JP2014528730A - 変異型rnaポリメラーゼ - Google Patents
変異型rnaポリメラーゼ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014528730A JP2014528730A JP2014533943A JP2014533943A JP2014528730A JP 2014528730 A JP2014528730 A JP 2014528730A JP 2014533943 A JP2014533943 A JP 2014533943A JP 2014533943 A JP2014533943 A JP 2014533943A JP 2014528730 A JP2014528730 A JP 2014528730A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rna polymerase
- oligonucleotide
- seq
- rna
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12N9/1247—DNA-directed RNA polymerase (2.7.7.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12Y207/07006—DNA-directed RNA polymerase (2.7.7.6)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
−標的配列の3’末端でのハイブリッド形成が可能な(一般的には「プロモーターオリゴヌクレオチド」と称される)第1オリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドはその5’末端と結合したプロモーターの(好適にはT7プロモーターの)配列を有する、第1オリゴヌクレオチド(このオリゴヌクレオチドのハイブリッド形成部分は出発材料として用いられるRNAプラスのそれと反対の極性を有する)、
−標的配列の3’末端で構成される第2オリゴヌクレオチド(「プライマー」)(このオリゴヌクレオチドはRNAプラスと同じ極性を有する)。
−配列番号:3の第1オリゴヌクレオチドおよび配列番号:4の第2オリゴヌクレオチド(変異Q744Rを生成するのを可能にする)、
−配列番号:5の第1オリゴヌクレオチドおよび配列番号:6の第2オリゴヌクレオチド(変異Q744Lを生成するのを可能にする)、
−配列番号:7の第1オリゴヌクレオチドおよび配列番号:8の第2オリゴヌクレオチド(変異Q744Pを生成するのを可能にする)。
1/組み換えT7RNAポリメラーゼタンパク質の発現のためのプラスミド構築物
T7RNAポリメラーゼの発現プラスミドはベクターpMR−7casの誘導体である(Arnaud et al.1997,Gene 199:149−156)。
T7RNAポリメラーゼの変異体を定方向変異誘発により直接pMR−7−cas由来ベクター上に構築した。
T7RNAポリメラーゼの変異体配列を含むプラスミド構築物を、当業者に知られる従来のプロトコルに従って大腸菌細菌(BL21株)を形質転換するのに用いられるpMR−7−cas由来の発現ベクター中に挿入する(Molecular Cloning−A laboratory−1.74,1989,Sambrook Joseph,EF.Fritsch,T.Maniatis 2nd Edition,ISBN 0−87969−309−6)。
1. コロニーを100mg/mLのアンピシリンを含有する10mLのルリアブロス(LB)培地に30℃で16時間、220rpmで撹拌しながら接種する(前培養)
2. 3.3mLの前培養物を用い、200mLのLB培地に播種し、600nmでの最終OD0.07〜0.09を得る。培地を次に37℃で撹拌(220rpm)しながら成長させる
3. 培養の600nmでのODが0.4〜0.6の値に達したら、T7RNAポリメラーゼ組み換えタンパク質の過剰発現を最終濃度0.4mMのIPTGの添加により誘発する。培地を次に4時間37℃で撹拌(220rpm)する。
1. 200mLの大腸菌培養物を遠心分離(20分、4℃、6000g)し、得られたバイオマスを10mLの溶解緩衝液(50mM トリス−HCl pH8.0、300mM NaCl)に懸濁させる
2. 前述の細胞懸濁液を5回の各30秒の超音波処理サイクルにより溶解する
3. ステップ[2.]からの溶解物を22000gで2分間、4℃で遠心分離する
4. 前述の浮遊物を金属キレートカラム上での親和性クロマトグラフィーにより精製する。これを行うため、予め周囲温度の同じ溶解緩衝液でバランスをとった1mLのNi−NTAカラム(His Trap(商標)、GE Healthcare、ref.17−5247)上に堆積させる。カラムを次に10mLの同じ緩衝液で洗浄する。組み換えタンパク質の溶出物を、5mLの溶出緩衝液(50mM トリス−HCl pH8.0、200mM NaCl、200mM イミダゾール)を適用し、0.5mLの画分を回収することにより得る
5. 組み換えタンパク質の生成レベルおよび純度をSDS−PAGE10%ゲル上での分析およびクマシーブルーでの染色により制御する
6. 精製されたT7RNAポリメラーゼタンパク質の濃度の測定を、Bradfordにより記載される方法に従い、BioRadからのBradford Quick Start(商標)キットを用いて行う(Bradford,M.M.1976,“Rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein−dye binding”,Anal.Biochem.72:248−254)。組み換えタンパク質濃度を測定するのに用いられる基準はBSAである
