JP2014510113A - プロテインキナーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、新規なキナーゼ阻害剤に関する。このクラスの化合物は、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦＲファミリーのメンバーを含む、プロテインキナーゼの有効な阻害剤であることが分かった。

Description

本発明は、新規なキナーゼ阻害剤に関する。特に、本発明は、通常は外部リガンドによる活性化を通して細胞機能を調節するｃＦＭＳ（ＣＳＦ−１Ｒ）およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）を含む血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）のメンバーなどの受容体型チロシンキナーゼの阻害剤に関する。

プロテインキナーゼは、真核細胞中の細胞内および膜貫通シグナル伝達タンパク質の大きなグループである（例えば、Ｍａｎｎｉｎｇ，Ｇ．，Ｄ．Ｂ．Ｗｈｙｔｅら（２００２）．「Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ．」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９８（５６００）：１９１２〜１９３４を参照）。これらの酵素は、ＡＴＰから末端（γ）リン酸を標的タンパク質の特定のアミノ酸残基への転移を担っている。標的タンパク質の特定のアミノ酸残基のリン酸化はそれら標的タンパク質の活性をモジュレートして細胞シグナル伝達および代謝に重大な変化をもたらすことができる。キナーゼは、細胞膜、サイトゾルおよび核などの小器官中に見出すことができ、代謝、細胞成長および分裂、細胞シグナル伝達、免疫応答のモジュレーション、ならびにアポトーシスを含む多数の細胞機能の媒介を担っている。タンパク質チロシンキナーゼ活性を有する細胞表面受容体は、受容体型チロシンキナーゼとして知られている。この大きなファミリーのタンパク質には、多様な生物活性を有する増殖因子受容体が含まれる（例えば、Ｌｅｍｍｏｎ，Ｍ．Ａ．およびＪ．Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ（２０１０）．「Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｒｅｃｅｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ．」Ｃｅｌｌ １４１（７）：１１１７〜１１３４を参照）。

種々のプロテインキナーゼの異常活性化または過剰発現は、良性および悪性増殖、過剰血管新生を特徴とする多数の疾患および障害、ならびに免疫系の不適当な活性化により生じる疾患の機構に関係している。したがって、選択キナーゼまたはキナーゼファミリーの阻害剤は、がん、関節炎、骨髄増殖性障害、心肥大、肺線維症、肝線維症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、糸球体腎炎、乾癬、ループス、多発性硬化症、黄斑変性、喘息、反応性滑膜炎などの疾患および障害の治療に有用であると期待される（例えば、Ｃｈｉｔｕ，Ｖ．およびＥ．Ｒ．Ｓｔａｎｌｅｙ（２００６）．「Ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ−１ ｉｎ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．」Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８（１）：３９〜４８；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ−Ｊｏｒｄａｎ，Ｓ．Ａ．，Ｔ．Ｈｏｌｏｐａｉｎｅｎら（２００８）．「Ｌｏｓｓ ｏｆ Ｂｍｘ ｎｏｎｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｖｅｒｌｏａｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ．」Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ １０３（１２）：１３５９〜１３６２；Ｕｅｍｕｒａ，Ｙ．，Ｈ．Ｏｈｎｏら（２００８）．「Ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｍ−ＣＳＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｋｉ２０２２７ ｓｕｐｒｅｓｓｅｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．」Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ １９５（１〜２）：７３〜８０；Ｃｏｈｅｎ，Ｐ．（２００９）．「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇｓ．」Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２１（２）：３１７〜３２４；Ｍｅｎｋｅ，Ｊ．，Ｗ．Ａ．Ｒａｂａｃａｌら（２００９）．「Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＣＳＦ−１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｔｈａｔ ｅｎｈａｎｃｅ ｌｕｐｕｓ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．」Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２０（１２）：２５８１〜２５９２；Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ，Ｆ．，Ｒ．Ｔ．Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙら（２０１０）．「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｎｏｎ−ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｗｉｔｈ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．」Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ９（１２）：９５６〜９７０；Ｈｉｌｇｅｎｄｏｒｆ，Ｉ．，Ｓ．Ｅｉｓｅｌｅら（２０１１）．「Ｔｈｅ ｏｒａｌ ｓｐｌｅｅｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｏｓｔａｍａｔｉｎｉｂ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．」Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ３１（９）：１９９１〜１９９９；Ｓｈａｒｍａ，Ｐ．Ｓ、Ｒ．Ｓｈａｒｍａら（２０１１）．「ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｓ ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ａｇｅｎｔｓ：ｐｒｅｓｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ．」Ｃｕｒｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ １１（５）：６２４〜６５３；Ｆａｂｂｒｏ，Ｄ．，Ｓ．Ｗ．Ｃｏｗａｎ−Ｊａｃｏｂら（２０１２）．「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｗｅｉｇｈｔ−ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．」Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ７９５：１〜３４を参照）。

疾患をモジュレートするために標的化することができるキナーゼの例としては、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）および血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリーのメンバーなどの受容体型チロシンキナーゼが挙げられる。

受容体型チロシンキナーゼのＰＤＧＦＲファミリーとしては、通常は外部リガンドによる活性化を通して細胞機能をモジュレートするｃＦＭＳ（ＣＳＦ−１Ｒ）およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）が挙げられる。

