群から選択される少なくとも１つの治療剤を含む。さらに、糖尿病を予防（ｐｈｏｐｈｙｌａｘｉｓ）するための方法では、処置領域は、アカルボース、メトホルミン、トログリタゾン、およびロシグリタソン（ｒｏｓｉｇｈｔａｚｏｎｅ）からなる群から選択される少なくとも１つの治療剤を含む。
別の実施形態では、本発明は、本発明の任意の方法に従って、集団内に含まれる個体について糖尿病性状態の発生を計算するステップと、糖尿病性状態を発生する前記リスクを含む要因に基づいて、集団内の個体を集団中の残りの個体に対して順位付ける、または集団を少なくとも２つの群に分けるステップとを含む、個体の集団を順位付けるまたは群分けする方法を提供する。
さらなる実施形態では、個体の健康保険の有資格を決定するため、個体の健康保険の保険料を決定するため、医療保険制度、健康維持機構、または好ましい提供組織における個体の会員保険料を決定するため、および医療保険制度、健康維持機構、または好ましい提供組織において医療従事者を個体に割り当てるための目的のうちの１つまたは複数のために、個体集団の順位付けまたは群分けを表す順位付けデータを使用することをさらに含む、個体集団を順位付けるまたは群分けする方法。
また、本発明は、個体または個体群に治療介入または生活習慣の介入を推奨するため、個体または個体群の医療を管理するため、個体または個体群の健康を監視するため、および個体または個体群のための医療処置、治療介入、または生活習慣の介入を監視するためからなる群から選択される１つまたは複数の目的のために、個体集団の順位付けまたは群分けを表す順位付けデータを使用することをさらに含む、個体５を順位付けるまたは群分けする方法も提供する。
一実施形態では、本発明は、個体において糖尿病性状態の現状を評価する方法であって、バイオマーカー測定データを取得するステップであって、バイオマーカー測定データが、個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであるステップと、モデルからの出力に基づいて個体において糖尿病性状態の現状を評価するステップであって、モデルが、バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップとを含み、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含む、方法を提供する。
前述の要約は、本発明のすべての態様を定義することを意図せず、さらなる態様が、発明を実施するための形態などの他のセクションに記載されている。文書全体が統合された開示として関連付けられることを意図し、特長の組合せが本文書の同じ文または段落またはセクション中に一緒に見つからない場合でも本明細書中に記載の特長のすべての組合せが企図されることを理解されたい。
前述のものに加えて、本発明には、さらなる態様として、具体的に上述した変形よりも何らかの様式で範囲が狭い本発明のすべての実施形態が含まれる。属として説明した本発明の態様に関しては、すべての個々の種が個々に本発明の別々の態様としてみなされる。範囲として説明した態様に関しては、すべての部分範囲および個々の値が具体的に企図される。
例えば、本願発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
糖尿病性状態を発生するリスクを評価する方法であって、
（ａ）個体のバイオマーカー測定データを取得するステップであって、前記バイオマーカー測定データが、前記個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含む、ステップと、
（ｂ）モデルからの出力に基づいて前記個体が糖尿病性状態を発生するリスクを評価するステップであって、前記モデルが、前記バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップと
を含む方法。
（項目２）
前記取得するステップが、前記少なくとも１つの生物学的試料中の前記バイオマーカーを測定することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記バイオマーカーの前記測定の前に、前記個体から少なくとも１つの生物学的試料を得るステップをさらに含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
バイオマーカー測定データを取得するステップが、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルの測定値の代表的なデータを既存の記録から取得することを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記評価ステップに、前記個体からの前記バイオマーカー測定データを、集団からの同じバイオマーカーのバイオマーカー測定データと比較し、前記比較から、前記個体が糖尿病性状態を発生するリスクを評価することが含まれる、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
（ｂ）からの前記リスク評価をビジュアルディスプレイに表示させることをさらに含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記リスク評価を紙に印刷または電子記憶媒体に記憶することをさらに含む、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記個体または医療従事者に前記リスク評価を通知することをさらに含む、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
年齢、体型指数（ＢＭＩ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）、家族歴（ＦＨＸ）、過去の妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）、身長（ＨＴ）、ヒップ周囲（Ｈｉｐ）、人種、性別、収縮期血圧（ＳＢＰ）、ウエスト周囲（Ｗａｉｓｔ）、および体重（ＷＴ）からなる群から選択される少なくとも１つの臨床パラメータに関する前記個体の臨床的測定データを取得するステップをさらに含み、
前記モデルが、前記バイオマーカー測定データおよび前記臨床的測定データの入力に基づいて実行される、項目１から８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
糖尿病性状態を発生するリスクを評価する方法であって、
（ａ）個体から単離した少なくとも１つの生物学的試料からバイオマーカーの測定値を取得するステップであって、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、
（ｂ）モデルの出力から糖尿病性状態を発生するリスクを計算するステップであって、前記モデルへの入力が前記バイオマーカーの測定値を含み、前記モデルが、個体の集団の縦断的研究からのデータを当てはめることによって作成され、前記当てはめたデータが、前記選択された個体の集団における前記バイオマーカーのレベルおよび糖尿病への転換を含むステップと
を含む方法。
（項目１１）
前記取得するステップが、前記少なくとも１つの生物学的試料中の前記バイオマーカーを測定することを含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
（ｂ）からの前記計算されたリスクをビジュアルディスプレイに表示させることをさらに含む、項目１０または１１に記載の方法。
（項目１３）
前記計算されたリスクを紙に印刷または電子記憶媒体に記憶することをさらに含む、項目１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記個体または医療従事者に前記リスク評価を通知することをさらに含む、項目１０から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
年齢、体型指数（ＢＭＩ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）、家族歴（ＦＨＸ）、過去の妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）、身長（ＨＴ）、ヒップ周囲（Ｈｉｐ）、人種、性別、収縮期血圧（ＳＢＰ）、ウエスト周囲（Ｗａｉｓｔ）、および体重（ＷＴ）からなる群から選択される少なくとも１つの臨床パラメータに関する前記個体の少なくとも１つの臨床的測定値を取得するステップをさらに含み、
前記モデルへの前記入力が前記少なくとも１つの臨床的測定値をさらに含む、項目１０から１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記個体が糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態に罹患していると以前に診断されていない、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記個体が前糖尿病性状態に罹患しており、前記方法が、前記個体が糖尿病を発生するリスクを評価または計算する、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記個体が妊娠している、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記糖尿病性状態が、２型糖尿病、前糖尿病、代謝症候群、耐糖能異常、および空腹時高血糖からなる群から選択される、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記少なくとも１つの生物学的試料が全血、血清、または血漿を含む、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記バイオマーカー測定値のうちの少なくとも１つが、免疫アッセイおよび酵素活性アッセイからなる群から選択される方法によって得られる、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記バイオマーカーを使用する前記方法の、前記糖尿病性状態の発生の予測における診断精度の度合を反映するＲＯＣ曲線下面積が、少なくとも０．７５、０．７６、０．７７、０．７８、０．７９、０．８０、０．８１、０．８２、０．８３、０．８４、または０．８５である、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記バイオマーカーを使用する前記方法の、前記糖尿病性状態の発生の予測における診断精度の度合を反映するＲＯＣ曲線下面積が、前記バイオマーカーが前記グルコースおよび前記タンパク質バイオマーカーからなるが、前記脂質代謝物からはならない対応する方法よりも、少なくとも０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、または０．１５高い、項目１から２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
（ｉ）グルコース、
（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび
（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物
であるバイオマーカーの群を測定するための試薬を含むキット。
（項目２５）
前記試薬のうちの少なくとも１つが検出可能な標識を含む、項目２４に記載のキット。
（項目２６）
前記タンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物の前記試薬が固体支持体に付着している、項目２４に記載のキット。
（項目２７）
糖尿病性状態を発生するリスクを評価するためのコンピュータ実行可能命令を有するコンピュータ読取可能媒体であって、
少なくとも（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物の測定値を表すバイオマーカー測定データを記憶するために、コンピュータ読取可能媒体に記憶され、プロセッサによって実行されるように適合されたルーチンと、
前記バイオマーカー測定データを分析して糖尿病性状態を発生するリスクを評価するために、前記コンピュータ読取可能媒体に記憶され、プロセッサによって実行されるように適合されたルーチンと
を含むコンピュータ読取可能媒体。
（項目２８）
糖尿病性状態を発生するリスクを評価するための医療診断試験システムであって、
個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なバイオマーカー測定データを収集するように適合されたデータ収集ツールであって、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むデータ収集ツールと、
糖尿病性状態を発生するリスクと前記バイオマーカーの測定値との間の相関の表示が生じるように適合された統計的分析エンジンを含む分析ツールであって、前記相関の前記表示が、実行されて結果を生じるように適合されている分析ツールと、
前記結果を分析して、糖尿病性状態を発生する前記個体のリスクを決定し、前記結果を指標値として表すように適合された指標計算ツールと
を含む医療診断試験システム。
（項目２９）
前記分析ツールが第１の統計的分析エンジンを含む第１の分析ツールを含み、前記システムが、前記相関を表すことができる複数の表示から、糖尿病性状態を発生する前記リスクと前記バイオマーカーの測定値との間の前記相関の前記表示を選択するように適合された第２の統計的分析エンジンを含む第２の分析ツールをさらに含む、項目２８に記載の医療診断試験システム。
（項目３０）
前記指標値を含む報告書を作成するように適合された報告ツールをさらに含む、項目２８または２９に記載のシステム。
（項目３１）
糖尿病性状態を発生するリスクを評価するためのモデルを開発する方法であって、
バイオマーカー測定データを取得するステップであって、前記バイオマーカー測定データが、集団からのバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記集団のエンドポイントが含まれ、測定データを取得するための前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、
前記集団の少なくともサブセットの前記バイオマーカー測定データをモデル内に入力するステップと、
前記入力されたバイオマーカー測定データを使用して前記モデルをエンドポイントについて訓練して、糖尿病性状態を発生するリスクと個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値との間の相関の表示を導くステップと
を含む方法。
（項目３２）
個体において糖尿病性状態の現状を評価する方法であって、
バイオマーカー測定データを取得するステップであって、前記バイオマーカー測定データが、前記個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、
モデルからの出力に基づいて前記個体において糖尿病性状態の現状を評価するステップであって、前記モデルが、前記バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップと
を含む方法。
（項目３３）
個体において糖尿病性疾患の代替エンドポイントを評価する方法であって、
バイオマーカー測定データを取得するステップであって、前記バイオマーカー測定データが、前記個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであり、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含むステップと、
モデルからの出力に基づいて前記個体において糖尿病性疾患の代替エンドポイントを評価するステップであって、前記モデルが、前記バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップと
を含む方法。
（項目３４）
前記バイオマーカーが、表１からの少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のタンパク質バイオマーカーを含む、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目３５）
前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーが、アディポネクチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＨｂＡ１ｃ、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、インスリン、ＩＬ２ＲＡ、フェリチン、およびＬＥＰからなる群から選択される、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目３６）
前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーが、アディポネクチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＩＬ２ＲＡ、フェリチン、インスリン、およびＨｂＡ１ｃからなる群から選択される、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目３７）
前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーに、インスリンおよびＨｂＡ１ｃから選択される少なくとも１つの血糖指数マーカーが含まれる、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目３８）
前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーが、アディポネクチン、インスリン、およびＣ反応性タンパク質を含む、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目３９）
前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーが、アディポネクチン、ＣＲＰおよびＨｂＡ１ｃを含む、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４０）
前記少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーが、図８〜２６の任意の１つの組合せから選択される、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４１）
前記少なくとも３個のタンパク質マーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物が、図２７〜３５の任意の１つの組合せから選択される、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４２）
前記バイオマーカーが、表２からの少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の脂質代謝物を含む、項目１から４１のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、または任意のシステム。
（項目４３）
前記少なくとも１つの脂質代謝物が少なくとも１つのコレステロールエステルを含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４４）
前記少なくとも１つの脂質代謝物が、ＡＣ６：０、ＡＣ８：０、ＡＣ１０：０、ＣＥ１６：０、ＣＥ１６：１ｎ７、ＣＥ１８：０、ＣＥ１８：３ｎ６、ＣＥ１８：１ｎ９、ＣＥ１８：２ｎ６、ＣＥ２０：３ｎ６、ＣＥ２０：４ｎ３、ＴＧＴＬ、ＤＧ１６：０、ＤＧ１８：０、ＤＧ１８：１ｎ９、ＤＧ１８：２ｎ６、ＤＧ１８：３ｎ３、ＤＧＴＬ、ＦＡ１６：０、ＦＡ１６：１ｎ７、ＦＡ１８：１ｎ９、ＦＡ１８：２ｎ６、ＦＡ２４：０、ＬＹ１６：１ｎ７、ＬＹ１８：１ｎ７、ＬＹ１８：１ｎ９、ＬＹ１８：２ｎ６、ＰＣ１６：１ｎ７、ＰＣ１８：２ｎ６、ＰＣ１８：３ｎ６、ＰＣ１８：１ｎ７、ＰＣ２０：３ｎ９、ＰＣ２２：４ｎ６、ＰＣ２２：５ｎ３、ＰＣｄｍ１８：０、ＰＣｄｍ１８：１ｎ９、ＰＣｄｍ１６：０、ＰＣ２０：３ｎ６、ＰＣ２０：４ｎ３、ＰＥｄｍ１８：１ｎ９、ＰＥ１６：１ｎ７、ＰＥ１８：２ｎ６、ＰＥ２０：２ｎ６、ＰＥ２２：０、ＰＥ２４：１ｎ９ ＰＥｄｍ１８：０、ＴＧ１６：０、ＴＧ１６：１ｎ７、ＴＧ１８：０、ＴＧ１８：１ｎ７、ＴＧ１８：１ｎ９、ＴＧ１８：２ｎ６およびＴＧ１８：３ｎ３からなる群から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４５）
前記少なくとも１つの脂質代謝物が、ＣＥ１６：１ｎ７、ＣＥ２０：３ｎ６、ＣＥ１８：２ｎ６、ＣＥ１６：０、ＣＥ１８：１ｎ９、ＬＹ１８：２ｎ６、ＬＹ１８：１ｎ７およびＬＹ１８：１ｎ９からなる群から選択される、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４６）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１６：１ｎ７を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４７）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ２０：３ｎ６を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４８）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１８：２ｎ６を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目４９）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１６：０を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目５０）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＣＥ１８：１ｎ９を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目５１）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＬＹ１８：２ｎ６を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目５２）
前記少なくとも１つの脂質代謝物がＬＹ１８：１ｎ７またはＬＹ１８：１ｎ９を含む、項目１から４２のいずれか一項に記載の方法、キット、コンピュータ読取可能媒体、またはシステム。
（項目５３）
個体の糖尿病リスクスコアを表すリスクスコアのデータを取得するステップであって、前記糖尿病リスクスコアは、糖尿病性状態を発生するリスクを計算するための項目２に記載の方法に従って計算するステップと、
糖尿病の発症を遅延させるまたは予防するための治療レジメンの処方箋を表す処方箋処置データを、前記糖尿病リスクスコアによって糖尿病のリスクが上昇しているとして同定された個体に対して作成するステップと
を含む、糖尿病を予防する方法。
（項目５４）
項目１から２３および３４から５２のいずれか一項に記載の方法に従って、少なくとも１の被験体の、糖尿病性状態を発生するリスクを評価または計算するステップと、
糖尿病性状態のリスクが上昇していると同定された被験体を、糖尿病の発症を遅延させるまたは予防するための治療レジメンで処置するステップと
を含む、糖尿病を予防する方法。
（項目５５）
前記治療レジメンが、ＩＮＳ、ＩＮＳ類似体、血糖降下剤、抗炎症剤、脂質低下剤、カルシウムチャネル遮断剤、ベータ−アドレナリン作動性受容体遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤のプロドラッグ、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、レニン阻害剤、リパーゼ阻害剤、アミリン類似体、ナトリウム−グルコース共輸送体２阻害剤、二重脂肪トリグリセリドリパーゼおよびＰＩ３キナーゼ活性化因子、神経ペプチドＹ受容体のアンタゴニスト、ヒトホルモン類似体、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、三重モノアミンオキシダーゼ再取り込み阻害剤、ノルエピネフリンおよびドーパミン再取り込みの阻害剤、１１ベータ−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型（１１ｂ−ＨＳＤ１）の阻害剤、コルチゾール合成の阻害剤、糖新生の阻害剤、グルコキナーゼ活性化因子、タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂのアンチセンス阻害剤、島新生治療、およびベータヒスチンからなる群から選択される少なくとも１つの治療剤を含む、項目５３または５４に記載の方法。
（項目５６）
処置領域が、アカルボース、メトホルミン、トログリタゾン、およびロシグリタソンからなる群から選択される少なくとも１つの治療剤を含む、項目５３または５４に記載の方法。
（項目５７）
項目１０から２３のいずれか一項に記載の方法に従って、前記集団内に含まれる個体について糖尿病性状態の発生を計算するステップと、
糖尿病性状態を発生する前記リスクを含む要因に基づいて、前記集団内の個体を前記集団中の残りの個体に対して順位付ける、または前記集団を少なくとも２つの群に分けるステップと
を含む、個体の集団を順位付けるまたは群分けする方法。
（項目５８）
個体の健康保険の有資格を決定するため、
個体の健康保険の保険料を決定するため、
医療保険制度、健康維持機構、または好ましい提供組織における個体の会員保険料を決定するため、および
医療保険制度、健康維持機構、または好ましい提供組織において医療従事者を個体に割り当てるため
の目的のうちの１つまたは複数のために、前記個体集団の前記順位付けまたは群分けを表す順位付けデータを使用することをさらに含む、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
個体または個体群に治療介入または生活習慣の介入を推奨するため、
個体または個体群の医療を管理するため、
個体または個体群の健康を監視するため、および
個体または個体群のための医療処置、治療介入、または生活習慣の介入を監視するためからなる群から選択される１つまたは複数の目的のために、前記個体集団の前記順位付けまたは群分けを表す順位付けデータを使用することをさらに含む、項目５７または５８に記載の方法。
（項目６０）
個体において糖尿病性状態の現状を評価する方法であって、
バイオマーカー測定データを取得するステップであって、前記バイオマーカー測定データが、前記個体からの少なくとも１つの生物学的試料中のバイオマーカーの測定値の代表的なものであるステップと、
モデルからの出力に基づいて前記個体において糖尿病性状態の現状を評価するステップであって、前記モデルが、前記バイオマーカー測定データの入力に基づいて実行されるステップと
を含み、前記バイオマーカーが、（ｉ）グルコース、（ｉｉ）表１中のタンパク質バイオマーカーから選択される少なくとも３つのタンパク質バイオマーカーおよび（ｉｉｉ）表２中の脂質代謝物から選択される少なくとも１つの脂質代謝物を含む、方法。