7. 組み換えタンパク質を含有する画分を7kDaのZeba(商標)脱塩スピンカラム(Thermoscientific、ref.89882)上で脱塩し、保存緩衝液(20mM KH2PO4/K2HPO4 pH7.5、100mM NaCl、1M トレハロース、1mM EDTA、0.268% v/v トリトンX−100、0.1mg/mL BSA、1mM DTT)中に溶解させる。各精製T7RNAポリメラーゼ変異体を−80℃で保存する。
転写メカニズムの測定方法は従来、新たに形成された転写体への放射活性の組み込みを時間とともにモニタリングすることに基づく(Martin C.T.and Coleman E.Biochemistry,26:2690−2696,1987)。この方法には、完全な転写体の生成だけでなく、T7RNAポリメラーゼの触媒サイクルが不完全である場合不完全な転写体の生成ももたらすT7RNAポリメラーゼ活性を測定する不利点がある(Martin C.T.et al.Biochemistry 27:3966−3974,1988)。放射活性を用いない代替方法が開発された。これらはRNAインターカレーターもしくは分子マーカーのような蛍光分子(Liu J.et al.Analytical Biochemistry,300:40−45,2002)または比色法(Lee et al.Bull.Korean Chem Soc 30(10):2485−2488,2009)を用いる。分子マーカーの使用に基づく方法は、完全な転写体の発現を特異的に測定し、小さな不完全転写体の生成をもたらすT7RNAポリメラーゼの不完全サイクルを考慮しないという利点を有する。
緩衝液A、B、CおよびDを以下の割合に従って混合する:
10% 緩衝液A
1.8% 緩衝液B
7% 緩衝液C
35.7% 緩衝液D
45.6% 分子生物学用水。
70mM トリス−HCl、pH8.5
1.3mM dNTP
2.6mM rATP、rCTPおよびrUTP
2mM rGTP
0.6mM rITP
60mM サッカロース
40mM マンニトール
7g/L デキストランT−40
16mM MgCl2
320mM KCl
20mM DTT
3.5M DMSO
0.1μM〜0.3μM 分子マーカーMB1
10nM〜20nM オリゴヌクレオチドT7−マイナス
10nM〜20nM オリゴヌクレオチドT7−プラス
1. 1mg/mLの酵素溶液を得るため、T7RNAポリメラーゼ酵素を緩衝液A中に希釈する
2. 1mg/mLの酵素溶液5μLを溶液W39μL中に希釈する
3. 前述の溶液[2.]5μLを溶液W50μL中に希釈する
4. 前述の溶液[3.]25μLを溶液S75μLに添加する
5. 前述の溶液[4.]20μLを用い、活性を37℃で30分間測定する。
pr=参照T7RNAポリメラーゼについて5〜10分で得られる勾配
px=T7RNAポリメラーゼ変異体について5〜10分で得られる勾配
Ar=参照T7RNAポリメラーゼの容量活性
Ax=変異T7RNAポリメラーゼの容量活性
Ax=(Ar *px)/pr
よって、744位で変異させたT7RNAポリメラーゼ(Q744R、Q744PまたはQ744L)は、野生型T7RNAポリメラーゼの比活性と比較して増加した比活性を有する。変異S430P+F880Y+F849I(T3)、S430P+F880Y+F849I+C510R(T3+C510R)、S430P+F880Y+F849I+S767G(T3+S767G)、またはS430P+F880Y+F849I+C510R+S767G(T3+C510R+S767G)を含むT7RNAポリメラーゼは、それらの向上した半減期温度T1/2のため増加した熱安定性(表7)だけでなく、表4に示すように低い比活性も示す。変異Q744Rをさらに含むこれらの同じT7RNAポリメラーゼは、持続的な熱安定性および非常に良好な比活性の両方を有する。よって、変異Q744Rは熱安定化変異により変わった比活性の向上、またはその回復を可能にする。
この実施例では、T7RNAポリメラーゼのいくつかの変異体のT1/2値を測定する。測定方法の詳細、および用いられた異なる試薬を以下に示す。
緩衝液B、CおよびDを以下の割合に従って混合する:
1.8% 緩衝液B
7% 緩衝液C
38.6% 緩衝液D
52.6% 分子生物学用水。
bioMerieux社により製造されるNuclisens EasyQ(商標)VIH−1 1.2キットからの試薬アキュスフィアを120μLの希釈液(キット番号、285036)および60μLの分子生物学用水中に希釈する。
1容量の溶液W1を3容量の溶液W2に混合する。
70mM トリス−HCl、pH8.5
1.3mM dNTP
2.6mM rATP、rCTPおよびrUTP
2mM rGTP
0.6mM rITP
60mM サッカロース
40mM マンニトール
7g/L デキストランT−40
16mM MgCl2
320mM KCl
20mM DTT
3.5M DMSO
0.1μM〜0.3μM 分子マーカーMB1
10nM〜20nM オリゴヌクレオチドT7−マイナス
10nM〜20nM オリゴヌクレオチドT7−プラス
2. 評価する酵素の3μLを193μLの溶液3中に希釈する
3. [2.]の20μLを0.2mLチューブに分け入れ、サーモサイクラーにおいて10分間適温でインキュベートする
4. 酵素の残留活性と関連した5〜10分の蛍光増加速度を測定するため、プレインキュベートした混合物5μLを溶液S20μLに添加する
5. 各変異体の残留活性を、プレインキュベートされておらず、以下の計算:
pN=プレインキュベートされていないT7RNAポリメラーゼについて5〜10分で得られる勾配
pT=異なる温度でプレインキュベートされた変異体T7RNAポリメラーゼについて5〜10分で得られる勾配
%相対活性=%(pT/pN)
による100%活性に対応する、酵素の画分の割合として表す
6. T1/2値は酵素がプレインキュベーションなしのその初期容量活性の50%のみを有する温度に対応する
