JP2014530752A - 微生物産生物の生産用平衡系及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
以下の用語は、本開示内で用いられる。
「バイオリアクタ」は、特定の微生物の成長に都合のよい、完全に別々の順序で配置される物理的格納系である。
「フェーズ空間」は、特定の生物学的反応に都合のよい、別個の単離された環境である。
「フェーズプロファイル」は、フェーズ空間についての物理的、時間的、及び生物学的パラメータの所定の組である。
「フェーズデータの組」は、フェーズ空間及び関連付けられたフェーズプロファイルと相関するデータの組である。
「有機負荷速度」は、有機原料がある物理的系に導入される速度である。
「水圧荷速度」は、水がある物理的系に導入される速度である。
「内部再利用速度」は、作動流体がフェーズ空間内で再利用される速度である。
「液体送り速度」は、作動流体がフェーズ空間間で転送される速度である。
「液体滞留時間」は、作動流体がフェーズ空間内に存在する時間である。
「作動流体」は、ある生物の生活環境及び栄養素を、フェーズ空間を通じて支持し、輸送する流体物質である。
実施形態は、農学において用いる微生物産生物及び関連する副生成物の生成のための系及び方法を提供する。
(a)該有機材料が加水分解される、第1のフェーズと;
(b)該第1のフェーズと一部重複する第2のフェーズであって、上記(a)の加水分解物が、酸生成及び酢酸生成に供され、水素、二酸化炭素、揮発性有機酸、及びメタン生成前駆体を含む材料を得る、第2のフェーズと;
(c)該第2のフェーズと一部重複する第3のフェーズであって、該(b)中の材料中の該メタン生成前駆体が、メタンに変換され、該(b)中の材料が、さらに脱窒に供される、第3のフェーズと;
(d)該第3のフェーズと一部重複する第4のフェーズであって、該(c)からの材料が、安定化及び先祖返りに供される、第4のフェーズと;
を備える多フェーズ方法が提供される。
(a)各フェーズについてプロファイルの組(以下「フェーズプロファイル」)を受信することと;
(b)各フェーズからの物理データの組(pHレベル、COD、伝導度、及び/又は、温度を含み得るが、これらに限定されない)を監視することと;
(c)各フェーズからのプロファイルの組を、各フェーズからの物理データの組と比較することと、;
(d)(c)の比較に基づいて、各フェーズに対する制御応答を導出することと;
(e)制御応答を各フェーズに適用することと;
を更に備える。
(a)作動流体内に含まれ得る、有機材料の加水分解のための第1のフェーズ空間と;
(b)第1のフェーズ空間からの有機材料の酸生成及び酢酸生成のための第2のフェーズ空間であって、(a)の第1のフェーズ空間と一部重複する第2のフェーズ空間と;
(c)第2のフェーズ空間からの有機材料のメタン生成のための第3のフェーズ空間であって、(b)の第2のフェーズ空間と一部重複する第3のフェーズ空間と;
(d)(c)の有機材料の安定化及び先祖返りのための第4のフェーズ空間であって、(c)の第3のフェーズ空間と一部重複する第4のフェーズ空間と;
を備えるようにしてもよい。
(a)第1のフェーズ空間が、有機材料を含む作動流体を第1の循環速度で、第1のフェーズ及び該第1のフェーズ空間中の第2のフェーズを通じて再循環させ、作動流体を第2のフェーズ空間に液体送り速度で送り;
(b)第2のフェーズ空間が、作動流体を第2の循環速度で、第2のフェーズ及び該第2のフェーズ空間中の第3のフェーズを通じて再循環させ、作動流体を第3のフェーズ空間に液体送り速度で送り;
(c)第3のフェーズ空間が、作動流体を第2の循環速度で、第2のフェーズ、第3のフェーズ、及び第4のフェーズを通じて再循環させ、作動流体を第4のフェーズ空間に液体送り速度で送り;
(d)第4のフェーズ空間は、作動流体を第2の循環速度で、第3のフェーズ及び第4のフェーズを通じて再循環させ、作動流体を出口ポートに液体送り速度で送る。
(a)第1のフェーズ空間は、メタン生成、硫黄還元、塩素除去(脱塩素化)、鉄酸化、硝化、及び芳香族分解からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み、以下の微生物に限定されるものではないが、シントロファス属(Syntrophus)、デスルフォビブリオ属(Desulfovibrio)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、又は、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)のうちの少なくとも1つを含んでいてもよく;
(b)第2のフェーズ空間は、メタン生成、塩素除去、芳香族分解、脱窒、硝化、嫌気性アンモニア酸化、及び高CO2からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み、以下の微生物に限定されるものではないが、シントロファス属(Syntrophus)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、オーウェンウィークシア属(Owenweeksia)、又は、スフィンゴモナス属(Sphingomonas)のうちの少なくとも1つを含んでいてもよく;