ｃＦＭＳは、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）およびインターロイキン（ＩＬ）−３４（ＩＬ−３４）に結合し（例えば、Ｃｈｉｈａｒａ，Ｔ．，Ｓ．Ｓｕｚｕら（２０１０）．「ＩＬ−３４ ａｎｄ Ｍ−ＣＳＦ ｓｈａｒｅ ｔｈｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆｍｓ ｂｕｔ ａｒｅ ｎｏｔ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｉｇｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．」Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １７（１２）：１９１７〜１９２７を参照）、マクロファージ、単球および破骨細胞生物学で重要な役割を果たす膜貫通受容体型キナーゼである。ｃＦＭＳ−ＣＳＦ−１経路は、慢性マクロファージ活性化を伴う種々のヒト疾患においてアップレギュレートされている。ｃＦＭＳの活性化は、単球の分化におけるその役割を通して関節炎で中心的役割を果たしており（例えば、Ｐａｎｉａｇｕａ，Ｒ．Ｔ．，Ａ．Ｃｈａｎｇら（２０１０）．「ｃ−Ｆｍｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｎｇ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｅｌｌｓ ｐｌａｙ ａ ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．」Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ １２（１）：Ｒ３２を参照）、ｃＦＭＳの阻害は関節炎の前臨床モデルで有効であることが示されており（例えば、Ｃｏｎｗａｙ，Ｊ．Ｇ．，Ｈ．Ｐｉｎｋら（２００８）．「Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃＦＭＳ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ５−（３−ｍｅｔｈｏｘｙ−４−（（４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉａｍｉｎｅ（ＧＷ２５８０） ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｃ ｒａｔｓ．」Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３２６（１）：４１〜５０）；Ｏｈｎｏ，Ｈ．，Ｙ．Ｕｅｍｕｒａら（２００８）．「Ｔｈｅ ｏｒａｌｌｙ−ａｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃ−Ｆｍｓ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｋｉ２０２２７ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａ ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ．」Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３８（１）：２８３〜２９１；Ｈｕａｎｇ，Ｈ．，Ｄ．Ａ．Ｈｕｔｔａら（２００９）．「Ｐｙｒｉｄｏ［２，３−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−５−ｏｎｅｓ：ａ ｎｏｖｅｌ ｃｌａｓｓ ｏｆ ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ−１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．」Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５２（４）：１０８１〜１０９９；およびＩｌｌｉｇ，Ｃ．Ｒ．，Ｃ．Ｌ．Ｍａｎｔｈｅｙら（２０１１）．「Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｃｌａｓｓ ｏｆ ａｒｙｌａｍｉｄｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ−１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ４−ｃｙａｎｏ−Ｎ−［２−（１−ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎ−１−ｙｌ）−４−［１−［（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ａｃｅｔｙｌ］−４−ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ］ｐｈｅｎｙｌ］−１Ｈ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅ−２−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ（ＪＮＪ−２８３１２１４１）．」Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５４（２２）：７８６０〜７８８３を参照）、ｃＦＭＳキナーゼ阻害剤がヒト関節炎の治療に有用となり得ることを示唆している。ｃＦＭＳ阻害はまた、多発性硬化症の前臨床モデルで有効であることが示されている（Ｕｅｍｕｒａ，Ｙ，、Ｈ．Ｏｈｎｏら（２００８）．「Ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｍ−ＣＳＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｋｉ２０２２７ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．」Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ １９５（１〜２）：７３〜８０）。

ｃＦＭＳの阻害剤は、通常は高レベルのＣＳＦ−１発現を特徴とする腱鞘巨細胞腫（ｔｅｎｏｓｙｎｏｖｉａｌ ｇａｉｎ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ）、色素性絨毛結節性滑膜炎および他の反応性滑膜炎（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｓｙｎｏｖｉｔｉｄｅｓ）の治療において、治療上有用であることが期待される（例えば、Ｃｕｐｐ，Ｊ．Ｓ．，Ｍ．Ａ．Ｍｉｌｌｅｒら（２００７）．「Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＳＦ１ ｉｎ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｖｉｌｌｏｎｏｄｕｌａｒ ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ， ｔｅｎｏｓｙｎｏｖｉａｌ ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ， ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｓｙｎｏｖｉｔｉｄｅｓ．」Ａｍ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｐａｔｈｏｌ ３１（６）：９７０〜９７６を参照）。ＣＳＦ−１を標的化する抗体を用いた前臨床研究は、ｃＦＭＳ阻害剤がこれらのヒト疾患の治療に有用となり得ることを予測している（Ｃｈｅｎｇ，Ｈ．，Ｐ．Ｗ．Ｃｌａｒｋｓｏｎら（２０１０）．「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＣＳＦ１ Ｉｍｐｅｄｅ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｉｎ ａ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｔｅｎｏｓｙｎｏｖｉａｌ Ｇｉａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｕｍｏｒ．」Ｓａｒｃｏｍａ ２０１０：１７４５２８）。

ｃＦＭＳは破骨細胞の分化および機能に重要であり、そのため、ｃＦＭＳ阻害は関節炎ならびに骨転移の形成および進行における破骨細胞機能をモジュレートするのに有用となり得る（例えば、Ｍａｎｔｈｅｙ，Ｃ．Ｌ．，Ｄ．Ｌ．Ｊｏｈｎｓｏｎら（２００９）．「ＪＮＪ−２８３１２１４１， ａ ｎｏｖｅｌ ｏｒａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ−１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ＦＭＳ−ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ−３ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ， ｂｏｎｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ， ａｎｄ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．」Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ８（１１）：３１５１〜３１６１を参照）。腫瘍関連マクロファージによる増殖因子および免疫抑制サイトカインの分泌は、ｃＦＭＳの阻害を通したその機能の標的化が抗がん治療に有用となり得るだろうということを示唆している（例えば、Ｂｉｎｇｌｅ，Ｌ．，Ｎ．Ｊ．Ｂｒｏｗｎら（２００２）．「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｎｅｗ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．」Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １９６（３）：２５４〜２６５を参照）。したがって、ｃＦＭＳ阻害またはノックダウンは、腫瘍関連マクロファージの阻害を通した腫瘍モデルで効果を示し（例えば、Ａｈａｒｉｎｅｊａｄ，Ｓ．，Ｐ．Ｐａｕｌｕｓら（２００４）．「Ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ−１ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４（１５）：５３７８〜５３８４；およびＭａｎｔｈｅｙ、Ｊｏｈｎｓｏｎら ２００９を参照）、ｃＦＭＳ阻害剤がヒトがんの治療に有用となり得ることを示唆している。

ＦＬＴ３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の成人患者の約３０％で突然変異しており、予後に有意な影響をもたらす（例えば、Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，Ｄ．Ｇ．およびＪ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｎ（２００２）．「Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＦＬＴ３ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．」Ｂｌｏｏｄ １００（５）：１５３２〜１５４２を参照）。したがって、ＦＬＴ３の阻害は、ＡＭＬなどの悪性腫瘍の治療に有用であることが期待される（例えば、Ｋｎａｐｐｅｒ，Ｓ．（２０１１）．「Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＦＬＴ３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．」Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ ２０（１０）：１３７７〜１３９５；Ｐｅｍｍａｒａｊｕ，Ｎ．，Ｈ．Ｋａｎｔａｒｊｉａｎら（２０１１）．「ＦＬＴ３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｔｈｅ ｓｔａｒｔ ｏｆ ａｎ ｅｒａ？ Ｃａｎｃｅｒ １１７（１５）：３２９３〜３３０４を参照）。さらに、ＦＬＴ３リガンドは、関節炎の誘発および進行に関係しており、ＦＬＴ３の阻害剤が関節炎の治療に有用となり得ることを示唆している（例えば、Ｄｅｈｌｉｎ，Ｍ．，Ｍ．Ｂｏｋａｒｅｗａら（２００８）．「Ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｆｍｓ−ｌｉｋｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ３ ｌｉｇａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ａ ｄｒｉｖｉｎｇ ｆｏｒｃｅ ｉｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．」ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ３（１１）：ｅ３６３３を参照）。