表7はよって記載された各種T7RNAポリメラーゼ変異体の熱安定性に対するQ744R変異の準中性を示すことを可能にする。この変異が熱安定性変異体に添加される場合、後者のT1/2値は顕著に変わらない。また、C510RおよびS767Gの変異の熱安定化効果は、同じT3変異体において組み合わされる場合付加的であることに留意されたい。
この実施例では、T7RNAポリメラーゼの向上したクローンを、41℃の参照温度より高い温度でのそれらの機能性を確認するため、bioMerieuxからのNASBA増幅VIH1 1.2のフレームワーク内で評価した。測定方法の詳細、および用いられた異なる試薬を以下に示す。
緩衝液B、CおよびDを以下の割合に従って混合する:
1.8% 緩衝液B
7% 緩衝液C
38.6% 緩衝液D
52.6% 分子生物学用水。
溶液W116.4μLを25U/μLのAMV−RT3.14μL、1.2U/μLのRNAseH0.79μLおよび分子生物学用水4.49μLと混合する。この溶液を液体窒素中で直接冷凍し、凍結乾燥し、T7RNAポリメラーゼ活性を有さない酵素混合物を含有する球体(酵素球体)を生成する。
1. HIV1 1.2キット(キット番号、285036)からの試薬球体を90μLの試薬希釈液中に溶解する
2. 溶液Eに対応する酵素球体を40.5μLの酵素希釈液中に溶解する。この溶液に、容量活性が70〜120kU/mLである、評価するT7RNAポリメラーゼ変異体4.5μLを添加する。
3. 5cp/反応または20cp/反応に対応するB型HIV転写体5μLを0.2μLチューブに入れる。試薬[1.]15μL、および酵素溶液[2.]5μLを次に添加する。
4. 反応をbioMerieuxからのEASYQ(商標)蛍光計において41℃以上で30分間行う。
Claims (15)
- 744位で、グルタミン(Q)をアルギニン(Q744R)、ロイシン(Q744L)またはプロリン(Q744P)から選択されるアミノ酸により置換し、変異させたT7RNAポリメラーゼ。
- 変異Q744Rを含む、請求項1に記載のRNAポリメラーゼ。
- 変異F849I、F880YおよびS430Pを含む、請求項1または2に記載のRNAポリメラーゼ。
- 変異C510Rを含む、請求項3に記載のRNAポリメラーゼ。
- 変異S767Gを含む、請求項3または4に記載のRNAポリメラーゼ。
- 請求項1〜5のいずれか1項に記載のT7RNAポリメラーゼをコードする遺伝子。
- 請求項6に記載の遺伝子および適切な発現配列を含む発現ベクター。
- 請求項7に記載のベクターで形質転換させた、変異型RNAポリメラーゼを発現することができる細胞。
- 核酸の転写増幅反応における請求項1〜5のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼの使用。
- 前記核酸の転写増幅反応が核酸の等温転写増幅反応である、請求項9に記載の使用。
- −請求項1〜5のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼ、
−逆転写酵素活性を有する酵素
を含む、等温転写増幅反応に用いられる酵素の混合物。 - 前記逆転写酵素活性を有する酵素がRNAseH活性も有する、請求項11に記載の酵素の混合物。
- 配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:7または配列番号:8のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの混合物。
- 第1オリゴヌクレオチドおよび第2オリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド対であって、前記オリゴヌクレオチド対が以下のオリゴヌクレオチド対:
−配列番号:3の第1オリゴヌクレオチドおよび配列番号:4の第2オリゴヌクレオチド、
−配列番号:5の第1オリゴヌクレオチドおよび配列番号:6の第2オリゴヌクレオチド、
−配列番号:7の第1オリゴヌクレオチドおよび配列番号:8の第2オリゴヌクレオチド
から選択される、オリゴヌクレオチド対。 - 請求項6に記載の遺伝子を得るための、請求項13に記載の少なくとも1つのオリゴヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの混合物、または請求項14に記載の少なくとも1つのオリゴヌクレオチド対の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1159051 | 2011-10-06 | ||
FR1159051A FR2981088B1 (fr) | 2011-10-06 | 2011-10-06 | Arn polymerases mutees |
PCT/EP2012/069886 WO2013050609A1 (fr) | 2011-10-06 | 2012-10-08 | Arn polymerases t7 mutees |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014528730A true JP2014528730A (ja) | 2014-10-30 |
JP5957531B2 JP5957531B2 (ja) | 2016-07-27 |
Family
ID=46980983
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014533943A Expired - Fee Related JP5957531B2 (ja) | 2011-10-06 | 2012-10-08 | 変異型rnaポリメラーゼ |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9540670B2 (ja) |
EP (1) | EP2764097B1 (ja) |
JP (1) | JP5957531B2 (ja) |
FR (1) | FR2981088B1 (ja) |
