JP2014518611A5

JP2014518611A5 -

Info

Publication number: JP2014518611A5
Application number: JP2014502663A
Authority: JP
Filing date: 2012-03-26
Publication date: 2015-05-14

Claims

ＮｔｃＡ結合部位を含む転写因子領域と、
ＲｕＢｉｓＣｏプロモーターまたはその変異体もしくは機能的断片を含むコアプロモーター領域と、を含み、
前記コアプロモーター領域は、前記転写因子領域を含むかまたはそこに作動可能に連結される、窒素感受性発現系。
転写可能な核酸分子および３’転写終結核酸分子をさらに含み、
前記コアプロモーター領域は、前記転写可能な核酸分子に作動可能に連結され、
前記転写可能な核酸分子は、前記３’転写終結核酸分子に作動可能に連結される、請求項１に記載の発現系。
前記転写因子領域は、ＧＴＡＮ₁₁Ｃコンセンサス配列、ＧＴＡＮ₈ＴＡＣコンセンサス配列、ＧＴＡＮ₈ＴＧＣコンセンサス配列、ＧＴＮ₁₀ＡＣコンセンサス配列、ＴＧＴＮ₉ＡＣＡコンセンサス配列、ＴＧＴＮ₁₀ＡＣＡコンセンサス配列、及びＴＡＮ ₃ Ｔ／Ａボックスのうちの少なくとも１つを含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
前記コアプロモーター領域は、ＲｕＢｉｓＣｏプロモーターのポリメラーゼ結合部位を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
前記コアプロモーター領域は、ノストック種ＰＣＣ７１２０、シネコシスティス種ＰＣＣ６８０３、もしくはアナベナＰＣＣ７１２０由来のＲｕＢｉｓＣｏ（ｒｂｃＬＳ）プロモーター配列、またはその機能的断片に対して少なくとも約７０％の配列同一性を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
プロモーター活性、並びに、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３および配列番号２３４のうちのいずれか１つに対する少なくとも約７０％の配列同一性を有する単離された核酸分子を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
プロモーター活性、および
（ａ）配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３および配列番号２３４のうちのいずれか１つの少なくとも９５個の連続した塩基、または
（ｂ）配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３および配列番号２３４のうちのいずれか１つの機能的断片、
を有する単離された核酸分子を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
（ａ）ＮｔｃＡポリペプチドもしくはＮｔｃＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列であって、前記ＮｔｃＡポリペプチドもしくは前記ＮｔｃＢポリペプチドは、前記構築物の前記コアプロモーター領域に作動可能に連結される、ポリヌクレオチド配列、または
（ｂ）前記コアプロモーター領域に作動可能に連結される、ＮｔｃＡポリペプチドおよびＮｔｃＢポリペプチドをコードする配列番号２７９のポリヌクレオチド配列、
を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
プロモーター活性を有し、配列番号２３４のヌクレオチド位置１７７〜８３６、もしくはそれと少なくとも約７０％の配列同一性の、単離された核酸分子、
プロモーター活性を有し、配列番号２３４のヌクレオチド位置１〜３５２、もしくはそれと少なくとも約７０％の配列同一性の、単離された核酸分子、または
プロモーター活性を有し、配列番号２３４のヌクレオチド位置１７７〜３５２、もしくはそれと少なくとも約７０％の配列同一性の、単離された核酸分子、
を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
前記転写可能な核酸分子は、スクロースリン酸シンターゼ活性、スクロースリン酸ホスファターゼ活性、スクロースリン酸シンターゼおよびスクロースリン酸ホスファターゼ活性、トレハロースリン酸シンターゼ活性、トレハロースリン酸ホスファターゼ活性、グルコシルグリセロールリン酸シンターゼ活性、グルコシルグリセロールリン酸ホスファターゼ活性、マンノシルフルクトースリン酸シンターゼ活性、またはマンノシルフルクトースリン酸ホスファターゼ活性を有するポリペプチドをコードする、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
前記転写可能な核酸分子は、
配列番号１、もしくはそれと少なくとも８０％の配列同一性ならびにスクロースリン酸シンターゼおよびスクロースリン酸ホスファターゼ活性を有するポリペプチドをコードすること、または
