JP2014503192A - 塩基修飾オリゴヌクレオチド - Google Patents
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Abstract
【解決手段】2’修飾を有する少なくとも1つのヌクレオチドとアミノカルボニル修飾塩基を有する少なくとも1つのヌクレオチドとを含む、オリゴヌクレオチド。
【選択図】図3
Description
本発明は、相補的ポリヌクレオチドに対する高い結合親和性を有する修飾オリゴヌクレオチドに関する。
本発明は、2’修飾を有する少なくとも1つのヌクレオチドとアミノカルボニル修飾塩基を有する少なくとも1つのヌクレオチドとを含むオリゴヌクレオチド、さらにはこの修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物ならびにこのオリゴヌクレオチドの使用方法および合成方法に関する。
本発明は、2’修飾を有する少なくとも1つのヌクレオチドとアミノカルボニル修飾塩基を有する少なくとも1つのヌクレオチドとを含むオリゴヌクレオチドに関する。本発明はさらに、このオリゴヌクレオチドの使用方法および合成方法に関する。
5−ヨード−2’−O−メチルウリジンは、公知の方法により容易に合成され、また、市販品として入手可能である。ヌクレオシドの5’−および3’−ヒドロキシル基は、それぞれ、標準的4,4’−ジメトキシトリチル化法およびアセチル化法により保護した。次いで、50mLボロシリケートボストン丸瓶中で無水THFおよびN,N−ジメチルアセトアミドの1:1混合物にヌクレオシドを溶解させることにより、この二重保護ヌクレオシドをカルボキサミド化に付した。混合物に5当量のTEAおよび3当量の第一級アミンまたはアミン塩酸塩を添加し、続いて、0.1当量のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)を添加した。密封可能な入口および圧力ゲージを備えた300mL Parrボンベ内に瓶を配置した。一酸化炭素で60psiまで充填することにより、装置を一酸化炭素でフラッシングし、次いで、圧力を10psiまで解放し、これを2回繰り返した。次いで、装置を60psiまで充填し、密封し、70℃の油浴中に17時間配置した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をMeOH中に再溶解させ、Zemplen条件下または類似の条件下、55℃で脱アセチル化した。得られたヌクレオシドをモノクロリダイト方法によりヌクレオシドホスホロアミダイトに変換した。
50mLボストン丸瓶中、5’−O−DMTr−3’−O−Ac−5−ヨードウリジン(1g、1.373mmol)をTHF(体積:10ml)およびDMA(体積:10ml)に加えて無色溶液を得た。テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(0.159g、0.137mmol)を秤取し、瓶に添加し、続いて、トリエチルアミン(0.694g、6.86mmol)および2−(4−メチル−ピペラジン−1−イル)エタンアミン(0.413g、2.88mmol)を添加した。瓶を250mL Parrボンベ中に配置し、これを密封し、ニードルバルブを介して排気した。次いで、ボンベを一酸化炭素で60psiに加圧する。次いで、ボンベを高真空下で排気し、一酸化炭素(60psi)で再充填する。ボンベを再密封し、70℃に加熱された油浴中に17時間配置する。ボンベを室温に冷却し、圧力を徐々に解放する。瓶をボンベから取り出し、減圧下で溶媒を除去する(Vaught et al., J. Am. Chem. Soc., 132(12):4141 -4151 (2010)(その全体を参照により本明細書に援用する))。