(c)第3のフェーズ空間は、芳香族分解、脱窒、硝化、従属栄養体、硝化、メタン資化性及び高CO2からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み、以下の微生物に限定されるものではないが、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、セディミニ属(Sedimini)、メチロノマス属(Methylonomas)、又は、スフィンゴモナス属(Sphingomonas)のうちの少なくとも1つを含んでもよく;
(d)第4のフェーズ空間は、メタン生成、芳香族分解、脱窒、硝化、従属栄養体、硝化、嫌気性、硫黄酸化、嫌気性アンモニア酸化、高CO2及び鉄酸化からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み、以下の微生物に限定されるものではないが、シントロファス属(Syntrophus)、デスルフォビブリオ属(Desulfovibrio)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、ベリリネア属(Bellilinea)、スルフリタレア属(Sulfuritalea)及びオーウェンウィークシア属(Owenweeksia)を含んでもよい。
(a)作動流体を混合して該混合された作動流体を第1のフェーズ空間に流し込むための第1のフェーズ空間に接続された保持タンクと;
(b)第4のフェーズ空間に接続された低温殺菌装置と;
(c)低温殺菌装置に接続された濃縮装置と;
更に備える。
(a)有機材料を供給する。ここで、該有機材料は、作動流体の第1の部分として、第1のフェーズ空間、第2のフェーズ空間、第3のフェーズ空間及び第4のフェーズ空間の総作動容量の1立方フィート当たり0.001から約0.1ポンドまでの範囲の有機性の供給原料である。
(b)作動流体の第2の部分として、2単位の有機性の供給原料当たり約1単位から10単位の有機性の供給原料に対して、約1単位の範囲で、有機性の供給原料に比例した量の水を供給する。
(a)乾燥活性酵母を、第1のフェーズ空間内の作動流体に、5000ガロンの作動流体当たり約0.2〜約2ポンドの乾燥活性酵母の量で導入することと;
(b)第2の作動流体を、第1のフェーズ空間内の作動流体に、1〜5ガロンの範囲の量で導入することと;
を更に含み、ステップ(a)及び(b)は、約38〜約40℃の間の温度で行われる。
(a)pHレベルデータを、7.5〜8.8の範囲内で、最終pHレベルに合わせ込むステップ
(b)化学的酸素要求量レベルデータを、90mg/L〜120mg/Lの範囲内で、最終化学的酸素要求量レベルに適合させるステップ
(c)伝導度レベルデータを、約900μS〜1200μSの範囲で、最終伝導度レベルに合わせ込むステップ
(a)作動流体を混合するための保持タンクと;
(b)作動流体を再循環させるために、保持タンクに接続された完全混合リアクタと;
(c)作動流体から固体を分離するために、完全混合リアクタに接続された浄化装置と;
(d)有機材料の加水分解、酸生成、酢酸生成、メタン生成、安定化、及び、再構成のための4つ以上の充填層リアクタであって、各充填層リアクタが、固定された培地(media)を含み、各充填層リアクタが、少なくとも隣接した充填層リアクタと流体連通しており、完全混合リアクタに接続された浄化装置が、第1の充填層リアクタと流体連通しており、充填層リアクタが、浄化装置に連結された該完全混合リアクタに隣接しており、固定された培地が各充填リアクタの内側に固定されている4つ以上の充填層リアクタと;
(e)該リアクタからの処理された有機材料を堆積し、最終充填層リアクタに操作可能に接続された容器であって、充填層リアクタが、少なくとも第4の充填層リアクタである容器と;
を備える多フェーズバイオリアクタも提供される。
(a)格納系に操作可能に連結された一組の系制御部と;
(b)格納系に操作可能に連結された一組の系センサと;
(c)一組の系センサから導出された一組のフェーズデータの組と;
(d)一組のフェーズプロファイルと;
を追加として備えるようにしてもよい。
(a)pHが約7.5〜8である;
(b)COD範囲は約150mg/L未満である;
(c)伝導度の範囲は約600μS〜1400μSである;
(d)白金:コバルト(pt/co)スケールにおいて、約500pt/co単位〜約700pt/co単位の間の透明な琥珀色;
(e)シントロファス属(Syntrophus)、デスルフォビブリオ属(Desulfovibrio)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、ベリリネア属(Bellilinea)、スルフリタレア属(Sulfuritalea)、及び、オーウェンウィークシア属(Owenweeksia)を含む;
(f)107個細胞/mLを超えるバイオマスを有する;
(g)約10〜60ng/mLのDNAを含有する;
(h)少なくとも8種類の微生物種を含む。
具体的な実施形態において、上記土壌改良剤は、1回のみ出現する少なくとも20種の微生物を更に含む。
作動流体が流れる物理的格納系が提供される。作動流体は、系内を約1ガロン/分の流量で流れる。作動流体は、該作動流体内の栄養素により栄養を供給される多数の競合微生物種を維持する。物理的格納系は、フェーズ空間を独立した順序で配置して、多フェーズバイオリアクタを作る。この順序は、有機材料の処理を容易にする前条件及び後条件に基づいている。フェーズ空間には、所定の制御された好ましい環境が提供され、その中で生物群落が予測可能かつ計画された方法で反応する。上記物理的格納系は、環境をリアルタイムで調整することを可能にする。本実施形態は、微生物産生物の端から端までの生成を記載する。多フェーズ空間は、種々の微生物産生物の使用と同時に生成を促すものであってもよい。