血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）およびＴＩＥ２ファミリーのメンバーの阻害は、がんおよび関節炎を含む多くの疾患または障害の治療に有用となり得る抗血管新生効果を有することが期待される（例えば、Ｔｉｍａｒ，Ｊ．およびＢ．Ｄｏｍｅ（２００８）．「Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ．」Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ８（５）：４６２〜４６９；Ｈｕａｎｇ，Ｈ．、Ａ．Ｂｈａｔら（２０１０）．「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＮＧＰＴ−ＴＩＥ２ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．」Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １０（８）：５７５〜５８５；およびＨｕａｎｇ，Ｈ．，Ｊ．Ｙ．Ｌａｉら（２０１１）．「Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−２ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ， Ｔｉｅ２−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．」Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １７（５）：１００１〜１０１１を参照）。

線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）は、治療効果のために標的化することができるキナーゼのさらなる例を提供する。ＦＧＦＲ１は、がんの選択サブセットにおいて増幅されており（例えば、Ｃｏｕｒｊａｌ，Ｆ．，Ｍ．Ｃｕｎｙら（１９９７）．「Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ＤＮＡ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｔ １５ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ ｉｎ １８７５ ｂｒｅａｓｔ ｔｕｍｏｒｓ：ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｇｒｏｕｐｓ．」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５７（１９）：４３６０〜４３６７；およびＴｓｕｊｉｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｈ．Ｓｕｇｉｈａｒａら（１９９７）．「Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ＤＮＡ ｐｌｏｉｄｙ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ．」Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ ４３１（６）：３８３〜３８９を参照）、ＦＧＦＲ１の阻害はがんの前臨床モデルで効果を示した（例えば、Ｇｏｚｇｉｔ，Ｊ．Ｍ．，Ｍ．Ｊ．Ｗｏｎｇら（２０１２）．「Ｐｏｎａｔｉｎｉｂ（ＡＰ２４５３４）， ａ ｍｕｌｔｉ−ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐａｎ−ＦＧＦＲ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ＦＧＦＲ−ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｏｒ ｍｕｔａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌｓ．」Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１１（３）：６９０〜９を参照）。

低分子阻害剤を用いたキナーゼの阻害は、ヒトの状態の治療に使用されるいくつかの承認治療薬をうまくもたらした。本明細書では、本発明者らは、キナーゼ阻害剤の新規なファミリーを開示する。さらに、本発明者らは、化合物置換の修飾がキナーゼ選択性およびそれゆえにその薬剤の生物学的機能に影響を及ぼし得ることを実証する。

本発明は、新規なキナーゼ阻害剤に関する。特に、本発明は、ｃＦＭＳ、Ｆｌｔ３、ＫＤＲおよびＦＧＦＲ１を含む血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）のメンバーなどの受容体型チロシンキナーゼの阻害剤に関する。

本明細書では、式１：

（式中、
ｍは０〜１の整数であり；
ｎは０〜２の整数であり；
Ｒ^１はアルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリルまたはヘテロシクリルから選択され；
Ｒ^１はアリールまたはヘテロアリールからも選択され、これらのアリールおよびヘテロアリールは
１）ハロゲン、
２）アルコキシ、
３）アミノ、
４）−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、
５）−Ｎ（Ｈ）ＳＯ_２−アリール、
６）−Ｎ（Ｈ）ＳＯ_２−ヘテロアリール、
７）−Ｎ（Ｈ）ＣＯＮ（Ｈ）−アリール、
８）および−Ｎ（Ｈ）ＣＯＮ（Ｈ）−ヘテロアリール、
から選択される基でさらに置換されていてもよく；
Ｒ^２ａ、Ｒ^２ｂ、Ｒ^２ｃ、Ｒ^２ｄ、Ｒ^２ｅ、Ｒ^２ｆは独立に水素、アルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールから選択され、Ｒ^２ａとＲ^２ｂ、Ｒ^２ｃとＲ^２ｄ、またはＲ^２ｅとＲ^２ｆは縮合して３〜８員シクロアルキルまたはヘテロシクリル環系を形成することができ；
ＸはＣＨ_２、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_ｎ、ＮＲ^３から選択され；
Ｒ^３は水素、アルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^４、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ^４Ｒ^５から選択され；
Ｒ^４およびＲ^５は独立にアルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールから選択され、またはＲ^４とＲ^５は縮合して３〜８員ヘテロシクリル環系を形成することができる）
の化合物を提供する。

特定の実施形態では、式１の化合物は、

（式中、Ｒ^１は

として定義できる）
としてさらに定義できる。

本発明は、式１により記載される全化合物、そのラセミもしくはジアステレオ異性体混合物、薬学的に許容される塩、プロドラッグおよび活性代謝産物を包含する。

本発明の別の態様は、有効量の式１の化合物と、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。

本発明の別の態様では、プロテインキナーゼの阻害剤、より具体的にはｃＦＭＳ、Ｆｌｔ３、ＫＤＲおよびＦＧＦＲ１およびＴｉｅ２の阻害剤としての式１の化合物の使用を提供する。

本発明の別の態様は、細胞を、ｃＦＭＳ、ＦＬＴ３、ＫＤＲ、ＦＧＦＲ１、Ｔｉｅ２などの所与のキナーゼもしくは複数のキナーゼの酵素活性をモジュレートするのに十分な量の本発明の化合物と接触させるステップを含み、それによってキナーゼ機能がモジュレートされる、キナーゼ機能をモジュレートする方法を提供する。

本発明の別の態様は、ａ）細胞を、標的キナーゼ機能をモジュレートするのに十分な量の本発明の化合物と接触させるステップと、それによってｂ）標的キナーゼ活性およびシグナル伝達をモジュレートするステップとを含む、標的キナーゼ機能をモジュレートする方法を提供する。

本発明の別の態様は、検出可能な標識またはアフィニティータグで標識した式１の化合物を含むプローブを提供する。換言すれば、プローブは、検出可能な標識に共有結合でコンジュゲートした式１の化合物の残基を含む。このような検出可能な標識としては、それだけに限らないが、蛍光部分、化学発光部分、常磁性造影剤、金属キレート、放射性同位元素含有部分またはビオチンが挙げられる。

本発明は、新規なキナーゼ阻害剤に関する。本発明者らは、これらの化合物が受容体型チロシンスーパーファミリーのメンバーを含むプロテインキナーゼの有効な阻害剤であることを発見した。

本発明の化合物は、有効量の式１の化合物と薬学的に許容される希釈剤または担体とを含む医薬組成物に製剤化することができる。例えば、医薬組成物は、経口投与（例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤およびシロップ剤）、非経口投与（例えば、注射（静脈内、筋肉内または皮下））、点滴注入製剤、吸入、点眼薬、局所投与（例えば、軟膏）、あるいは坐剤に適した従来の剤形であってよい。選択した投与経路にかかわらず、化合物を当業者に公知の従来法により薬学的に許容される剤形に製剤化することができる。

「薬学的に許容される」という句は、本明細書において、妥当な医学的判断の範囲内で、合理的な有益性／危険性の比に釣り合った、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症をもたらすことなく、ヒトおよび動物の組織と接触させて用いるのに適したリガンド、材料、組成物および／または剤形を指すために使用される。