図１は、Ｉｎｔｅｒ９９コホートにおける２型糖尿病の５年発生率のリスクを評価するための、モデルの性能および妥当性確認を提供する図である。データセット全体（６３２人すべての転換者および非転換者、実線）を使用して開発し、ブートストラップ再サンプリング手法（点線）を使用して妥当性確認した、６個のバイオマーカーのレベル、すなわち、空腹時血清ＡＤＩＰＯＱ、ＣＲＰ、インスリン、ＦＴＨ１、およびＩＬ２ＲＡ、ならびに空腹時血漿グルコースを使用するモデルのＲＯＣ曲線。 図２は、２型糖尿病の５年リスクを評価するための１１個の方法のＲＯＣ分析を示す図である。ＤＲＳ、本研究で開発した糖尿病リスクスコア；ＨＯＭＡ−ＩＲ、恒常性モデル評価インスリン耐性（空腹時血清インスリン×空腹時血漿グルコース）／２２．５）；非侵襲性臨床モデル（年齢、ＢＭＩ、ウエスト周囲、および一等親血縁者の家族歴を使用した非侵襲性臨床アルゴリズム）；ＯＧＴＴ、２時間経口グルコース負荷試験。有意性コード：０＜＊＊＊＜０．００１＜＊＊＜０．０１＜＊＜０．０５＜＜１。 図３は、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２および年齢≧３９歳によって定義される、リスクがあるＩｎｔｅｒ９９部分集団における糖尿病リスクスコアおよび空腹時血漿グルコースの性能を示す図である。白色、薄灰色および濃灰色の領域は、それぞれ低、中および高リスクの層に対応する。研究からの結果はベイズの規則を使用して調節し、Ｉｎｔｅｒ９９中の３０３２人のリスクがある個体間で５．７％の観察された５年発生率を反映している（Ａ）。左軸には絶対的リスクを示し、一方で相対的リスクを右軸に示す。黒色の実線は、リスクとＤＲＳ予測との間の関係性を表す。点線の曲線は、研究における個体のリスク予測の標準誤差から推定した、リスクに対する９５％信頼区間の平均の上限および下限を示す。三角形は調節された研究集団の十分位数を表し、変換された平均の観察された分数を平均ＤＲＳに対してプロットしている。このリスク曲線の作成の詳細は、オンラインの付録Ｃに提示されている。空腹時血漿グルコース状態（Ｂ）およびＤＲＳリスク層（Ｃ）による、リスクがあるＩｎｔｅｒ９９部分集団の層別化。ＮＦＧ、正常な空腹時血糖（≦１００ｍｇ／ｄｌ）；ＩＦＧ、空腹時高血糖（＞１００ｍｇ／ｄｌ）。 図４は、ＤＲＳ、ＨｂＡ１ｃ、ＢＭＩ、性別で調節したウエスト、空腹時インスリンおよび空腹時血糖、ＨＯＭＡ ＩＲならびに非侵襲性臨床モデルのＡＵＣを示す図である。 図５は、糖尿病への進行に関連する経路を示す図である。 図６は、特許請求した方法のステップおよび装置のシステムを実装し得る適切な計算システム環境１００の例を例示する図である。 図７は、糖尿病性状態を発生する人または人の群のリスクを評価するために使用し得るモデルを開発する方法例を示す流れ図である。 図８は、糖尿病性状態を発生する被験体（たとえば人または人の群）のリスクを評価するためにモデルを使用する方法例を示す流れ図である。 図９は、７５個のパラメータの評価からの、特に有用な３パネルの組合せを示す図である。 図９は、７５個のパラメータの評価からの、特に有用な３パネルの組合せを示す図である。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ａは、３個のバイオマーカーのパネルの７個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｂは、４個のバイオマーカーのパネルの２５個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｃは、５個のバイオマーカーのパネルの６５個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｃは、５個のバイオマーカーのパネルの６５個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｄは、６個のバイオマーカーのパネルの１３４個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｄは、６個のバイオマーカーのパネルの１３４個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｄは、６個のバイオマーカーのパネルの１３４個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｄは、６個のバイオマーカーのパネルの１３４個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｅは、７個のバイオマーカーのパネルの１４７個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｅは、７個のバイオマーカーのパネルの１４７個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｅは、７個のバイオマーカーのパネルの１４７個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｅは、７個のバイオマーカーのパネルの１４７個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｅは、７個のバイオマーカーのパネルの１４７個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｆは、８個のバイオマーカーのパネルの１００個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した８個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｆは、８個のバイオマーカーのパネルの１００個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した８個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｆは、８個のバイオマーカーのパネルの１００個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した８個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｇは、９個のバイオマーカーのパネルの４４個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した９個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｈは、１０個のバイオマーカーのパネルの１１個の特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１０個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１０（Ａ〜Ｉ）は、実施例２の基礎集団から測定および計算した、１１個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能な様々な３パネル〜１１パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を要約する表を含有する図である（１〜２列）。図１０Ｉは、１１個のバイオマーカーのパネルの特に有用な組合せを示す図である。パネルは、単独で、または記載した１１個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１１は、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組から可能なすべての３パネル、４パネル、５パネル、６パネル、および７パネルのＡＬＬＤＢＲＩＳＫの組合せの、当てはめロジスティック回帰モデルの完全な列挙を要約する表を示す図である（１〜３列）。 図１２は、３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、６５個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１２は、３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、６５個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１２は、３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、６５個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１３は、４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１４は、５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１４は、５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１４は、５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１５は、６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１５は、６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１５は、６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１６は、７個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１６は、７個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１６は、７個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した７個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、２６個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１７は、８個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した８個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１７は、８個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した８個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす 図１７は、８個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した８個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす 図１８は、９個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した９個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１８は、９個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した９個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１８は、９個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した９個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１９は、１０個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１０個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８５個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１９は、１０個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１０個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８５個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図１９は、１０個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１０個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８５個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２０は、１１個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１１個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２０は、１１個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１１個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２０は、１１個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１１個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２０は、１１個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１１個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２１は、１２個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１２個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２１は、１２個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１２個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２１は、１２個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１２個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２１は、１２個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１２個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２２は、１３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２２は、１３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２２は、１３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２２は、１３個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１３個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２３は、１４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２３は、１４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２３は、１４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２３は、１４個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１４個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２４は、１５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２４は、１５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２４は、１５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２４は、１５個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１５個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２５は、１６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２５は、１６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２５は、１６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２５は、１６個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した１６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２６は、１７個のバイオマーカーのパネルの選択された特に有用な組合せを示す図である。それぞれのパネルは、単独で、または記載した６個のマーカーと組み合わせた追加のバイオマーカーと共に使用することができる。これらのパネルは、より基礎集団から測定および計算した、１８個の選択されたＡＬＬＤＢＲＩＳＫの開始組からの当てはめロジスティック回帰モデルの列挙を表し、事前に決定されたカットオフレベル（０．７５ＡＵＣ以上）を満たす。 図２７〜３１は、グルコース、少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物のパネルの、選択された特に有用な組合せを示す図である。 図２７〜３１は、グルコース、少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物のパネルの、選択された特に有用な組合せを示す図である。 図２７〜３１は、グルコース、少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物のパネルの、選択された特に有用な組合せを示す図である。 図２７〜３１は、グルコース、少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物のパネルの、選択された特に有用な組合せを示す図である。 図２７〜３１は、グルコース、少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物のパネルの、選択された特に有用な組合せを示す図である。 図３２である。 図３３である。 図３４である。 図３５である。
本発明には、タンパク質バイオマーカーおよび脂質代謝物を含めた生物学的マーカーのセット、ならびに、糖尿病のリスクの評価における現在の標準治療と比較した場合に顕著な識別の改善をもたらす、関連する多変量アルゴリズムが含まれる。このマーカーのセットには臨床的手段、タンパク質バイオマーカー、および脂質代謝物が包含される。
本発明における主要な方法論的構成要素は、一変量および多変量の性能評価ならびに分析的安定性／発展の検討事項の段階的な手順を使用して、潜在的なマーカー候補の大きな組から比較的少数の最も情報価値のあるマーカーを抽出することである。本発明の１つの注目すべき特長は、ＯＧＴＴおよび任意の単一のマーカークラス単独よりも良好な識別性能を提供する、単一の多変量アルゴリズムにおけるタンパク質および脂質代謝物（ならびに任意選択で血糖を含めた他の要因）の組合せである。
本発明は、糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態に罹患している被験体、または糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態を発生しやすい被験体に関連するバイオマーカーの同定に関する。したがって、本発明の特長は、本明細書中に開示したバイオマーカーの検出によって、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態について無症候性である被験体を含めた、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を発生するリスクがある被験体を同定する方法である。また、これらのバイオマーカーは、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の処置および治療を受けている被験体の監視、ならびに糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態に罹患している被験体において有効であろう治療および処置の選択または改変にも有用であり、そのような処置および治療の選択および使用は、糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態の進行を遅くする、またはその発症を予防する。
２７２個のバイオマーカー（ＡＬＬＤＢＲＩＳＫと総称する）のリストを以下の表７として記載し、これらのバイオマーカーは、本発明で使用するための、分析物に基づいたまたは個体の病歴に基づいたバイオマーカーである。本発明で使用するためのタンパク質バイオマーカー好ましいサブセットを表１に記載する。
優先順位を付けたマーカーのリストを、３つのネステッド症例対照研究、すなわち、Ｉｎｔｅｒ−９９（ｎ＝６３２）、Ｂｏｔｎｉａ（ｎ＝３８７）およびＪｏｓｌｉｎ（ｎ＝９４）から開発した。異なる研究は異なる目的を有していたが、すべてで糖尿病の発生に関連するモデルが作成された。Ｉｎｔｅｒ−９９では、一般的なマーカー選択技法（たとえば、段階的な選択、逆方向選択、一変量の有意性）に基づいて、個々にまたは１００個のブートストラップ複製下でマーカーを選択した。マーカーそれぞれの基準について順位付けし、平均の順位付けによって仕分けた。平均の順位付けは、４つの分類、すなわち、常に選択される、しばしば選択される（＞５０％の場合）、時折選択される（＜５０％）および選択されないへと分類した。この優先順位付けスキームを空腹時高血糖のサブセットおよび正常な空腹時血糖のサブセットで繰り返した。Ｂｏｔｎｉａデータセットはｉｎｔｅｒ−９９と一致した様式で分析した。Ｊｏｓｌｉｎデータセットでは、経口グルコースチャレンジ後の２時間グルコース（ＯＧＴＴ）、インスリン感受性（ＣＩＳＩ）およびインスリン耐性（デルタインスリン）を予測する３つのモデルを開発し、一般的な選択技法（一変量、順方向、逆方向、または段階的な選択）を使用して、１００個のブートストラップ複製下でマーカーを選択した。マーカー計数の有意性は、順序を変えた多数の結果でマーカー選択基準を繰り返すことによって判断した。マーカーを以下の４つの分類へと分けた。常に選択されるとは、すべてのマーカーをモデル内に許可した場合に選択されたマーカーであり、しばしば選択されるとは、グルコースおよびインスリンを検討から外した後に選択されたモデルであり、時折選択されるとは、すべての血糖指数（グルコース、インスリン、ＨｂＡ１ｃ、フルクトサミン）を外した場合のモデルであり、ならびに選択されないものである。
表１ − 好ましいタンパク質バイオマーカー
Figure 2015052617
一実施形態では、本発明は、個体が将来糖尿病を発生するリスク、たとえば、個体が今後１、２、２．５、５、７．５、または１０年間以内に糖尿病を発生するリスクを評価するために測定および使用することができる、新規のバイオマーカーパネルを提供する。例示的な好ましいパネルを図８〜２６に示す。図中に描かれているそれぞれのパネルは、本明細書中に詳述した１つまたは複数の脂質代謝物バイオマーカーと組み合わせた場合に、本発明の個々の実施形態として企図される。それぞれのパネルは、そのようなマーカーのセットを用いる方法、改善、キット、コンピュータ読取可能媒体、システム、および本発明の他の態様のために１つまたは複数の脂質代謝物バイオマーカーと共に用いることができる１セットのマーカーを定義する。
さらに、図２７〜３１は、グルコース、少なくとも３個のタンパク質バイオマーカーおよび少なくとも１つの脂質代謝物の例示的な好ましい組合せを提供する。図中に描かれているそれぞれのパネルは、本明細書中に詳述した１つまたは複数の脂質代謝物バイオマーカーと組み合わせた場合に、本発明の個々の実施形態として企図される。それぞれのパネルは、そのようなマーカーのセットを用いる方法、改善、キット、コンピュータ読取可能媒体、システム、および本発明の他の態様のために用いることができる１セットのマーカーを定義する。
脂質代謝物バイオマーカーのリストを以下の表３に記載する。本発明で使用するための脂質代謝物バイオマーカーの好ましいサブセットを表２に記載する。
表２ − 脂質代謝物
Figure 2015052617
国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２３５７号（Ｌｉｐｏｍｉｃｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、２００８年９月０４日にＷＯ２００８／１０６０５４号として公開）およびＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６０８３０号（Ｔｅｔｈｙｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、２００８年１０月３０日にＷＯ２００８／１３１２２４号として公開）、ならびに関連する米国特許出願第１２／５２８，０６５号および第１２／５０１，３８５号（Ｔｅｔｈｙｓ、公開第２００９／０２７１１２４号、２００９年１０月２９日）の完全な開示は、その全体で本明細書中に組み込まれている。
定義
内容によりそうでないと明らかに指示される場合以外は、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には複数形の言及が含まれる。
本明細書中で使用する「体液」には、それだけには限定されないが、血液、血漿、血清、単離したリポタンパク質画分、唾液、尿、リンパ液、脳脊髄液、および胆汁などの流体が含まれる。
本明細書中で使用する「脂質クラス」とは、たとえば、中性脂肪、リン脂質、遊離脂肪酸、全脂肪酸、トリグリセリド、コレステロールエステル、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ジグリセリド、リソファチジルコリン、遊離コレステロール、モノアシルグリセリド（ｍｏｎｏａｃｙｌｇｌｙｅｒｉｄｅ）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、およびスフィンゴミエリンなどの脂質のクラスを示す。
別段に定義しない限りは、化学用語は当分野で公知のように使用する。
本明細書中において、言語「含む」を用いて実施形態を説明した場合はいつでも、「からなる」および／または「から本質的になる」に関して説明した、その他の点では類似の実施形態も提供されることを理解されたい。
本明細書中で使用する、状態または障害と「正に関連した」または「正に相関した」代謝物（または他のバイオマーカー）には、正常な対照被験体または正常な対照参照と比較して、そのレベルまたは濃度が一般に障害に伴って増加する代謝物が含まれる。状態または障害と「負に関連した」または「負に相関した」代謝物（または他のバイオマーカー）には、一般に、正常な対照被験体または正常な対照参照と比較して、そのレベルまたは濃度が障害に伴って減少する代謝物が含まれる。
「精度」とは、測定または計算した量（試験報告された値）の、その実際の（または真の）値に対する適合の度合をいう。臨床的精度は、真の結果の割合（真陽性（ＴＰ）または真陰性（ＴＮ）対誤分類された結果（偽陽性（ＦＰ）または偽陰性（ＦＮ））に関するものであり、他の測度の中でとりわけ、感度、特異度、陽性予測値（ＰＰＶ）もしくは陰性予測値（ＮＰＶ）として、または尤度、オッズ比として記述し得る。
本発明のコンテキストにおける「バイオマーカー」には、それだけには限定されないが、タンパク質、核酸、および代謝物が、その多型、突然変異体、変異体、修飾体、サブユニット、断片、タンパク質−リガンド複合体、および分解生成物、タンパク質−リガンド複合体、元素、関連する代謝物、ならびに他の分析物または試料由来の測度と一緒に包含される。また、バイオマーカーには、突然変異したタンパク質または突然変異した核酸も含まれることができる。また、バイオマーカーには、非血液由来因子、健康状態の非分析物生理的マーカー、または、本明細書中に定義されている「臨床パラメータ」、およびやはり本明細書中に定義されている「伝統的な実験室危険因子」などの、試料（たとえば体液などの生物学的試料）から測定されない他の要因もしくはマーカーも包含される。また、バイオマーカーには、数学的に作成された任意の計算された指標、または、時間的な傾向および差異を含めた前述の測定値のうちの任意の１つもしくは複数の組合せも含まれる。本明細書中で使用する用語「分析物」は、任意の測定する物質を意味することができ、電解質およびカルシウムなどの元素を包含することができる。
臨床パラメータ」または「ＣＰ」には、それだけには限定されないが、年齢（ＡＧＥ）、人種または民族（ＲＡＣＥ）、性別（ＳＥＸ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）および収縮期血圧（ＳＢＰ）、家族歴（ＦＨＸ、片親ではＦＨｘ１および両親ではＦＨｘ２が含まれる）、身長（ＨＴ）、体重（ＷＴ）、ウエスト（Ｗａｉｓｔ）およびヒップ（Ｈｉｐ）の周囲、ウエスト−ヒップの比（ＷＨｒ）、体型指数（ＢＭＩ）、過去の妊娠性糖尿病（ＧＤＭ）、ならびに安静時心拍数などの、被験体の健康状態または他の特徴のすべての非試料または非分析物バイオマーカーが包含される。
「検討事項」には、それだけには限定されないが金銭的な検討事項を含めた価値のあるものすべて、およびそれだけには限定されないが関連するサービスまたは製品、サービスまたは製品の値引き、ひいきの供給者関係、より迅速な支払いなどの非金銭的な検討事項が包含される。
本発明のコンテキストにおける「糖尿病性状態」は、Ｉ型およびＩＩ型の真性糖尿病、ならびに前糖尿病（本明細書中で定義）を含む。また、糖尿病関連状態には糖尿病および前糖尿病性状態（本明細書中で定義）が含まれることも、当分野で公知である。
本発明のコンテキストにおける「真性糖尿病」には、自己免疫および特発性の両方の１型糖尿病ならびに２型糖尿病（本明細書中で「糖尿病」または「Ｔ２ＤＭ」と呼ぶ）が包含される。世界保健機関は、真性糖尿病の空腹時血漿グルコース濃度の診断値を７．０ｍｍｏｌ／ｌ（１２６ｍｇ／ｄｌ）以上（全血で６．１ｍｍｏｌ／ｌもしくは１１０ｍｇ／ｄｌ）、または１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上（２００ｍｇ／ｄＬ以上）の２時間グルコースレベルと定義している。また、６％を超えるＨｂＡ１ｃレベル、たとえば≧６．５％に基づいて糖尿病を診断することも可能であり得る。真性糖尿病の高いリスクを示唆するまたは示す他の値には、１４０／９０ｍｍＨｇ以上の上昇した動脈圧、上昇した血漿トリグリセリド（１．７ｍｍｏｌ／Ｌ、１５０ｍｇ／ｄＬ以上）および／または低いＨＤＬ−コレステロール（男性では＜０．９ｍｍｏｌ／Ｌ、３５ｍｇ／ｄｌ、女性では＜１．０ｍｍｏｌ／Ｌ、３９ｍｇ／ｄＬ）、中心性肥満（男性：ウエスト対ヒップの比＞０．９０、女性：ウエスト対ヒップの比＞０．８５）および／または３０ｋｇ／ｍ２を超える体型指数、ミクロアルブミン尿症（尿中アルブミン排泄速度が２０μｇ／分以上または３０ｍｇ／ｇ以上のアルブミン：クレアチニン比）が含まれる。
「妊娠糖尿病」とは、妊娠中のグルコース不耐性をいう。この状態は、妊娠中に開始されるまたは最初に診断される高血糖をもたらす。
「ＦＮ」とは偽陰性であり、病状の試験では、疾患の被験体を非疾患または正常として不正確に分類することを意味する。
「ＦＰ」とは偽陽性であり、病状の試験では、正常な被験体を疾患に罹患しているとして不正確に分類することを意味する。