本実施形態で用いられる処理工程は、4つの連続的なフェーズを含む。図1は、本実施形態において実現される4フェーズを示すグラフである。第1のフェーズ105(曲線101で表される)は、加水分解フェーズを含む。第2のフェーズ106(曲線102で表される)は、酸生成及び酢酸生成フェーズを含む。第3のフェーズ107(曲線103で表される)は、メタン生成フェーズを含む。第4のフェーズ108(曲線104で表される)は、先祖返り/安定化フェーズを含む。各フェーズにおける特定の生物集団の数的優勢が、存在する他の生物集団の数的優勢よりも助長される。本実施形態の1つの特徴は、フェーズの一部重複である。あるフェーズが終わると、次のフェーズが始まる。さらに、上記フェーズは、物理的包含系内の発生時点に移行し得る。他の実施形態では、他のフェーズが存在することができ、また、特定のフェーズを繰り返すことができ、異なる生態及び栄養素が存在する追加的な又は異なるフェーズを反映する。
各フェーズ空間は、フェーズプロファイルとして知られている一組の物理的、化学的、生物学的及び時間的パラメータにより特徴付けられる。各フェーズプロファイルは、予め定められており、フェーズの類型及びその開始と完了の特徴を反映したものとなっている。物理的格納系は、各パラメータを各フェーズ空間内に定期的に登録及び記録して、フェーズデータの組を生成する。フェーズデータの組に基づいて、所望の微生物産生物の予測可能な生産を保証するために、複数の機能を行う系を制御するための制御入力が提供される。こうした制御系は、技術者又は自動化系により監視することができる。
フェーズデータの組は、物理的格納系及び作動流体の物理特性の測定値の組である。フェーズデータの組は、各フェーズ空間内に存在する生物活性を特徴付ける。フェーズデータの組は、工程制御のフィードバックを提供するために用いられ、物理的格納系内の条件の改変を可能にし、物理的格納系に含まれる生物を制御する。フェーズデータの組は、最終的な微生物産生物の稠度を確保するために、連続的に監視される。
各フェーズ空間における物理的格納系内の液体負荷速度、送り速度、滞留時間、及び、循環速度中の水によるシアリングを慎重に調整することにより、作動流体内の微生物群落のコロニー形成を調整し、菌膜の成長を促進及び制御する。液体負荷速度及び滞留時間の制御は、好適な微生物種同士の競合を最小限に抑え、各フェーズ内の反応効率を最大化して、菌膜の発達を増進させる。
図3に示されるように、一定流量の作動流体327を格納し、入力供給原料301から微生物産生物303へ向かって反応を進行させる物理的格納系302が提供される。物理的格納系302は、系制御部304、305、306及び307を含む。好適な実施形態においては、系制御部304、305、306及び307は、ポンプ、弁、加熱器、換気系、タイマー、廃棄物排出口であり、作動流体327に対して生物学的変化を生じさせる。
物理的格納系302の第1のフェーズ空間は、保持タンクに接続され、浄化装置と連結された完全混合リアクタ(CMR)を備える。第1のフェーズ328は、作動流体327、すなわち、有機性の供給原料及び水がCMRの中に供給されると開始する。
組み合わされた負荷速度=(0.001〜0.1ポンド)の有機性の供給原料/ft3リアクタ混合培地体積/日)+(0.2〜2ポンドの乾燥活性酵母/5,000ガロンの液体淡水入力)(28〜40℃において)
であり、安定した処理済材料製品を5〜14日の系HDT(液体滞留時間)で産出する。
組み合わせた負荷速度=(0.01ポンド有機原料/ft3リアクタ固定培地体積/日)+(1ポンドの乾燥活性酵母/5,000ガロン液体淡水入力)(34℃において)
であり、安定した処理済材料製品を7日のHDT(液体滞留時間)系で産出する。
本実施形態において、充填層リアクタのそれぞれは、開放セルで設計されており、作動流体327の自由な移動が可能となっている。固定培地は、各充填層リアクタの内側に固定されている。固定培地は、微生物群落と作動流体327との接触表面積を増加させる材料を含む。固定培地はまた、菌膜をしっかりと固定するための安定したプラットフォームを提供する。固定培地は、いくつかの種類のものでもよく、耐久性プラスチック、ポリ塩化ビニル(PVC)、金属、金属合金、ガラス、ガラス配合物(compound)、繊維ガラス又は任意の適度に強度のある不活性材料を含む。固定培地の設計及び構成は、作動流体327が各充填層リアクタを通過して自由に移動し、ファウリング(fouling)を防ぐのを可能にする、様々な幾何学的パターンを想定することができる。自由流れは、制御された液体の切り混ぜをサポートし、時間内に作動流体327の均等な分布を促進する。本実施形態において、固定培地は、各充填層リアクタの断面積全体に分散する。
(第1のフェーズの数的結果)
第1のフェーズ328内の作動流体327のサンプルは、物理的格納系302から採取し、第1のフェーズ328内の作動流体327のサンプル内に含まれる微生物は、ピロシーケンシングを用いて解析する。このピロシーケンシングから、第1のフェーズ328の微生物を、PCR増幅された16S rRNA遺伝子断片のリボタイプと呼ばれる配列から同定し、第1のフェーズ328内の物理的格納系302の有用性が確認される。第1のフェーズ328のサンプルの解析結果を、以下の表1に示す。