第一級アミンとして3当量の1−(3−アミノプロピル)イミダゾールを用いて、灰白色フォームとして64%の収率で所望の生成物を得た。1H NMR (300 MHz) δ 2.00-2.10 (m, 2H); 3.21-3.37 (m, 2H), 3.46 (d, J=4.2Hz, 2H), 3.57 (s, 3H), 3.78 (s, 6H), 3.92 (dd, J=5.6, 3.2Hz, 1H), 3.95-4.10 (m, 4H), 4.15-4.22 (m, 1H), 5.92 (d, J=3.2Hz, 1H), 6.08 (bs, 1H), 6.84 (dd, J=9.0. 1.4Hz, 4H), 6.93-7.50 (m, 10H), 7.63 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.74 (t, J=6.0Hz, 1H)。MS (ESI+) 計算値 711.76, 実測値 712.6。
第一級アミンとして3当量の3−モルホリノプロピルアミンを用いて、白色フォームとして64%の収率での所望の生成物を得た。1HNMR (300MHz) δ 1.76 (quin, J=7.0Hz, 2H), 2.41-2.50 (m, 4H), 3.40-3.47 (m, 4H), 3.53 (s, 3H), 3.70-3.75 (m, 8H), 3.79 (s, 6H), 3.89 (dd, J=5.7, 3.2Hz, 1H), 3.98-4.15 (m, 2H), 5.90 (d, J=3.2Hz, 1H), 6.84 (dd, J=9.0, 0.9Hz, 4H), 7.15-7.48 (m, 9H), 8.48 (s, 1 H), 8.75(t, J=5.8Hz, 1H)。MS (ESI+) 計算値 730.8, 実測値 731.5。
第一級アミンとして3当量のベンジルアミンを用いて、白色フォームとして87%の収率で所望の生成物を得た。1HNMR (300MHz) δ 3.45-3.49 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.78 (s, 6H), 3.89 (dd, J=5.6, 3.1Hz, H), 4.03-4.17 (m, 2H), 4.58 (dd, J=5.7, 4.6Hz, 2H), 5.90 (d, J=3.1Hz, 1H), 6.85 (dd, J=9.0, 1.3Hz, 4H), 7.15-7.60 (m, 15 H), 8.59 (s, 1H), 8.87 (t, J=5.9Hz, 1H)。
第一級アミンとして3当量のN,N−ジメチルエチレンジアミンを用いて、白色フォームとして91%の収率で所望の生成物を得た。1HNMR (300MHz) δ 2.31 (s, 6H), 2.54 (t, J=6.5Hz, 2H), 3.40-3.50 (m, 3H), 3.52 (s, 3H), 3.79 (s, 6H), 3.88 (dd, J=5.6, 3.1Hz), 3.95-4.10 (m, 4H), 5.86 (d, J=3.1Hz, 1H), 6.84 (dd, J=9.0, 1.4Hz, 4H), 7.17-7.49 (m, 9H), 8.46 (s, 1H), 8.79 (t, J=5.61Hz, 1H)。
100mL丸底フラスコ中で、DIEA(0.364ml、2.084mmol)および5−(3−(4−メチルピペラジン−1−イル)プロパン−1−カルボキサミド)−5’−O−DMTr−3’−O−Ac−2’−O−Me−ウリジン(1.55g、2.084mmol)をDCM(体積:15ml)中に溶解して、無色溶液を得た。フラスコをアルゴンでフラッシングして、撹拌を開始する。3−(クロロ(ジイソプロピルアミノ)ホスフィン)(オキシ)プロパンニトリル(または「モノクロリダイト」)(0.451g、2.084mmol)を滴下して、反応混合物を3時間撹拌させた。
カラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH/TEA)の後、82%の収率で得られた白色フォーム。ジアステレオマーの1:1混合物(1H NMRにより決定された)をNMRにより測定した。分解されたプロトンを記述し、その後、結果を列記し、そしてアステリスクを付記した。31P NMR(121.5MHz)δ150.15*、150.89*。プロトンスペクトルでは、混合物は、次の分解されたジアステレオマーピークを与える。2’−O−メチル基の3Hに対応する3.45ppm*および3.47ppm*の一重線、トリチル上のメトキシ基の6Hに対応する3.80ppm*および3.81ppm*の2つの一重線、それぞれ5.0Hzおよび5.4Hzの結合定数を有し、C1’位の1Hに対応する、5.92ppm*および5.96ppm*の2つの二重線、塩基のC−6位の1Hに対応する8.49ppm*および8.56ppm*の2つの一重線。ピークの残りは、次のとおりである。1H-NMR (300MHz) δ 1.04-1.22 (m, 12H), 1.69-1.82 (m, 2H), 2.41-2.49 (m, 6H), 2,58-2.67 (m, 2H), 3.33-3.44 (m, 4H), 3.51-3.65 (m, 3H), 3.70-3.76 (m, 4H), 3.83-3.95 (m, 1H), 3.95-4.07 (m, 1H), 4.17-4.36 (m, 2H), 6.82-6.89 (m, 4H), 7.15-7.51 (m, 9H), 8.63-8.76 (m, 1H)。MS (ESI+) 計算値 931.0, 実測値 931.8。
カラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH/TEA)の後、80%の収率で得られた白色アモルファスフォーム。ジアステレオマーの55:45混合物(1H NMRにより決定された)をNMRにより測定した。分解されたプロトンを記述し、その後、結果を列記し、そしてアステリスクを付記した。31P NMR(121.5MHz)δ150.26*、150.81*。プロトンスペクトルでは、混合物は、次の分解されたジアステレオマーピークを与える。2Hに対応する2.63ppm*(J=6.1,1.3Hz)の主ジアステレオマーおよび2.37(J=6.3,1.4Hz)の副シグナルの2つの三重線の二重線、2’−O−メチル基の3Hに対応する両方とも3.49ppm*の2つの一重線、C1’位の1Hに対応する5.92ppm*(副、J=4.5Hz)および5.99ppm*(主、J=5.2Hz)の2つの二重線、塩基のC−6位の1Hに対応する8.55ppm*(主)および8.63ppm*(副)の2つの一重線。ピークの残りは、次のとおりである。1H-NMR (300MHz) δ 1.04-1.22 (m, 12H), 1.97-2.10 (m, 2H), 2.80-2.94 (m, 1H), 3.23-3.47 (m, 4H), 3.52-3.74 (m, 3H), 3.75-3.95 (m, 7H), 3.96-4.13 (m, 3H), 4.22-4.41 (m, 2H), 6.79-6.89 (m, 4H), 6.96 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 7.15-7.53 (m, 9H), 7.59 (s, 1H), 8.69-8.80 (m, 1H)。MS (ESI+) 計算値 912.0, found 912.3。
カラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH/TEA)の後、87%の収率で得られた白色アモルファスフォーム。ジアステレオマーの55:45混合物(1H NMRにより決定された)をNMRにより測定した。分解されたプロトンを記述し、その後、結果を列記し、そしてアステリスクを付記した。31P NMR(121.5MHz)δ150.12*、150.71*。プロトンスペクトルでは、混合物は、次の分解されたジアステレオマーピークを与える。C1’位の1Hに対応する、5.90ppm*(副、J=(4.8Hz))および5.93ppm*(主、J=(5.2Hz))の2つの二重線、塩基のC−6位の1Hに対応する8.46ppm*(主)および8.53ppm*(副)の2つの一重線。ピークの残りは、次のとおりである。1H-NMR (300MHz) δ 1.04-1.22 (m, 12H), 2.31 (s, 6H), 2.52-3.06 (m, 4H), 3.33-3.49 (m, 5H), 3.52-3.74 (m, 4H), 3.75-3.94 (m, 7H), 3.95-4.07 (m, 1H), 4.16-4.34 (m, 2H), 6.80-6.90 (m, 4H), 7.15-7.53 (m, 10H), 8.68-8.82 (m, 1H)。