用語「式」、「アルゴリズム」、および「モデル」とは、任意の数学的方程式、アルゴリズム、分析もしくはプログラミングのプロセスと、または、１つもしくは複数の連続的もしくは分類別入力（本明細書中で「パラメータ」と呼ぶ）をとって、時折「指標」もしくは「指標値」と呼ばれる出力値を計算する統計的技法と、互換性があるように使用される。「式」の非限定的な例には、和、比、および係数またはべき指数などの回帰演算子、バイオマーカー値の変換および正規化（それだけには限定されないが、性別、年齢、または民族などの臨床パラメータに基づいた正規化スキームが含まれる）、規則および指針、統計的分類モデル、ならびに歴史的集団で訓練した神経回路網が含まれる。被験体試料中で検出されたバイオマーカーのレベルと被験体の糖尿病のリスクとの間の関係性を決定するための、線形および非線形の方程式ならびに統計的分類分析が、バイオマーカーに特に有用である。パネルおよび組合せの構築では、とりわけ、相互相関、主成分分析（ＰＣＡ）、因子回転、ロジスティック回帰（ＬｏｇＲｅｇ）、線形判別分析（ＬＤＡ）、固有遺伝子線形判別分析（ＥＬＤＡ）、サポートベクターマシーン（ＳＶＭ）、ランダムフォレスト（ＲＦ）、再帰的分割木（ＲＰＡＲＴ）、ならびに他の関連する決定木分類技法、収縮（Ｓｈｒｕｋｅｎ）重心（ＳＣ）、ステップＡＩＣ、第ｋ最近傍、ブースティング、決定木、神経回路網、ベイジアンネットワーク、サポートベクターマシーン、および隠れマルコフモデル、直線回帰または分類アルゴリズム、非直線回帰または分類アルゴリズム、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、階層分析またはクラスタリングアルゴリズム、決定木を使用した階層アルゴリズム；カーネル部分最小二乗アルゴリズム、カーネル一致追跡アルゴリズム、カーネルフィッシャーの判別分析アルゴリズム、またはカーネル主成分分析アルゴリズムなどのカーネルに基づいた機械アルゴリズムなどの、確立された技法を含めたパターン認識特長を利用した、構造的および構文的な統計的分類アルゴリズムならびにリスク指標の構築方法が特に興味深い。これらの技法の多くは、順方向選択、逆方向選択、もしくは段階的な選択などのＡＬＬＤＢＲＩＳＫ選択技法、所定の大きさのすべての潜在的なパネルの完全な列挙、遺伝的アルゴリズムと組み合わせて有用であるか、または、これら自体が、その技法自身中にバイオマーカー選択方法が含まれ得る。これらは、追加のバイオマーカーとモデルの改善との間のトレードオフを定量し、過剰適応の最小化を援助するために、赤池の情報量基準（ＡＩＣ）またはベイズ情報量基準（ＢＩＣ）などの情報量基準とカップリングさせ得る。生じる予測モデルは、１つ残す（Ｌｅａｖｅ−Ｏｎｅ−Ｏｕｔ、ＬＯＯ）および１０倍相互検証（１０倍ＣＶ）などの技法を使用して、他の研究で妥当性確認するか、または、それらを元々訓練した研究で相互妥当性確認し得る。「ＤＲＳ式」とは、本明細書中に記載のように作成し、本明細書中に記載のバイオマーカー試験からの結果を含む入力から糖尿病リスクスコアを計算するために使用する式である。ＤＲＳ式は、糖尿病リスクスコアを計算するための好ましい手段である。
「保健経済学効用関数」とは、診断的または治療的な行為を標準治療に導入する前およびその後の両方の、理想的な適用される患者集団における臨床成績の範囲の予想された確率の組合せから導かれた式である。これには、そのような介入の精度、有効性および性能特徴の推定、ならびにそれぞれの結果に関連する費用および／または値の測定（効用）が包含され、これは、実際の保健制度の治療費（サービス、消耗品、装置および薬物など）から、ならびに／またはそれぞれの結果でもたらされる質を調節した生存年（ＱＡＬＹ）あたりの推定される許容値として導き得る。結果の予測された集団の大きさとそれぞれの結果の予想された効用とを掛算した積の、すべての予測された結果にわたる和が、所定の標準治療の保健経済学効用の総計である。（ｉ）介入を用いた標準治療で計算された保健経済学効用の総計と（ｉｉ）介入を用いない標準治療の保健経済学効用の総計の間の差異が、介入の保健経済学的な費用または値の全体的な測度をもたらす。これ自体を分析する患者群全体の中で（もっぱら介入群の中で）分割して、単位介入あたりの費用に達し得る、ならびに市場ポジショニング、価格設定、および保健制度の容認の想定などの決定を指導し得る。そのような保健経済学効用関数は、一般的に、介入の対費用効果の高さを比較するために使用されるが、医療制度が支払うことをいとわないＱＡＬＹあたりの許容される値、または新しい介入に必要とされる許容される対費用効果の高い臨床的性能特徴を推定するために変換してもよい。
本発明の診断的（または予後的）介入では、それぞれの結果（疾患分類診断試験ではＴＰ、ＦＰ、ＴＮ、またはＦＮであり得る）は異なる費用を負担するため、保健経済学効用関数は、臨床的状況ならびに個々の結果の費用および値に基づいて特異度よりも感度を、またはＮＰＶよりもＰＰＶを優先的に好む場合があり、したがって、より直接的な臨床的または分析的な性能の測度とは異なり得る、保健経済学的な性能および値の別の測度を提供する。これらの異なる測定値および相対的トレードオフは、一般に、すべての性能の測度が異なる度合で不完全性よりも有利である、誤り率がゼロ（すなわち、予測被験体結果の誤分類またはＦＰおよびＦＮがゼロ）の完璧な試験の場合にのみ収束するであろう。
「耐糖能異常」（ＩＧＴ）とは、正常よりも高いが、真性糖尿病として分類されるほど高くない血糖値を有すると定義される、前糖尿病性状態である。ＩＧＴを有する被験体は、７５ｇ経口グルコース負荷試験で１４０〜１９９ｍｇ／ｄＬ（７．８〜１１．０ｍｍｏｌ）の２時間グルコースレベルを有する。これらのグルコースレベルは、正常を超えているが、糖尿病に診断的なレベル未満である。耐糖能異常または空腹時高血糖を有する被験体は糖尿病を発生する顕著なリスクを有しており、したがって一次予防の重要な標的群である。
「インスリン耐性」とは、身体の細胞がインスリンの効果に対して耐性となる、すなわち、所定の量のインスリンに対する正常な応答が低下している、糖尿病性または前糖尿病性状態をいう。その結果、インスリンがその効果を発揮するためにより高レベルのインスリンが必要である。
経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）は主に、血糖値が曖昧である場合、妊娠中、または疫学研究において、真性糖尿病または前糖尿病性状態の診断に使用される（Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ， Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ ａｎｄ ｉｔｓ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｐａｒｔ １、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、１９９９年）。ＯＧＴＴは、少なくとも３日間の無制限の食事（毎日１５０ｇより多くの炭水化物）および通常の身体活動の翌朝に投与すべきである。妥当な（３０〜５０ｇの）炭水化物含有食事を試験の前夜に摂取すべきである。試験には８〜１４時間の終夜絶食が先行すべきであり、その間に水を摂取してもよい。空腹時血液試料を採取した後、被験体は２５０〜３００ｍｌの水中の７５ｇの無水グルコースまたは８２．５ｇのグルコース一水和物を５分間かけて飲むべきである。子供では、試験負荷は、体重１ｋｇあたり１．７５ｇのグルコースで、合計７５ｇのグルコースまでであるべきである。試験のタイミングは飲み始めからである。血液試料は試験負荷の２時間後に採取しなければならない。以前に注記したように、耐糖能異常（ＩＧＴ）の診断は、ＷＨＯカットオフ点で使用した場合に、７．５年間の糖尿病への転換について５０％の感度しかなく、＞１０％の偽陽性率を有すると注記されている。他の危険因子によって別段に高められない限りは、比較的高いリスクの民族でさえもそのような期間の間に１０％の糖尿病への転換率しか有さないため、このことは試験の臨床的効用とって顕著な問題である。非選択の一般集団では、そのような期間の間の転換率は５〜６％、または年間で１％未満と推定されている。
「測定すること」または「測定」とは、臨床もしくは被験体に由来する試料内の所定の物質の、そのような物質の定性的もしくは定量的な濃度レベルを導くことを含めた、存在、非存在、量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）もしくは量（ａｍｏｕｎｔ）（有効量であることができる）を評価すること、または他の様式で被験体の臨床パラメータの値もしくは分類を評価することを意味する。
「陰性予測値」または「ＮＰＶ」とは、ＴＮ／（ＴＮ＋ＦＮ）またはすべての陰性試験結果の真陰性の分数によって計算する。また、これは、試験することを意図する集団の疾患の有病率および試験前確率によっても本質的に影響を受ける。たとえば、試験、たとえば臨床的診断試験の特異度、感度、ならびに陽性および陰性の予測値を記述しているＯ’Ｍａｒｃａｉｇｈ ＡＳ、Ｊａｃｏｂｓｏｎ ＲＭ、「Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ Ｔｈｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ Ｖａｌｕｅ Ｏｆ Ａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｔｅｓｔ， Ｈｏｗ Ｔｏ Ｐｒｅｖｅｎｔ Ｍｉｓｌｅａｄｉｎｇ Ｏｒ Ｃｏｎｆｕｓｉｎｇ Ｒｅｓｕｌｔｓ」、Ｃｌｉｎ． Ｐｅｄ．、１９９３年、３２巻（８号）：４８５〜４９１頁を参照されたい。しばしば、連続的な診断試験測定を使用した２進病状分類手法では、感度および特異度は、Ｐｅｐｅら、「Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｄｄｓ Ｒａｔｉｏ ｉｎ Ｇａｕｇｉｎｇ ｔｈｅ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ， Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ， ｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｍａｒｋｅｒ」、Ａｍ． Ｊ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ、２００４年、１５９巻（９号）：８８２〜８９０頁に従って受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線によって要約され、曲線下面積（ＡＵＣ）、または試験（もしくはアッセイ）のカット点の範囲全体にわたる試験、アッセイ、もしくは方法の感度および特異度の表示を単一の値のみで可能にする指標であるｃ統計によって要約される。たとえば、Ｓｈｕｌｔｚ、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」、第１４章、Ｔｅｉｔｚ、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＢｕｒｔｉｓおよびＡｓｈｗｏｏｄ（編）、第４版、１９９６年、Ｗ．Ｂ． Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９２〜１９９頁ならびにＺｗｅｉｇら、「ＲＯＣ Ｃｕｒｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａｎ Ｅｘａｍｐｌｅ Ｓｈｏｗｉｎｇ Ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ Ａｍｏｎｇ Ｓｅｒｕｍ Ｌｉｐｉｄ Ａｎｄ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ Ｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ Ｓｕｂｊｅｃｔｓ
Ｗｉｔｈ Ｃｏｒｏｎｏｒｙ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ．、１９９２年、３８巻（８号）：１４２５〜１４２８頁も参照されたい。尤度関数、オッズ比、情報理論、予測値、較正（適合度が含まれる）、および再分類測定を使用した代替手法は、Ｃｏｏｋ、「Ｕｓｅ ａｎｄ Ｍｉｓｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ Ｃｕｒｖｅ ｉｎ Ｒｉｓｋ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ」、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００７年、１１５巻：９２８〜９３５頁に従って要約されている。試験によって定義される被験体コホート内の危険率ならびに絶対的および相対的なリスクの比は、臨床的な精度および効用のさらなる測度である。この最後では、Ｖａｓａｎ、「Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ： Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ」、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００６年、１１３巻：２３３５〜２３６２頁による参照限界、識別限界、およびリスクの閾値を含めた複数の方法が、異常または疾患の値を定義するために頻繁に使用されている。
分析精度とは、測定プロセス自体の再現性および予測性をいい、変動係数、ならびに異なる時点、ユーザ、機器および／または試薬を用いた同じ試料または対照の一致および較正の試験などの測定値で要約し得る。また、新しいバイオマーカーの評価におけるこれらおよび他の検討事項も、Ｖａｓａｎ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００６年、１１３巻：２３３５〜２３６２頁に要約されている。
「正常なグルコースレベル」とは、用語「血糖正常」および「正常」と互換性があるように使用され、６．１ｍｍｏｌ／Ｌ（１１０ｍｇ／ｄＬ）未満の空腹時静脈血漿グルコース濃度をいう。この量は自由裁量であるが、正常なグルコース負荷が証明された被験体においてそのような値が観察されており、ただし、一部の者は経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）によって測定してＩＧＴを有し得る。血糖正常を超えるグルコースレベルは前糖尿病性状態とみなされる。
「性能」とは、診断的または予後的な試験の全体的な有用性および品質に関する用語であり、とりわけ、臨床的および分析的な精度、使用特徴（たとえば、安定性、使用の容易さ）、保健経済学的価値、および試験の構成要素の相対的費用などの他の分析およびプロセスの特徴が含まれる。これらの要因のうちの任意のものが、優れた性能、したがって試験の有用性の源であり得る。
「陽性予測値」または「ＰＰＶ」とは、ＴＰ／（ＴＰ＋ＦＰ）またはすべての陽性試験結果の真陽性の分数によって計算する。これは、試験することを意図する集団の疾患有病率および試験前確率によって本質的に影響を受ける。
本発明のコンテキストにおける「前糖尿病」または「前糖尿病性」とは、個体または集団における生理的状態、および正常より高い明白な２型真性糖尿病への予想された疾患転換率を有する任意の治療介入（食事、運動、薬学、または他の様式）の非存在を示す。また、前糖尿病とは、所定の期間または時間的対象期間以内に、一般的な非選択の集団よりも高い率で明白な２型真性糖尿病へと転換する、または転換すると予測される被験体もしくは個体、または被験体もしくは個体の集団をいうこともできる。前糖尿病集団における、明白な２型真性糖尿病へのそのような絶対的な転換の予測率は、年間で１パーセント以上と低い場合があるが、好ましくは年間で２パーセント以上である。また、これは、リスクの四分位数間の正常からの相対的リスクに関して、または本発明からくるものを含めた様々なバイオマーカーと指標スコアとの間の尤度比としても記述し得る。別段に注記しない限りは、かつそれだけには限定されないが、前糖尿病の分類別陽性診断を本明細書中で記述する場合、これは、所定の閾値（選択された前糖尿病の臨床的カットオフ）で試験した者のうち、２型真性糖尿病への予測転換率が今後５．０年間の間に年間で２％以上、または期間全体中で１０％以上である被験体群を参照して、実験的に定義されている。糖尿病転換のリスクの連続的測度を作成する場合、前糖尿病には、正常な参照または一般的な非選択の正常な有病率の集団で見られるものを超える、すべての予想年間転換率が包含される。実施例において完全な研究を遡及的に記述する場合、前糖尿病には、それぞれが研究中に２型真性糖尿病へと転換したすべての「転換者」または「症例」アームのベースライン状態が包含される。
非選択の個体集団では、前糖尿病は、「前糖尿病性状態」に罹患しているすべての者と重複しているが、必ずしもその完全な上位集合、またはそれ内に含有されるサブセットではない。これは、所定の時間的対象期間中に糖尿病へと転換する者の多くは、現在は見かけ上健康であり、明らかな前糖尿病性状態に罹患しておらず、また、多くの者は前糖尿病性状態に罹患しているが、所定の時間的対象期間中に転換しないからである。これが診断的ギャップであり、本発明によって満たす必要がある。集団として見ると、前糖尿病に罹患している個体は、前糖尿病に罹患していないがそれ以外はリスクが一致した個体と比較して、糖尿病への転換（治療介入の非存在）への予測可能なリスクを有する。
「前糖尿病性状態」とは、正常なグルコースの恒常性および代謝と明白な真性糖尿病で見られる状態との中間の代謝状態をいう。前糖尿病性状態には、それだけには限定されないが、代謝症候群（「Ｘ症候群」）、耐糖能異常（ＩＧＴ）、および空腹時高血糖（ＩＦＧ）が含まれる。ＩＧＴとはグルコース調整の食後異常をいう一方で、ＩＦＧとは絶食状態で測定される異常をいう。世界保健機関は、ＩＦＧの値を６．１ｍｍｏｌ／Ｌ（１００ｍｇ／ｄＬ）（全血で５．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１００ｍｇ／ｄＬ）以上であるが、７．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）（全血で６．１ｍｍｏｌ／Ｌ、１１０ｍｇ／ｄＬ）未満の空腹時血漿グルコース濃度として定義している。全国コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）の基準による代謝症候群は、１３０／８５ｍｍＨｇ以上の血圧、６．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上の空腹時血漿グルコース、ウエスト周囲＞１０２ｃｍ（男性）または＞８８ｃｍ（女性）、１．７ｍｍｏｌ／Ｌ以上のトリグリセリド、およびＨＤＬコレステロール＜１．０ｍｍｏｌ／Ｌ（男性）または１．３ｍｍｏｌ／Ｌ（女性）のうちの少なくとも３つを有するとして定義されている。前糖尿病性状態に罹患している多くの個体はＴ２ＤＭへと転換しない。
本発明のコンテキストにおける「リスク」とは、明白な糖尿病への転換などのように、特定の期間の間に事象が起こる確率に関し、被験体の「絶対的」リスクまたは「相対的」リスクを意味することができる。絶対的リスクは、関連する時間コホートの測定後の実際の観察を参照して、または関連する期間の間追跡した統計的に妥当な歴史的コホートから作成した指標値を参照して、測定することができる。相対的リスクとは、低いリスクのコホートまたは平均の集団リスクのどちらかの絶対的リスクと比較した、被験体の絶対的リスクの比をいい、臨床的危険因子をどのように評価したかによって変動する場合がある。また、オッズ比、所定の試験結果陽性事象対陰性事象の割合も、転換なしに対して一般的に使用されている（オッズは式ｐ／（１−ｐ）に従い、ｐは事象の確率であり、（１−ｐ）は事象なしの確率である）。本発明のコンテキストにおいて評価し得る代替の連続的測度には、糖尿病転換までの時間および治療的糖尿病転換のリスク低下の比が含まれる。
本発明のコンテキストにおける「リスク評価」または「リスクの評価」には、事象または病状が起こり得る確率、オッズ、または尤度、事象あるいは１つの病状から別のものへの転換、すなわち、血糖正常状態から前糖尿病性状態もしくは前糖尿病へ、または前糖尿病性状態から前糖尿病もしくは糖尿病への転換の発生率の予測を行うことが包含される。また、リスク評価は、絶対的または以前に測定した集団を参照した相対的な観点のどちらかで、将来のグルコース、ＨＢＡ１ｃスコアまたは糖尿病の他の指標を予測することも含むことができる。本発明の方法は、２型糖尿病への転換のリスクの連続的または分類別の測定を行い、したがって前糖尿病性として定義された被験体の分類のリスク範囲を診断および定義するために使用し得る。分類別のシナリオでは、本発明は、正常および前糖尿病の被験体コホートを識別するために使用することができる。他の実施形態では、本発明は、前糖尿病を糖尿病から、または糖尿病を正常から識別するために使用し得る。そのような様々な使用は、個体パネル、数学アルゴリズム、および／またはカットオフ点において異なるバイオマーカーの組合せを必要とし得るが、意図する使用のために同じ前述の精度測定の対象となり得る。
本発明のコンテキストにおける「試料」とは、被験体から単離した生物学的試料であり、例として、かつそれだけには限定されないが、全血、血清、血漿、血液細胞、内皮細胞、組織生検、リンパ液、腹水、間質液（「細胞外液」としても公知であり、とりわけ歯肉溝滲出液を含めた、細胞間の空間に見つかる流体が包含される）、骨髄、脳脊髄液（ＣＳＦ）、唾液、粘液、痰、汗、尿、または任意の他の分泌物、排泄物、もしくは他の体液が含まれることができる。「血液試料」とは、全血または血液細胞、血清および血漿を含めたその任意の画分をいう。血清が好ましい血液試料である。
「感度」とは、ＴＰ／（ＴＰ＋ＦＮ）または疾患の被験体の真陽性の分数によって計算する。
「特異度」とは、ＴＮ／（ＴＮ＋ＦＰ）または非疾患または正常な被験体の真陰性の分数によって計算する。
「統計的に有意な」とは、変更が、偶然単独（これは「偽陽性」の可能性がある）によって起こると予想され得るよりも高いことを意味する。統計的有意性は、当分野で公知の任意の方法によって決定することができる。一般的に使用される有意性の測度には、少なくとも所定のデータ点ほど極端な結果が得られる確率を表すｐ値が含まれ、データ点の想定は偶然単独の結果であった。結果は、しばしば、０．０５以下のｐ値で高度に有意とみなされる。
本発明のコンテキストにおける「被験体」とは、好ましくは哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであることができるが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物を、真性糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の動物モデルを表す被験体として有利に使用することができる。被験体は雄または雌であることができる。被験体は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態に罹患していると以前に診断または同定されており、任意選択で、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の治療介入を既に受けた、または受けている者であることができる。あるいは、被験体は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態に罹患していると以前に診断されていない者であることもできる。たとえば、糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態の１つもしくは複数の危険因子を示す者、または糖尿病の危険因子を示さない被験体、または糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態について無症候性である被験体であることができる。また、被験体は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を患っている、またはそれを発生するリスクがある者であることもできる。
「ＴＮ」とは真陰性であり、病状の試験では、非疾患または正常の被験体を正しく分類することを意味する。
「ＴＰ」とは真陽性であり、病状の試験では、疾患の被験体を正しく分類することを意味する。
「伝統的な実験室危険因子」または「ＴＬＲＦ」とは、対象試料から単離したまたはそれに由来し、臨床研究室で現在評価されており、Ｓｔｅｒｎ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、フィンランド糖尿病リスクスコア、ＡＲＩＣ糖尿病、およびアルキメデスなどの伝統的な全体的リスク評価アルゴリズムで使用されているバイオマーカーに対応する。対象血液試料から一般的に試験される伝統的な実験室危険因子には、それだけには限定されないが、総コレステロール（ＣＨＯＬ）、ＬＤＬ（ＬＤＬ／ＬＤＬＣ）、ＨＤＬ（ＨＤＬ／ＨＤＬＣ）、ＶＬＤＬ（ＶＬＤＬＣ）、トリグリセリド（ＴＲＩＧ）、グルコース（それだけには限定されないが空腹時血漿グルコース（Ｇｌｕｃｏｓｅ）および経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）が含まれる）ならびにＨＢＡ１ｃ（ＨＢＡ１Ｃ）のレベルが含まれる。
ここでも、本発明の態様または実施形態がマーカッシュ群または他の代替物の群分けに関して本明細書中で説明されている場合、本発明には、全体として記載した群全体のみだけでなく、群のそれぞれの個々のメンバーおよび主群のすべての可能な部分群が包含され、また、群のメンバーのうちの１つまたは複数を欠く主群も包含される。また、本発明は、特許請求した発明における群のメンバーのうちの任意の１つまたは複数の明確な排除も想定する。
糖尿病性状態の定量的代用マーカー
一部の実施形態では、本発明は、糖尿病性状態を評価する方法を提供する。一部の実施形態では、糖尿病性状態の評価は、糖尿病性状態を、診断する、分類する、同定する、監視する、発生のリスクの尤度を決定する、度合（もしくは重度）を決定する、ならびに／またはその進行および／もしくは退行を評価することを含む。一部の実施形態では、糖尿病性状態は前糖尿病性状態である。一部の実施形態では、糖尿病性状態はインスリン耐性である。一部の実施形態では、糖尿病性状態は耐糖能異常である。（用語「耐糖能異常」は、本明細書中で「グルコース不耐性」と互換性があるように使用される。）一部の実施形態では、糖尿病性状態は空腹時高血糖である。一部の実施形態では、糖尿病性状態は前糖尿病である。一部の実施形態では、糖尿病性状態は糖尿病の一形態である。
一部の実施形態では、本発明は、糖尿病、２型糖尿病、インスリン耐性、耐糖能異常、空腹時高血糖、前糖尿病、代謝症候群、肝脂肪症、インスリン感受性、高インスリン血症、肝脂肪症、筋脂肪症、高脂血症、高コレステロール血症からなる群から選択される糖尿病性状態に罹患している患者を診断、分類、および／または監視するために使用できる試験方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、経口グルコース不耐性、インスリン耐性、インスリン感受性、肝脂肪症、２型糖尿病、および妊娠糖尿病からなる群から選択される糖尿病性状態に罹患している患者を診断、分類、および／または監視するために使用できる試験方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、経口グルコース不耐性またはインスリン耐性である糖尿病性状態に罹患している患者を診断、分類、および／または監視するために使用できる試験方法を提供する。一部のさらなる実施形態では、本発明は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、小児ＮＡＳＨ、肥満症、小児期肥満症、代謝症候群、および多嚢胞性卵巣疾患からなる群から選択される糖尿病性状態に罹患している患者を診断、分類、および／または監視するために使用できる試験方法を提供する。
糖尿病ならびにその関連する併存症および状態は、脂質の代謝の変化が主因である。本発明者らは、体液中の特定の量の具体的な脂質代謝物が糖尿病性状態と相関していることを発見した。
一部の態様では、本発明は、経口グルコース不耐性の代謝マーカーを提供する。耐糖能異常および空腹時高血糖は、前糖尿病性状態であることが公知である（Ｌｉｎら、Ｔｏｈｏｋｕ Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２１２巻：３４９〜５７頁（２００７年））。経口耐糖能異常は、肥満の小児における非アルコール性脂肪肝疾患の予測子（Ｓａｒｔｏｒｉｏら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｎｕｔｒ．、６１巻：８７７〜８３頁（２００７年））ならびに非アルコール性脂肪肝疾患に罹患している患者における脂肪性肝炎（ｓｔｅａｔｏｈｅｐｔａｔｉｔｉｓ）および線維症の予測子（Ｈａｕｋｅｌａｎｄら、Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、４０巻：１４６９〜７７頁（２００５年））であるとして報告されている。また、妊娠糖尿病を検出するための経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）の使用も報告されている（Ｌａｐｏｌｌａら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． Ｍｅｔａｂ．、２００７年１２月１８日［印刷前の電子公開］）。さらに、経口グルコース不耐性およびインスリン感受性は多嚢胞性卵巣症候群と関連付けられている（Ａｍａｔｏら、Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． （Ｏｘｆ）、２００７年１１月２２日［印刷前の電子公開］）。
一部の実施形態では、本発明のマーカーは、糖尿病性状態を評価するための既存の試験（たとえば、空腹時血糖値または経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ））の代替として使用される。他の実施形態では、本発明のマーカーは、それだけには限定されないが空腹時血糖値またはＯＧＴＴを含めた別の方法を介して糖尿病性状態についてさらに試験するために被験体を同定または選択する試験で使用される。
本発明の診断的および予後的な適応症
本発明は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の改善された診断および予後診断を提供する。糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を発生するリスクは、被験体からの試験試料中の、それだけには限定されないがタンパク質、核酸、多型、脂質代謝物、および他の分析物などを含めた様々なバイオマーカーを測定し、複数の個体バイオマーカーおよび非分析物臨床パラメータからの結果からの情報を単一の測定値または指標へと合わせる数学アルゴリズムまたは式をしばしば利用して、測定された値を参照または指標値と比較することによって、事前に決定されたレベルの予測性で検出することができる。増加した糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態のリスクを有するとして同定された被験体は、任意選択で、本明細書中に定義した「糖尿病調節剤」などの予防的もしくは治療的化合物の投与、または糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態の発症を予防するもしくは遅延させるための運動レジメンの実装もしくは栄養補助食品などの、治療レジメンを受けるように選択することができる。