本実施形態において、第1のフェーズ328のフェーズプロファイル316は、pH、COD、伝導度及び温度の範囲を含んでいる。これらのパラメータのそれぞれを監視するためのデータ取得センサ308を、各容器の内側に取り付けるか、又は、各容器に接触させる。データは、第1のフェーズ328のフェーズデータの組312を形成するために、連続的にデータ取得センサ308から取得する。
第1のフェーズ空間のCMR及び浄化装置内の所定の液体滞留時間後に、作動流体327は、第1のフェーズ空間から第2のフェーズ空間に移す。
本実施形態において、循環速度の比は、約25:1〜35:1の範囲内である。第2のフェーズ空間は、データ取得センサ309を通じて、pH(好ましくは約6.0〜8.0の範囲内)、COD(好ましくは約100mg/L〜400mg/Lの範囲内)、及び、伝導度(好ましくは約1000μS〜1600μSの範囲内)について監視する。
第2のフェーズ329内の作動流体327のサンプルを、物理的格納系302から採取し、第2のフェーズ329内の作動流体327のサンプルに含まれる微生物を、ピロシーケンシングを用いて解析する。このピロシーケンシングにより、第2のフェーズ329の微生物を、PCR増幅16S rRNA遺伝子断片の配列(リボタイプと呼ばれる)から同定し、第2のフェーズ329内の物理的格納系302の有用性を確認する。第2のフェーズ329の解析結果のサンプルを、表3に示す。
本実施形態において、第2のフェーズ空間のPBR内又は隣接した位置にあるデータ取得センサ309は、pHレベル、COD、伝導度及び温度を含む、データを第2のフェーズ329のフェーズデータの組313として収集する。フェーズデータの組313を、第2のフェーズ329のフェーズプロファイル317と比較する。フェーズデータの組313が、フェーズプロファイル317と適合する場合には、系制御の変更を行わない。フェーズデータの組313がフェーズプロファイル317と適合しない場合には、制御フィードバック326についてルックアップテーブル322を閲覧し、フェーズプロファイル317に対してパラメータを調整するために、物理的格納系302の系制御部305を行なう。本実施形態において、系制御部305は、ある場合には手動で、また、他の場合には自動的に調整してもよい。
第2のフェーズ空間において所定の液体滞留時間後に、作動流体327を、第2のフェーズ空間から第3のフェーズ空間に移す。作動流体327は、第2のフェーズ空間から第3のフェーズ空間に毎分1ガロンの液体送り速度で移し、物理的格納系302の液体滞留時間と有機物負荷との所定の平衡を維持するために、第2のフェーズ空間の全体積に比例するように調整することができる。
第3のフェーズ空間を、データ取得センサ310を通じて、pH(好ましくは約7.0〜8.0の範囲内)、COD(好ましくは約100mg/L〜400mg/Lの範囲内)、及び、伝導度(好ましくは約700μS〜1500μSの範囲内)について監視する。
第3のフェーズ330内の作動流体327のサンプルを、物理的格納系302から採取し、第3のフェーズ330の作動流体327のサンプル内に含まれる微生物を、ピロシーケンシングを用いて解析する。このピロシーケンシングにより、第3のフェーズ330の微生物を、PCR増幅16S rRNA遺伝子断片の配列(リボタイプと呼ばれる)から同定し、第3のフェーズ330内の物理的格納系302の有用性を確認する。第3のフェーズ330内の作動流体327の解析結果のサンプルを、以下の表5に示す。
本実施形態において、データ取得センサ310は、第3のフェーズ空間の物理的格納系302を形成するPBR内又は隣接した位置に設置する。データ取得センサ310は、プロセッサ320を有する、SCADA系処理コントローラにデータを送信し、センサ入力及び既定の範囲に基づいて、温度、負荷速度、循環速度及び液体送り速度を調節する。第3のフェーズ330のフェーズデータの組314を、第3のフェーズ330のフェーズプロファイル318と比較する。比較によりフェーズデータの組314が、フェーズプロファイル318と適合することが示された場合、系制御の変更を行わなかった。フェーズデータの組314がフェーズプロファイル318と適合しない場合には、ルックアップテーブル323を閲覧して、物理的格納系302の制御フィードバック326を決定する。制御フィードバック326は、バルブ及びモーター制御などの機構を含む系制御部306を介して行われ、物理的格納系302の条件を変更する。第3のフェーズ330の制御フィードバック326は、以下の表6により決定する。
第3のフェーズ空間において所定の液体滞留時間後に、作動流体327を、第3のフェーズ空間から第4のフェーズ空間に移す。作動流体327を、第2のフェーズ空間から第3のフェーズ空間に毎分1ガロンの液体送り速度で移し、物理的格納系302の液体滞留時間と有機物負荷との所定の平衡を維持するために、第3のフェーズ空間の全体積に比例するように調整することができる。
第4のフェーズ空間は、データ取得センサ311を介して、pH(好ましくは約7.6〜8.3の範囲内)、COD(好ましくは約80mg/L〜150mg/Lの範囲内)、及び、伝導度(好ましくは約900μS〜1200μSの範囲内)について監視する。