WO (1) | WO2013050609A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108779446B (zh) | 2016-01-13 | 2023-04-21 | 新英格兰生物实验室公司 | T7 rna聚合酶的热稳定变体 |
CN107460177B (zh) * | 2016-06-06 | 2021-08-17 | 张海生 | 可利用化学修饰核苷酸的rna聚合酶突变体 |
CN109715804A (zh) | 2016-09-23 | 2019-05-03 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于宿主细胞的指导rna表达系统 |
US11384352B2 (en) | 2016-12-13 | 2022-07-12 | Modernatx, Inc. | RNA affinity purification |
US10034951B1 (en) * | 2017-06-21 | 2018-07-31 | New England Biolabs, Inc. | Use of thermostable RNA polymerases to produce RNAs having reduced immunogenicity |
EP3668971B8 (en) | 2017-08-18 | 2024-05-29 | ModernaTX, Inc. | Rna polymerase variants |
WO2020056111A1 (en) * | 2018-09-12 | 2020-03-19 | Guardian Therapeutics, Llc | Rna polymerase for synthesis of modified rna |
US11851694B1 (en) | 2019-02-20 | 2023-12-26 | Modernatx, Inc. | High fidelity in vitro transcription |
CN113795579A (zh) * | 2019-02-20 | 2021-12-14 | 摩登纳特斯有限公司 | 用于共转录加帽的rna聚合酶变体 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009113718A1 (ja) * | 2008-03-11 | 2009-09-17 | 東ソー株式会社 | 機能改善したrnaポリメラーゼ変異体 |
JP2009213499A (ja) * | 2009-07-02 | 2009-09-24 | Toyobo Co Ltd | 改良されたrnaポリメラーゼ |
JP2009213497A (ja) * | 2009-07-02 | 2009-09-24 | Toyobo Co Ltd | 改良されたrnaポリメラーゼ |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4952496A (en) | 1984-03-30 | 1990-08-28 | Associated Universities, Inc. | Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase |
IL86724A (en) | 1987-06-19 | 1995-01-24 | Siska Diagnostics Inc | Methods and kits for amplification and testing of nucleic acid sequences |
CA1340843C (en) | 1987-07-31 | 1999-12-07 | J. Lawrence Burg | Selective amplification of target polynucleotide sequences |
CA1340807C (en) | 1988-02-24 | 1999-11-02 | Lawrence T. Malek | Nucleic acid amplification process |
AU4829690A (en) | 1988-12-16 | 1990-07-10 | Siska Diagnostics, Inc. | Self-sustained, sequence replication system |
KR100242252B1 (ko) | 1989-07-11 | 2000-03-02 | 다니엘 엘. 캐시앙 | 핵산서열의 증폭방법 |
US5122457A (en) | 1989-10-19 | 1992-06-16 | Schering Corporation | Expression systems utilizing bacteriophage t7 promoters, gene sequences, and t7 rna polymerase |
US5385834A (en) | 1993-08-13 | 1995-01-31 | Georgia Tech Research Corporation | Mutant T7 RNA polymerase GP1(lys222) exhibiting altered promoter recognition |
DE69431240T2 (de) | 1993-12-01 | 2003-04-17 | Toyo Boseki | Verfahren zur ampflifizierung und zum nachweis bestimmter nukleinsäuresequenzen mittels thermostabiler enzyme |
DE69917322T2 (de) | 1998-12-11 | 2005-05-04 | bioMérieux B.V. | Rna polymerase mutanten mit erhöhter stabilität |