バイオマーカーの量は、試験試料中で測定し、すべてＶａｓａｎ、２００６年に記載のように、糖尿病、前糖尿病、および前糖尿病性状態のカットオフ点および異常値を定義するための参照限界、識別限界、またはリスク定義閾値などの技法を利用して、「正常な対照レベル」と比較することができる。正常な対照レベルとは、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を患っていない被験体中で典型的に見つかる、１つもしくは複数のバイオマーカーのレベルまたは合わせたバイオマーカー指標を意味する。そのような正常な対照レベルおよびカットオフ点は、バイオマーカーが単独で、または他のバイオマーカーを指標内に組み合わせる式中で使用されるかどうかに基づいて変動し得る。あるいは、正常な対照レベルは、臨床的に意味のある時間的対象期間の間に糖尿病へと転換しなかった、以前に試験した被験体からのバイオマーカーのパターンのデータベースであることができる。
本発明は、２型糖尿病への転換のリスクの連続的または分類別の測定を行い、したがって前糖尿病性として定義された被験体の分類のリスク範囲を診断および定義するために使用し得る。分類別のシナリオでは、本発明の方法は、正常および前糖尿病の被験体コホートを識別するために使用することができる。他の実施形態では、本発明は、前糖尿病を糖尿病から、または糖尿病を正常から識別するために使用し得る。そのような様々な使用は、個体パネル、数学アルゴリズム、および／またはカットオフ点において異なるバイオマーカーの組合せを必要とし得るが、意図する使用のために同じ前述の精度測定の対象となり得る。
前糖尿病性被験体の同定は、その被験体が明白な糖尿病状態へと転換することを遅延させる、低下するまたは予防するための、様々な治療介入または治療レジメンの選択および開始を可能にする。また、有効量のバイオマーカーのレベルは、糖尿病、前糖尿病または前糖尿病性状態の処置過程が監視されることも可能にする。本方法では、生物学的試料は、糖尿病の治療レジメンまたは治療介入、たとえば薬物処置を受けている被験体から提供することができる。そのような治療レジメンまたは治療介入には、それだけには限定されないが、運動レジメン、食事の改変、栄養補給、肥満外科的処置、薬物の投与、および糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態が診断または同定された被験体において使用される治療剤または予防剤を用いた処置が含まれることができる。所望する場合は、生物学的試料は、処置の前、その間、またはその後の様々な時点で被験体から得られる。
また、本発明は、任意の数の設定において患者または被験体の集団をスクリーニングするためにも使用することができる。たとえば、健康維持機構、公衆衛生団体または学校保健プログラムが、上述の介入を必要とする者を同定するため、または疫学的データを収集するために、被験体群をスクリーニングすることができる。保険会社（たとえば、健康、生命、または身体障害）は、申請者を補償範囲もしくは価格設定の決定プロセスにおいて、または既存の顧客を潜在的な介入についてスクリーニングし得る。そのような集団スクリーニングで収集されたデータは、特に糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態などの状態への任意の臨床的進行と関係している場合に、たとえば、健康維持機構、公衆衛生プログラムおよび保険会社の運営において価値があるであろう。そのようなデータのアレイまたはコレクションは、機械読取可能媒体中に記憶させ、任意の数の健康関連データ管理システムで使用して、改善された医療サービス、対費用効果の高い医療、改善された保険運営などを提供することができる。たとえば、米国特許出願、米国特許出願第２００２／００３８２２７号、米国特許出願ＵＳ２００４／０１２２２９６号、米国特許出願ＵＳ２００４／０１２２２９７号、および米国特許第５，０１８，０６７号を参照されたい。そのようなシステムは、本明細書中にさらに詳述するように、データを内部データ記憶から直接、または１つもしくは複数のデータ記憶サイトから遠隔でアクセスすることができる。したがって、被験体または集団が糖尿病性状態を発生するリスクが、糖尿病の危険因子を分析することを含む、健康関連データ管理システムでは、本発明は、本明細書中に定義したバイオマーカー測定値および／またはこれらのバイオマーカー測定値から生じるリスクの評価を包含するデータアレイの使用を含む改善を提供する。
機械読取可能記憶媒体は、当該データを使用するための命令をプログラミングした機械を使用した場合に、それだけには限定されないが、経時的なまたは糖尿病調節薬物療法に応答した糖尿病の危険因子に関する被験体情報、創薬などの、様々な目的での使用が可能な、機械読取可能なデータまたはデータアレイをコードしたデータ記憶材料を含むことができる。有効量の本発明のバイオマーカーの測定値および／またはこれらのバイオマーカーから生じるリスクの評価は、とりわけプロセッサ、データ記憶システム（揮発性および不揮発性のメモリおよび／または記憶素子が含まれる）、少なくとも１つの入力装置、ならびに少なくとも１つの出力装置を含む、プログラマブルコンピュータ上で実行されるコンピュータプログラムで実装することができる。プログラムコードを入力データに適用して、上述のファンクションを行って出力情報を生成させることができる。出力情報は、当分野で公知の方法に従って、１つまたは複数の出力装置に適用することができる。コンピュータは、たとえば、慣用の設計のパーソナルコンピュータ、マイクロコンピュータ、またはワークステーションであり得る。
それぞれのプログラムは、コンピュータシステムと通信するために高レベルの手続き型またはオブジェクト指向のプログラム言語で実装することができる。しかし、プログラムは、所望する場合はアセンブリまたは機械言語で実装することができる。言語はコンパイル済または解釈言語であることができる。それぞれのそのようなコンピュータプログラムは、本明細書中に記載の手順を行うために記憶媒体または装置がコンピュータによって読み取られる場合にコンピュータを構成および操作するための、一般または特殊目的のプログラマブルコンピュータによって読取可能な記憶媒体または装置（たとえば、ＲＯＭもしくは磁気ディスケットまたは本開示中の他の箇所に定義された他のもの）に記憶することができる。また、本発明の健康関連データ管理システムは、コンピュータプログラムを用いて構成されたコンピュータ読取可能記憶媒体として実装されることを検討してよく、その場合、そのように構成された記憶媒体は、コンピュータが具体的かつ事前に定義された様式で作動して本明細書中に記載の様々なファンクションを行うことを引き起こす。その後、有効量のバイオマーカーのレベルを決定し、参照値、たとえば、その糖尿病性状態が知られている対照被験体もしくは集団または指標値もしくはベースライン値と比較することができる。参照試料または指標値もしくはベースライン値は、処置に曝露された１人もしくは複数人の被験体からとるもしくは導き得る、または糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態を発生するリスクが低い１人もしくは複数人の被験体からとるもしくは導き得る、または処置への曝露の結果、糖尿病の危険因子（本明細書中に定義した臨床パラメータもしくは伝統的な実験室危険因子など）の改善を示した被験体からとるもしくは導き得る。あるいは、参照試料または指標値もしくはベースライン値は、処置に曝露されていない１人または複数人の被験体からとるまたは導き得る。たとえば、試料は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の初期処置を受け、処置の進行を監視するために糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の続く処置を受けた被験体から採取し得る。また、参照値は、本明細書中に開示したものなどの集団研究からのリスク予測アルゴリズムから導いた値または計算された指標も含むことができる。
図６は、特許請求した方法のステップおよび装置のシステムを実装し得る適切な計算システム環境１００の一例を例示する。計算システム環境１００は、適切な計算環境の一例にすぎず、特許請求の範囲の装置の方法の使用または機能性の範囲に関していかなる限定も示唆することを意図しない。また、計算環境１００は、例示的なオペレーティング環境１００中に例示した構成要素のうちの任意の１つまたは組合せに関していかなる依存性または要件も有すると解釈されるべきでない。
特許請求した方法のステップおよびシステムは、数々の他の一般目的または特殊目的の計算システム環境またはコンフィギュレーションで作動可能である。特許請求の範囲の方法またはシステムでの使用に適切であり得る周知の計算システム、環境、および／またはコンフィギュレーションの例には、それだけには限定されないが、パーソナルコンピュータ、サーバーコンピュータ、ハンドヘルドまたはラップトップ装置、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサに基づいたシステム、セットトップボックス、プログラマブル大衆消費電子製品、ネットワークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、本開示の他の箇所に記載されているシステム、環境、コンフィギュレーションおよび手段を含めた上記システムまたは装置などのうちの任意のものが含まれる分散形計算環境が含まれる。
特許請求した方法のステップおよびシステムは、コンピュータによって実行されるプログラムモジュールなどのコンピュータ実行可能命令の一般的コンテキストで説明し得る。一般に、プログラムモジュールには、特定のタスクを行うまたは特定の抽象データ型を実装する、ルーチン、プログラム、オブジェクト、構成要素、データ構造などが含まれる。また、方法および装置は、タスクが通信ネットワークを介してリンクされている遠隔処理装置によって行われる、分散形計算環境で実施してもよい。統合および分散形計算環境のどちらにおいても、プログラムモジュールは、メモリ記憶装置を含めたローカルおよび遠隔のコンピュータ記憶媒体のどちらにも設置されていてよい。
図６を参照して、特許請求した方法のステップおよびシステムを実装するための例示的なシステムには、コンピュータ１１０の形態の一般目的の計算装置が含まれる。コンピュータ１１０の構成要素には、それだけには限定されないが、処理装置１２０、システムメモリ１３０、およびシステムメモリを含めた様々なシステム構成要素を処理装置１２０に連結させるシステムバス１２１が含まれ得る。システムバス１２１は、メモリバスまたはメモリ制御装置、周辺バス、および様々なバスアーキテクチャのうちの任意のものを使用したローカルバスを含めた数種類のバス構造のうちの任意のものであり得る。例として、かつそれだけには限定されないが、そのようなアーキテクチャには、産業標準アーキテクチャ（ＩＳＡ）バス、マイクロチャネルアーキテクチャ（ＭＣＡ）バス、拡張ＩＳＡ（ＥＩＳＡ）バス、ビデオ電子装置標準規格化協会（ＶＥＳＡ）ローカルバス、およびメザニンバスとしても公知の周辺装置相互接続（ＰＣＩ）バスが含まれる。
コンピュータ１１０には、典型的には様々なコンピュータ読取可能媒体が含まれる。コンピュータ読取可能媒体は、コンピュータ１１０によってアクセスすることができる任意の利用可能な媒体であることができ、揮発性および不揮発性の媒体、取り外し可能および取り外し不可能な媒体の両方が含まれる。例として、かつそれだけには限定されないが、コンピュータ読取可能媒体は、コンピュータ記憶媒体および通信媒体を含み得る。コンピュータ記憶媒体には、コンピュータ読取可能命令、データ構造、プログラムモジュールまたは他のデータなどの情報を記憶するための任意の方法または技術で実装された、揮発性および不揮発性の取り外し可能および取り外し不可能な媒体の両方が含まれる。コンピュータ記憶媒体には、それだけには限定されないが、ＲＡＭ、ＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、フラッシュメモリもしくは他のメモリ技術、ＣＤ−ＲＯＭ、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）もしくは他の光学ディスク記憶、磁気カセット、磁気テープ、磁気ディスク記憶もしくは他の磁気記憶装置、または所望の情報を記憶するために使用することができ、コンピュータ１１０によってアクセスすることができる任意の他の媒体が含まれる。通信媒体は、典型的には、コンピュータ読取可能命令、データ構造、プログラムモジュールまたは搬送波もしくは他の移送機構などの変調データ信号中の他のデータを具現化し、任意の情報送達媒体が含まれる。用語「変調データ信号」とは、その特徴のうちの１つまたは複数が信号中に情報をコードするような様式で設定または変化された信号を意味する。例として、かつそれだけには限定されないが、通信媒体には、配線式ネットワークまたは直接配線式接続などの配線式媒体、ならびに音響、ＲＦ、赤外線および他の無線媒体などの無線媒体が含まれる。また、上記のうちの任意のものの組合せも、コンピュータ読取可能媒体の範囲内に含まれるべきである。
システムメモリ１３０には、読取り専用メモリ（ＲＯＭ）１３１およびランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）１３２などの揮発性および／または不揮発性メモリの形態のコンピュータ記憶媒体が含まれる。起動中などに、コンピュータ１１０内で素子間の情報の転送を助ける基本ルーチンを含有する基本入出力システム１３３（ＢＩＯＳ）は、ＲＯＭ１３１に記憶されている。ＲＡＭ１３２は、典型的には、処理装置１２０がすぐにアクセス可能および／または現在それによって作動されているデータおよび／またはプログラムモジュールを含有する。例として、かつそれだけには限定されないが、図６は、オペレーティングシステム１３４、アプリケーションプログラム１３５、他のプログラムモジュール１３６、およびプログラムデータ１３７を例示する。
また、コンピュータ１１０には、他の取り外し可能／取り外し不可能な揮発性／不揮発性のコンピュータ記憶媒体も含まれ得る。例のみとして、図６は、取り外し不可能な不揮発性の磁気媒体から読み取るまたはそれに書き込むハードディスクドライブ１４０、取り外し可能な不揮発性の磁気ディスク１５２から読み取るまたはそれに書き込む磁気ディスクドライブ１５１、およびＣＤ ＲＯＭまたは他の光学的媒体などの取り外し可能な不揮発性光学ディスク１５６から読み取るまたはそれに書き込む光学ディスクドライブ１５５を例示する。例示的なオペレーティング環境で使用することができる他の取り外し可能／取り外し不可能な揮発性／不揮発性のコンピュータ記憶媒体には、それだけには限定されないが、磁気テープカセット、フラッシュメモリカード、デジタル多用途ディスク、デジタルビデオテープ、固体ＲＡＭ、固体ＲＯＭなどが含まれる。ハードディスクドライブ１４１は、典型的にはインターフェイス１４０などの取り外し不可能メモリインターフェイスを介してシステムバス１２１に接続されており、磁気ディスクドライブ１５１および光学ディスクドライブ１５５は、典型的にはインターフェイス１５０などの取り外し可能メモリインターフェイスによってシステムバス１２１に接続されている。
上述し、図６に例示したドライブおよびその関連するコンピュータ記憶媒体は、コンピュータ１１０のコンピュータ読取可能命令、データ構造、プログラムモジュールおよび他のデータの記憶を提供する。たとえば、図６では、ハードディスクドライブ１４１は、オペレーティングシステム１４４、アプリケーションプログラム１４５、他のプログラムモジュール１４６、およびプログラムデータ１４７を記憶するとして例示されている。これらの構成要素は、オペレーティングシステム１３４、アプリケーションプログラム１３５、他のプログラムモジュール１３６、およびプログラムデータ１３７と同じまたは異なることができることに注意されたい。オペレーティングシステム１４４、アプリケーションプログラム１４５、他のプログラムモジュール１４６、およびプログラムデータ１４７は、最低限でもこれらが異なるコピーであることを例示するために、異なる番号を与える。ユーザは、キーボード１６２および一般的にマウス、トラックボールまたはタッチパッドと呼ばれるポインティングデバイス１６１などの入力装置を介して指令および情報をコンピュータ２０内に入力し得る。他の入力装置（示さず）には、マイクロフォン、ジョイスティック、ゲームパッド、衛星放送受信アンテナ、スキャナーなどが含まれ得る。これらおよび他の入力装置は、しばしばシステムバスに連結されているユーザ入力インターフェイス１６０を介して処理装置１２０に接続されているが、パラレルポート、ゲームポートまたはユニバーサルシリアルバス（ＵＳＢ）などの他のインターフェイスおよびバス構造によって接続されていてもよい。また、モニタ１９１または他の種類の表示装置も、ビデオインターフェイス１９０などのインターフェイスを介してシステムバス１２１に接続されている。また、モニタに加えて、コンピュータには、出力周辺インターフェイス１９０を介して接続されていてもよいスピーカー１９７およびプリンター１９６などの他の周辺出力装置も含まれ得る。
したがって、本発明のバイオマーカーを使用して、糖尿病、前糖尿病、または耐糖能異常などの前糖尿病性状態に罹患しておらず、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を発生することが予想されない被験体の「参照バイオマーカープロファイル」を作成することができる。また、本明細書中に開示したバイオマーカーを使用して、糖尿病、前糖尿病、または耐糖能異常などの前糖尿病性状態に罹患している被験体からとった「被験体バイオマーカープロファイル」を作成することもできる。被験体バイオマーカープロファイルを参照バイオマーカープロファイルと比較して、糖尿病、前糖尿病または前糖尿病性状態を発生するリスクがある被験体を診断または同定する、疾患の進行および疾患の進行速度を監視する、および糖尿病、前糖尿病または前糖尿病性状態の処置モダリティーの有効性を監視することができる。本発明の参照および被験体のバイオマーカープロファイルは、それだけには限定されないが、とりわけＶＣＲによって読取可能なものなどのアナログテープ、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、ＵＳＢフラッシュ媒体等の、機械読取可能媒体中に含有させることができる。また、そのような機械読取可能媒体は、それだけには限定されないが、臨床パラメータおよび伝統的な実験室危険因子の測定値などの、追加の試験結果も含有することができる。あるいはまたはそれに加えて、機械読取可能媒体は、病歴および任意の関連する家族歴などの被験体情報も含むことができる。また、機械読取可能媒体は、本明細書中に記載のものなどの他の糖尿病リスクのアルゴリズムおよび計算された指標に関する情報も含有することができる。
被験体の遺伝子構造の差異は、糖尿病、前糖尿病または前糖尿病性状態の症状または危険因子を調節し得る様々な薬物を代謝するその相対的能力の差異をもたらす場合がある。糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態に罹患している、または糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態を発生するリスクがある被験体は、年齢、民族、体型指数（ＢＭＩ）、総コレステロールレベル、血糖値、血圧、ＬＤＬおよびＨＤＬレベル、ならびに他のパラメータが様々な場合がある。したがって、本明細書中に開示したバイオマーカーの使用は、単独でおよび薬物代謝の公知の遺伝因子と一緒に組み合わせて、選択された被験体において試験する推定上の治療剤または予防剤が被験体における糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の処置または予防に適切であるという、事前に決定されたレベルの予測性を可能にする。
また、特定の被験体に適した治療剤または薬物を同定するために、被験体からの試験試料を治療剤または薬物に曝露させ、１つまたは複数のバイオマーカーのレベルを決定することもできる。１つまたは複数のバイオマーカーのレベルは、治療剤もしくは薬物の処置もしくは曝露の前および後に被験体に由来する試料と比較することができるか、または、そのような処置もしくは曝露の結果として糖尿病もしくは前糖尿病の危険因子（たとえば、臨床パラメータもしくは伝統的な実験室危険因子）の改善を示した１人もしくは複数人の被験体に由来する試料と比較することができる。
糖尿病、前糖尿病、前糖尿病性状態、または糖尿病性合併症のリスクを低下させる薬剤には、それだけには限定されないが、インスリン、血糖降下剤、抗炎症剤、脂質低下剤、カルシウムチャネル遮断剤などの降圧剤、ベータ−アドレナリン作動性受容体遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、アンジオテンシン系阻害剤、ＡＣＥ阻害剤、レンニン阻害剤が、他の一般的な危険因子調節剤（本明細書中で「糖尿病調節薬物」）と共に含まれる。
用語「インスリン（ｉｎｓｕｌｉｎ、ＩＮＳ）」には、成熟インスリン（ＩＮＳＵＬＩＮ−Ｍ）、プロインスリン（ｐｒｏ−ｉｎｓｕｌｉｎ）および可溶性ｃ−ペプチド（ＳＣｐ）が含まれる。「インスリン」には、速効型、たとえば、インスリンリスプロｒＤＮＡ起源：ＨＵＭＡＬＯＧ（１．５ｍＬ、１０ｍＬ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、インディアナ州Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）、インスリン注射（レギュラーインスリン）用牛肉および豚肉（レギュラーＩＬＥＴＩＮ Ｉ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ］、ヒト：ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ Ｒ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＮＯＶＯＬＩＮ Ｒ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、ニューヨーク州Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、半合成：ＶＥＬＯＳＵＬＩＮヒト（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ｒＤＮＡヒト、緩衝化：ＶＥＬＯＳＵＬＩＮ ＢＲ、豚肉：レギュラーインスリン（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、精製豚肉：豚肉レギュラーＩＬＥＴＩＮ ＩＩ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、レギュラー精製豚肉インスリン（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびレギュラー（濃縮）ＩＬＥＴＩＮ ＩＩ Ｕ−５００（５００単位／ｍＬ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）；中間型、たとえば、インスリン亜鉛懸濁液、牛肉および豚肉：ＬＥＮＴＥ ＩＬＥＴＩＮ Ｇ Ｉ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ヒト、ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ Ｌ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＮＯＶＯＬＩＮ Ｌ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、精製豚肉：ＬＥＮＴＥ ＩＬＥＴＩＮ ＩＩ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、イソフェンインスリン懸濁液（ＮＰＨ）：牛肉および豚肉：ＮＰＨ ＩＬＥＴＩＮ Ｉ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ヒト、ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ Ｎ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｎｏｖｏｌｉｎ Ｎ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、精製豚肉：豚肉ＮＰＨ ＩＬＥＴＩＮ ＩＩ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＮＰＨ−Ｎ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）；ならびに持続型、たとえば、インスリン亜鉛懸濁液、延長（ＵＬＴＲＡＬＥＮＴＥ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ヒト、ｒＤＮＡ：ＨＵＭＵＬＩＮ Ｕ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）が含まれる。
被験体細胞（すなわち被験体から単離した細胞）を候補剤の存在下でインキュベーションし、試験試料中のバイオマーカー発現のパターンを測定し、参照プロファイル、たとえば、糖尿病参照発現プロファイルもしくは非糖尿病参照発現プロファイルまたは指標値もしくはベースライン値と比較することができる。試験剤は、任意の化合物もしくは組成物またはその組合せであることができる。たとえば、試験剤とは、糖尿病の治療レジメンにおいて頻繁に使用される薬剤であり、本明細書中に記載されている。
さらに、前述の方法のうちの任意のものを別々にまたは組み合わせて使用して、被験体が「糖尿病の危険因子の改善」を示したかどうか、または前糖尿病のリスク範囲内で移動したかどうかを評価することができる。そのような改善には、それだけには限定されないが、体型指数（ＢＭＩ）の低下、血糖値の低下、ＨＤＬレベルの増加、収縮期および／もしくは拡張期血圧の低下、インスリンレベルの増加、またはその組合せが含まれる。
糖尿病または前糖尿病性状態を患っているまたはそれを発生するリスクがある被験体は、動脈血管疾患、高血圧、または肥満症も患っているまたはそれも発生するリスクがあり得る。特に２型糖尿病および動脈血管疾患は多くの危険因子を共有しており、これらの危険因子の多くは互いに高度に相関している。これらの危険因子間の関係性は、少数の生理的現象、場合によっては単一の現象に起因している場合さえあり得る。糖尿病、動脈血管疾患、高血圧または肥満症を患っているまたはそれを発生するリスクがある被験体は、当分野で公知の方法によって同定される。
糖尿病と動脈血管疾患との間の相互関係が原因で、本発明の個体バイオマーカーおよびバイオマーカーパネルの一部またはすべては、重複するまたは動脈血管疾患のバイオマーカーによって包含される場合があり、実際に、動脈血管疾患のリスクの診断に有用であり得る。
糖尿病性状態の代替としてのモル百分率脂肪酸組成
トリグリセリド（または任意の他の脂質クラス）の相対的割合である脂質代謝物は、血清または血漿などの体液中で、肝性トリグリセリド（または他の脂質クラス）中のその脂質代謝物の相対的割合の定量的測度として測定することができる。この脂質代謝物（または脂質代謝物のコレクション）の相対的割合がインスリン耐性と相関する場合は、これはインスリン耐性の定量代替法として役割を果たす。したがって、特定の脂質クラス内の特定の脂肪酸のモル百分率をインスリン耐性の定量代替法として使用し得る。
一実施形態では、単一の脂質代謝物のモル百分率を本発明の方法で使用し得る。他の実施形態では、２つ以上の脂質代謝物、たとえば、２、３、４、５、１０、１５、２０個、またはそれより多くの脂質代謝物のモル百分率を本発明の方法で使用し得る。
本発明によれば、２つ以上の脂質代謝物によって与えられる効果を分析する場合は、たとえば様々な数式またはモデルを使用してそれぞれの脂質代謝物の効果を定量することによって、これらの脂質代謝物の効果を個々に評価するか、またはこれらの脂質代謝物の正味効果を得ることができる。１つまたは複数の脂質代謝物のレベルを変数として含有する式には、１つまたは複数の脂質代謝物の値を変数として使用した数学的もしくは統計的な原理または方法に基づいて確立した、任意の数式、モデル、方程式、または式が含まれる。本明細書中に記載のように、数式またはモデルを使用して、タンパク質バイオマーカーおよび／または他の要因と組み合わせた脂質代謝の効果を評価および重み付けることができる。
一般に、被験体の糖尿病性状態を投影することに関して、任意の適切な数学的分析を使用して、２つ以上の脂質代謝物（またはタンパク質バイオマーカーもしくは他の要因と組み合わせた１つもしくは複数の脂質代謝物）の正味効果を分析することができる。たとえば、多変量分散分析、多変量回帰、重回帰などの方法を使用して、従属変数および独立変数間の関係性を決定することができる。階層的および非階層的方法がどちらも含まれるクラスタリング、ならびに非計量的次元尺度法を使用して、変数間およびこれらの変数中の変化間の関連性を決定することができる。
さらに、主成分分析は、研究の次元を縮小させる一般的な方法であり、データセットの分散−共分散構造を解釈するために使用することができる。主成分は、重回帰およびクラスター分析などの応用に使用され得る。因子分析は、「隠れた」変数を観測変数から構築することによって共分散を説明するために使用される。因子分析は主成分分析の延長であるとみなされる場合があり、主成分分析は、最大尤度方法と共にパラメータの推定として使用される。さらに、２つの平均のベクターの平等などの単純な仮説は、ホテリングのＴ二乗統計量を使用して試験することができる。
一実施形態では、１つまたは複数の脂質代謝物を（任意選択で１つまたは複数のタンパク質バイオマーカーまたは他の要因と組み合わせて）変数として含有する式は、回帰分析、たとえば多重直線回帰を使用することによって確立される。作成された式の例には、いかなる限定もされずに、以下が含まれる。
式Ｉ：ｋ＋ｋ１（ＦＡ１）＋ｋ２（ＦＡ２）＋ｋ３（ＦＡ３）
式ＩＩ：ｋ−ｋ１（ＦＡ１）＋ｋ２（ＦＡ２）＋ｋ３（ＦＡ３）
式ＩＩＩ：ｋ＋ｋ１（ＦＡ１）−ｋ２（ＦＡ２）＋ｋ３（ＦＡ３）
式ＩＶ：ｋ＋ｋ１（ＦＡ１）＋ｋ２（ＦＡ２）−ｋ３（ＦＡ３）
式Ｖ：ｋ−ｋ１（ＦＡ１）−ｋ２（ＦＡ２）＋ｋ３（ＦＡ３）
式ＶＩ：ｋ＋ｋ１（ＦＡ１）−ｋ２（ＦＡ２）−ｋ３（ＦＡ３）
式ＶＩＩ：ｋ−ｋ１（ＦＡ１）＋ｋ２（ＦＡ２）−ｋ３（ＦＡ３）
式ＶＩＩＩ：ｋ−ｋ１（ＦＡ１）−ｋ２（ＦＡ２）−ｋ３（ＦＡ３）