第4のフェーズ331内の作動流体327のサンプルを、物理的格納系302から採取し、第4のフェーズ331内の作動流体327のサンプル内に含まれる微生物を、ピロシーケンシングを用いて解析する。このピロシーケンシングにより、第4のフェーズ331の微生物は、PCR増幅16S rRNA遺伝子断片の配列(リボタイプと呼ばれる)から同定され、第4のフェーズ331内の物理的格納系302の有用性を確認する。さらに、第4のフェーズ331内の菌膜サンプルを、第4のフェーズ空間から採取する。第4のフェーズ331内の菌膜中の微生物は、ピロシーケンシングを用いて解析する。第4のフェーズ331の解析結果のサンプルを、以下の表7に示す。
フェーズデータの組315を、第4のフェーズ331のPBR内又は隣接したデータ取得センサ311から取得する。第4のフェーズ331のフェーズデータの組315を、pH、COD、伝導度及び温度を含む。フェーズデータの組315は、第4のフェーズ331のフェーズプロファイル319と比較する。比較が差異を示さない場合、次に系制御部307に対して制御入力を行わない。しかし、フェーズデータの組315がフェーズプロファイル319と適合しない場合には、制御フィードバック326に対する適切な入力について、ルックアップテーブル324を閲覧する。データ取得センサ311は、プロセッサ320を有する、SCADA系処理コントローラにデータを送信し、センサ入力及び既定の範囲に基づいて、温度、負荷速度、循環速度及び液体送り速度を調節する。第4のフェーズ331の制御フィードバック326は、以下の表8により決定する。
図5を参照すると、一実施形態では、物理的格納系500は、完全混合リアクタ501と、完全混合リアクタ501に接続された浄化装置502と、浄化装置502に順次接続された一連の充填層リアクタ503、504、505、506、507及び508とを備えており、それらの全てが共働して4つのフェーズ空間を形成していた。低温殺菌装置701は、充填層リアクタ508に任意に接続することができ、濃縮装置702は、低温殺菌装置701に接続することができる。濃縮装置702は、最終微生物製品568、569及び570、並びに最終微生物製品のブレンド571、572及び573を産生する。
図6を参照すると、一実施形態では、物理的格納系600は、完全混合リアクタ601と、浄化装置602と、管609内に形成された、一連の充填層リアクタセクション603、604、605、606、607及び608とを備える。任意の数の充填層リアクタセクションが用いられてもよい。低温殺菌装置701は、充填層リアクタセクション608に任意に接続されていてもよく、濃縮装置702は、低温殺菌装置701に接続されていてもよい。濃縮装置702は、最終微生物製品660、661及び662、及び、最終微生物製品のブレンド663、664、及び665を産生する。
図5及び6を参照すると、物理的格納系500及び600は、任意の追加処理工程を含んでもよい。低温殺菌装置701内で、微生物産生物は、ボイラー系に入る前に熱交換器を介してポンプ圧送される。多フェーズバイオリアクタ内で形成された微生物産生物が予熱されて65℃〜72℃の範囲に昇温され、その温度範囲で最低約1時間保持される。その後に、微生物産生物を、熱交換器を介してポンプ圧送して戻すことによって冷却し、廃棄物を効率的に利用し、エネルギーを節約する。
最終微生物産生物が生産されると、TDS、及び、製品の透明度及び色などの他の要素を監視し、予想範囲と比較する。一定分量の最終微生物産生物は、化学的平衡及び微生物的平衡について手動で分析することができる。この分析は、系の自動化制御要素によって行われてもよい。コンピュータ化された処理制御系は、産生物が産生後処理のための準備が整ったことを示唆する表示デバイス上に情報を提供し得る。
植物の生育反応に対する土壌添加剤製品中の微生物の寄与を評価するために、レガシー系で産生された製品(図7を参照、以下「レガシー製品」という。)中、及び、上記の多フェーズバイオリアクタ系(図5及び6を参照)で産生された製品(以下「ペディゴ製品」という)中の微生物固体群を分析した。特に、レガシー製品及びペディゴ製品中の微生物の豊富さ及び微生物固体群の多様性を比較することにより研究を行った。
微生物の豊富さは、培地で検出された生菌数(プレートカウント:plate count)により定量した。全微生物群落は、代表的な試料から抽出したDNAのバイオマス分析を用いて定量した。
プレートカウントは、1/4の濃度のトリプチックソイアガー(Remel,Lenexa,KY)上に、製品の段階希釈物を播種することにより行った。解剖用の顕微鏡を利用してコロニーをカウントする前に、30℃で1週間、プレートをインキュベートした。
標準検査培地上のコロニー形成単位(CFU)の数に基づくと、ペディゴ製品は、レガシー製品(×9)より約1桁少ない細菌を含んでいた。この差は、ANOVA(P<0.002)によって決定されたように有意性が高く、「生の」(安定化製品)製品及び「AF」(加熱及び濃縮された)製品のいずれにおいても一貫していた。CFUに関して、生の製品は、AF製品よりも多い微生物を含んでいた。混合された微生物群落中で、10%未満の微生物がこれらのプレートカウントによって検出されたため、微生物のバイオマスも分子技術を用いて評価した。