カラムクロマトグラフィー(EtOAc/ヘキス)の後、89%の収率で得られた白色アモルファスフォーム。ジアステレオマーの55:45混合物(1H NMRにより決定された)をNMRにより測定した。分解されたプロトンを記述し、その後、結果を列記し、そしてアステリスクを付記した。31P NMR(121.5MHz)δ150.26*、150.81*。プロトンスペクトルでは、混合物は、次の分解されたジアステレオマーピークを与える。2Hに対応する2.64ppm*(1=6.5,2.1Hz)の主ジアステレオマーおよび2.38(J=6.5,1.5Hz)の副シグナルの2つの三重線の二重線、C1’位の1Hに対応する5、93ppm*(副、J=4.7Hz)および5.98ppm*(主、J=5.3Hz)の2つの二重線、塩基のC−6位の1Hに対応する8.57ppm*(主)および8.64ppm*(副)の2つの一重線。ピークの残りは、次のとおりである。1H-NMR (300MHz) δ 1.04-1.22 (m, 12H), 3.36-3.46 (m, 2H), 3.50-3.76 (m, 4H), 3.77-3.93 (m, 7H), 3.95-4.10 (m, 1H), 4.17-4.36 (m, 2H), 4.45-4.67 (m, 2H), 6.82-6.90 (m, 4H), 7.15-7.54 (m, 14H), 8.83-8.95 (m, 1H)。MS (ES1+) 計算値 912.0, 実測値 912.3。
修飾のためのカルボキサミド置換基は、親水性基および疎水性基の両方から選択した。次の理由で、親水性基を優先的に選択した。他の核酸塩基と新しい水素結合相互作用を形成する能力、標準的オリゴヌクレオチド合成下で追加の保護基を必要とする交換性プロトンまたは感受性官能基の欠如、生理的pHでのこれらの基のカチオン性。疎水性基は、核酸塩基間のπスタッキング相互作用を活用すべくおよびヌクレオチドで新しい疎水性領域を形成するよう選択した。また、ヌクレオチド上で新しい疎水性領域およびカチオン性/親水性領域を形成すると、細胞透過性を増強する血清タンパク質への増強された結合も形成され得る。ペンダント疎水性基(たとえば、ステロールおよび直鎖脂質)さらには2’疎水性修飾(たとえば、アルキル、アリール、および2’−4’リンカー)を有するヌクレオチドは、血清リポタンパク質粒子との相互作用を増大させることにより、細胞内取込みを増強することができる。同様に、高荷電カチオン種で高アニオン性ヌクレオチド骨格の影響を打ち消すと、細胞内取込みが増強される。
化合物10941(mCs;ppTs;ppTs;ppTs;ppTs;ppTs;mGs;mCs;ppTs;mCs;mGs;ppTs;mCs;ppTs;ppTs;mA)の調製。塩基修飾オリゴヌクレオチドの合成でホスホロアミダイト試薬(3c)を使用した。ABI Expedite(Model 8909)DNA/RNA合成装置を用いて、オリゴデオキシヌクレオチドを合成した。酸化溶液を1:1ピリジン/ACN中0.2M PADSと交換し、市販の合成試薬を利用して、DMT−ONモードで、製造業者の推奨基準に従って、合成を行った。適切なカップリングサイクル時にアセトニトリル中0.1M溶液としてホスホロアミダイト試薬を添加した。米国特許第5,750,672号(その全体を参照により本明細書に援用する)に記載の方法により、または40%水性メチルアミン溶液を用いてCPG結合オリゴヌクレオチドを55℃で30分間加熱することにより、担体からのオリゴヌクレオチドの切断を達成した。粗DMT−ONオリゴヌクレオチド溶液をWaters Sep−Pak(登録商標)Vac C18カートリッジ上に充填し、当業者に公知の標準的DMT−ONオリゴヌクレオチド脱塩手順を用いて溶出することにより、得られたオリゴヌクレオチド水性溶液をさらに精製した。マトリックスとして3−ヒドロキシピコリン酸および当業者に公知の標準的方法を利用して、MALDI−TOF質量分析により生成物の特性解析を行った。計算値6922.4、実測値6920.7。