式は、１、２、３、４、５、１０、１５、２０個、またはそれより多くの脂質代謝物などの１つまたは複数の脂質代謝物を（任意選択で１つまたは複数のタンパク質バイオマーカーまたは他の要因と組み合わせて）変数として使用し得る。これらの式の定数は、既知の糖尿病性状態から得られたデータセットを使用することによって確立することができる。通常は、これらの式において使用される脂質代謝物のレベルは、ある時点でのレベルまたは一定期間にわたるレベルの変化のどちらかであることができる。
本発明によれば、脂質代謝物を使用して確立された数式を使用して、被験体の糖尿病性状態を一定期間にわたって定性的または定量的に評価することができる。たとえば、１つまたは複数の脂質代謝物を変数として有する式を使用して、被験体の糖尿病性状態を直接計算することができる。さらに、１つまたは複数の脂質代謝物を含有する式の正味値を、糖尿病性状態のパターンに対応するそのような式、たとえば糖尿病性状態の進行または退行の標準値と比較することができ、そのような比較の結果を使用して糖尿病性状態の発生を投影することができる。具体的には、糖尿病性状態の進行に割り当てられたまたはそれに関連する式の標準値に類似またはその範囲内にある、そのような式の正味値を有する被験体は、一定期間の間に進行を経験する可能性が高い。同様に、退行に割り当てられたまたはそれに関連する式の標準値に類似またはそのような範囲内にある、そのような式の正味値を有する被験体は、一定期間の間に糖尿病性状態の退行を経験する可能性が高い。
糖尿病性状態の追加の定量代替法
モル百分率以外の脂質代謝物のモデルを糖尿病性状態の代用マーカーとして使用し得る。たとえば、追加のバイオマーカーのリスト、たとえばエイコサノイドを参照されたい。糖尿病性状態のための脂質代謝物および追加のバイオマーカー
一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質代謝物を、糖尿病性状態を評価するための代謝物マーカーとして使用する。一部の他の実施形態では、使用する代謝物マーカーは、脂質代謝物および追加のバイオマーカーをどちらも含む。
一実施形態では、脂質代謝物には、特定の脂質クラス内に存在する脂肪酸が含まれる。一実施形態では、脂質クラスは、中性脂肪、リン脂質、遊離脂肪酸、全脂肪酸、トリグリセリド、コレステロールエステル、ホスファチジルコリン、およびホスファチジルエタノールアミンからなる群から選択される。一実施形態では、脂質クラスは遊離脂肪酸である。一実施形態では、脂質クラスは全脂肪酸である。一実施形態では、脂質クラスはトリグリセリドである。一実施形態では、脂質クラスはコレステロールエステルである。一実施形態では、脂質クラスはホスファチジルコリンである。一実施形態では、脂質クラスはホスファチジルエタノールアミンである。一実施形態では、脂質代謝物は、表３に示す脂肪酸から選択される。この方法は、２、３、４、５、１０、１５、２０個、またはそれより多くの脂質代謝物などの、複数の脂質代謝物の量を測定することを含み得る。一実施形態では、表３中の２つ以上の脂質代謝物を測定する。一実施形態では、表３中の３つ以上の脂質代謝物を測定する。
一実施形態では、脂質代謝物は糖尿病性状態と正に相関している。一実施形態では、脂質代謝物は糖尿病性状態と負に相関している。一実施形態では、脂質代謝物は、その特定の脂質クラス内の相対量として測定する。一実施形態では、脂質代謝物は、血液、血漿、血清、またはリポタンパク質画分などの血液系の体液中で測定する。
表３． 糖尿病性状態の血液系の脂質代謝物マーカー
Figure 2015052617
Figure 2015052617
一部の実施形態では、糖尿病性状態（複数可）のマーカー（複数可）は、ＣＥ１６：１ｎ７、ＣＥ２０：３ｎ６、ＣＥ１８：２ｎ６、ＣＥ１６：０、ＣＥ１８：１ｎ９、ＬＹ１８：２ｎ６、ＬＹ１８：１ｎ７およびＬＹ１８：１ｎ９からなる群から選択される１個または複数個、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、または６個以上のマーカーを含む。
以下の追加のバイオマーカーが糖尿病性状態の診断を援助し得る：（１）マロニル−ＣｏＡおよびマロニルカルニチン、（２）遊離カルニチンおよび表４に記載のアシルカルニチン、ならびに（３）表５に記載のステロールおよび胆汁酸。体液および細胞の試料を使用してこれらの追加のバイオマーカーを測定し得る。細胞試料の例には、それだけには限定されないが、リンパ球およびマクロファージが含まれる。
表４． アシルカルニチン代謝物のリスト
Figure 2015052617
表５． 胆汁酸およびステロール代謝物のリスト
Figure 2015052617
さらに、以下の追加のバイオマーカーが糖尿病性状態の診断を援助し得る：（１）表５に記載のステロールおよび胆汁酸（増加したコレステロール合成に伴ってレベルが増加している）、（２）それだけには限定されないが表６に示したものを含めたエイコサノイド、ならびに／または（３）それだけには限定されないが、ＴＮＦα、ＩＬ−６、レプチン、アディポネクチンを含めたサイトカインおよびケモカイン。体液および細胞の試料を使用して追加のマーカーを測定し得る。細胞試料の例には、それだけには限定されないが、リンパ球およびマクロファージが含まれる。
表６． エイコサノイド代謝物のリスト
Figure 2015052617
脂質代謝物の測定値に加えて、これらの追加のバイオマーカーのうちの１つまたは複数の量の測定値を本発明の方法で使用し得る。一実施形態では、バイオマーカーのうちの１つの量を被験体からの試料中で測定する。一実施形態では、バイオマーカーのうちの２つの量を被験体からの試料中で測定する。他の実施形態では、バイオマーカーのうちの３、４、５、６、７、８、１０、１２、１５、２０個、またはそれより多くを被験体からの試料中で測定し得る。
経口グルコース不耐性に関連する選択されたマーカーの診断的カットオフ値：
前糖尿病および他の糖尿病関連状態の診断に効用を提供すると予想されるＡＣ６：０の濃度は、１グラムの血漿または血清あたり０．４４〜０．７０ｎモルである。より高い値は、より明白な糖尿病性状態または増加したリスクに関連している。
前糖尿病および他の糖尿病関連状態の診断に効用を提供すると予想されるＡＣ８：０の濃度は、１グラムの血漿または血清あたり０．１１９〜０．２６０ｎモルである。より高い値は、より明白な糖尿病性状態または増加したリスクに関連している。
前糖尿病および他の糖尿病関連状態の診断に効用を提供すると予想されるＡＣ１０：０の濃度は、１グラムの血漿または血清あたり０．１２３〜０．３１５ｎモルである。より高い値は、より明白な糖尿病性状態または増加したリスクに関連している。
前糖尿病および他の糖尿病関連状態の診断に効用を提供すると予想されるＰＥ２０：４ｎ６の濃度は、血漿または血清中に２１．３０〜２４．１５モルパーセントの全ホスファチジルエタノールアミン脂肪酸組成物である。より高い値は、より明白な糖尿病性状態または増加したリスクに関連している。
前糖尿病および他の糖尿病関連状態の診断に効用を提供すると予想されるＰＣ１８：０の濃度は、血漿または血清中に１２．４０〜１４．２０モルパーセントの全ホスファチジルコリン脂肪酸組成物である。より高い値は、より明白な糖尿病性状態または増加したリスクに関連している。
前糖尿病および他の糖尿病関連状態の診断に効用を提供すると予想されるＴＧ１４：０の濃度は、血漿または血清中に０．０７〜０．０４モルパーセントの全トリグリセリド脂肪酸組成物である。より高い値は、より明白な糖尿病性状態または増加したリスクに関連している。
診断および監視の方法
本発明の方法を使用して、特定の状態、たとえば、糖尿病、２型糖尿病、インスリン耐性、耐糖能異常、空腹時高血糖、前糖尿病、代謝症候群、肝脂肪症、インスリン感受性、高インスリン血症、肝脂肪症、筋脂肪症、高脂血症、高コレステロール血症を診断し得る。また、本方法を使用して、糖尿病性状態の重度を評価する、糖尿病性状態を監視する、糖尿病性状態の進行もしくは退行を評価する、および／または治療に対する応答を監視し得る。
たとえば、診断方法は、被験体の体液からの試料において、１つまたは複数の脂質クラスの脂質の全脂肪酸含量に対する１つまたは複数の脂肪酸の相対量を決定し、その量を糖尿病性状態の存在と相関させることを含み得る。一部の実施形態では、本方法は、相対量を参照と比較するステップをさらに含んでいてよく、相対量が参照よりも多い場合に、糖尿病、２型糖尿病、インスリン耐性、耐糖能異常、空腹時高血糖、前糖尿病、代謝症候群、肝脂肪症、インスリン感受性、高インスリン血症、肝脂肪症、筋脂肪症、高脂血症、高コレステロール血症が示される。一部の実施形態では、本方法は、相対量を参照と比較するステップをさらに含んでいてよく、相対量が参照よりも少ない場合に、糖尿病、２型糖尿病、インスリン耐性、耐糖能異常、空腹時高血糖、前糖尿病、代謝症候群、肝脂肪症、インスリン感受性、高インスリン血症、肝脂肪症、筋脂肪症、高脂血症、高コレステロール血症が示される。
同様に、糖尿病性状態の重度を測定してよく、相対量が糖尿病性状態の重度を示す。さらに、相対量は状態の現状を示し、したがって、糖尿病性状態を監視し得るおよび／または状態の進行もしくは退行を評価し得る。相対量は２つ以上の時点で測定し得る。一部の実施形態では、相対量は、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１５、２０個、またはそれより多くの時点で測定し得る。それぞれの時点は、１単位または複数単位の時間、日、週、月によって離れていてよい。相対量を複数の時点で測定することによって、臨床家が被験体の処置に対する応答を評価し得る。
脂質代謝物およびバイオマーカーの測定方法
脂質代謝物含量のアッセイを体液または組織の試料で行い得る。一実施形態では、アッセイは、全血、血漿、血清、または単離したリポタンパク質画分で行い得る。追加のバイオマーカーのアッセイは、体液または細胞の試料で行い得る。これらの脂質代謝物および他のバイオマーカーは、それだけには限定されないが、質量分析（ＭＳ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、均一濃度ＨＰＬＣ、勾配ＨＰＬＣ、順相クロマトグラフィー、逆相ＨＰＬＣ、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動、マイクロ流体工学、クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、固定金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、アフィニティークロマトグラフィー、免疫アッセイ、および／または比色アッセイを利用した方法を含めた、当業者に公知の方法によって容易に単離および／または定量し得る。一実施形態では、本発明の方法は、ＭＳを利用して脂質代謝物含量を決定する。一実施形態では、本発明の方法は、免疫アッセイを利用して脂質代謝物含量を決定する。一実施形態では、本発明の方法は、ＭＳを利用してバイオマーカーの濃度を決定する。一実施形態では、本発明の方法は、免疫アッセイを利用してバイオマーカーの濃度を決定する。
様々な分析方法が当業者に周知であり、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている以下の文書中にさらに記載されている。
質量分析：Ｃｙｒら、Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、２００６年２月１７日；８３２巻（１号）：２４〜９頁；Ｖｏｇｅｓｅｒら、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ．、２００３年２月；４１巻（２号）：１１７〜２６頁。
ＨＰＬＣ：Ｋｈａｌｉｌら、Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、２００６年５月２３日；Ｆｏｕａｓｓｉｅｒら、Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．、２００６年５月；４巻（５号）：１１３６〜９頁；Ｂａｄｉｏｕら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００４年；５０巻（３〜４号）：１５３〜８頁；Ｂｒｕｎｅｌｌｉら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００１年；４７巻（７〜８号）：３９３〜７頁。
キャピラリー電気泳動：Ｚｉｎｅｌｌｕら、Ｊ Ｓｅｐ Ｓｃｉ．、２００６年３月；２９巻（５号）：７０４〜８頁；Ｊａｂｅｅｎら、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．、２００６年５月２３日；Ｇａｏら、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．、２００６年５月；２７巻（９号）：１７８４〜９頁。
マイクロ流体工学：Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｅｎら、ＩＥＥＥ Ｔｒａｎｓ Ｎａｎｏｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．、２００２年３月；１巻（１号）：２９〜３６頁；Ｈｅｒｒｍａｎｎら、Ｌａｂ Ｃｈｉｐ．、２００６年４月；６巻（４号）：５５５〜６０頁；Ｙａｎｇら、ＡＳＡＩＯ Ｊ．、２００５年９月〜１０月；５１巻（５号）：５８５〜９０頁；Ｄｕｐｕｙら、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ．、２００５年；４３巻（１２号）：１２９１〜３０２頁。
クロマトグラフィー：Ｐａｔｅｒｓｏｎら、Ａｄｄｉｃｔｉｏｎ．、２００５年１２月；１００巻（１２号）：１８３２〜９頁；Ｂｏｔｔｃｈｅｒら、Ｊ Ａｎａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．、２００５年１１月〜１２月；２９巻（８号）：７６９〜７６頁；Ｊｕｌａｋ、Ｐｒａｇｕｅ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．、２００５年；１０６巻（２号）：１７５〜９４頁；Ｂｏｅｔｔｃｈｅｒら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２０００年；４６巻（１〜２号）：４９〜５２頁。
免疫アッセイ：Ｗｅｓｔｅｒｍａｎｎら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００２年；４８巻（１〜２号）：６１〜７１頁；Ａｏｙａｇｉら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００１年；４７巻（３〜４号）：１１９〜２７頁；Ｈｕｂｌら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００５年；５１巻（１１〜１２号）：６４１〜５頁；Ｈａｌｌｅｒら、Ｊ Ａｎａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．、２００６年３月；３０巻（２号）：１０６〜１１頁；Ｂａｙｅｒら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００５年；５１巻（９〜１０号）：４９５〜５０４頁；Ｇｒｏｃｈｅら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００３年；４９巻（１１〜１２号）：６５７〜６１頁；Ｉｖａｎら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００５年；５１巻（７〜８号）：３８１〜７頁。
比色（Ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ）アッセイ：Ｋｒａｍｅｒら、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ．、２００５年１１月；５１巻（１１号）：２１１０〜６頁；Ｇｒｏｃｈｅら、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００３年；４９巻（１１〜１２号）：６５７〜６１頁；Ｗｏｌｆ、Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ．、２００６年３月２４日。
また、ＴｒｕｅＭａｓｓ（登録商標）分析プラットフォームも本発明の方法に使用し得る。ＴｒｕｅＭａｓｓ（登録商標）とは、血清または血漿から、トリグリセリド、コレステロールエステルおよびリン脂質の代謝などの構造およびエネルギー脂質の代謝に関与している約４００個の個々の代謝物に関する定量的データを取得するために使用し得る分析プラットフォームである。構造およびエネルギー脂質は代謝の中心的成分であり、身体の事実上すべての生物学的プロセス内に組み込まれているため、このプラットフォームは疾患のプロファイリングに有用である。血漿または血清の試料のデータセットは、遊離コレステロールや、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、トリグリセリド、ジグリセリド、遊離脂肪酸、ならびにコレステロールエステル：１４：０、１５：０、１６：０、１８：０、２０：０、２２：０、２４：０、１４：１ｎ５、１６：１ｎ７、ｔ１６：１ｎ７、１８：１ｎ９、ｔ１８：１ｎ９、１８：１ｎ７、１８：２ｎ６、ｔ１８：２ｎ６、１８：３ｎ６、１８：３ｎ３、１８：４ｎ３、２０：１ｎ９、２０：２ｎ６、２０：３ｎ９、２０：３ｎ６、２０：４ｎ６、２０：３ｎ３、２０：４ｎ３、２０：５ｎ３、２２：１ｎ９、２２：２ｎ６、２２：４ｎ６、２２：５ｎ３、２２：６ｎ３、２４：１ｎ９、２４：６ｎ３および１６：０、１８：０、１８：１ｎ９や１８：１ｎ７のプラズマローゲン誘導体からの脂肪酸の定量的測定を含む。ＴｒｕｅＭａｓｓ（登録商標）を使用する方法は当業者に公知であり、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている以下の文書中にも記載されている：米国特許出願第１１／２９６，８２９号（１２／６／０５に出願、米国特許公開第２００６／００８４１２９号）；Ｍｕｔｃｈら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、２００５年４月；１９巻（６号）：５９９〜６０１頁；Ｓｔｏｎｅら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２００４年３月１９日；２７９巻（１２号）：１１７６７〜７６頁；Ｗａｔｋｉｎｓら、Ｊ Ｎｕｔｒ．、２００３年１１月；１３３巻（１１号）：３３８６〜９１頁；Ｗａｔｋｉｎｓら、Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、２００２年１１月；４３巻（１１号）：１８０９〜１７頁。
他の指示薬／試験と組み合わせた代謝物マーカーの使用
本発明は、本明細書中に記載の１つまたは複数の代謝物マーカーのレベルを測定することに加えて、１つもしくは複数のリスク指標を評価すること、グルコースレベルを測定すること、および／または糖尿病性状態の別の診断試験を行うことを任意選択で含む、糖尿病性状態を評価する方法をさらに提供する。糖尿病の様々なリスク指標が当業者に公知であり、それだけには限定されないが、年齢、体重、体型指数（ＢＭＩ）、家族歴（たとえば糖尿病に罹患している親戚）、病歴（たとえば妊娠糖尿病の病歴）、民族的背景、高血圧、コレステロールレベル、および活性レベルが含まれることができる。一部の実施形態では、グルコースレベルは空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）によって測定する。一部の代替実施形態では、グルコースレベルは経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）によって測定する。一部の実施形態では、本明細書中で使用する代謝物マーカーのうちの１つまたは複数を、血液中の糖化ヘモグロビン（ｈｅｍｏｇｏｂｌｉｎ）（たとえばＨｂＡ１ｃ）の試験と組み合わせて使用して、糖尿病性状態を評価する。
一部の実施形態では、本方法は、脂質代謝物などの１つまたは複数の代謝物マーカーの測定を含むことに加えて、（１）糖尿病性状態の１つもしくは複数の危険因子存在もしくは非存在を決定し、危険因子の存在もしくは非存在を、糖尿病性状態の存在、発生するリスク、もしくは重度と相関させること、および／または（２）追加のバイオマーカーのレベルを測定し、追加のバイオマーカーのレベルを、糖尿病性状態の存在、発生するリスク、もしくは重度と相関させることをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の危険因子は、年齢、体重、体型指数（ＢＭＩ）、家族歴、病歴、民族的背景、高血圧、コレステロールレベル、および活性レベルからなる群から選択される。一部の実施形態では、追加のバイオマーカーは、血糖または糖化ヘモグロビンからなる群から選択される。
本発明の性能および精度の測度
本発明の性能、したがって絶対的および相対的な臨床的有用性は、上述のように複数の方法で評価し得る。様々な性能の評価のうち、とりわけ、本発明は臨床診断および予後診断において精度を提供することを意図する。診断的または予後的な試験、アッセイ、または方法の精度は、試験、アッセイ、または方法の、糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態に罹患している、または糖尿病、前糖尿病、もしくは前糖尿病性状態のリスクがある被験体の間を区別する能力に関係し、被験体が「有効量」のバイオマーカーのレベルまたはその「有意な変更」が有するかどうかに基づく。「有効量」または「有意な変更」とは、バイオマーカーの測定値がそのバイオマーカーの事前に決定されたカットオフ点（または閾値）とは異なることを意味し、したがって、バイオマーカーが決定要因である糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態に被験体が罹患していることを示す。正常と異常との間のバイオマーカーのレベルの差異は、好ましくは統計的に有意であり、バイオマーカーレベルの増加またはバイオマーカーレベルの減少であり得る。以下に注記するように、かつ本発明のいかなる限定もせず、統計的有意性、したがって好ましい分析的および臨床的精度を達成することは、必ずしもではないが、一般に、統計的に有意なバイオマーカー指標を達成するために、いくつかのバイオマーカーの組合せをパネル中で一緒に使用し、数学アルゴリズムと組み合わせることを必要とする。
病状の分類別診断では、試験（またはアッセイ）のカット点または閾値を変化させることは、通常は感度および特異度を変化させるが、定性的に反比例の関係性にある。したがって、被験体の状態を評価するための提案された医学的試験、アッセイ、または方法の精度および有用性の評価において、常に感度および特異度をどちらも考慮すべきであり、感度および特異度はカット点の範囲にわたって有意に変動し得るために、感度および特異度を報告しているカット点がどこにあるかに注意するべきである。すべての潜在的なカット点の値が包含されるＡＵＣなどの統計学の使用が、本発明を使用したほとんどの分類別リスク測度に好ましい一方で、連続的リスク測度には、観察された結果または他のゴールドスタンダードに対する適合度および較正の統計学が好ましい。
そのような統計学を使用して、「許容される度合の診断精度」とは、本明細書中では、ＡＵＣ（試験またはアッセイのＲＯＣ曲線下面積）が少なくとも０．６０、望ましくは少なくとも０．６５、より望ましくは少なくとも０．７０、好ましくは少なくとも０．７５、より好ましくは少なくとも０．８０、最も好ましくは少なくとも０．８５である試験またはアッセイ（バイオマーカーの臨床的に有意な存在を決定するための本発明の試験などであり、これにより、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態の存在が示される）として定義される。
「非常に高い度合の診断精度」とは、ＡＵＣ（試験またはアッセイのＲＯＣ曲線下面積）が少なくとも０．８０、望ましくは少なくとも０．８５、より望ましくは少なくとも０．８７５、好ましくは少なくとも０．９０、より好ましくは少なくとも０．９２５、最も好ましくは少なくとも０．９５である試験またはアッセイを意味する。
任意の試験の予測値は、試験の感度および特異度、ならびに試験する集団における状態の有病率に依存する。ベイズの定理に基づいたこの概念は、スクリーニングする状態が被験体または集団において存在する尤度が高ければ高いほど（試験前確率）、陽性試験の妥当性がより高くなり、結果が真陽性である尤度がより高くなることを提供する。したがって、状態が存在する尤度が低い任意の集団において任意の試験を使用することの問題は、肯定的な結果がより限定された値を有することである（すなわち、陽性試験が偽陽性である可能性がより高い）。同様に、非常に高いリスクがある集団では、陰性の試験結果が偽陰性である可能性がより高い。
その結果、ＲＯＣおよびＡＵＣは、低い疾患有病率の試験集団（年間で１％未満の発生の率（発生率）、または指定した時間的対象期間にわたって１０％未満の累積有病率であるものと定義）における試験の臨床的効用に関して、誤解を招く場合がある。あるいは、本開示中の他の箇所に定義した絶対的リスクと相対的リスクとの比を用いて、臨床的効用の度合を決定することができる。また、試験する被験体の集団は、試験の測定値によって四分位数へと分類することもでき、上位の四分位数（集団の２５％）は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を発生する最も高い相対的リスクを有する被験体の群を含み、下位の四分位数は、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態を発生する最も低い相対的リスクを有する被験体の群を含む。一般に、低い有病率の集団において上位から下位の四分位数で２．５倍を超える相対的リスクを有する試験またはアッセイに由来する値が、「高い度合の診断精度」を有するとみなされ、それぞれの四分位数で５〜７倍の相対的リスクを有するものは、「非常に高い度合の診断精度」を有するとみなされる。それにもかかわらず、それぞれの四分位数で１．２〜２．５倍の相対的リスクしか有さない試験またはアッセイに由来する値は依然として臨床的に有用であり、疾患の危険因子として幅広く使用されている。将来の心血管イベントのその予測に関して、総コレステロールおよび多くの炎症性バイオマーカーの場合がそうである。しばしば、そのような低い診断精度の試験は、前述の全体的リスク評価の指標で行われているように、治療介入に有意義な臨床的閾値を導くために追加のパラメータと組み合わせなければならない。
保健経済学効用関数とは、潜在的な分類別試験の結果を、それぞれの臨床的および経済的価値の実際の測度に基づいて重み付けすることからなる、所定の試験の性能および臨床的価値を測定するさらに別の手段である。保健経済学効用関数は試験被験体の誤分類の正しい分類および費用の利点のために経済的価値を具体的に割り当てるため、保健経済学性能は精度に密接に関連している。性能の測度としては、試験の標的価格を超えた試験あたりの保健経済学的価値の増加（費用の試験の前）をもたらす性能レベルを達成するために試験を必要とすることは稀ではない。
一般に、治療的使用の閾値が未だ確立されていない、または疾患前の診断のゴールドスタンダードが存在しない、疾患分類またはリスク分類（前糖尿病などの）が関連する医学界および医療の実施によって未だ明らかに定義されていない場合には、診断精度の決定の代替方法が、一般的に連続的測度に使用されている。リスクの連続的測度には、計算された指標の診断精度の測度は、典型的には、予測された連続的値と実際の観察値（または歴史的指標の計算値）との間の曲線の当てはめおよび較正に基づいており、Ｒ二乗、Ｈｏｓｍｅｒ−ＬｅｍｅｓｈｏｗのＰ値統計学および信頼区間などの測度を利用する。そのようなアルゴリズムを使用した予測値が、Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ）によって市販されている、将来の乳癌の再発のリスクの試験のように、歴史的な観察されたコホートの予測に基づいた信頼区間（通常は９０％または９５％のＣＩ）を含めて報告されることは稀ではない。
一般に、診断精度の度合、すなわち、許容されるＡＵＣ値を定義するＲＯＣ曲線上のカット点を定義することによって、有効量の本発明のバイオマーカーを構成する相対的濃度の許容される範囲を決定することで当業者がバイオマーカーを使用して事前に決定されたレベルの予測性および性能で被験体を診断または同定することが可能となる。
糖尿病リスクスコア（「ＤＲＳ」）の計算
本発明中に開示したようにバイオマーカー（および他の任意選択の要因）の組を選択した後、相互相関、主成分分析（ＰＣＡ）、因子回転、ロジスティック回帰（ＬｏｇＲｅｇ）、線形判別分析（ＬＤＡ）、固有遺伝子線形判別分析（ＥＬＤＡ）、サポートベクターマシーン（ＳＶＭ）、ランダムフォレスト（ＲＦ）、再帰的分割木（ＲＰＡＲＴ）、関連する決定木分類技法、収縮重心（ＳＣ）、ステップＡＩＣ、第ｋ最近傍、ブースティング、決定木、神経回路網、ベイジアンネットワーク、サポートベクターマシーン、および隠れマルコフモデル、直線回帰もしくは分類アルゴリズム、非直線回帰もしくは分類アルゴリズム、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、階層分析もしくはクラスタリングアルゴリズム、決定木を使用した階層アルゴリズム；カーネル部分最小二乗アルゴリズム、カーネル一致追跡アルゴリズム、カーネルフィッシャーの判別分析アルゴリズム、もしくはカーネル主成分分析アルゴリズムなどのカーネルに基づいた機械アルゴリズム、または他の数学的および統計的方法などの周知の技法を使用して、糖尿病リスクスコアを計算するためのＤＲＳ式を作成することができる。集団中のバイオマーカーの値およびその臨床成績に関する歴史的情報が利用可能な、選択された個体の集団を使用する。所定の個体の糖尿病リスクスコアを計算するためには、個体から採取した１つまたは複数の試料からバイオマーカー値を取得して、入力データとして使用する（選択された個体の集団から得られた実際の歴史的データに当てはめたＤＲＳ式への入力。
バイオマーカー試験の実装