ES2242733T3 (es) | 2000-03-07 | 2005-11-16 | Biomerieux B.V. | Mutante de arn polimerasa con termoestabilidad mejorada. |
EP2316934B1 (en) * | 2008-08-08 | 2015-05-13 | Tosoh Corporation | Rna polymerase mutant with improved functions |
-
2011
- 2011-10-06 FR FR1159051A patent/FR2981088B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-10-08 EP EP12769123.6A patent/EP2764097B1/fr not_active Not-in-force
- 2012-10-08 WO PCT/EP2012/069886 patent/WO2013050609A1/fr active Application Filing
- 2012-10-08 JP JP2014533943A patent/JP5957531B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-10-08 US US14/349,976 patent/US9540670B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009113718A1 (ja) * | 2008-03-11 | 2009-09-17 | 東ソー株式会社 | 機能改善したrnaポリメラーゼ変異体 |
JP2009213499A (ja) * | 2009-07-02 | 2009-09-24 | Toyobo Co Ltd | 改良されたrnaポリメラーゼ |
JP2009213497A (ja) * | 2009-07-02 | 2009-09-24 | Toyobo Co Ltd | 改良されたrnaポリメラーゼ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9540670B2 (en) | 2017-01-10 |
WO2013050609A1 (fr) | 2013-04-11 |
EP2764097A1 (fr) | 2014-08-13 |
FR2981088A1 (fr) | 2013-04-12 |
EP2764097B1 (fr) | 2015-09-09 |
FR2981088B1 (fr) | 2013-11-29 |
JP5957531B2 (ja) | 2016-07-27 |
US20150024435A1 (en) | 2015-01-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5957531B2 (ja) | 変異型rnaポリメラーゼ | |
CN110291196B (zh) | 耐热逆转录酶突变体 | |
JP5625908B2 (ja) | 機能改善したrnaポリメラーゼ変異体 | |
US9193959B2 (en) | T7 RNA polymerase variants with enhanced thermostability | |
JP4832694B2 (ja) | 増加した熱安定性を有するrnaポリメラーゼ変異体 | |
JP2007537724A (ja) | ジオバチルス・ステアロサーモフィラス(Geobacillusstearothermophilus)由来のRNA依存型DNAポリメラーゼ | |
JP7324200B2 (ja) | Rnaからの核酸増幅反応に適したdnaポリメラーゼ変異体 | |
JP7067737B2 (ja) | Dnaポリメラーゼ変異体 | |
JP4485066B2 (ja) | 安定性を増大させたrnaポリメラーゼ変異体 | |
JP7363063B2 (ja) | 変異型dnaポリメラーゼ | |
JP2020182463A (ja) | 核酸増幅試薬 | |
JP7180944B1 (ja) | 改変型dnaポリメラーゼ | |
CN107460177B (zh) | 可利用化学修饰核苷酸的rna聚合酶突变体 | |
JP4399684B2 (ja) | 改良されたrnaポリメラーゼ | |
JP2021023199A (ja) | 新規dnaポリメラーゼ変異体 | |
JP6070180B2 (ja) | 酵素のスクリーニング方法 | |
US9994886B2 (en) | Modified Epstein-Barr virus DNA polymerase and methods for isothermal DNA amplification | |
JP5789949B2 (ja) | 改良されたrnaポリメラーゼ変異体 | |
WO2016084880A1 (ja) | Pcna単量体 | |
JP2010183842A (ja) | 新規耐熱性dnaポリメラーゼ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150811 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20160428 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160524 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160620 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5957531 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |