JP2015043702A - 核酸配列計測方法、核酸配列計測用デバイス、核酸配列計測用デバイスの製造方法および核酸配列計測装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ターゲットが供給されない場合には、結合部を介する結合が維持されて、蛍光分子に接近した消光物質により蛍光分子の蛍光が消光される。ターゲットが供給された場合には、検出部にターゲットが結合して結合部を介する結合が解消され、消光物質が蛍光分子から離れることにより蛍光分子が蛍光を呈する。
【選択図】図1
Description
前記核酸配列計測用デバイスは、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈し、
前記核酸配列計測方法は、
前記核酸配列計測用デバイスによりハイブリダイゼーションを行うステップと、
ハイブリダイゼーションを行った前記核酸配列計測用デバイスからの蛍光を測定するステップと、
を備えることを特徴とする。
この核酸配列計測方法によれば、互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブの基端がそれぞれ固定されるので、消光効果を適切に発揮させることが可能となり、検出感度を良好なものとすることができるとともに、ラべリング工程が不要となり、洗浄工程を省略することも可能となる。
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈することを特徴とする。
この核酸配列計測用デバイスによれば、互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブの基端がそれぞれ固定されるので、消光効果を適切に発揮させることが可能となり、検出感度を良好なものとすることができるとともに、ラべリング工程が不要となり、洗浄工程を省略することも可能となる。
前記核酸配列計測用デバイスは、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈し、
前記核酸配列計測用デバイスの製造方法は、
前記結合部を介して前記蛍光プローブおよび前記消光プローブを結合させるステップと、
前記結合部を介して互いに結合された状態で、前記蛍光プローブおよび前記消光プローブを前記固相面に結合させるステップと、
を備えることを特徴とする。
この核酸配列計測用デバイスの製造方法によれば、結合部を介して互いに結合された状態で、蛍光プローブおよび消光プローブを固相面に結合させるので、蛍光プローブおよび消光プローブの位置関係を適切に管理でき、消光効果を適切に発揮させることが可能となるため、検出感度を良好なものとすることができる。
前記核酸配列計測用デバイスは、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈し、
前記核酸配列計測装置は、
ハイブリダイゼーションを行った前記核酸配列計測用デバイスからの蛍光を測定することを特徴とする。
この核酸配列計測装置によれば、互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブの基端がそれぞれ固定されるので、消光効果を適切に発揮させることが可能となり、検出感度を良好なものとすることができるとともに、ラべリング工程が不要となり、洗浄工程を省略することも可能となる。
まず、蛍光プローブ10および消光プローブ20を混合したプローブ液を調製し、プローブ濃度を調整する。
次に、プローブ液を加熱後、急冷し、蛍光プローブ10と消光プローブ20をカップリングさせる。これにより、X部12およびY部22を介して蛍光プローブ10と消光プローブ20が結合される。ここでは、例えば、プローブ液を95℃に加熱後、5分間温度を保持し、その後、25度に急冷することで蛍光プローブ10と消光プローブ20をカップリングさせる。
次に、蛍光プローブ10と消光プローブ20がカップリングした状態にあるプローブ液を固相面にスポットして、蛍光プローブ10と消光プローブ20を固相面100に固定化する。
次に、固相面100を洗浄し、固定化されていない余剰のプローブを除去する。以上の手順により、DNAチップが製造される。
11 蛍光分子
12 X部(結合部)
13 検出配列(検出部)
14 リンカー(基端)
20 消光プローブ
21 消光物質
22 Y部(結合部)
23 検出配列(検出部)
24 リンカー(基端)
60 蛍光読取装置(核酸配列計測装置)
Claims (10)
- ハイブリダイゼーションによりサンプルに含まれる特定の核酸配列を有するターゲットを計測する核酸配列計測用デバイスを用いた核酸配列計測方法において、
前記核酸配列計測用デバイスは、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈し、
前記核酸配列計測方法は、
前記核酸配列計測用デバイスによりハイブリダイゼーションを行うステップと、
ハイブリダイゼーションを行った前記核酸配列計測用デバイスからの蛍光を測定するステップと、
を備えることを特徴とする核酸配列計測方法。 - 前記蛍光を測定するステップでは、前記核酸配列計測用デバイスに供給された溶液を洗浄しない状態で、前記核酸配列計測用デバイスからの蛍光を測定することを特徴とする請求項1に記載の核酸配列計測方法。
- ハイブリダイゼーションによりサンプルに含まれる特定の核酸配列を有するターゲットを計測する核酸配列計測用デバイスにおいて、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈することを特徴とする核酸配列計測用デバイス。 - 前記検出部は前記蛍光プローブに設けられることを特徴とする請求項3に記載の核酸配列計測用デバイス。
- 前記固相面は、平面基板上またはビーズ上に設けられることを特徴とする請求項3または4に記載の核酸配列計測用デバイス。
- 前記結合部の少なくとも一部が前記検出部として機能することを特徴とする請求項3〜5のいずれか1項に記載の核酸配列計測用デバイス。
- 前記消光プローブが前記蛍光プローブよりも多いことを特徴とする請求項3〜6のいずれか1項に記載の核酸配列計測用デバイス。
- ハイブリダイゼーションによりサンプルに含まれる特定の核酸配列を有するターゲットを計測する核酸配列計測用デバイスの製造方法において、
前記核酸配列計測用デバイスは、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈し、
前記核酸配列計測用デバイスの製造方法は、
前記結合部を介して前記蛍光プローブおよび前記消光プローブを結合させるステップと、
前記結合部を介して互いに結合された状態で、前記蛍光プローブおよび前記消光プローブを前記固相面に結合させるステップと、
を備えることを特徴とする核酸配列計測用デバイスの製造方法。 - ハイブリダイゼーションによりサンプルに含まれる特定の核酸配列を有するターゲットを核酸配列計測用デバイスを用いて計測する核酸配列計測装置において、
前記核酸配列計測用デバイスは、
互いに独立した蛍光プローブおよび消光プローブと、
前記蛍光プローブの基端および前記消光プローブの基端がそれぞれ固定される固相面と、
を備え、
前記蛍光プローブには蛍光分子が付加されるとともに、前記消光プローブには消光物質が付加され、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには互いに相補的な配列を有する結合部がそれぞれ設けられ、
前記蛍光プローブまたは前記消光プローブには、前記核酸配列と相補的な配列を有する検出部が設けられ、
前記ターゲットが供給されない場合には、前記結合部を介する結合が維持されて、前記蛍光分子に接近した前記消光物質により前記蛍光分子の蛍光が消光され、
前記ターゲットが供給された場合には、前記検出部に前記ターゲットが結合して前記結合部を介する結合が解消され、前記消光物質が前記蛍光分子から離れることにより前記蛍光分子が蛍光を呈し、
前記核酸配列計測装置は、
ハイブリダイゼーションを行った前記核酸配列計測用デバイスからの蛍光を測定することを特徴とする核酸配列計測装置。 - 前記核酸配列計測装置は、前記核酸配列計測用デバイスに供給された溶液を洗浄しない状態で、前記核酸配列計測用デバイスからの蛍光を測定することを特徴とする請求項9に記載の核酸配列計測装置。
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