バイオマーカーおよびバイオマーカーパネルを測定するための試験は、様々な診断試験システムに実装することができる。診断試験システムとは、典型的には試験結果を生物学的試料から得る手段が含まれる装置である。そのような手段の例には、試験（たとえば、生化学的、免疫学的、核酸検出アッセイ）を自動化するモジュールが含まれる。一部の診断試験システムは複数の生物学的試料を取り扱うように設計されており、それぞれの試料で同じまたは異なる試験を実行するようにプログラミングすることができる。診断試験システムには、典型的には、それぞれの試料の試験結果を、通常はデータ構造またはデータベースで収集、記憶および／または追跡するための手段が含まれる。例には、周知の物理的および電子的なデータ記憶装置（たとえば、ハードドライブ、フラッシュメモリ、磁気テープ、紙の印刷物）が含まれる。また、診断試験システムには試験結果を報告する手段が含まれることが典型的である。報告手段の例には、目に見える表示、データ構造もしくはデータベースとのリンク、またはプリンターが含まれる。報告手段は、試験結果をデータ構造、データベース、ビジュアルディスプレイ、またはプリンターなどの外部装置に送信するためのデータリンクでしかない場合がある。
本発明の一実施形態は、糖尿病を発生するリスクがある個体の同定を援助するために適合された診断試験システムを含む。試験システムは、本明細書中の説明に従ってバイオマーカーパネルから測定されたバイオマーカーのレベルが含まれる入力にＤＲＳ式を適用する手段を用いる。典型的には、本発明のバイオマーカーパネルからの試験結果は、ＤＲＳ式を用いてプログラミングしたコンピュータまたはマイクロプロセッサへの入力として役割を果たす。入力に糖尿病リスクスコアのすべての入力が含まれる場合は、診断試験システムには、報告された試験結果中のスコアが含まれる場合がある。システムで試験されたバイオマーカー以外のいくつかの要因を使用して最終リスクスコアを計算する場合には、その後、これらの要因を診断試験システムに供給して、リスクスコアの計算を完了させることができる、または、ＤＲＳ式が、報告され、外部で他の入力と合わせられて、最終リスクスコアを計算するための指標スコアを生じることができる。
いくつかの診断試験システムが、本発明を実装し、本発明を実施するためのさらなる手段を例示するために利用可能である。１つのそのような装置は、高スループットで完全に自動化された臨床的化学分析器である、Ａｂｂｏｔｔ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ（登録商標）システムである（ＡＲＣＨＩＴＥＣＴは、医療診断学の分野で使用するためのコンピュータハードウェアおよびソフトウェアからなるデータ管理および実験室自動化システムの、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国イリノイ州Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、６００６４の登録商標である）。Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ（登録商標）システムは、ＵＲＬ Ｗｏｒｌｄ−Ｗｉｄｅ−Ｗｅｂ．ａｂｂｏｔｄｉａｇｎｏｓｉｃｓ．ｃｏｍ／ｐｕｂｓ／２００６／２００６＿ＡＡＣＣ＿Ｗｉｌｓｏｎ＿ｃ１６０００．ｐｄｆ（Ｗｉｌｓｏｎ， Ｃ．ら、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｕｂ−Ｓｙｓｔｅｍ Ｌｅｖｅｌ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｃｈｉｃａｇｏ， Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、２００６年７月２３〜２７日、およびＫｉｓｎｅｒ ＨＪ、「Ｐｒｏｄｕｃｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ： ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｂｂｏｔｔ ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ」、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｍａｎａｇｅ
Ｒｅｖ．、１９９７年１１月〜１２月；１１巻（６号）：４１９〜２１頁；Ｏｇｎｉｂｅｎｅ Ａら、「Ａ ｎｅｗ ｍｏｄｕｌａｒ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ａｎａｌｙｓｅｒ ｅｖａｌｕａｔｅｄ」、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ．、２０００年３月；３８巻（３号）：２５１〜６０頁；Ｐａｒｋ ＪＷら、「Ｔｈｒｅｅ−ｙｅａｒ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｉｎ ｕｓｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ」、Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａｎ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ．、２００２年；３３巻補遺２：６８〜７３頁；Ｐａｕｌｉ Ｄら、「Ｔｈｅ Ａｂｂｏｔｔ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｃ８０００： ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ａ ｎｅｗ ａｎａｌｙｚｅｒ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｇｅｎｅｒａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｔｅｓｔｉｎｇ」、Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．、２００５年；５１巻（１〜２号）：３１〜４１頁に記載されている。別の有用なシステムは、他のＡｂｂｏｔｔシステムと共にＵＲＬ Ｗｏｒｌｄ−Ｗｉｄｅ−Ｗｅｂ．ａｂｂｏｔｄｉａｇｎｏｓｉｃｓ．ｃｏｍ／Ｐｒｏｄｕｃｔｓ／Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ＿ｂｙ＿Ｐｌａｔｆｏｒｍ／に記載されている、Ａｂｂｏｔｔ ＡｘＳＹＭ（登録商標）およびＡｘＳＹＭ（登録商標）Ｐｌｕｓシステムである。
バイオマーカーを測定する試験の実装に有用な他の装置は、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｖｉｔｒｏｓ（登録商標）システム（ＶＩＴＲＯＳは、医学的機器、すなわち、病院、研究室、診療所および医院において専門家が血液および他の体液から診断試験結果を生成するために使用する化学分析装置の、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｃｏｒｐ．、米国ニュージャージー州Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋの登録商標である、ＵＲＬ Ｗｏｒｌｄ−Ｗｉｄｅ−Ｗｅｂ．ｊｎｊｇａｔｅｗａｙ．ｃｏｍ／ｈｏｍｅ．ｊｈｔｍｌ？ｌｏｃ＝ＵＳＥＮＧ＆ｐａｇｅ＝ｍｅｎｕ＆ｎｏｄｅｋｅｙ＝／Ｐｒｏｄ＿Ｉｎｆｏ／Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ／Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ／Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ＿ａｎｄ＿Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ＿Ｍｅｄｉｃｉｎｅ／Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＿Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓを参照）；Ｄａｄｅ−Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ（登録商標）システム（ＤＩＭＥＮＳＩＯＮは、体液を分析するための医療診断分析器、ならびに分析器の操作に使用し、分析器によって生成されたデータの分析に使用するコンピュータハードウェアおよびコンピュータソフトウェアの、Ｄａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｃ．、米国イリノイ州Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄの登録商標である。ＵＲＬ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ．ｓｉｅｍｅｎｓ．ｃｏｍ／ｗｅｂａｐｐ／ｗｃｓ／ｓｔｏｒｅｓ／ｓｅｒｖｌｅｔ／ＰＳＧｅｎｅｒｉｃＤｉｓｐｌａｙ〜ｑ＿ｃａｔａｌｏｇＩｄ〜ｅ＿−１１１〜ａ＿ｌａｎｇＩｄ〜ｅ＿−１１１〜ａ＿ｐａｇｅＩｄ〜ｅ＿９４４８９〜ａ＿ｓｔｏｒｅＩｄ〜ｅ＿１０００１．ｈｔｍを参照）である。
本発明のバイオマーカーパネルの試験は、米国の臨床実験改善修正法（合衆国法典第４２巻、第２６３（ａ）条）、または臨床目的のために試料を分析する研究室の運営を統治する任意の国、州、もしくは省の他の連邦、国家、州、省、もしくは他の法律の下で認定されたものなどの研究室で実施することができる。そのような研究室には、たとえば、本部が３５８ Ｓｏｕｔｈ Ｍａｉｎ Ｓｔｒｅｅｔ、ノースカロライナ州Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、２７２１５、米国にあるＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ
Ａｍｅｒｉｃａ；本社が３ Ｇｉｒａｌｄａ Ｆａｒｍｓ、ニュージャージー州Ｍａｄｉｓｏｎ、０７９４０、米国にあるＱｕｅｓｔ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；ならびに病院基盤の参照研究室および臨床化学研究室が含まれる。
バイオマーカーの選択
脂質バイオマーカーの選択を上記に多少詳述した。本セクションは、増強された予測値を提供するために脂質代謝物と組み合わせて使用することができるタンパク質および他のバイオマーカーならびに一部の他の要因を強調する。
本発明のバイオマーカーおよび方法は、当業者が、糖尿病、前糖尿病、または前糖尿病性状態のいかなる症状も示さないが、それにもかかわらず糖尿病、前糖尿病発生するリスク、前糖尿病性状態に特徴的な症状を経験するリスクがあり得る被験体を同定、診断、または他の様式で評価することを可能にする。
２６６個の分析物に基づいたバイオマーカーが、糖尿病に罹患している、または前糖尿病性状態に特徴的な症状を示す、または前糖尿病（本明細書中に定義）に罹患している被験体において、変更または改変された存在または濃度レベルを有するとして同定されており、そのような被験体には、インスリン耐性である、変更されたベータ細胞機能を有する、あるいは、糖尿病の家族歴、低い活性レベル、貧しい食事、過剰体重（特にウエスト周り）、４５歳を超える年齢、高血圧、高レベルのトリグリセリド、３５未満のＨＤＬコレステロール、以前に同定された耐糖能異常、以前の妊娠中の糖尿病（妊娠性糖尿病もしくはＧＤＭ）または９ポンド（４．１キログラム）より重い新生児の出産、および民族などの、公知の臨床パラメータまたは伝統的な実験室危険因子に基づいて糖尿病を発生するリスクがある者などが含まれる。
バイオマーカーは、本明細書中に概説したように様々な群から選択されて、ｎ個のマーカーのパネルを形成することができる。たとえば、本発明の一実施形態は、少なくとも３個のバイオマーカーのレベルを測定することと、測定されたバイオマーカーのレベルを使用して糖尿病または糖尿病関連状態を発生するリスクを評価することとを含む、糖尿病または別の糖尿病関連状態を発生するリスクを評価する方法を包含し、２個のバイオマーカーがＡＤＩＰＯＱ、ＣＲＰ、ＧＬＵＣＯＳＥ、ＧＰＴ、ＨＢＡ１Ｃ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＮＳ、ＬＥＰ、およびＴＲＩＧから選択され、１個のバイオマーカーが表７、表８および表９のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳ、ＣＰ、およびＴＬＲＦから選択される。この場合では、ｎは３である。異なる群から選択する場合は、ユニークなバイオマーカーを使用するべきである。たとえば、直前の例では、ＡＤＩＰＯＱがＡＤＩＰＯＱ、ＣＲＰ、ＧＬＵＣＯＳＥ、ＧＰＴ、ＨＢＡ１Ｃ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＮＳ、ＬＥＰ、およびＴＲＩＧの群から選択される場合は、ＡＤＩＰＯＱは表７、表８、および表９のマーカーから選択されるべきでない。糖尿病関連状態には、上記定義した糖尿病および前糖尿病性状態が含まれる。
表７は、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫと総称されるいくつかのバイオマーカーを含み、これらは本発明で使用するための分析物に基づいたまたは個体の病歴に基づいたバイオマーカーである。当業者は、本明細書中に提示するＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳには、それだけには限定されないが、多型、アイソフォーム、突然変異体、誘導体、核酸およびプロタンパク質を含めた前駆体、切断産物、受容体（可溶性および膜貫通受容体が含まれる）、リガンド、タンパク質−リガンド複合体、翻訳後修飾された変異体（架橋結合またはグリコシル化など）、断片、および分解生成物、ならびに、完全にアセンブルされた構造の構成サブユニットとしてＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのうちの任意のものからなる、任意の複数単位の核酸、タンパク質、および糖タンパク質の構造を含めた、すべての形態および変異体が包含されることを理解されよう。
表７
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表８
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（およびウエスト対ヒップの比（ＷＨｒ）を含めた他のその組合せ）。
表９
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当業者は、上記記載したＡＬＬＤＢＲＩＳＫマーカー（「ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳ」）は、糖尿病に関連していると一般的に認識されていない多くを含めた、多様な生理的および生物学的経路の組からのものであることに注目されたい。様々なＡＬＬＤＢＲＩＳＫマーカーのこれらの群分けは、高い有意性のセグメント内のものでさえも、疾患の進行の段階または速度の様々なシグナルの前兆となり得る。ＡＬＬＤＢＲＩＳＫマーカーのそのような明白な群分けは、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫマーカーからのより生物学的に詳細かつ臨床的に有用なシグナル、および複数のＡＬＬＤＢＲＩＳＫシグナルを組み合わせたＡＬＬＤＢＲＩＳＫアルゴリズム内のパターン認識の機会を可能にし得る。
一態様では、本発明は、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫマーカーのサブセットに関する。上記表７に記載されていないがこれらの生理的および生物学的経路に関連する、他のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳおよびさらにはバイオマーカーが、これらの研究から提供されるシグナルおよび情報を考慮して、有用であることが判明し得る。他のバイオマーカー経路参加者（すなわち、上記表７中のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのリスト内に含有されるバイオマーカーと共通の経路中の他のバイオマーカー参加者）も、前糖尿病、糖尿病、または前糖尿病性状態の関連する経路参加者である限りは、バイオマーカーの機能的均等物で有り得、したがって表７中に開示されている。
これらの他の経路参加者も、本明細書中に開示した生物学的プロセスへの関与、ならびに有用な信号対雑音比でおよび血清などの有用な試料マトリックス中での、前記バイオマーカーのバイオアベイラビリティなどの分析的に重要な特徴がどちらも含まれる、良好なバイオマーカーの特定の定義された特徴をさらに共有する限りは、本発明のコンテキストにおいてＡＬＬＤＢＲＩＳＫとみなされる。そのような要件は、典型的には生物学的経路の多くのメンバーの診断的有用性を制限し、しばしば、前糖尿病、前糖尿病性状態、および糖尿病の疾患進行に関連しているかどうかにかかわらず、分泌性物質を構成する、細胞の形質膜上で接近可能である、および、アポトーシスあるいは内皮再構築または他の細胞代謝回転もしくは細胞壊死プロセスなどの他の理由が原因の細胞死の際に血清中に放出される経路メンバーでのみ起こる。しかし、このＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳの高い基準を満たす残りのおよび将来のバイオマーカーは非常に貴重である可能性が高い。
さらに、リストに記載していない他のバイオマーカーが、表７中でＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳとして記載したバイオマーカーと非常に高度に相関しているであろう（本出願の目的のために、任意の２つの変数は、０．４以上の相関（Ｒ）を有する場合に「非常に高度に相関している」とみなされる）。本発明には、前述のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのそのような機能的および統計的均等物が包含される。さらに、そのような追加のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳの統計的効用は、複数のバイオマーカー間の相互相関に実質的に依存しており、任意の新しいバイオマーカーは、根底にある生物学の意味を詳しく説明するためにパネル内で作動することがしばしば必要である。
記載したＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのうちの１つまたは複数、好ましくは２つ以上を、本発明の実施において検出することができる。たとえば、２、３、４、５、１０、１５、２０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０個またはそれより多くのＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳを検出することができる。一部の態様では、本明細書中に記載のすべてのＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳを検出することができる。検出することができるＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳの数の好ましい範囲には、１個〜すべての公知のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳまでから選択される任意の最小、特に２、５、１０、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０個と、すべての公知のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳまでの任意の最大、特に５、１０、２０、５０、および７５までとの対によって境界付けられた範囲が含まれる。特に好ましい範囲には、２〜５、２〜１０、２〜５０、２〜７５、２〜１００、５〜１０、５〜２０、５〜５０、５〜７５、５〜１００、１０〜２０、１０〜５０、１０〜７５、１０〜１００、２０〜５０、２０〜７５、２０〜１００、５０〜７５、５０〜１００、１００〜１２５、１２５〜１５０、１５０〜１７５、１７５〜２００、２００〜２１０、２１０〜２２０、２２０〜２３０、２３０〜２４０、２４０〜２５０、２５０〜２６０、および２６０〜２６０より多く（２６０＋）が含まれる。
本発明の一部の変形では、１〜２０個の任意の整数の数のＡＬＬＤＢＲＩＳＫを、１〜２０個の整数の数の脂質代謝物バイオマーカー、ならびに１〜１０個の任意の整数の数のグルコース、臨床パラメータおよび伝統的な危険因子を含めた本明細書中に記載の他の要因と組み合わせる。
臨床アルゴリズムの構築
任意の式を使用して、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫの結果、脂質代謝物、伝統的な危険因子、グルコースおよび本明細書中に記載の他のパラメータを、本発明の実施に有用な指標内に組み合わせ得る。上述のように、かつそれだけには限定されないが、そのような指標は、様々な他の指標のうち、とりわけ、確率、尤度、絶対的もしくは相対的リスク、１つの症状から別の病状への転換までの時間もしくはその速度、または、明白な疾患の診断において糖尿病に使用されるグルコースもしくはＨＢＡ１ｃなどの、糖尿病の将来のバイオマーカーの測定値の予測を行うことを示し得る。これは、具体的な期間もしくは時間的対象期間のため、または残りの生涯のリスクのため、または単純に別の参照被験体集団に相対的な指標として提供し得る。
様々な好ましい式を本明細書中に記載したが、本明細書中および上記定義で言及したもの以外のいくつかの他のモデルおよび式の種類が当業者に周知である。使用する実際のモデルの種類または式は、それ自体が、訓練集団におけるその結果の性能および診断の精度特徴に基づいて、潜在的なモデルの分野から選択され得る。式自体の仕様は、一般的に、関連する訓練集団におけるＡＬＬＤＢＲＩＳＫ、脂質代謝物および他の結果から導き得る。他の使用のうち、そのような式は、とりわけ、１つまたは複数のＡＬＬＤＢＲＩＳＫ、脂質代謝物および他の入力から導かれた特長空間を被験体クラスの組にマッピングすること（たとえば、被験体の正常、前糖尿病、糖尿病としてクラスメンバーシップの予測に有用）、ベイジアン手法を使用してリスクの確率関数の推定を導くこと（たとえば糖尿病のリスク）、またはクラス条件付き確率を推定し、その後、ベイズの規則を使用して以前の例のようにクラス確率関数を生じることを意図し得る。
好ましい式には、広範なクラスの統計的分類アルゴリズム、特に判別分析の使用が含まれる。判別分析の目的は、以前に同定した特長の組からクラスメンバーシップを予測することである。線形判別分析（ＬＤＡ）の場合、何らかの基準によって群間の分離を最大限にする、特長の一次結合を同定する。特長は、様々な閾値（ＥＬＤＡ）を用いた固有遺伝子に基づいた手法を使用したＬＤＡ、または多変量分散分析（ＭＡＮＯＶＡ）に基づいた段階的なアルゴリズムについて同定することができる。ホテリング−ローリー統計量に基づいて分離なしの確率を最小限にする、順方向、逆方向、および段階的なアルゴリズムを行うことができる。
固有遺伝子に基づいた線形判別分析（ＥＬＤＡ）は、Ｓｈｅｎら（２００６年）によって開発された特長の選択技法である。式は、最も重要な固有ベクターに関連する特長を同定するために、改変固有分析を使用して特長（たとえばバイオマーカー）を多変量フレームワーク中で選択する。「重要な」とは、何らかの閾値に対して分類されようとしている試料間の差異中の分散を最も説明する固有ベクターとして定義される。
サポートベクターマシーン（ＳＶＭ）とは、２つのクラスを分離する超平面を見つけることを試みる分類式である。この超平面は、サポートベクター、超平面から正確に余裕距離（ｍａｒｇｉｎ ｄｉｓｔａｎｃｅ）であるデータ点を含有する。分離する超平面が現在のデータの次元に存在しないという、可能性の高い事象の場合は、元の変数の非線形関数をとることによってデータをより大きな次元に投影することによって、次元を大きく拡大させる（ＶｅｎａｂｌｅｓおよびＲｉｐｌｅｙ、２００２年）。必要ではないが、特長をＳＶＭに関してフィルタリングすることで、しばしば予測が改善される。ノンパラメトリッククルスカル−ワリス（ＫＷ）試験を使用して最良の一変量の特長を選択して、特長（たとえばバイオマーカー）をサポートベクターマシーンについて同定することができる。ランダムフォレスト（ＲＦ、Ｂｒｅｉｍａｎ、２００１年）または再帰的分割（ＲＰＡＲＴ、Ｂｒｅｉｍａｎら、１９８４年）を別々にまたは組み合わせて使用して、最も重要なバイオマーカーの組合せを同定することができる。ＫＷおよびＲＦはどちらも、いくつかの特長が全体から選択されることを必要とする。ＲＰＡＲＴは、利用可能なバイオマーカーのサブセットを使用して単一の分類木を作成する。
個体のＡＬＬＤＢＲＩＳＫ、脂質代謝物、および他の測定値の結果をより価値のある情報形態へと前処理するために他の式を使用した後に、それを予測式に提示し得る。最も著しくは、バイオマーカーの結果の正規化、たとえば、対数またはロジスティック関数などの一般的な数学的変換を使用したもの、正常または他の分布位置としてのもの、集団の平均値を参照したものなどは、すべて当業者に周知である。年齢、性別、人種、または性別などの臨床パラメータに基づいた正規化組が特に興味深く、ここでは特定の式を１つのクラスの被験体のみに使用するか、または臨床パラメータを入力として連続的に組み合わせる。他の例では、分析物に基づいたバイオマーカーを計算変数へと組み合わせることができ（ＢＭＩが身長および体重を使用した計算であるように）、続いてこれが式に提示される。
潜在的に正規化されている１人の被験体の個体のパラメータ値に加えて、すべての被験体、または任意の公知の被験体クラスの全体的な予測式自体を、Ｄ’Ａｇｏｓｔｉｎｏら（２００１年）ＪＡＭＡ、２８６巻：１８０〜１８７頁に概要を示した技法、または他の類似の正規化および再較正の技法に従って、集団の予想された有病率の調節およびバイオマーカーの平均パラメータ値に基づいて再較正または他の様式で調節し得る。そのような疫学的調節統計学は、モデルに提示された機械読取可能もしくは他の様式であり得る過去のデータのレジストリを介して、または時には記憶されたサンプルの遡及クエリもしくはそのようなパラメータおよび統計学の歴史的研究の参照によって、連続的に入手、確認、改善および更新し得る。式の再較正または他の調節の被験体であり得る追加の例には、オッズ比の制限に関してはＰｅｐｅ， Ｍ．Ｓ．ら、２００４年；ＲＯＣ曲線に関してはＣｏｏｋ， Ｎ．Ｒ．、２００７年；および心血管病のバイオマーカーに関してはＶａｓａｎ， Ｒ．Ｓ．、２００６年による研究中で使用されている統計学が含まれる。
最後に、絶対的リスクに対して較正し、分類またはリスクの式の様々な数値結果の信頼区間を提供するために、分類式自体の数値結果を、実際の臨床的集団および研究結果および観察されたエンドポイントに対するその参照によって、処理後に変換させ得る。これの一例は、実際の臨床研究を使用して導き、Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ）のＯｎｃｏｔｙｐｅ Ｄｘ製品中の再発スコア式の出力を参照して選択された、絶対的リスク、およびそのリスクの信頼区間の提示である。さらなる改変は、分類またはリスクの式の出力に基づき、年齢または性別などのその臨床パラメータによって定義および選択された、研究のより小さな部分集団について調節することである。
アルゴリズム開発プロセスの要約およびアルゴリズムの適用
図７は、人または人の群の糖尿病性状態を発生するリスクを評価するために使用し得るモデルを開発するための、方法例２００の流れ図である。方法２００は、図６の計算システム環境例１００を使用して実装してよく、環境１００の作動を説明するために使用する。しかし、方法２００は計算システム環境１００とは異なるシステムによって実装できることを理解されたい。ブロック２０２では、本明細書中に記載した代表的な、集団からのバイオマーカーデータを、システムメモリ１３０、内部もしくは外部データベース、または他のコンピュータ記憶媒体などのデータ記憶装置から得る。バイオマーカーデータは、一定期間にわたる代表的な集団の観察を含む前向き（縦断的）研究、サンプルをクエリする代表的な集団のサンプルの遡及的な研究および／またはＮＩＨデータベースなどの以前の研究の結果を含有する遡及的な疫学的データ記憶を含めた、様々な手段を介して最初に導き得る。バイオマーカーデータは単一の研究または複数の研究に由来していてよく、一般に、本明細書中に記載のバイオマーカーの値、臨床的アノテーション（エンドポイントが含まれ得る）、および最も著しくは本発明で使用するためのアルゴリズムを多くの被験体にわたって訓練するための所望のエンドポイントを含めた、代表的な集団の所望の指標およびエンドポイントに関するデータが含まれる。
ブロック２０４では、以下に記載するバイオマーカーの選択に使用するモデルまたは分析の要件を満たすために、代表的な集団データセットを必要に応じて調製する。たとえば、データセットの調製には、代表的な集団、またはその選択されたサブセット内のそれぞれの被験体からバイオマーカー値を調製することが含まれ得る。しかし、生のバイオマーカーデータ単独は、モデルを訓練する目的に完全には有用でない場合がある。したがって、ギャップフィル技法（たとえば、最近傍内挿または他のパターン認識）、モデル要件を満たすためにデータの分布を変化させるための対数関数（たとえば、１０進法、自然対数など）などの、品質検査、様々な式（たとえば統計的分類アルゴリズム）、正規化および／または変換を使用したデータの組合せ等の、様々なデータ調製方法を使用してデータを調製し得る。ここでも、特定のデータ調製手順は、代表的な集団データを使用して訓練するモデルまたは複数のモデルに依存する。様々な異なるモデルの種類のための特定のデータ調製技法は公知であり、さらに説明する必要はない。
ブロック２０６では、特定のバイオマーカーを選択し、続いて糖尿病性状態を発生するリスクを評価するために使用するモデルの訓練に使用する。バイオマーカーの選択は、代表的な集団データセットを妥当性確認するために選択モデルを利用すること、および最も再現性のある結果を提供するデータセットからのバイオマーカーデータを選択することを含み得る。データセットの妥当性確認の例には、それだけには限定されないが、相互検証およびブートストラップが含まれ得る。マーカー選択から、糖尿病性状態を発生するリスクの評価に使用するモデルを決定および選択し得る。しかし、すべてのモデルが同じデータセットで同じ結果を提供するわけではないことに注意されたい。たとえば、異なるモデルは異なる数のバイオマーカーを利用して異なる結果を生じ、それにより、選択されたモデル上のバイオマーカーの組合せに有意性が付加され得る。したがって、リスク評価の最適なモデルを同定するために、複数の選択モデルを代表的な集団データセットまたはデータセットのサブセットで選択および利用し得る。バイオマーカーを選択するために使用し得る、統計的モデル、アルゴリズムなどを含めた特定のモデルの例は、上述されている。
データセットまたはそのサブセットで使用するそれぞれの選択モデルについて、バイオマーカーは、モデル中のそれぞれのバイオマーカーの統計的有意性に基づいて選択する。それぞれのモデルに入力する際、バイオマーカーは様々な統計的有意性の基準に基づいて選択され、累積的な投票および重み付けをさらに含み得る。統計的有意性の試験には、脱出試験（ｅｘｉｔ−ｔｅｓｔ）および分散分析（ＡＮＯＶＡ）が含まれ得る。モデルには、その多くの例が上述されている、分類モデル（たとえば、ＬＤＡ、ロジスティック回帰、ＳＶＭ、ＲＦ、ツリーモデルなど）および生存モデル（たとえばｃｏｘ）が含まれ得る。
統計的に有意なバイオマーカーを同定するためにバイオマーカーをそれぞれの選択モデルに個々に適用し得るが、一部の例では、個体バイオマーカー単独では糖尿病性状態のリスクの完全な指標でない場合があり、その場合は、バイオマーカーの組合せを選択モデルに適用し得ることに注意されたい。たとえば、一変量のバイオマーカー選択を利用する代わりに、多変量のバイオマーカー選択を利用し得る。すなわち、バイオマーカーは、選択モデルへの一変量の入力として使用した倍は良好な指示薬でない場合があるが、それぞれのマーカーは、単独でとった場合は指標とならない追加の情報を組合せに与え得るため、他のバイオマーカーと組み合わせて使用した場合に（すなわち、モデルへの多変量の入力）良好な指示薬であり得る。
ブロック２０８では、リスクの評価に使用するモデルを選択し、訓練し、妥当性確認する。特に、その例が上述されている最有力候補モデルを１つまたは複数の性能基準に基づいて選択し得る。たとえば、データセットまたはデータのサブセットを様々なモデルで使用することから、モデルを統計的に有意なバイオマーカーを決定するために使用するだけでなく、結果を使用して最適なモデルをバイオマーカーと共に選択し得る。したがって、リスクを評価するために使用する評価モデルには、分類モデルおよび生存モデルを含めた、選択モデルとして使用されるもののうちの１つが含まれ得る。マーカーサブセットを含めたモデルのマーカーの組合せを、サブセットおよび個体データセットで比較および妥当性確認し得る。比較および妥当性確認は、モデルを訓練および妥当性確認するため、ならびに適切なモデルを選択するために何度も繰り返してよく、その後、糖尿病性状態のリスクを評価するための評価モデルとしてこれを使用する。
図８は、糖尿病性状態を発生する被験体（たとえば人または人の群）のリスクを評価するためのモデルを使用するための、方法例２５０の流れ図である。ブロック２５２では、被験体からのバイオマーカーデータを、図７を参照して上述したデータ記憶装置と同じものまたは異なるものであり得るデータ記憶装置から得る。被験体バイオマーカーデータは、自己申告、身体検査、臨床検査および既存の診療記録、カルテまたはデータベースを含めた様々な手段によって最初に導き得る。図７のブロック２０４の代表的な集団バイオマーカーデータと同様、ブロック２５４の被験体バイオマーカーデータは、図７中で選択および訓練したモデルの種類に従って、必要に応じて変換、対数、組合せ、正規化などを使用して調製し得る。データが調製された後、ブロック２５６で、被験体バイオマーカーデータが評価モデル内に入力され、ブロック２５８で、評価モデルが指標値（たとえば、リスクスコア、相対的リスク、転換までの時間など）を出力する。モデルをどのように使用して被験体バイオマーカーを評価して指標値を出力し得るかに関する多くの例が本明細書中に提供されており、たとえば実施例１を参照されたい。
治療介入パネルの改変
ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ、脂質代謝物、グルコースおよび任意選択で他のパラメータのパネルを構築し、やはり治療介入を受けている被験体で使用するための性能を増強させるために式を具体的に導くことができるか、または、別々のパネルおよび式をそのような患者集団だけのために使用し得る。本発明の一態様は、そのようなパネルの構築および式の誘導のための、そのような被験体におけるこれらのバイオマーカーおよび他のパラメータの具体的な公知の特徴ならびにその変化の使用である。そのような改変は、糖尿病の予防、ならびに糖尿病および前糖尿病の診断、治療、監視、および予後診断における上述の様々な指標の性能を増強させ得る。
本明細書中に開示したＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳならびに他のバイオマーカーおよびパラメータのうちのいくつかは、生活習慣の介入であれ（たとえば食事および運動）、手術的介入であれ（たとえば肥満手術）、薬学的介入であれ（たとえば、本明細書中で言及した、または一般的な危険因子もしくは糖尿病のリスクを改変させることが公知の薬物の様々なクラスのうちの１つ）、治療介入下で予測可能に変動することが当業者に公知である。たとえば、用語「アディポネクチン薬物」を使用したＰｕｂＭｅｄ検索は７００件を超える参照を返し、その多くは、様々な個々の糖尿病調節剤で処置した被験体におけるアディポネクチン（ＡＤＩＰＯＱ）のレベルの変化または非変化に関するものである。治療介入下の分散の同様の証拠が、とりわけＣＲＰ、ＦＧＡ、ＩＮＳ、ＬＥＰなどの表７に記載のバイオマーカーの多くに広く利用可能である。記載したバイオマーカーのうちの特定のもの、最も著しくは臨床パラメータおよび伝統的な実験室危険因子（ならびにＧＬＵＣＯＳＥ、ＳＢＰ、ＤＢＰ、ＣＨＯＬ、ＨＤＬ、およびＨＢＡ１ｃなどのバイオマーカーも含まれる）は、糖尿病調節剤のクラス全体の有効性の代替または主要エンドポイントマーカーとして伝統的に使用されており、したがって、間違いなく統計的に有意な様式で変化する。
ＰＰＡＲＧおよびＩＮＳＲで公知の多型などの遺伝子バイオマーカー（ならびに一般に体細胞突然変異以外のすべての遺伝子バイオマーカー）を含めた、さらに他のものが、同様に、特定の治療介入下でその測定が変動しないことが公知である。そのような変動は、所定のパネルの一般的な妥当性に影響を与えるまたは与えない場合があるが、しばしば報告される指標値に影響を与え、異なるマーカーの選択、式の再最適化、または本発明の実施への他の変化を必要とし得る。また、治療介入下で正常に報告された結果を調節するために、手動の表検索および調整係数の使用を含めた代替モデル較正も実施し得る。
したがって、個体のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳおよび他のパラメータのそのような特性を予期および活用して、治療介入を選択、指導、および監視することができる。たとえば、特定のＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳおよび他のパラメータを、それらが治療介入下で変動するまたは変動しないことが公知であるかどうかに基づいて、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫパネルの構築において検討下にある組に加算またはそれから減算し得る。あるいは、そのようなＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳおよび他のパラメータは、上記および当業者に周知の他の手段に従って、そのような効果を調節するために個々に正規化するまたは式を再較正し得る。
臨床パラメータの組合せ
前述の臨床パラメータ、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫバイオマーカー、脂質代謝物の他の要因のうちの任意のものを、式への入力として、または特定のパネルおよび式を使用した測定する関連集団を定義する予選択基準として、本発明の実施において使用し得る。上述のように、臨床パラメータは、バイオマーカーの正規化および前処理、またはバイオマーカーの選択、パネルの構築、式の種類の選択および誘導、ならびに式の結果の後処理においても有用であり得る。
本発明のエンドポイント
本発明の一実施形態は、パネルおよび式を、集団および終点または意図する使用にあつらえることである。たとえば、パネルおよび式は、被験体を一次予防および診断ならびに二次予防および管理について評価するために使用し得る。一次評価には、パネルおよび式は、状態の予測およびリスク層別化、糖尿病性状態の診断、グルコースレベルおよび変化の速度の予後診断、ならびに将来の診断の指標のために使用し得る。二次予防および管理には、パネルおよび式は、糖尿病合併症の予後診断、リスク層別化のために使用し得る。パネルおよび式は、介入を次の訪問まで延期するかどうか、正常な予防的健康診を推奨するかどうか、訪問の頻度の増加を推奨するかどうか、試験の増加を推奨するかどうか、および治療介入を推奨するかどうかの決定などの、臨床的意思決定支援に使用し得る。また、パネルおよび式は、治療剤の選択および応答、治療の調節および投薬、継続中の治療効率の監視、ならびに治療介入の変化の指標などの、糖尿病性状態に罹患している被験体における介入にも有用であり得る。
本発明の疾患エンドポイントには、Ｉ型およびＩＩ型の真性糖尿病ならびに他の糖尿病性状態および前糖尿病性状態が含まれる。パネルおよび式は、潜伏性ＩＩ型真性糖尿病の診断を援助することによって、ならびにＩＩ型真性糖尿病の重度の決定およびＩＩ型真性糖尿病のサブクラスの決定を援助することによって、疾患エンドポイントの現状を評価するために使用し得る。また、パネルおよび式は、治療、介入および薬物療法を用いた将来のＩＩ型真性糖尿病の予後診断の決定などの、介入の将来の状態の決定にも有用である。本発明は、特定の介入、薬物クラス、治療クラスまたは治療剤もしくは薬物療法あるいはその組合せにあつらえてもよい。
本発明の代替エンドポイントには、ＨＢＡ１ｃ、グルコース（ＦＰＧおよびＯＧＴＴ）、ならびにグルコースクラス（正常なグルコース負荷（ＮＧＴ）、ＩＧＴ、ＩＦＧおよびＴ２ＤＭ）の測定が含まれる。パネルおよび式は、絶食を用いたまたは用いないグルコースクラスを診断することによって、代替エンドポイントの現状の決定に有用である。将来のグルコースクラスの予後診断の決定などの代替エンドポイントの将来の状態は、本発明のパネルおよび式を使用して決定し得る。また、パネルおよび式は、薬物療法を用いた将来のグルコースクラスの予後診断の決定などの介入の将来の状態の決定にも有用である。
糖尿病性状態の合併症エンドポイントには、数例を挙げると眼の網膜症、微小血管損傷、肝損傷、肢の切断および心血管合併症が含まれる。パネルおよび式は、肝損傷の診断を援助することによって疾患エンドポイント現状を評価するために使用し得る。将来の網膜症の予後診断の決定などの合併症エンドポイントの将来の状態は、パネルおよび式を使用して決定し得る。また、パネルおよび式は、治療剤または薬物療法を用いた将来の網膜症の予後診断の決定などの介入の将来の状態の決定にも有用である。
ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳならびに他のバイオマーカーおよびパラメータの測定
バイオマーカーは、より予測可能な被験体および分析のばらつきを達成するために設計されたいくつかの技法を使用して測定し得る。被験体のばらつきに関しては、上記ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳならびに他のバイオマーカーおよびパラメータの多くは、一般的には空腹状態で、最も一般的には朝に測定し、摂食量ならびに代謝および日周の変動の両方が原因の被験体のばらつきのレベルの低下をもたらす。本発明は、本明細書によって、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳならびに本明細書中に記載の他のバイオマーカーおよびパラメータを使用したすべての空腹時および時間に基づいたサンプリング手順を特許請求する。また、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫならびに他のバイオマーカーおよびパラメータの結果の前処理調節も、この効果を低下させることを意図し得る。
ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのレベルの実際の測定値は、当分野で公知の任意の方法を使用したタンパク質または核酸レベルで決定することができる。たとえば、核酸レベルでは、これらの配列のうちの１つまたは複数を特異的に認識するプローブを使用した、ノーザンおよびサザンハイブリダイゼーション分析、ならびにリボヌクレアーゼ保護アッセイを使用して、遺伝子発現を決定することができる。あるいは、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのレベルは、たとえば示差的に発現された遺伝子配列に特異的なプライマーを使用して、逆転写に基づいたＰＣＲアッセイ（ＲＴ−ＰＣＲ）を使用して測定することができる。また、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳのレベルは、たとえば本明細書中に記載の遺伝子産物によってコードされているペプチドのレベル、またはその活性を測定することによって、タンパク質レベルで決定することもできる。そのような方法は当分野で周知であり、たとえば、遺伝子によってコードされているタンパク質に対する抗体、アプタマーまたは分子刷り込みに基づいた免疫アッセイが含まれる。任意の生物学的物質をタンパク質またはその活性の検出／定量に使用することができる。あるいは、分析するそれぞれのタンパク質の活性に応じて、適切な方法を選択して、バイオマーカー遺伝子によってコードされているタンパク質の活性を決定することができる。
ＡＬＬＤＢＲＩＳＫタンパク質、ポリペプチド、突然変異体、およびその多型は、任意の適切な様式で検出することができるが、典型的には、被験体からの試料を、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫタンパク質、ポリペプチド、突然変異体、または多型と結合する抗体と接触させ、その後、反応生成物の存在または非存在を検出することによって、検出される。抗体は、上記に詳述した前述のもののモノクローナル、ポリクローナル、キメラ、または断片であってよく、反応生成物を検出するステップは、任意の適切な免疫アッセイで実施し得る。被験体からの試料は、典型的には上述の生物学的流体であり、上述の方法を実施するために使用したものと同じ生物学的流体の試料であり得る。
本発明に従って実施する免疫アッセイは、均一アッセイまたは不均一アッセイであり得る。均一アッセイでは、免疫学的反応は、通常、特異的抗体（たとえば抗ＡＬＬＤＢＲＩＳＫタンパク質抗体）、標識した分析物、および対象の試料を含む。標識から生じるシグナルは、抗体と標識した分析物とが結合した際に、直接または間接的に改変される。免疫学的反応およびその程度の検出はどちらも、均一溶液中で実施することができる。用い得る免疫化学的標識には、フリーラジカル、放射性同位元素、蛍光色素、酵素、バクテリオファージ、または補酵素が含まれる。
不均一アッセイ手法では、試薬は、通常は、試料、抗体、および検出可能なシグナルを生じさせるための手段である。上述の試料を使用し得る。抗体をビーズ（タンパク質Ａおよびタンパク質Ｇアガロースビーズなど）、プレートまたはスライドなどの支持体に固定し、抗原を含有することが疑われる検体と、液相中で接触させることができる。その後、支持体を液相から分離し、そのようなシグナルを生じさせるための手段を用いて、支持体相または液相のどちらかを検出可能なシグナルについて検査する。シグナルは、試料中の分析物の存在に関連する。検出可能なシグナルを生じさせるための手段には、放射性標識、蛍光標識、または酵素標識の使用が含まれる。たとえば、検出する抗原が第２の結合部位を含有する場合、その部位と結合する抗体を検出可能な基とコンジュゲートさせ、分離ステップの前に液相反応溶液に加えることができる。固体支持体上の検出可能な基の存在は、試験試料中の抗原の存在を示す。適切な免疫アッセイの例には、それだけには限定されないが、オリゴヌクレオチド、免疫ブロッティング、免疫沈降、免疫蛍光方法、化学発光方法、電気化学発光（ＥＣＬ）または酵素連結免疫アッセイが含まれる。
当業者は、本明細書中に開示した方法の実施に有用であり得る数々の具体的な免疫アッセイ様式およびその変形に精通しているであろう。一般にＥ． Ｍａｇｇｉｏ、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、（１９８０年）（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌａ．）を参照されたい。また、Ｓｋｏｌｄらの米国特許第４，７２７，０２２号、表題「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ Ｌｉｇａｎｄ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、Ｆｏｒｒｅｓｔらの米国特許第４，６５９，６７８号、表題「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｏｆ Ａｎｔｉｇｅｎｓ」、Ｄａｖｉｄらの米国特許第４，３７６，１１０号、表題「Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ Ａｓｓａｙｓ Ｕｓｉｎｇ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｌｉｔｍａｎらの米国特許第４，２７５，１４９号、表題「Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ
Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｓｓａｙｓ」、Ｍａｇｇｉｏらの米国特許第４，２３３，４０２号、表題「Ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ Ｃｈａｎｎｅｌｉｎｇ」、およびＢｏｇｕｓｌａｓｋｉらの米国特許第４，２３０，７６７号、表題「Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｓｓａｙ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ａ Ｃｏｅｎｚｙｍｅ ａｓ Ｌａｂｅｌ」も参照されたい。
抗体は、受動結合などの公知の技法に従って、診断アッセイに適した固体支持体（たとえば、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇアガロースなどのビーズ、ラテックスまたはポリスチレンなどの材料から形成されたミクロスフェア、プレート、スライドまたはウェル）とコンジュゲートさせることができる。同様に、本明細書中に記載の抗体は、公知の技法に従って、放射標識（たとえば、３５Ｓ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、酵素標識（たとえば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ）、および蛍光標識（たとえば、フルオレセイン、Ａｌｅｘａ、緑色蛍光タンパク質、ローダミン）などの検出可能な標識または基とコンジュゲートさせ得る。
また、抗体は、チロシンリン酸化、スレオニンリン酸化、セリンリン酸化、グリコシル化（たとえばＯ−ＧｌｃＮＡｃ）などの、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫタンパク質、ポリペプチド、突然変異体、および多型の翻訳後修飾の検出にも有用である場合がある。そのような抗体は、対象のタンパク質または複数のタンパク質中のリン酸化されたアミノ酸を特異的に検出し、本明細書中に記載の免疫ブロッティング、免疫蛍光、およびＥＬＩＳＡアッセイに使用することができる。これらの抗体は当業者に周知であり、市販されている。また、翻訳後修飾は、反射型マトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）において準安定イオンを使用することによっても決定することができる（Ｗｉｒｔｈ， Ｕ．ら（２００２年）Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、２巻（１０号）：１４４５〜５１頁）。
酵素活性を有することが公知のＡＬＬＤＢＲＩＳＫタンパク質、ポリペプチド、突然変異体、および多型では、活性は、当分野で公知の酵素アッセイを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで決定することができる。そのようなアッセイには、多くのもののうちとりわけ、それだけには限定されないが、キナーゼアッセイ、ホスファターゼアッセイ、レダクターゼアッセイが含まれる。酵素活性の動力学の変調は、ヒルプロット、ミカエリス−メンテン式、ラインウィーバー−バーク分析などの直線回帰プロット、およびスキャッチャードプロット等の公知のアルゴリズムを使用して、速度定数ＫＭを測定することによって決定できる。
ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ配列のデータベースのエントリーによって提供される配列情報を使用して、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ配列の発現を検出し（存在する場合）、当業者に周知の技法を使用して測定することができる。たとえば、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ配列に対応する配列データベースのエントリー内、または本明細書中に開示した配列内の配列を使用して、たとえば、ノーザンブロットハイブリダイゼーション分析または特異的な核酸配列を特異的にかつ好ましくは定量的に増幅する方法において、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ ＲＮＡ配列を検出するためのプローブを構築することができる。別の例として、配列を使用して、たとえば逆転写に基づいたポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）などの増幅に基づいた検出方法においてＡＬＬＤＢＲＩＳＫ配列を特異的に増幅するためのプライマーを構築することができる。遺伝子発現中の変更が遺伝子増幅、欠失、多型、および突然変異体に関連している場合は、試験および参照細胞集団中の検査したＤＮＡ配列の相対量を比較することによって、試験および参照集団における配列比較を行うことができる。
本明細書中に開示した遺伝子の発現は、当分野で公知の任意の方法を使用してＲＮＡレベルで測定することができる。たとえば、これらの配列のうちの１つまたは複数を特異的に認識するプローブを使用したノーザンハイブリダイゼーション分析を使用して、遺伝子発現を決定することができる。あるいは、発現は、たとえば示差的に発現された配列に特異的なプライマーを使用した逆転写に基づいたＰＣＲアッセイ（ＲＴ−ＰＣＲ）を使用して測定することができる。また、ＲＮＡは、たとえば、他の標的増幅方法（たとえば、ＴＭＡ、ＳＤＡ、ＮＡＳＢＡ）、またはシグナル増幅方法（たとえばｂＤＮＡ）などを使用して定量することもできる。
あるいは、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫタンパク質および核酸代謝物を測定することができる。用語「代謝物」には、生物学的分子（たとえば、タンパク質、核酸、炭水化物、または脂質）のプロセッシング、切断または消費によって生じる任意の化合物などの、代謝プロセスの任意の化学的または生化学的産物が含まれる。代謝物は、屈折率分光分析（ＲＩ）、紫外線分光分析（ＵＶ）、蛍光分析、放射線化学分析、近赤外線分光分析（近ＩＲ）、核磁気共鳴分光分析（ＮＭＲ）、光散乱分析（ＬＳ）、質量分析、熱分解質量分析、比濁分析、分散的ラマン分光分析、質量分析と組み合わせたガスクロマトグラフィー、質量分析と組み合わせた液体クロマトグラフィー、質量分析と組み合わせたマトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）、質量分析と組み合わせたイオンスプレー分光分析、キャピラリー電気泳動、ＮＭＲおよびＩＲ検出を含めた、当業者に公知の様々な方法によって検出することができる。（そのそれぞれがその全体で本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ０４／０５６４５６号およびＷＯ０４／０８８３０９号を参照）。この観点から、他のＡＬＬＤＢＲＩＳＫ分析物は、上述の検出方法、または当業者に公知の他の方法を使用して測定することができる。たとえば、循環カルシウムイオン（Ｃａ２＋）は、とりわけＦｌｕｏシリーズ、Ｆｕｒａ−２Ａ、Ｒｈｏｄ−２などの蛍光色素を使用して、試料中で検出することができる。他のＡＬＬＤＢＲＩＳＫ代謝物は、そのような代謝物を検出するために具体的に設計またはあつらえた試薬を使用して、同様に検出することができる。
キット
本発明の方法を実施するためのキットが提供される。キットには、（ａ）１つまたは複数の脂質代謝物（および／または追加のバイオマーカー）の量を測定するための１つまたは複数の試薬と、（ｂ）使用説明書とが含まれる。キットは、１、２、３、４、５、１０、１５、２０個、またはそれより多くの脂質代謝物の量を測定するための、１、２、３、４、５、１０、１５、２０個、またはそれより多くの試薬を提供し得る。キットは、上記および表Ｘ−Ｘ中に開示したものなどの１つまたは複数の追加のバイオマーカーを測定するための１つまたは複数の試薬をさらに提供し得る。一実施形態では、キットには、免疫アッセイで使用するための１つまたは複数の試薬が含まれる。一実施形態では、キットには、ＭＳアッセイで使用するための１つまたは複数の試薬が含まれる。本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに例示される。
また、本発明には、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ検出試薬、たとえば、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ核酸またはＡＬＬＤＢＲＩＳＫ核酸によってコードされているタンパク質に対する抗体の一部分に相補的な、オリゴヌクレオチド配列またはアプタマーなどの相同的な核酸配列を有することによって、１つまたは複数のＡＬＬＤＢＲＩＳＫ核酸を特異的に同定する核酸が含まれ、キットの形態で一緒に梱包されている。オリゴヌクレオチドはＡＬＬＤＢＲＩＳＫ遺伝子の断片であることができる。たとえば、オリゴヌクレオチドは、２００、１５０、１００、５０、２５、１０個またはそれ未満のヌクレオチドの長さであることができる。キットは、別々の容器中に、核酸または抗体（固体マトリックスに既に結合しているか、もしくはマトリックスに結合させるために試薬とは別々に梱包されている）、対照配合物（陽性および／もしくは陰性）、ならびに／またはとりわけフルオレセイン、緑色蛍光タンパク質、ローダミン、シアニン色素、Ａｌｅｘａ色素、ルシフェラーゼ、放射標識などの検出可能な標識を含有し得る。アッセイを実施するための説明書（たとえば、書面、テープ、ＶＣＲ、ＣＤ−ＲＯＭなど）をキットに含め得る。アッセイは、たとえば、当分野で公知のようにノーザンハイブリダイゼーションまたはサンドイッチＥＬＩＳＡの形態であり得る。
たとえば、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫ検出試薬を多孔条片などの固体マトリックスに固定して、少なくとも１つのＡＬＬＤＢＲＩＳＫ検出部位を形成する。多孔条片の測定または検出領域には、核酸を含有する複数の部位が含まれ得る。また、試験条片は、陰性および／または陽性対照の部位も含有し得る。あるいは、対照部位は、試験条片とは別々の条片に位置することができる。任意選択で、異なる検出部位は、異なる量の固定された核酸、たとえば、第１の検出部位中により多くの量および続く部位中により少ない量を含有し得る。試験試料を加えた際、検出可能なシグナルを表示する部位の数が、試料中に存在するＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳの量の定量的指標を提供する。検出部位は、任意の適切に検出可能な形状で構成されていてよく、典型的には試験条片の幅の全長にわたるバーまたはドットの形状である。
あるいは、キットは、１つまたは複数の核酸配列を含む核酸基質アレイを含有する。アレイ上の核酸は、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳ１〜２７１によって表される１つまたは複数の核酸配列を特異的に同定する。様々な実施形態では、ＡＬＬＤＢＲＩＳＫＳ１〜２７１によって表される配列のうちの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、４０、５０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０個またはそれより多くの発現を、アレイとの結合によって同定することができる。基質アレイは、米国特許第５，７４４，３０５号に記載のように、たとえば固体基質、たとえば「チップ」にあることができる。あるいは、基質アレイは、溶液アレイ、たとえば、ｘＭＡＰ（Ｌｕｍｉｎｅｘ、テキサス州Ａｕｓｔｉｎ）、Ｃｙｖｅｒａ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、カリフォルニア州Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）、ＣｅｌｌＣａｒｄ（Ｖｉｔｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カリフォルニア州Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ）およびＱｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔｓ’Ｍｏｓａｉｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄ）であることができる。