本明細書で使用する「薬学的に許容される担体」という句は、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料などの、薬学的に許容される材料、組成物または媒体を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、かつ患者に有害ではないという意味において「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体として働くことができる材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えば乳糖、ブドウ糖およびショ糖；（２）デンプン、例えばコーンスターチ、ジャガイモテンプンおよび置換もしくは非置換β−シクロデキストリン；（３）セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）トラガント末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオ脂および坐剤ワックス；（９）油、例えばラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱性物質除去水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；ならびに（２１）医薬製剤に使用される他の非毒性適合性物質が挙げられる。

「薬学的に許容される塩」という用語は、化合物（複数可）の相対的に非毒性の無機および有機付加塩を指す。これらの塩は、化合物（複数可）の最終的な単離および精製中にｉｎ−ｓｉｔｕで、あるいは遊離塩基型の精製化合物（複数可）を適当な有機または無機酸と別に反応させ、こうして形成された塩を単離することにより調製することができる。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリルスルホン酸塩およびアミノ酸塩などが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１〜１９を参照）。

他の場合では、本発明の化合物は、１種または複数の酸性官能基を含んでいてもよく、したがって、薬学的に許容される塩基と薬学的に許容される塩を形成することができる。これらの例では、「薬学的に許容される塩」という用語は、化合物（複数可）の相対的に非毒性の無機および有機塩基付加塩を指す。これらの塩も同様に化合物（複数可）の最終的な単離および精製中にｉｎ ｓｉｔｕで、あるいはその遊離酸型の精製化合物（複数可）を適当な塩基、例えば薬学的に許容される金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩、アンモニア、または薬学的に許容される有機第一級、第二級もしくは第三級アミンと別に反応させることにより調製することができる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩などが挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンとしては、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、上記を参照）。

本明細書で使用する場合、「アフィニティータグ」という用語は、コンジュゲートを溶液から抽出することを可能にする、本発明の化合物またはプロテインキナーゼドメインのいずれかに連結したリガンドまたは基を意味する。

「アルキル」という用語は、ハロアルキル基、例えばトリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチル等を含む、直鎖アルキルおよび分枝鎖アルキル基を含む、置換または非置換飽和炭化水素基を指す。代表的なアルキル基としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどが挙げられる。「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、長さおよび可能な置換に関して上記アルキルと類似であるが、それぞれ少なくとも１個の二重または三重結合を含む、置換または非置換不飽和脂肪族基を指す。代表的なアルケニル基としては、ビニル、プロペン−２−イル、クロチル、イソペンテン−２−イル、１，３−ブタジエン−２−イル、２，４−ペンタジエニルおよび１，４−ペンタジエン−３−イルが挙げられる。代表的なアルキニル基としては、エチニル、１−および３−プロピニルならびに３−ブチニルが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、アルキル置換基は、例えば１〜６個の炭素原子を有する低級アルキル基である。同様に、アルケニルおよびアルキニルは、好ましくは例えば２〜６個の炭素原子を有する低級アルケニルおよびアルキニル基を指す。本明細書で使用する場合、「アルキレン」とは、（単一結合価ではなく）２個の開放結合価（ｏｐｅｎ ｖａｌｅｎｃｉｅｓ）を有するアルキル基、例えば−（ＣＨ_２）_１〜１０−およびその置換変異型を指す。

「アルコキシ」という用語は、酸素が付着したアルキル基を指す。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられる。「エーテル」は、酸素により共有結合で連結された２個の炭化水素である。したがって、アルキルをエーテルにするアルキルの置換基はアルコキシであるまたはアルコキシに似ている。

「アルコキシアルキル」という用語は、アルコキシ基により置換され、それによってエーテルを形成するアルキル基を指す。

「アミド（ａｍｉｄｅ）」および「アミド（ａｍｉｄｏ）」という用語は、アミノ置換カルボニルとして当技術分野で認識されており（ａｒｔ−ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ）、一般式：

（式中、Ｒ^９、Ｒ^１０は上に定義されているものである）
により表すことができる部分を含む。アミドの好ましい実施形態は、不安定となり得るイミドを含まない。

「アミン」および「アミノ」という用語は、当技術分野で認識されており、非置換および置換アミンの両方ならびにこれらの塩、例えば一般式：

（式中、Ｒ^９、Ｒ^１０およびＲ^１０’はそれぞれ独立に水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｒ^８を表し、あるいはＲ^９およびＲ^１０は結合したＮ原子と一緒に環構造の４〜８個の炭素原子を有する複素環を完成し；Ｒ^８はアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリルまたはポリシクリルを表し；ｍは０または１〜８の整数である）
により表すことができる部分を指す。好ましい実施形態では、Ｒ^９またはＲ^１０の一方のみがカルボニルであってよく、例えば、Ｒ^９、Ｒ^１０および窒素は一緒にイミドを形成しない。なおさらに好ましい実施形態では、Ｒ^９およびＲ^１０（および任意選択によりＲ^１０’）はそれぞれ独立に水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｒ^８を表す。特定の実施形態では、アミノ基は塩基性である、つまりプロトン化型はｐＫ_ａ≧７．００を有することを意味する。

本明細書で使用する「アラルキル」という用語は、アリール基で置換されたアルキル基を指す。

本明細書で使用する「アリール」という用語は、環の各原子が炭素である５−、６−および７員置換または非置換単環芳香族基を含む。「アリール」という用語はまた、環の少なくとも１個が芳香環である、例えば、他の環がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルであり得る２個の隣接環に２個以上の炭素が共通している、２個以上の環を有する多環系も含む。アリール基としては、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリン、アントラセンおよびフェナントレンが挙げられる。

本明細書で使用する「炭素環」および「カルボシクリル」という用語は、環の各原子が炭素である非芳香族置換または非置換環を指す。「炭素環」および「カルボシクリル」という用語はまた、環の少なくとも１個が炭素環である、例えば、他の環がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルであり得る２個の隣接環に２個以上の炭素が共通している、２個以上の環を有する多環系も含む。代表的な炭素環基としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニルおよび３−シクロヘキセン−１−イル、シクロヘプチルが挙げられる。

「カルボニル」という用語は、当技術分野で認識されており、一般式：

（式中、Ｘは結合であるまたは酸素もしくは硫黄を表し、Ｒ^１１は水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｒ^８または薬学的に許容される塩を表す。）
により表すことができる部分を含む。Ｘが酸素であり、Ｒ^１１が水素ではない場合、式は「エステル」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ^１１が水素である場合、式は「カルボン酸」を表す。

「ヘテロアリール」という用語は、置換もしくは非置換芳香族５〜７員環構造、より好ましくはその環構造が１〜４個のヘテロ原子を含む５〜６員環を含む。「ヘテロアリール」という用語はまた、環の少なくとも１個が複素芳香環である、例えば、他の環がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルであり得る２個の隣接環に２個以上の炭素が共通している、２個以上の環を有する多環系も含む。ヘテロアリール基としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、イソキサゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジンおよびピリミジンなどが挙げられる。

本明細書で使用する「ヘテロ原子」という用語は、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は窒素、酸素および硫黄である。

「ヘテロシクリル」または「複素環基」という用語は、置換もしくは非置換芳香族３〜１０員環構造、より好ましくはその環構造が１〜４個のヘテロ原子を含む３〜７員環を指す。「ヘテロシクリル」または「複素環基」という用語はまた、環の少なくとも１個が複素環である、例えば、他の環がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルであり得る２個の隣接環に２個以上の炭素が共通している、２個以上の環を有する多環系も含む。ヘテロシクリル基としては、例えば、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルフォリン、ラクトンおよびラクタムが挙げられる。

本明細書で使用する「炭化水素」という用語は、＝Ｏまたは＝Ｓ置換基を有さず、典型的には少なくとも１個の炭素−水素結合および主に炭素骨格を有するが、任意選択によりヘテロ原子を含んでもよい、炭素原子を介して結合した基を指す。したがって、メチル、エトキシエチル、２−ピリジルおよびトリフルオロメチルのような基は本出願の目的のためのヒドロカルビルであると考えられるが、アセチル（連結炭素上に＝Ｏ置換基を有する）およびエトキシ（炭素ではなく酸素を介して連結している）などの置換基は考えられない。ヒドロカルビル基としては、それだけに限らないが、アリール、ヘテロアリール、炭素環、複素環、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびこれらの組合せが挙げられる。

「ポリシクリル」または「多環」という用語は、２個以上の炭素が２個の隣接環に共通している、例えば、環が「縮合環」である２個以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリル）を指す。多環の環の各々は置換されていても置換されていなくてもよい。

本明細書で使用する場合、「プローブ」という用語は、検出可能な標識またはアフィニティータグのいずれかで標識され、プロテインキナーゼドメインに共有結合または非共有結合で結合することができる本発明の化合物を意味する。例えば、プローブが非共有結合する場合、これは試験化合物により置換され得る。例えば、プローブが共有結合する場合、これを用いて架橋付加物を形成することができ、この付加物を試験化合物により定量化および阻害することができる。

「置換された」という用語は、置換基が骨格の１個または複数の炭素上の水素に取って代わっている部分を指す。「置換」または「〜で置換された」とは、このような置換が、置換された原子および置換基に許容される原子価にしたがっており、置換により、例えば、自発的に転位、環化、脱離等による変換を受けない安定な化合物が得られるという暗黙の条件を含むことが理解されるだろう。本明細書で使用する場合、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むと考えられる。広範な態様では、許容される置換基に、有機化合物の非環式および環状、分枝および非分枝、炭素環および複素環、芳香族および非芳香族置換基が含まれる。許容される置換基は適当な有機化合物について１種でも複数でもよく、同一でも異なっていてもよい。本発明の目的のために、窒素などのヘテロ原子は水素置換基および／またはヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載する有機化合物の任意の許容される置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミルもしくはアシルなど）、チオカルボニル（チオエステル、チオアセテートもしくはチオホルメートなど）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキルまたは芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を挙げることができる。炭化水素鎖上の置換された部分は、可能ならそれ自体置換されていてもよいことが当業者により理解されるだろう。

本発明の化合物はまた、中間体および／または最終化合物中に存在する原子の全同位体も含む。同位体は、同一原子番号を有するが異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体としては重水素およびトリチウムが挙げられる。

表１は式１の化合物のいくつかの例示的実施形態を要約する。

［一般的合成法］
［一般的合成法Ａ］
一般式ｉ−ａの化合物はスキームｉに要約する４つのステッププロセスで調製することができる。Ｒ^１ＮＨ_２をブロモアセトニトリルでアルキル化して中間体ｉ−ａを得る。ｐ−トルエンスルホン酸などの酸の存在下でｉ−ａとｉ−ｂを縮合することにより中間体ｉ−ｃを得る。ｔ−ＢｕＯＨ中ｔＢｕＯＫなどの塩基で中間体ｉ−ｃを処理して中間体ｉ−ｄを得る。エタノール中ホルムアミジン酢酸塩で中間体ｉ−ｄを処理して一般式ｉ−ｅの化合物を得る。

［例示］
以下の合成法は、式１の化合物を調製するために用いる化学反応を表すことを意図しており、限定することを意図したものではない。

［化合物１の合成］

［ステップ１：中間体１−ａ］
０℃に冷却したベンゼン−１，４−ジアミン（１０．０ｇ、９２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０００ｍＬ）中溶液に、クロロギ酸ベンジル（１３．２０ｍｌ、９２．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１６．１５ｍｌ、９２．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にゆっくり加温し、一晩攪拌した。反応物を濃縮して半分の体積にした。水および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ジエチルエーテル（３０ｍＬ）を残渣に添加すると、沈殿が形成し、これを濾過により除去した。濾液を真空中で濃縮して、ベージュ固体として中間体１−ａを得た。

［ステップ２：中間体１−ｂ］
中間体１−ａ（１４．３ｇ、５９．０ｍｍｏｌ）および２−ブロモアセトニトリル（７．７９ｇ、６４．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍｌ）中溶液にＤＩＰＥＡを室温で添加した。反応混合物を８０℃で一晩攪拌し、次いで、室温に冷却した。飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ジエチルエーテルを残渣に添加すると、沈殿が形成し、中間体１−ｂをベージュ固体として濾過により回収した。

［ステップ３：中間体１−ｃ］
中間体１−ｂ（２．００ｇ、７．１１ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中溶液に、２−オキソシクロペンタンカルボニトリル（８１５ｍｇ、７．４７ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼンスルホン酸水和物（０．１３５ｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、ディーンスターク装置を用いて３時間還流させ、次いで、室温に冷却した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ヘキサンを残渣に添加すると、沈殿が形成し、中間体１−ｃをベージュ固体として濾過により回収した。

［ステップ４：中間体１−ｄ］
中間体１−ｃ（２．１０ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（２５ｍＬ）中溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５４２ｍｇ、５．６４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で２時間攪拌し、次いで、室温に冷却した。飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ジエチルエーテルを残渣に添加すると、沈殿が形成し、中間体１−ｄをベージュ固体として濾過により回収した。

［ステップ５：化合物１］
中間体１−ｄ（２．３９ｇ、６．４２ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍｌ）中溶液に、ホルムアミジン酢酸塩（５．３４ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で１．５時間攪拌した。反応物を減圧下で濃縮した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して化合物１をベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４００．２

［化合物２の合成］

化合物１（１１４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（５３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ_２によりパージした。セライトを通して濾過する前に溶液をＨ２下（１気圧）で１８時間攪拌した。濾液を真空で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して化合物２をベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝２６６．２