ペディゴ製品は、レガシー製品よりも少ない微生物バイオマスを含み、より大きな固体群を含む系は、一般的に、より多様な個体群を含む。このため、ペディゴ製品をチェックして、この製品がレガシー製品と多様性が類似する群落を含むことを調べた。各系から生成された代表的な3つのバッチから、ライブラリを生成した。各バッチを段階希釈し、トリプチックソイ寒天上に総コロニー数が20〜30となるようにプレーティングし、全てのコロニーを、単離のために再度ストリークした。単離物を、製造元の指示書(MIDI,Inc. Newark,DE)に従って、シャーロックの微生物同定系を用いて、脂肪酸メチルエステル組成物に基づいて、これらのライブラリから分類した。
んでおり、種の総数はほぼ2倍であった。
Claims (37)
- 15日未満で有機材料を処理するための多フェーズ方法であって、
(a)前記有機材料が加水分解される、第1のフェーズと;
(b)前記第1のフェーズと一部重複する第2のフェーズであって、前記(a)の加水分解された材料が、酸生成及び酢酸生成に供され、水素、二酸化炭素、揮発性有機酸及びメタン生成前駆体を含む材料を得る、第2のフェーズと;
(c)前記第2のフェーズと一部重複する第3のフェーズであって、前記(b)中の材料中の前記メタン生成前駆体が、メタンに変換され、前記(b)中の材料が、さらに脱窒に供される、第3のフェーズと;
(d)前記第3のフェーズと一部重複する第4のフェーズであって、前記(c)からの材料が、安定化及び先祖返りに供される、第4のフェーズと;
を備える多フェーズ方法。 - 前記方法が、低温殺菌及び/又は濃縮のステップを更に備える、請求項1に記載の方法。
- (a)各フェーズについて一組のプロファイルを受信するステップと;
(b)各フェーズからの一組の物理データを監視するステップと;
(c)前記各フェーズからの一組のプロファイルを、前記各フェーズからの一組の物理データと比較するステップと;
(d)前記(c)の比較に基づいて、各フェーズに対する制御応答を導出するステップと;
(e)前記制御応答を各フェーズに適用するステップと;
を更に備える請求項1に記載の方法。 - 前記有機材料は供給原料である、請求項1に記載の方法。
- 作動流体を各フェーズに提供するステップを更に備える、請求項1に記載の方法。
- 前記第1のフェーズに提供される前記作動流体は有機材料であり、前記有機材料が、原料、水及び乾燥活性酵母である、請求項5に記載の方法。
- 前記有機材料が、生物刺激剤、土壌改良剤又は土壌添加剤を得るために処理される、請求項1に記載の方法。
- 前記一組の物理データを監視することが、pHレベル、COD、伝導度及び温度から成る群のうちの1つを監視することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記有機材料が、約5〜14日の間に処理される、請求項1に記載の方法。
- 有機材料から微生物群落を含む製品を生産するための多フェーズバイオリアクタ系であって、
(a)有機材料の加水分解のための第1のフェーズ空間と;
(b)前記第1のフェーズ空間からの有機材料の酸生成及び酢酸生成のための第2のフェーズ空間であって、前記(a)の第1のフェーズ空間と一部重複する第2のフェーズ空間と;
(c)前記第2のフェーズ空間からの有機材料のメタン生成のための第3のフェーズ空間であって、前記(b)の第2のフェーズ空間と一部重複する第3のフェーズ空間と;
(d)前記(c)の有機材料の安定化及び先祖返りのための第4のフェーズ空間であって、前記(c)の第3のフェーズ空間と一部重複する第4のフェーズ空間と;
を備える多フェーズバイオリアクタ系。 - 前記系が、低温殺菌装置及び/又は濃縮装置を更に備える、請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。
- 各フェーズ空間を監視及び/又は検出するための手段を更に備える、請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。
- 各フェーズ中の前記有機材料が、作動流体に含まれる、請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。
- (a)前記第1のフェーズ空間において、有機材料を含む作動流体を第1の循環速度で、第1のフェーズ及び前記第1のフェーズ空間中の第2のフェーズを通じて再循環させつつ、前記作動流体を前記第2のフェーズ空間に液体送り速度で渡し;
(b)前記第2のフェーズ空間において、作動流体を第2の循環速度で、前記第2のフェーズ及び前記第2のフェーズ空間内の第3のフェーズを通じて再循環させつつ、前記作動流体を前記第3のフェーズ空間に前記液体送り速度で渡し;
(c)前記第3のフェーズ空間において、作動流体を前記第2の循環速度で、前記第2のフェーズ、前記第3のフェーズ及び第4のフェーズを通じて再循環させつつ、前記作動流体を前記第4のフェーズ空間に前記液体送り速度で渡し;
(d)前記第4のフェーズ空間が、作動流体を前記第2の循環速度で、前記第3のフェーズ及び前記第4のフェーズを通じて再循環させつつ、前記作動流体を出口ポートに前記液体送り速度で渡し;
前記第1の循環速度及び/又は第2の循環速度が、前記液体送り速度に比例し、