ＡＬＬＤＢＲＩＳＫを検出するための抗体の適切な供給源には、たとえば、Ａｂａｚｙｍｅ、Ａｂｎｏｖａ、Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、ＡｎｔｉｂｏｄｙＳｈｏｐ、Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ、Ｂｉｏｓｅｎｓｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｃｙｔｏｌａｂ、ＤＡＫＯ、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｅｎｚｏ Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ、Ｆｕｓｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｇｅｎｅｓｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＧｌｏｂｏＺｙｍｅｓ、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｍｍｕｎｏｄｅｔｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃｓ、Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｒ、Ｉｍｍｕｎｏｖｉｓｉｏｎ、Ｂｉｏｇｅｎｅｘ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＫＭＩ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｋｏｍａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＬａｂＦｒｏｎｔｉｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｌｅｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｌｉｆｅｓｃｒｅｅｎ、Ｍａｉｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｍｅｄｉｃｌｏｎｅ、ＭｉｃｒｏＰｈａｒｍ Ｌｔｄ．、ＭｏｄｉＱｕｅｓｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｎｅｏｃｌｏｎｅ、Ｎｅｕｒｏｍｉｃｓ、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｎｏｖｏｃａｓｔｒａ、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｏｒｂｉｇｅｎ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｐａｎｖｅｒａ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｏｌｙｍｕｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐｏｌｙｓｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐｒｏｔｅｏｇｅｎｉｘ、Ｐｒｏｔｏｓ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＱＥＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒｅｐｌｉｇｅｎ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｂｏｓｃｒｅｅｎ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｅｉｋａｇａｋｕ Ａｍｅｒｉｃａ、Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｙｎａｐｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ、Ｔｅｃｈｎｏｐｈａｒｍ、Ｔｅｒｒａ Ｎｏｖａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＴｉｔｅｒＭａｘ、Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＵＳ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌ、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、およびＺｅｐｔｏｍｅｔｒｉｘなどの市販の供給源が含まれる。しかし、当業者は、表７中のＡＬＬＤＢＲＩＳＫのうちの任意のものに対する抗体、核酸プローブ、たとえば、オリゴヌクレオチド、アプタマー、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、日常的に作製することができる。
（実施例１）
以下は、表１の好ましいタンパク質バイオマーカーの一部を選択するための、アルゴリズムＬＤＡおよび（ＤＲＳ＝ｅｘｐ（Ｄ）／［１＋ｅｘｐ（Ｄ）］）として記載する式を使用したリスクの計算の説明である。
マーカー選択
ヒト被験体から収集した例示的なデータセットには、このデータセットからの６３２件の観察および６５件の潜在的な血液由来バイオマーカーが含まれていた（入力）。入力の数を減らすために、３つの広範なマーカー選択アルゴリズムを使用した：一変量のマーカー選択、徹底的小モデル検索、および一般的な発見的マーカー選択技法のブートストラップ複製。ブートストラップマーカー選択プロセスには、赤池の情報量基準（ＡＩＣ）およびホテリングのＴ２に基づいた順方向、逆方向、および段階的な選択、分散分析に基づいたフィルター、ランダムフォレストフィルターならびに固有遺伝子に基づいた線形判別分析が含まれていた。これらの選択技法を１００個のブートストラップ複製に使用し、マーカー計数を表にし、平均をとった。モデルの大きさを制御するために、マーカー計数を１／ｋによって重み付けた［式中、ｋはモデルの大きさである］。マーカーは、以下のように順列試験に基づいてモデリングのために選択した：アルゴリズム出力を並べ替え、１００個のブートストラップ複製を使用して、６つの選択技法の重み付けしたマーカー計数の平均を計算した。このプロセスを２０回繰り返し、重み付けしたマーカー計数の平均の９５パーセンタイルを、ランダムよりも有意に多く選択されたマーカーを同定するためのカットオフとして使用した。同様の順列技法を使用して、ランダムとは異なっていた一変量の特長および徹底的検索を同定した。
アルゴリズムの構築
その後、上述のように選択されたマーカーを組み合わせて、機能するモデルをもたらす係数を計算した。ロジスティック回帰および／または線形判別分析を使用して、それぞれ最大尤度および最小二乗平均に基づく係数を推定した。最初に、十分位数プロットを使用して個体マーカーを直線性について評価し、強い逸脱が注目された場合は変換を試みた。その後、すべてのマーカーを含めたモデルを構築し、係数を検査して、すべてが必要であったかどうかを決定した。マーカー数を減らす能力は、入力の主成分の回帰モデル、逆方向選択、およびブートストラップ方法を使用して評価する。残りのパラメータは、２つのモデル出力のそれぞれの、５０％群メンバーシップの以前の確率で構築された線形モデルであるアルゴリズムを生じるために使用した。この重み付けは、症例および対照（それぞれ転換者および非転換者としても知られる）の数が不釣合いである場合に、生じるモデルの感度および特異度の釣り合いをとるために有用である。症例とは、対照と異なるかどうかを決定するために分析する試料をいう。
例示目的のために、選択されたバイオマーカーの例示的な係数および生じる分析の切片を以下の表１０に記載する。バイオマーカーの変換値も被験体２０３１１（１）および７７８８４（０）の下に記載する。
表１０
Figure 2015052617
リスクの計算
アルゴリズムは、転換者の群に属する５０％が症例であるという以前の確率を仮定して、試料の群メンバーシップ（たとえば症例または対照）に関連する線形予測子ｌｐを生じた。このｌｐは、以下の方程式を使用して、０〜１０のスケールで個々の被験体の好都合なスコア（ＤＲＳ）に変換することができる：
ＤＲＳ＝１０＊ｅｌｐ／（１＋ｅｌｐ）
このスコアは、特定の以前の確率での転換の絶対的リスクと相関している（５０％の特定の確率を仮定）。アルゴリズムを構築するために使用した以前の確率を、集団中の「症例」の実際の百分率を反映する確率（その集団の疫学データに基づいて）に変化させることは、切片項αを以下のように変化させることによって線形モデルを有効にシフトさせる。
α’＝α＋ｌｎ（π１／π０）
α’が新しい切片である場合、αは５０％の以前を仮定した切片であり、π１は症例である以前の確率であり、π０は対照である以前の確率である。残りの係数は同じままであり、新しい線形予測子ｌｐ’が計算される。これから、リスクを以下のように計算する。
リスク＝ｅｌｐ’／（１＋ｅｌｐ’）
リスクは、被験体が症例（転換者）となる確率である。たとえば、２５％のリスクは、同様のＤＲＳを有する人の２５％が５年間以内に糖尿病患者へと転換することを示す。
リスクの計算例
表１０のアルゴリズムＬＤＡ．ＢＷＤのリスクを計算するために、以下のバイオマーカー値係数および切片を使用した：切片２６．４５６７、ＡＤＩＰＯＱ係数−０．６６７２４、ＣＨＯＬ係数−２．６６３９３、ＣＲＰ係数０．７０８２１、ＥＮＧ係数−１．１２９９９、ＦＴＨ１係数０．７１１８０９、ＧＬＵＣＯＳＥ係数１７．４６３１１、ＧＰＴ係数１．０８７７４５、ＨＢＡ１Ｃ係数１２．０５８１６、ＩＮＳＵＬＩＮ係数６６５９５４、ＬＥＰ係数０．６９６５８７、ＰＬＡＴ係数−０．９９９７１、ＴＲＩＧ係数０．８４６５４６、およびＶＣＡＭ１係数０．９９５９２４。
２人の被験体において、表１０に示したように変換したバイオマーカー値（濃度測定した）、ｌｐおよびスコアを以下のように計算し、表１１に記載する。
ｌｐ＝（ＡＤＩＰＯＱ＊−０．６６７２４）＋（ＣＨＯＬ＊−２．６６３９３）＋（ＣＲＰ＊０．７０８２１）＋（ＥＮＧ＊−１．１２９９９）＋（ＦＴＨ１＊０．７１１８０９）＋（ＧＬＵＣＯＳＥ＊１７．４６３１１）＋（ＧＰＴ＊１．０８７７４５）＋（ＨＢＡ１Ｃ＊１２．０５８１６）＋（ＩＮＳＵＬＩＮ＊６６５９５４）＋（ＬＥＰ＊０．６９６５８７）＋（ＰＬＡＴ＊−０．９９９７１）＋（ＴＲＩＧ＊０．８４６５４６）＋（ＶＣＡＭ１＊０．９９５９２４）＋−２６．４５６７
ＤＲＳ＝１０＊ｅｌｐ／（１＋ｅｌｐ）
表１１
Figure 2015052617
リスクを計算するために、分析する被験体がメンバーであるという集団の疫学データを考慮して、以前の予測性をシフトさせる。この例では、以前の予測性が１２．５％にシフトされている。以下の方程式を使用して、生じる新しい切片（α’）は−２８．４０２６である。
α’＝α＋ｌｎ（π１／π０）
新しい切片を使用して、調節された線形予測子（ｌｐ’）およびリスクを、以下の方程式を使用して計算する。リスクスコアを表１２に記載する。
ｌｐ＝（ＡＤＩＰＯＱ＊−０．６６７２４）＋（ＣＨＯＬ＊−２．６６３９３）＋（ＣＲＰ＊０．７０８２１）＋（ＥＮＧ＊−１．１２９９９）＋（ＦＴＨ１＊０．７１１８０９）＋（ＧＬＵＣＯＳＥ＊１７．４６３１１）＋（ＧＰＴ＊１．０８７７４５）＋（ＨＢＡ１Ｃ＊１２．０５８１６）＋（ＩＮＳＵＬＩＮ＊６６５９５４）＋（ＬＥＰ＊０．６９６５８７）＋（ＰＬＡＴ＊−０．９９９７１）＋（ＴＲＩＧ＊０．８４６５４６）＋（ＶＣＡＭ１＊０．９９５９２４）＋−２４．５１０８
リスク＝ｅｌｐ’／（１＋ｅｌｐ’）
表１２
Figure 2015052617
（実施例２）
Ｉｎｔｅｒ９９コホートを使用したタンパク質バイオマーカーの選択
以下は、本発明の一部の好ましいタンパク質バイオマーカーを選択する例示的な方法の記述である。
研究集団
Ｉｎｔｅｒ９９コホートは、デンマーク市民登録システム（Ｄａｎｉｓｈ Ｃｉｖｉｌ
Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）からの年齢が３０〜６０歳の６１，３０１人の被験体からなる。これはＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ、識別子ＮＣＴ００２８９２３７（１４）に登録された心血管病の生活習慣の介入治験であったが、この研究で観察された２型糖尿病への進行の５年率（３．４％）は、この年齢群の進行の他の推定に類似していた（１６）。１３，０１６人のサンプルをランダムに選択し、１２，９３４人が適格者であり、検査に招待し、６７８４人（５２．５％）が調査に参加した（１７）。適格な個体（ｎ＝６５３６人）を５年後に再度招待し、４５１１人（６９％）が参加した。空腹時血液試料、生活習慣データ、血圧、ウエスト周囲、血漿脂質、およびＯＧＴＴの結果をベースラインおよび５年時点で収集した。「リスクがある」部分集団は、ベースライン時にＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２、年齢≧３９歳および糖尿病を有さない者として定義した。これらの個体のうち、１７４人が５年経過観察の間に２型糖尿病へと進行し（転換者）、ベースラインサンプルは１６０人で利用可能であった一方で、２８７２人は進行しなかった（非転換者）。２型糖尿病の診断は、ＯＧＴＴにおいて≧１１．１ｍｍｏｌ／ｌ、またはＦＰＧ≧７．０ｍｍｏｌ／Ｌの２時間血漿グルコースによって定義した。非転換者（ｎ＝４７２人）は転換者に対して約３：１比でランダムに選択した。
臨床的および標準の実験室測定値
人体計測の測定値、血圧、日常的な実験室測度（ＦＰＧ、インスリン、脂質）、およびＯＧＴＴを、以前に記載のように行った（１７）。血清は−１９℃で貯蔵した。
候補バイオマーカー選択
潜在的なバイオマーカーは、糖尿病の発生に関連する検索用語を使用してＰｕｂＭｅｄデータベースを検索することによって同定した。代謝もしくは心血管障害、肥満症、細胞死、または炎症反応に関連する経路に関与しているとして同定された２６０個の候補バイオマーカーのうち、これらのバイオマーカーのうちの８９個についてアッセイ試薬を得た。５８個の候補からのデータが、試料の≧６６％からの結果がアッセイの線形動的範囲内にあることを必要とした本発明者らの品質管理基準を満たした。
分子アッセイ
５８個のタンパク質用に開発したサンドイッチ免疫アッセイでは、典型的にはモノクローナル捕捉抗体および蛍光標識した検出抗体を使用した。バイオマーカー候補は、超高感度分子計数技術（ＭＣＴ）プラットフォーム（Ｓｉｎｇｕｌｅｘ、モンタナ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を使用して測定した。アッセイ試薬に関する詳細は以前に記載されている（１８）。手短に述べると、標識した抗体の検出を、それぞれのウェルからの液体を毛細フローセル内の照合空間を通してポンプするＺｅｐｔＸ（商標）システムで行った。レーザー光（波長約６５０ｎｍ）を照合空間内に向け、それぞれの標識した抗体から生じた発光（波長６６８ｎｍ）を、光子検出器を備えた共焦点顕微鏡によって測定する。
モデル中のバイオマーカーには、試薬をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ミネソタ州Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）から個々に（単量体アディポネクチン（ＡＤＩＰＯＱ））またはＤｕｏＳｅｔキットとして（インターロイキン２受容体Ａ（ＩＬ２ＲＡ））、およびＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（マサチューセッツ州Ｓｗａｍｐｓｃｏｔｔ）（Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、フェリチン重鎖１（ＦＴＨ１））から入手した。ＡＤＩＰＯＱ、ＣＲＰ、およびＦＴＨ１の検出抗体を製造者の指示に従ってＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄ）とコンジュゲートさせ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（マサチューセッツ州Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ）からのＭｉｃｒｏｃｏｎ ＹＭ−３０を用いた限外濾過によって精製した。ＤｕｏＳｅｔキットを使用して検出された分析物は、ビオチン標識した検出抗体およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７とコンジュゲートしたストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を利用した。
１０μｌ／ウェルの全アッセイ体積中に平均１．３μｌの血清を使用して、３８４マイクロウェルプレートあたり１つのバイオマーカーを測定した。バイオマーカー濃度は３つ組の平均として計算した。アッセイは１０２〜１０３の動的範囲、≦５％のプレート内ＣＶ、および１０ｐｇ／ｍｌの平均検出下限を有していた。
モデル開発プロセス
限定された数の最も情報価値のあるマーカーを包含するために選択する複数の統計的手法を適用した、モデル開発プロセスを考案した。６４個の候補バイオマーカーを、複数マーカーモデル中への包含について評価した：６個の日常的な実験室測度（ＦＰＧ、空腹時血清インスリン、トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、およびＬＤＬ−コレステロール）、ならびに５８個の血清タンパク質。バイオマーカー候補は、４つの統計−学習手法の選択頻度に基づいて、モデルへの包含について選択した。４つの手法は、Ｕ（一変量ロジスティック回帰分析）、Ｅ（小さな（≦６）多変量ロジスティックモデルの徹底的列挙）、Ｈ（順方向、逆方向、および段階的な選択、クルスカル−ワリス試験、ランダムフォレスト、ならびにロジスティック回帰、線形判別分析、およびサポートベクターマシーンを含めた３つの異なる統計学習アルゴリズムを用いた固有遺伝子に基づいた線形判別分析を含めた、６つの異なる発見的モデルの構築方法）、およびＢ（同じ基本的な発見的モデル構築方法を使用した１００個のブートストラップ複製内の選択頻度）と呼んだ。
順列試験を使用して、バイオマーカーのモデル中の包含について選択頻度の閾値を確立した。順列試験には、ランダムに割り当てた結果を有するデータセットを使用して選択手順全体を繰り返した。モデルに含まれるためには、並べ替えていない（真の）結果を有するデータセットにおけるバイオマーカーの選択頻度は、ランダムに割り当てた結果を有するデータセットを使用したその選択頻度の９５％信頼区間の外でなければならない。モデルをより節減されたものにするために、選択されたバイオマーカーを逆方向の選択に供して、残ったすべてのバイオマーカーが９０％の信頼水準で有意であるまでバイオマーカーを連続的に除去した。
結果
転換者および非転換者の群のベースライン特徴を表１３に要約する。
Figure 2015052617
モデル開発プロセスを６４個すべての候補バイオマーカー（５８個の血清タンパク質および６個の日常的な実験室測度）に適用して、ＣＲＰ、ＦＴＨ１、グルコース、アラニンアミノトランスフェラーゼ、およびインスリンを４つすべての手法（Ｕ、Ｅ、Ｈ、Ｂ）によって選択し、インスリン様増殖因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ２）、ＩＬ２ＲＡおよび熱ショック７０ｋＤａタンパク質１Ｂ（ＨＳＰＡ１Ｂ）を３つの手法（Ｅ、Ｈ、Ｂ）によって選択し、レプチンおよびインターロイキン１８（ＩＬ１８）を２つの手法（Ｕ、Ｅ）によって選択し、ＡＤＩＰＯＱを１つの手法（Ｅ）によって選択した。逆方向の選択後、生じたＤＲＳモデルには６個のバイオマーカーが含まれていた（ＡＤＩＰＯＱ、ＣＲＰ、ＦＴＨ１、ｇｌｕｃｏｓｅ、ＩＬ２ＲＡ、およびｉｎｓｕｌｉｎ）。ブートストラップ再サンプリング手法を使用してこのモデルの性能を推定した。図１は、データセットの５年２型糖尿病のリスクを評価するためのこのＤＲＳモデルの当てはめた性能のＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ＝０．７８）を、データセットのブートストラップ再サンプリングを使用したこのＤＲＳモデル（ＡＵＣ＝０．７６）と比較する。ＡＵＣの類似性は、このモデルが過剰に当てはめられておらず、異なる集団においてリスクを評価するために使用した場合に頑強である可能性が高いことを示唆している。訓練組に対する性能および隔離妥当性確認データセットに対する性能のブートストラップ推定間の性能の類似性により、モデルの性能を推定するためにブートストラップ手法を使用することが妥当性確認される。
図２は、このＤＲＳモデルのＡＵＣを、いくつかの日常的な実験室測度（ＨｂＡ１ｃ、ＦＰＧ、空腹時血清インスリン、ＯＧＴＴからの２時間血清インスリンおよび２時間血漿グルコース）、２つの臨床的変数（ＢＭＩおよび性別で調節したウエスト）、空腹時血糖およびインスリンを使用したモデル、ならびに非侵襲性臨床モデル（年齢、ＢＭＩ、ウエスト周囲、および一等親血縁者の２型糖尿病の家族歴）と比較する。このＤＲＳモデルのＡＵＣは、空腹時血液試料、空腹時血糖およびインスリンを使用したモデル、人体計測の測度、ならびに臨床的指標からの単一マーカー測度とは統計的に有意に異なる一方で、２時間グルコース（ＯＧＴＴから）および２時間インスリンと同等である（それぞれｐ＝０．１８、ｐ＝０．７０）。非侵襲性モデルの家族歴、年齢、ＢＭＩおよびウエスト周囲の構成要素をこのＤＲＳモデルに加えることで、当てはめがわずかに改善されたが（ｐ＝０．００６７、尤度比試験）、わずかな性能の増加しか生じなかった（ＡＵＣは０．７９２対０．７８０、ｐ＝０．０５９）。女性のＤＲＳの平均は男性よりも１．３５低いことに注目されたい（ｐ＜０．０００１）。しかし、この性別の差異は糖尿病を発生するリスクの差異を正確に反映しており、ＤＲＳの性能は両方の性別で同等である（女性および男性でそれぞれＡＵＣ＝０．７７０および０．７８３、ｐ＝０．７９０８）。
このネステッド症例対照研究からの結果をＩｎｔｅｒ９９コホート内のリスクがある集団全体に外挿し、ＤＲＳを個体の絶対的糖尿病を発生するリスクへと変換する方法を提供するために、ベイズの法則を適用して、ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ２および年齢≧３９歳の集団で観察された５．７％の糖尿病への５年転換率について調節した。
図３は、ＦＰＧおよび２時間グルコースを測定することによって達成されたリスクと、このＤＲＳモデルを使用して達成されたものとの層別化を比較する。図３Ａは、ＤＲＳが、リスクがある集団において２型糖尿病へと進行するリスクの連続的な測度を提供することを示している。図３Ｂは、ＩＦＧについて１００ｍｇ／ｄＬの閾値を使用したＦＰＧクラスによるリスクレベルを例示する。ＩＦＧ群は、試験前確率よりも１．４倍高い５年転換のリスクを有しており、リスクがある集団の５６％を構成する。図３Ｃは、個体を低い、中程度、および高いリスクの群へと層別化するためにこのＤＲＳを使用した場合の、それぞれの層中のリスクのレベルを例示する。高いリスクの群中の個体は、試験前確率よりも３．５倍増加したリスクを有しており、集団の１０％を構成する。低いリスクの群中の個体は、３．５倍低いリスクを有しており、集団の５４％を構成し、残りの中程度のリスクの群は、１．３倍増加したリスクを有しており、集団の３６％を構成する。ＡＵＣの比較から予想され得るように、ＩＧＴを有する被験体（集団の１４．６％）における糖尿病を発生するリスクは２４．５％であり、これは高いリスクのＤＲＳ群におけるリスクに類似している。それにもかかわらず、ＤＲＳによって同定された低いリスクの群は１．６％の糖尿病を発生するリスクを有しており、これは、この研究においてＮＦＧ（２．４％）またはＮＧＴ（２．５％）のどちらかを有する被験体よりも低い。
図３
バイオマーカーおよび脂質代謝物の分析
このバイオマーカーのパネルを同定するために、血清中のタンパク質の測定に超高感度な分子計数技術を使用して、２つの欧州のコホート（ＢｏｔｎｉａおよびＩｎｔｅｒ９９）中の９０個を超えるタンパク質バイオマーカー（Ｌｙｓｓｅｎｋｏら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５４巻：１６６〜１７４頁、２００５年：Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｒｅｖ． Ｒｅｈａｂｉｌ、１０巻：３７７〜３８６頁、２０００年）。これら２つの研究から作成したアルゴリズムにより、集団年齢≧３９歳およびＢＭＩ≧２５において約０．７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を有する受信者動作曲線（ＲＯＣ）が生じた。
性能評価に関して、２つの直交性の基準組をマーカー選択に使用した。第１の基準は、２つの別々の集団コホート中の糖尿病転換者の結果研究に基づいてマーカーを選択した。マーカーの優先順位付けの段階的な手順は、１）コホート間の一変量性能の一貫性、２）縮小および段階的な選択技法を介した次元縮小、ならびに３）１つ残す（ＬＯＯ）および逆方向の排除手順を使用した相対的な順位付けに基づいたマーカーのフィルタリングを含む。この分析の結果を使用して、結果間を識別する生じるモデルの能力（ブートストラップＡＵＣ（ｂｓＡＵＣ）によって評価）、および尤度比試験（ＬＲＴ）などのモデルの当てはめの測度によって評価した多変量アルゴリズムにおけるマーカーの貢献の相対的強度に従って、臨床的、タンパク質および脂質マーカーの優先順位を付けた。
第２の基準組は、脂質マーカーを、いくつかの処置に基づいた研究のメタ分析におけるその一変量性能に基づいてさらに評価した。脂質マーカーは、糖尿病の処置に関連する薬物介入および生活習慣の改変の複数の研究にわたる、その一変量性能の一貫性に基づいて選択した。
両方の選択基準組からのマーカーリストを組み合わせ、縮小技法を使用した次元縮小に再度提出し、および単一の結果に基づいた研究を使用したＬＲＴによって測定されるＬＯＯおよびＢＷＤの排除手順におけるその相対的性能に基づいて再度優先順位を付けた。その後、そのそれぞれを相互妥当性確認したＡＵＣを使用して単一の結果に基づいた研究において比較的に評価した、すべてのマーカーの組合せを使用して複数のモデルを構築した徹底的検索技法を使用して、この「性能に基づいた」マーカーリストを照合した。マーカーの相対的重要性は、これらのモデル内の係数のｐ値および再サンプリングの複数の反復におけるマーカーの選択頻度によって評価した。
その後、「性能に基づいた」リストにおける脂質マーカーのサブセットを、分析の安定性、測定の制限、および規定されたタイムライン内にアッセイを開発する能力の検討事項に基づいて吟味した。この吟味手順に通らないいくつかの脂質を、良好な一変量性能、良好なシグナル対ノイズ特徴を示し、質量−異性体の間の区別に関して制限のない、代替の生物学的な類似体および誘導体で置き換えた。
生じたタンパク質、臨床的手段、および吟味した脂質代謝物のリストを、徹底的検索技法に再度供した。生じたモデル例の相対的性能および相対的マーカー性能を添付の補助資料に注記する。また、ＯＧＴＴに対するモデル例の性能も含める。
表１４は、高度に予測的であると同定された１４個のマーカーを示し、増殖因子、サイトカイン、ホルモン、コレステロールエステルおよびリゾホスファチジル（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｌｙ）コリンクラスからの脂質、ならびにグルコース代謝の特定の分子を含めた、糖尿病の発生に関連するいくつかの異なる分子クラスが含まれる。
Figure 2015052617
追加の試験の結果を、妥当性確認したアッセイを使用して、ＣＬＩＡに認定されたＴｅｔｈｙｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにおいて、３０〜６０歳の被験体で生成した。この研究におけるＡＵＣは０．８４であった（図４を参照）。特定の脂質分子を複数マーカーモデル内に取り込ませた予備結果では、ＡＵＣの有意な増加が示された。
これらのバイオマーカーは、インスリン耐性、肥満症、内分泌障害、および高血糖症などの、糖尿病への進行に関連する多くの経路にまたがる。図５は、ＢｏｔｎｉａおよびＩｎｔｅｒ９９の研究から作成した１つまたは複数のアルゴリズムにおいて糖尿病の予測に情報価値があると示された、それぞれの経路中のマーカー数を示す。一部のマーカーは様々な経路に重複する。
（実施例２）
妥当性確認した脂質アッセイ
生物学的試料は、単純な内部標準の添加およびタンパク質の沈殿によって以下のように調製した。内部標準の混合物（３つの奇数鎖の類似体：ＣＥ１５：１、ＣＥ１７：０、ＬＹ１７：０）を２０μＬの血清試料に加えた。その後、試料を少なくとも３秒間渦攪拌した。タンパク質を沈殿させるために、１ｍＬの５０／５０のＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３を試料に加え、次いで少なくとも３秒間渦攪拌した。その後、試料を１０分間、１７０００×Ｇで遠心分離した。続いて、上清を２ｍＬのガラスバイアルに移し、Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣシステムのオートサンプラーに載せた。オートサンプラーは１０℃に維持した。試料（試料あたり２ｕＬ）をＷａｔｅｒｓ Ｖａｎｇａｕｒｄ ＢＥＨ Ｃ１８プレカラム（２．１×５ｍｍ、１．７ｕｍ）を備えたＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ ＢＥＨ
Ｃ１８カラム（２．１×３０ｍｍ、１．７ｕｍ）に注入した。カラム区画を８０℃まで加熱した。溶媒Ａは水中に５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ２であった。溶媒ＢはＭｅＯＨ中に５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ２であった。０〜１分間の間、カラムを８０％の溶媒Ｂに維持し、その後、１分間で１００％のＢまで勾配させ、１００％のＢで１．７分間保った。カラムをすぐに８０％に戻し、１．２分間、再度平衡化させた。流速は１ｍＬ／分であった。Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣをＷａｔｅｒｓ Ｘｅｖｏ ＴＱＤ質量分析装置に連結させた。分析物は陽性エレクトロスプレーによってイオン化し、質量分析装置はアルゴンを衝突ガスとして用いてタンデムＭＳモードで稼動した。Ｗａｔｅｒｓ ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアを使用して、すべての分析物および内部標準のクロマトグラフィーピークを自動的に積分した。その後、ピーク面積比（分析物／内部標準）を計算し、その後、外部検量線を使用して絶対的分析物濃度へと変換した。

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