［化合物３の合成］

０℃に冷却した化合物２（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のピリジン（１ｍＬ）中溶液に、ジクロロメタン中ＤＭＡＰ（２．０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）およびフェニルスルホニルクロリド（６４．３ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃で３時間攪拌し、次いで室温に冷却した。飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濾過および濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、化合物３をベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４０６．１

［化合物４の合成］

０℃に冷却した化合物２（８３ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）のピリジン（１ｍＬ）中溶液に、フェニルイソシアネート（３６ｍｇ、０．３０）のジクロロメタン中溶液を添加した。次いで、反応物を室温で１８時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濾過および濃縮した。１％ＨＣｌ中１０〜７０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物４・ＨＣｌを白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝３５８．２

［化合物１７の合成］

化合物２（１５０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の酢酸（５ｍＬ）中溶液に、（トリフルオロメチル）フェニルイソシアネート（８３ｕＬ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で３０分間攪拌した。酢酸エチルを添加すると、沈殿が形成したので、これを濾過により回収し、真空下で乾燥させて化合物１７を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４５３．１

［化合物２７の合成］

化合物２（１５０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）およびＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、４−（ジフルオロメトキシ）フェニルイソシアネート（８７ｕＬＬ、０．６２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で３０分間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜７０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物２７・ＨＣｌを白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４５１．１

［化合物３０の合成］

化合物２（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）およびＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、ベンジルイソシアネート（５１ｕＬ、０．４１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で１８時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜７０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物３０・ＨＣｌを白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝３９９．２

［化合物３１の合成］

［ステップ１：中間体８−ａ］
２−ヒドロキシ酢酸ブチル（４７．２ｇ、３５７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液を、水素化ナトリウム（１４．２８ｇ、３５７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）中懸濁液に滴加した。混合物をクロトニトリル（２３．９６ｇ、３５７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液で、還流状態で処理し、混合物を２時間還流状態に維持し、次いで、室温に冷却した。溶媒を蒸発させ、２Ｎ ＮａＯＨ（２００ｍＬ）およびジエチルエーテル（２００ｍＬ）を残渣に添加した。有機層を分離し、水相をジエチルエーテルで２回抽出し、次いで、濃ＨＣｌ（７５ｍＬ）でｐＨ１に酸性化した。次いで、水相をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濾過および濃縮して中間体８−ａを茶色油として得た。

［ステップ２：中間体８−ｂ］
中間体１−ｂ（３．３８ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）のトルエン（６０．０ｍＬ）中溶液に、中間体８−ａ（２．０ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼンスルホン酸水和物（２２８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、ディーンスターク装置を用いて３時間還流させ、次いで、室温に冷却した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、中間体８−ｂをベージュ固体として得た。

［ステップ３：中間体８−ｃ］
中間体８−ｂ（２．０ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（２５ｍＬ）中溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６５９ｍｇ、５．８８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で３０分間攪拌し、次いで、室温に冷却した。１０％ＨＣｌ水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して中間体８−ｃを茶色固体として得た。

［ステップ４：化合物３１］
中間体８−ｃ（１．９ｇ、５．０７ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍｌ）中溶液に、ホルムアミジン酢酸塩（４．２３ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で１．５時間攪拌した。反応物を減圧下で濃縮した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して化合物３１をベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４０２．２

［化合物３２の合成］

化合物３１（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）のメタノール溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（１０６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ_２によりパージした。セライトを通して濾過する前に溶液をＨ_２下（１気圧）で４５分間攪拌した。濾液を真空中で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して化合物３２をオフホワイト固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝２６８．２

［化合物３３の合成］

化合物３２（１２３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、４−フルオロフェニルイソシアネート（６３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、酢酸（０．５ｍＬ）を添加し、次いで、反応物を室温で３０分間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜４０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物３３・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４０５．２

［化合物４１の合成］

化合物２（１５６ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、シクロヘキシルイソシアネート（７９ｕＬ、０．６２ｍｍｏｌ）、酢酸（０．５ｍＬ）を添加し、次いで、反応物を室温で１８時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜７０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物４１・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝３９１．３

［化合物４２の合成］

化合物２（１１２ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、１−フルオロ−４（２−イソシアナトエチル）ベンゼン（７７ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、酢酸（０．６ｍＬ）を添加し、次いで、反応物を室温で１８時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜７０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物４２・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４３１．２

［化合物４７の合成］

化合物３２（２００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、１−フルオロ−２−イソシアナト−４−メチルベンゼン（１１３ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、酢酸（０．５ｍＬ）を添加し、次いで、反応物を室温で３０分間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜４０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物４７・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４１９．２

［化合物４８の合成］

化合物３２（１５４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の酢酸（５ｍＬ）中溶液に、１−イソシアナト−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン（１０８ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で一晩攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜４０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物４８・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４５５．１

［化合物６０の合成］

［ステップ１：中間体１５−ａ］
３−フルオロ−４−ニトロアニリン（５．０ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中溶液にＢＯＣ_２Ｏ（６．９９ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間攪拌後、ＤＭＡＰ（３９１ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２日間攪拌し、次いで真空中で濃縮した。１０％クエン酸および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、中間体１５−ａを黄色固体として得た。

［ステップ２：中間体１５−ｂ］
中間体１５−ａ（１．７ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）のメタノール溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（１．４１ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ_２によりパージした。セライトを通して濾過する前に溶液をＨ_２下（１気圧）で一晩攪拌した。濾液を真空中で濃縮して、白色固体として中間体１５−ｂを得た。

［ステップ３：中間体１５−ｃ］
０℃に冷却した中間体１５−ｂ（１．５ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６６．０ｍＬ）中溶液に、クロロギ酸ベンジル（９４３μｌ、６．６３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．１５ｍｌ、６．６３ｍｍｏｌ）を連続的に添加し、反応物を室温にゆっくり加温して一晩攪拌した。反応物を真空中で濃縮した。水および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して中間体１５−ｃをベージュ油として得た。

［ステップ４：中間体１５−ｄ］
ジオキサン（１０ｍｌ、４０．０ｍｍｏｌ）中４Ｎ ＨＣｌを中間体１５−ｃ（２．１７ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）に０℃で添加し、懸濁液を０℃で１時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣をジエチルエーテルと共に粉砕した。形成した沈殿を濾過により回収し、真空下で乾燥させて中間体１５−ｄを白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝２６１．１

［ステップ５：中間体１５−ｅ］
中間体１５−ｄ（１．８ｇ、６．０７ｍｍｏｌ）およびブロモアセトニトリル（８００ｍｇ、６．６７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２．０ｍｌ）中溶液にＤＩＰＥＡ（２．２２ｍｌ、１２．７４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、次いで、反応混合物を８０℃で一晩攪拌し、次いで、室温に冷却した。飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ジエチルエーテルを残渣に添加すると、沈殿が形成し、これを濾過により回収して中間体１５−ｅをベージュ固体として得た。