修飾鎖の融解温度と、ホスホロチオエートDNAヌクレオチドまたはホスホロチオエート2’−O−メチルRNAヌクレオチドのいずれかを利用した同一の配列の融解温度と、の差を決定することにより、導入1つあたりの融解温度(Tm)の上昇を決定した。
一次新生仔ラット心筋細胞を用いて行った細胞培養実験から、5−カルボキサミド−塩基修飾オリゴヌクレオチドの多くは、miR−208aに結合するだけでなく、有効な細胞内miR−208a阻害剤であると予想されるようなbMHCの下流制御をも行うことが実証される。図6および7に示されるように、ヌクレオチドのLNA/DNAまたはLNA/2’−O−Me混合物を含有する2つの既知のポジティブコントロールは、miR−208a阻害およびbMHCの用量依存的制御の両方を示す。オリゴヌクレオチドはすべて、2%血清含有培地で細胞上に受動的に(トランスフェクション試薬を用いずに)置いた。37℃で72時間インキュベートした後、Cells to Ct(Ambion)緩衝液を用いて、細胞を溶解させた。Taqman系RT−PCR(Applied Biosystems)により、miR−208aおよびmRNA bMHCを解析した。実験はすべて、三重試験方式で行われ、平均±標準偏差として示される。7〜8の範囲にpKa値を有するペンダントカチオン種(生理学的pHでほとんどプロトン化される可能性が最も高いもの)を特徴とする塩基修飾は、miR−208a阻害とbMHCとの間に正の相関を示す可能性がより高かった。この相関は、miR−208a阻害が一次心筋細胞の溶解前に起こることを示唆する。ヌクレオチド置換様式もまた、同一配列を有する阻害剤の効力に影響を及ぼし得ることにも留意されたい。5−(2−(2−メチル−1H−イミダゾイル−1−イル)−エチルカルボキサミド)−2’−O−メチルウリジンヌクレオチド変異体は、全部で9つの天然ウリジンヌクレオチド位置のうちの4つまたは9つのいずれかが置換されて、16ヌクレオチド2’−O−メチルホスホロチオエート抗208aヌクレオチド配列に導入されたとき、miR−208aの阻害を示す。有効なbMHC mRNA制御を示すのは、4つの置換を有するオリゴヌクレオチドのみである。
C57BL/6マウス(10941、10876、10711)において、3つの塩基修飾オリゴヌクレオチドをin vivoで試験した。各オリゴの比較可能な塩基を含有するコントロールも注入した(11091、11087、11086)。オリゴヌクレオチドは、1日目に皮下注入を介して25mg/kg送達することにより投与した。投与4日後に心臓組織を採取し、リアルタイムPCRによりmiR−208aのレベルを決定した。マウスからの採取後、注入部位反応も目に見える器官損傷もなかった。図8に見られるように、標的化オリゴはすべて、miR−208aのいくらかの阻害を示し、10711オリゴヌクレオチドは、生理食塩水と比較して、心臓組織で統計的に有意にmiR208aを阻害することが可能であった。コントロールはすべて、生理食塩水との統計的な差異はなかった。このことから、全身投与された塩基修飾オリゴヌクレオチドは、コンジュゲートや薬剤送達システムを用いることなく、心臓特異的miRNAの強力な阻害剤として作用し得ることが実証された。
最小修飾〜最大修飾のスケールで可視化したときの塩基修飾および糖修飾の両方のTm効果。塩基修飾は、単独では、リン酸骨格を有する2’デオキシリボヌクレオシドに中程度の影響を及ぼすにすぎないと予想され(たとえば、Ahmadian et al., Nucleic Acids Res., 1998, 26(13):3127-3135 (1998)、Znosko et al., J. Am. Chem. Soc., 125(20):6090-6097 (2003)(これらはその全体を参照により本明細書に援用する)を参照されたい)、C3超のアルキン置換基でさえも、DNA:DNA二本鎖安定性を不安定化する傾向がある。