配列番号２のポリペプチドをコードする核酸配列、もしくはそれと少なくとも８０％類似し、スクロースリン酸シンターゼおよびスクロースリン酸ホスファターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列、
を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の発現系。
宿主細胞において転写可能な核酸分子を発現させるための方法であって、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の発現系を用いて宿主細胞を安定に形質転換することと、
前記転写可能な核酸分子が発現される条件下で前記発現系を含む前記宿主細胞またはその子孫を成長させることと、を含み、
硝酸塩が主な窒素源である場合、前記転写可能な核酸分子の発現が抑制され、尿素またはアンモニアが主な窒素源である場合、前記転写可能な核酸分子が発現される、方法。
前記形質転換された宿主生物の成長率は、同じかもしくは実質的に同様の条件下において、非形質転換宿主生物よりも約２０％以下低いか、または、
前記形質転換された宿主生物の成長率は、同じかもしくは実質的に同様の条件下において成長させた調節されていない構築物で形質転換した宿主生物よりも約５％超高い成長率（例えば、約１０％、１５％、または２０％超より高い成長率）である、
請求項１２に記載の方法。
（ａ）前記宿主細胞は、窒素制御系の下でＮｔｃＡポリペプチドまたはＮｔｃＢポリペプチドを内在的に発現し、
（ｂ）前記宿主細胞は、窒素制御系の下でＮｔｃＡポリペプチドまたはＮｔｃＢポリペプチドを発現するように遺伝子操作され、
（ｃ）前記発現系は、ＮｔｃＡポリペプチドまたはＮｔｃＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、前記ＮｔｃＡポリペプチドまたは前記ＮｔｃＢポリペプチドは、前記構築物の前記コアプロモーター領域に作動可能に連結される、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
前記宿主細胞は、光合成微生物である、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
前記宿主細胞は、スピルリナ・マキシマム、スピルリナ・プラテンシス、ドナリエラ・サリナ、ボトリオコックス・ブラウニイ、クロレラ・ブルガリス、クロレラ・ピレノイドーサ、セレナストルム・カプリコミュータ、セネデスムス・クアドリカウダ、ポルフィリディウム・クルエンタム、セネデスムス・アクタス、ドナリエラ種、セネデスムス・オブリクース、アナベノプシス、アウロシラ、キリンドロスペルマム、シネコッカス種、シネコシスティス種、およびトリポスリックスからなる群から選択される光合成微生物である、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（ａ）ＮｔｃＡ結合部位を含む転写因子領域と、
（ｂ）ＲｕＢｉｓＣｏプロモーターまたはその変異体もしくは機能的断片を含むコアプロモーター領域と、
（ｃ）転写可能な核酸分子と、
（ｄ）３’転写終結核酸分子と、
（ｅ）任意選択的に、ＮｔｃＡポリペプチドまたはＮｔｃＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列と、を含み、
前記コアプロモーター領域は、前記転写因子領域を含むか、または前記転写因子領域に作動可能に連結され、
前記コアプロモーター領域は、前記転写可能な核酸分子に作動可能に連結され、
前記転写可能な核酸分子は、３’転写終結核酸分子に作動可能に連結され、
エレメント（ａ）〜（ｄ）は、宿主生物における発現カセットの発現が、前記転写可能な核酸分子によってコードされるポリペプチド配列の生成をもたらすように、互いに対して位置付けられ、および、
エレメント（ｅ）が存在する場合、エレメント（ｅ）は、前記宿主生物における前記発現カセットの前記発現が、前記ＮｔｃＡポリペプチドまたは前記ＮｔｃＢポリペプチドの生成をもたらすように位置付けられる、発現カセット。
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の発現系を含むか、
請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の方法によって生成されるか、もしくは前記発現系を含むその子孫であるか、または
請求項１７に記載の発現カセットを含むかであり、
前記転写可能な核酸分子によってコードされる前記ポリペプチド配列の発現は、硝酸塩の存在下において抑制され、
前記転写可能な核酸分子によってコードされる前記ポリペプチド配列の発現は、尿素またはアンモニアの存在下において誘導される、遺伝子導入宿主細胞。
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の発現系、または請求項１７に記載の発現カセット、および前記発現カセットを宿主細胞に導入するための少なくとも１つの試薬、および任意選択的に、前記発現カセットを宿主細胞に導入するための指示を含む、キット。