［ステップ６：中間体１５−ｆ］
中間体１５−ｅ（１．８ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）のトルエン（３０．０ｍｌ）中溶液に、２−オキソシクロペンタンカルボニトリル（９８４ｍｇ、９．０２ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼンスルホン酸水和物（１１４ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、ディーンスターク装置を用いて３時間還流させ、次いで、室温に冷却した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、中間体１５−ｆをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝３９１．５

［ステップ７：中間体１５−ｇ］
中間体１５−ｆ（１．３ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（３３．０ｍＬ）中溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４１１ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で３０分間攪拌し、次いで、室温に冷却した。１０％ＨＣｌ水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して中間体１５−ｇを茶色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝３９１．７

［ステップ８：化合物６０］
中間体１５−ｈ（１．３ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）のエタノール（３３ｍｌ）中溶液に、ホルムアミジン酢酸塩（２．７７ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で１．５時間攪拌した。反応物を減圧下で濃縮した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。１％ＨＣｌ中１０〜５０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物６０・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４１８．１

［化合物６１の合成］

化合物６０（１．２ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）のメタノール溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（６１２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）で処理し、Ｈ_２によりパージした。セライトを通して濾過する前に溶液をＨ_２下（１気圧）で４５分間攪拌した。濾液を真空中で濃縮し、化合物６１をオフホワイト固体として得た。

［化合物６２の合成］

化合物６１（２００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、１−フルオロ−２−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（１４５ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で一晩攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜５０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物６２・ＨＣｌをベージュ固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４８９．１

［化合物６３の合成］

化合物６１（２００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、３−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート（１３２ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で３０分間攪拌した。酢酸エチルを添加すると、沈殿が形成したので、これを濾過により回収した。１％ＨＣｌ中１０〜５０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物６３・ＨＣｌを白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４７１．１

［化合物６４の合成］

化合物２（１１９ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の酢酸（３ｍＬ）中溶液に、１−イソシアナト−４−（メチルスルホニル）ベンゼン（１１５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、反応物を室温で３０分間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。１％ＨＣｌ中１０〜７０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物６４・ＨＣｌを白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４６３．２

［化合物７４の合成］

［ステップ１：中間体２０−ａ］
ベンゼン−１，４−ジアミン（１６．２ｇ、１５０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０．７７ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ中溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナートのＤＭＦ溶液（３４．８ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）を１５分の期間にわたって滴加し、反応物を室温で一晩攪拌した。水および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濾過および濃縮した。ヘキサンを残渣に添加すると、沈殿が形成し、これを濾過により回収して中間体２０−ａをベージュ固体として得た。

［ステップ２：中間体２０−ｂ］
中間体２０−ａ（１０．０ｇ、４８．０ｍｍｏｌ）およびブロモアセトニトリル（６．３４ｇ、５２．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍｌ）中溶液にＤＩＰＥＡ（１７．６１ｍｌ、１０１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、反応混合物を８０℃で一晩攪拌し、次いで、室温に冷却した。飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ジエチルエーテルを残渣に添加すると、沈殿が形成し、これを濾過により回収して中間体２０−ｂをベージュ固体として得た。

［ステップ３：中間体２０−ｃ］
中間体２０−ｂ（１．２ｇ、４．８５ｍｍｏｌ）のトルエン（３０．０ｍｌ）中溶液に、２−オキソシクロペンタンカルボニトリル（７９４ｍｇ、７．２８ｍｍｏｌ）および４−メチルベンゼンスルホン酸水和物（９２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、ディーンスターク装置を用いて３時間還流させ、次いで、室温に冷却した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮し、中間体２０−ｃを茶色固体として得た。

［ステップ４：中間体２０−ｄ］
中間体２０−ｃ（１．３ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）中溶液に、５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソシアナトイソキサゾール（８６５ｍｇ、５．２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を還流状態で１時間攪拌し、次いで、室温に冷却した。揮発性物質を減圧下で除去した。ヘキサンを残渣に添加すると、沈殿が形成し、これを濾過により回収して中間体２０−ｄを茶色固体として得た。

［ステップ５：中間体２０−ｅ］
中間体２０−ｄ（１．９ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（２３．０ｍＬ）中溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５８０ｍｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で３０分間攪拌し、次いで、室温に冷却した。１０％ＨＣｌ水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して中間体２０−ｅを茶色固体として得た。

［ステップ６：化合物７４］
中間体２０−ｅ（１．９ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）のエタノール（２３ｍｌ）中溶液に、ホルムアミジン酢酸塩（３．９１ｇ、３７．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８０℃で３０分間攪拌した。反応物を減圧下で濃縮した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および酢酸エチルを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。１％ＨＣｌ中１０〜５０％メタノール勾配を用いて溶出する逆相クロマトグラフィーによる精製により、化合物７４・ＨＣｌを得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）Ｍ＋Ｈ＝４３２．２

［キナーゼ結合］
選択的キナーゼ結合親和性を、Ｋｉｎａｓｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（商標） Ｓｅｒｖｉｃｅ Ａｓｓａｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｖ５３．０）を用いて測定した。
化合物１４は、１００ｎＭの濃度でｃＦＭＳ（ｈ）、Ａｕｒｏｒａ−Ｂ（ｈ）、Ｆｌｔ３（ｈ）、ＫＤＲ（ｈ）、ＰＤＧＦＲ−ｂ（ｈ）、ＦＧＦＲ１、Ｔｉｅ２およびＦＬＴ４を阻害する。
化合物４４は、１００ｎＭでｃＦＭＳ、Ｆｌｔ３、ＫＤＲ、ＦＧＦＲ１およびＥｐｈＡ２を阻害する。選択性の尺度として、２１６種の他のキナーゼは３００ｎＭで２０％以下阻害された。

［生化学ｃＦＭＳ（ＣＳＦ１Ｒ）アッセイ］
蛍光偏光に基づくキナーゼ生化学アッセイを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）から供給されたヒスチジンタグ付き組換えヒトコロニー刺激因子１受容体（ＦＭＳ）（触媒ドメイン（アミノ酸５３８〜９１０）を含み、昆虫細胞で発現し、自己リン酸化によりインビトロで活性化する）およびＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標）から供給されたＫｉｎＥＡＳＥ（商標） ＦＰ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ Ｇｒｅｅｎ Ａｓｓａｙの修正プロトコルを用いて３８４ウェルプレートフォーマットで行った。
キナーゼ反応を、１００μＭ基質、１０μＭ ＡＴＰおよび様々な試験物濃度の存在下、室温で６０分間、３８４ウェルプレートフォーマットで行った。反応をＥＤＴＡ／ＫｉｎＥＡＳＥ（商標）検出試薬を用いて停止し、偏光をＴｅｃａｎ ５００装置で測定した。得られた用量−応答曲線から、非線形当てはめ曲線を用いて、Ｇｒａｐｈ ｐａｄ ｐｒｉｓｍｓ（登録商標）を用いてＩＣ_５０を推定した。