これによって、前記第1のフェーズ空間に導入されるときの作動流体は、前記第1のフェーズ空間、前記第2のフェーズ空間、前記第3の(フェーズ)空間及び前記第4のフェーズ空間を順次通過して、前記微生物産生物を出口ポートで産出する、請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。 - 各フェーズ空間が、複数の微生物を含み、
(a)前記第1のフェーズ空間が、メタン生成、硫黄還元、脱塩素化、鉄酸化、硝化及び芳香族分解からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み;
(b)前記第2のフェーズ空間が、メタン生成、脱塩素化、芳香族分解、脱窒、硝化、アナモックス及び高CO2からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み;
(c)前記第3のフェーズ空間が、芳香族分解、脱窒、硝化、従属栄養体、硝化、メタン資化性菌、及び高CO2からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含み;
(d)前記第4のフェーズ空間が、メタン生成、芳香族分解、脱窒、硝化、従属栄養体、硝化、嫌気性生物、硫黄酸化、アナモックス、高CO2、及び鉄酸化からなる群から選択される代謝機能のうちの少なくとも1つを有する微生物を含む;
請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。 - 各フェーズ空間が、複数の微生物を含み、
(a)前記第1のフェーズ空間内では、前記微生物のうちの少なくとも1つが、シントロファス属(Syntrophus)、デスルフォビブリオ属(Desulfovibrio)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、又は、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)であり;
(b)前記第2のフェーズ空間内では、前記微生物のうちの少なくとも1つが、シントロファス属(Syntrophus)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、オーウェンウィークシア属(Owenweeksia)、又は、スフィンゴモナス属(Sphingomonas)であり;
(c)前記第3のフェーズ空間内では、前記微生物のうちの少なくとも1つが、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、セディミニ属(Sedimini)、メチロノマス属( Methylonomas)、又は、スフィンゴモナス属(Sphingomonas)であり;
(d)前記第4のフェーズ空間内では、前記微生物のうちの少なくとも1つが、シントロファス属(Syntrophus)、デスルフォビブリオ属(Desulfovibrio)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、ベリリネア属(Bellilinea)、スルフリタレア属(Sulfuritalea)、及び、オーウェンウィークシア属(Owenweeksia)である;
請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。 - 前記系が、さらに
(a)前記第1のフェーズ空間に接続された、前記作動流体を混合して、前記作動流体を前記第1のフェーズ空間に、ある負荷速度で流すための保持タンクと;
(b)前記第4のフェーズ空間に接続された低温殺菌装置と;
(c)前記低温殺菌装置に接続された濃縮装置と;
を備える請求項10に記載の多フェーズリアクタ系。 - 前記液体送り速度に比例した前記第1の循環速度が、毎分1ガロンの前記液体送り速度に対して、毎分20ガロンから、毎分40ガロンまでの範囲内の第1の比率となる循環速度である、請求項14に記載のバイオリアクタ系。
- 前記液体送り速度に比例した前記第2の循環速度が、毎分1ガロンの前記液体送り速度に対して、毎分25ガロンから、毎分35ガロンまでの範囲内の第2の比率となる循環速度である、請求項14に記載のバイオリアクタ系。
- 前記多フェーズバイオリアクタ系が、
(a)各フェーズ空間に操作可能に連結された一組の系制御部と;
(b)各フェーズ空間に操作可能に連結された一組の系センサと;
(c)前記一組の系センサから導出された一組のフェーズデータの組と;
(d)一組のフェーズプロファイルと;
を備える請求項10に記載の多フェーズバイオリアクタ系。 - (a)前記一組の系制御部及び前記一組の系センサに操作可能に接続されたプロセッサと;
(b)前記一組のフェーズプロファイルを含む、前記プロセッサに接続されたメモリと;
(c)一組の命令であって、前記メモリ内に存在し、前記プロセッサによって実行されるときに、次の(d)〜(h)の機能を実現する一組の命令:
(d)前記一組のフェーズプロファイルを受信し;
(e)前記一組のフェーズデータの組を前記一組の系センサから収集し;
(f)比較を行い;
(g)調整に関連する一組の制御信号を導出し;
(h)前記一組の制御信号を前記一組の系制御部に送信する;
を備える、請求項20に記載の多フェーズバイオリアクタ系。 - 約15日未満で微生物産生物を生産するために十分な条件下で、有機材料及び作動流体を、請求項10に記載の多フェーズ系にアプライすることを含む、有機材料から前記微生物産生物を生産するための方法。
- 有機材料及び作動流体が、
(a)作動流体の第1の部分として、前記第1のフェーズ空間、前記第2のフェーズ空間、前記第3のフェーズ空間、及び、前記第4のフェーズ空間の総容量の1立方フィート当たり0.001〜約0.1ポンドの範囲の有機性の供給原料である有機原料をアプライし、
(b)前記作動流体の第2の部分として、2単位の前記有機原料当たり約1単位の前記水〜10単位の前記有機原料に対して約1単位の前記水の範囲で前記有機原料に比例した量の水を提供する
ことによって、前記多フェーズ系に適用される、請求項22に記載の方法。 - さらに
(a)乾燥活性酵母を、前記第1のフェーズ空間内の前記作動流体に、約0.2〜約2ポンド/5000ガロンの量で導入することと、
(b)第2の作動流体を、前記第1のフェーズ空間内の前記作動流体に、1〜5ガロンの範囲の量で導入することと、を含み、
ステップ(a)及び(b)が、約38〜約40℃の間で行われる、請求項23に記載の方法。 - 前記作動流体が、前記多フェーズバイオリアクタ系の前記第1のフェーズ空間、前記第2のフェーズ空間、前記第3のフェーズ空間、及び、前記第4のフェーズ空間を通過した後に、最終データの組を前記微生物産生物の最終フェーズプロファイルに適合させるステップをさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 最終データの組を前記微生物産生物の最終フェーズプロファイルに適合させる前記ステップが、
(a)データpHレベルを、7.5〜8.8の範囲で最終pHレベルに適合させるステップと、
(b)データ化学的酸素要求量レベルを、90mg/L〜120mg/Lの範囲で最終化学的酸素要求量レベルに適合させるステップと、
(c)データ伝導度レベルを、900μS〜1200μSの範囲で最終伝導度レベルに適合させるステップと、を含む、請求項25に記載の方法。 - 前記微生物産生物が、土壌添加剤又は改良剤である、請求項22に記載の方法。
- (a)作動流体を混合するための保持タンクと、
(b)作動流体を再循環させるために、前記保持タンクに接続された完全混合リアクタと、
(c)前記作動流体から固体を分離するために、前記完全混合リアクタに接続された浄化装置と、
(d)有機材料の加水分解、酸生成、酢酸生成、メタン生成、安定化及び再構成のための4つ以上の充填層リアクタであって、各充填層リアクタが、固定された培地を含み、各充填層リアクタが、少なくとも隣接した充填層リアクタと流体連結されており、前記完全混合リアクタに接続された前記浄化装置が、第1の充填層リアクタと流体連通しており、充填層リアクタが、浄化装置に連結された前記完全混合リアクタに隣接しており、固定された培地は、各充填リアクタの内側に固定されている、4つ以上の充填層リアクタと、
(e)前記リアクタからの前記処理された有機材料を堆積させるために、最終充填層リアクタに操作可能に接続され、充填層リアクタは、少なくとも第4の充填層リアクタである容器と、を有する格納系を備える、多フェーズバイオリアクタ。 - 前記完全混合リアクタ、浄化及び充填層リアクタが、連続無瞬断管内に形成される、請求項28に記載のリアクタ。
- 前記バイオリアクタがさらに、最終充填層リアクタに接続された低温殺菌装置を備える、請求項28に記載の多フェーズバイオリアクタ。
- さらに前記低温殺菌装置に接続された濃縮装置を備え、処理有機材料の前記堆積のための前記容器への出口を有する、請求項20に記載の多フェーズバイオリアクタ。
- 前記バイオリアクタが、さらに
(a)前記格納系に操作可能に連結された一組の系制御部と、
(b)前記格納系に操作可能に連結された一組の系センサと、
(c)前記一組の系センサから導出された一組のフェーズデータの組と、
(d)一組のフェーズプロファイルと、を備える、請求項28に記載の多フェーズバイオリアクタ。 - 約15日未満で微生物産生物を生産するために十分な条件下で、有機材料及び作動流体を、請求項28に記載のバイオリアクタに適用することを含む、有機材料から前記微生物産生物を生産するための方法。
- 前記微生物産生物が、土壌添加剤又は改良剤である、請求項32に記載の方法。
- 請求項6、31又は33に記載の処理により得られた土壌改良剤。
- 以下の特徴を有する、土壌改良剤:
(a)約7.5〜8のpHを有する、
(b)約150mg/L未満のCOD範囲、
(c)約600μS〜1400μSの伝導度範囲、
(d)白金:コバルト(pt/co)スケールにおいて、約500pt/co単位〜約700pt/co単位の間の透明な琥珀色、
(e)シントロファス属(Syntrophus)、デスルフォビブリオ属(Desulfovibrio)、シンビオバクテリア属(Symbiobacteria)、ゲオルグフューシャ属(Georgfuschia)、サウエラ属(Thauera)、ニトロソモナス属(Nitrosomonas)、ベリリネア属(Bellilinea)、スルフリタレア属(Sulfuritalea)、及び、オーウェンウィークシア属(Owenweeksia)を含む、
(f)1mL当たり107個の微生物を超えるバイオマスを有する、
(g)約10〜60ng/mLのDNAを含有する、
(h)少なくとも8種類の微生物種を含む。 - 前記土壌改良剤が、1回だけ出現する、少なくとも20種の微生物種をさらに含む、請求項33に記載の土壌改良剤。
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