［細胞アッセイ］
［マウスＭ−ＣＳＦ−依存性Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞生存アッセイ］
マウスＭ−ＮＦＳ−６０ Ｍ−ＣＳＦ−依存性骨髄性白血病細胞をＡＴＣＣ（ＣＲＬ−１８３８）から購入した。細胞を３０ｎｇ／ｍｌ組換えマウスＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ ３１５−０２）を含む完全培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、５０ｕＭ βメルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ）中、３７℃、５％ＣＯ_２で通常通り培養した。生存アッセイのために、各実験の開始２４時間前に、細胞を枯渇培地（Ｍ−ＣＳＦが枯渇した完全培地）に移した。Ｍ−ＣＳＦ飢餓細胞を収集し、２０ｎｇ／ｍｌ Ｍ−ＣＳＦを含む完全培地に再懸濁した。細胞を９６ウェルプレートに２５０００個細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした。細胞を１ｕＭまたは１０ｕＭ化合物曲線で３通り処理し、細胞生存をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により７２時間後に測定した。発光を、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｆ２００マイクロプレートリーダーを用いて読み取った。ＥＣ５０値（媒体処理対照と比較して化合物の存在下で５０％生存）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて非線形当てはめ用量応答化合物曲線から計算した。

［ヒトＭＶ４−１１二重表現型（Ｂｉｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ）Ｂ骨髄単球性白血病細胞生存アッセイ］
二重表現型Ｂ骨髄単球性白血病ＭＶ４−１１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９５９１）を完全培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ）中、３７℃、５％ＣＯ_２で懸濁培養した。処理の１日前に、完全培地中８０００個細胞／ウェルで９６ウェルプレートに細胞を播種した。翌日、三組ウェルを化合物の効力にしたがって１００、１０００または１００００ｎＭ開始濃度の化合物曲線で処理した。細胞生存をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により７２時間後に測定した。発光を、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｆ２００マイクロプレートリーダーを用いて読み取った。ＥＣ５０値（媒体処理対照と比較して化合物の存在下で５０％生存）を、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ ＢｉｏＡｓｓａｙソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて非線形当てはめ用量応答化合物曲線から計算した。

Claims (20)

1. 式１：
   

   

   （式中、ｍは０〜１の整数であり；
   ｎは０〜２の整数であり；
   Ｒ^１はアルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリルまたはヘテロシクリルから選択され；
   Ｒ^１はアリールまたはヘテロアリールからも選択され、前記アリールおよびヘテロアリールは
   １）ハロゲン、
   ２）アルコキシ、
   ３）アミノ、
   ４）−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、
   ５）−Ｎ（Ｈ）ＳＯ_２−アリール、
   ６）−Ｎ（Ｈ）ＳＯ_２−ヘテロアリール、
   ７）−Ｎ（Ｈ）ＣＯＮ（Ｈ）−アリール、
   ８）および−Ｎ（Ｈ）ＣＯＮ（Ｈ）−ヘテロアリール
   から選択される基でさらに置換されていてもよく；
   Ｒ^２ａ、Ｒ^２ｂ、Ｒ^２ｃ、Ｒ^２ｄ、Ｒ^２ｅ、Ｒ^２ｆは、独立に、水素、アルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールから選択され、Ｒ^２ａとＲ^２ｂ、Ｒ^２ｃとＲ^２ｄ、またはＲ^２ｅとＲ^２ｆは、縮合して３〜８員シクロアルキル環またはヘテロシクリル環系を形成することができ；
   Ｘは、ＣＨ_２、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_ｎ、ＮＲ^３から選択され；
   Ｒ^３は、水素、アルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^４、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^４Ｒ^５、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ^４Ｒ^５から選択され；
   Ｒ^４およびＲ^５は、独立に、アルキル、ヘテロアルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールから選択され、または、Ｒ^４とＲ^５は、縮合して、３〜８員ヘテロシクリル環系を形成することができる）
   の化合物。
2. 式１が、
   

   

   からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ^１が、
   

   

   

   

   からなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
4. Ｒ^３が、
   

   

   

   から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
5. 

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   からなる群から選択される化合物。
6. 化合物１、２、１８、２４、２５、３１、３２、６０および６１からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
7. 化合物３、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２６、２９、３４、３７、４０、４９および５１からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
8. 化合物１４、１６、１７、２０、２１、２３、３０、３３、３６、３９、４１、４４、４５、４６、４７、５０、５５、５７、５８、５９、６２、６３、６４、６６、６７、６８、６９、７２および７３からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
9. 化合物１１、１３、１９、２７、２８、３５、４３、４８、５４、５６および７４からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
10. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
11. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物または請求項１０に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、標的キナーゼ機能をモジュレートする方法。
12. 前記標的キナーゼ機能が、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＶＥＧＦＲから選択されるキナーゼの機能である、請求項１１に記載の方法。
13. 前記キナーゼが、ｃＦＭＳ、Ｆｌｔ３、ＫＤＲ、ＦＧＦＲ１またはＴｉｅ２である、請求項１２に記載の方法。
14. プロテインキナーゼの阻害剤としての、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物の使用。
15. 前記プロテインキナーゼが、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲおよびＶＥＧＦＲからなる群から選択される、請求項１４に記載の使用。
16. 前記プロテインキナーゼが、ｃＦＭＳ、Ｆｌｔ３、ＫＤＲ、ＦＧＦＲ１およびＴｉｅ２からなる群から選択される、請求項１４に記載の使用。
17. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物と、前記化合物のための検出可能な標識またはアフィニティータグとを含むプローブ。
18. 前記検出可能な標識が、蛍光部分、化学発光部分、常磁性造影剤、金属キレート、放射性同位元素含有部分およびビオチンから選択される、請求項１７に記載のプローブ。
19. 細胞を、標的キナーゼ機能をモジュレートするのに十分な量の請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物に接触させるステップを含み、それによって前記標的キナーゼ活性およびシグナル伝達がモジュレートされる、標的キナーゼ機能をモジュレートする方法。
20. （ａ）Ｒ^１ＮＨ_２をブロモアセトニトリルでアルキル化して、中間体ｉ−ａ
    

    

    を得るステップと、
    （ｂ）酸の存在下でｉ−ａとｉ−ｂ
    

    

    を縮合することにより、中間体ｉ−ｃ
    

    

    を得るステップと、
    （ｃ）塩基で中間体ｉ−ｃを処理して中間体ｉ−ｄ
    

    

    を得るステップと、
    （ｄ）アルコール中ホルムアミジン酢酸塩で中間体ｉ−ｄを処理して式ｉ−ｅ
    

    

    の化合物を得るステップと
    を含む、式ｉ−ｅの化合物を調製する方法。