生理学的pH下でプロトン化される非カルボキサミド連結ヘキシルアミンを有するウリジン塩基ヌクレオシドの複数導入でさえも、正味のDNA:DNA二本鎖安定化を示さなかった(Hashimoto et al., J. Am. Chem. Soc., 115(16):7128-7134 (1993)(その全体を参照により本明細書に援用する)を参照されたい)。糖修飾(この場合、2’−O−メチル化リボヌクレオシド)は、本発明者らの手によって、miR−208aRNAとのこの特定の二本鎖を約1℃/修飾で安定化することが示されている。本発明で教示された塩基修飾を有する2’デオキシリボヌクレオシドは、ホスホロチオエート骨格を有する16mer抗208aオリゴヌクレオチドに完全に導入されたとき(ウリジンに関して9置換)、miR−208aRNAに対する増大された二本鎖安定化をほとんど示さない。図9参照。しかしながら、塩基修飾2’デオキシリボヌクレオシドが、ウリジンを除くすべての塩基に2’−O−メチル化ヌクレオシドをも含有するヌクレオチドに導入されたとき、塩基修飾の安定化が顕在化した。9未満の糖修飾が存在するときでさえも、二本鎖は、16の2’−O−メチル糖修飾を有するオリゴヌクレオチドと同一のTmを有していた。5−カルボキサミド塩基修飾と2’−O−メチル糖修飾との両方を有するウリジン塩基ヌクレオシドで各ウリジンを置換した2’−O−メチル化抗208aは糖修飾のみを有するオリゴヌクレオチドよりも2℃/修飾を超える予想外なTm上昇を示す。
図10は、糖修飾と塩基修飾との両方をカウントして、図9のデータをΔTm/修飾として表している。5−カルボキシアミド−2’−O−メチルウリジンヌクレオシドの複数導入は、予期せずして、塩基または糖のいずれかが単独のときよりも、糖および塩基の修飾1つあたりより大きい安定化を与える。この証拠から、ヌクレオシドの3’−エンド糖パッカーに有利な修飾と組み合わされた5−カルボキサミドは、相加性を上回ることが示唆される。それらは、相乗的に作用して、いずれか一方の修飾単独よりも大きい二本鎖安定性を与える。二本鎖安定性の増大は、限界があるが、おそらく、microRNA阻害剤などの特定のオリゴヌクレオチドに基づく治療に望ましいであろう。さらに、これらのタイプの修飾はまた、酵素分解からの保護、低減された静電荷に起因する細胞内送達の保護、ならびに向上した薬動学的および/または薬力学的性質の保護を行い得る。
カチオン性5−カルボキサミド修飾デオキシウリジンの複数導入(すなわち、合計16のうちの9)は、ホスホロチオエート骨格およびホスフェート骨格の16merオリゴヌクレオチドの両方について二本鎖安定性に対する最小の増強を与えるように思われる。図11参照。これは、置換基の塩基の水和または立体的嵩高さの撹乱に起因すると思われる。しかしながら、驚くべきことに、単一の導入は、ホスホロチオエート骨格またはホスフェート骨格のいずれかを有する16mer抗208aデオキシオリゴヌクレオチドと、その標的であるmiR−208aRNAとの二本鎖安定性を、それぞれ、10℃超および17℃超上昇させ得る。本発明に開示される修飾は、望ましい二本鎖形成性、二本鎖タンパク質結合性、または一緒に望ましい薬動学的および/もしくは薬力学的性質を有する、治療用オリゴヌクレオチドを得るために、単一導入もしくは複数導入として単独で、または単一導入もしくは複数導入として他の糖修飾と組み合わせて、使用できる。
Claims (49)
- 2’修飾を有する少なくとも1つのヌクレオチドとアミノカルボニル修飾塩基を有する少なくとも1つのヌクレオチドとを含む、オリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドがヒトmicroRNAに高い親和性でハイブリダイズする、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが約6〜約22ヌクレオチド長である、請求項1または2に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが約10〜約18ヌクレオチド長である、請求項3に記載のオリゴヌクレオチド。
- 各アミノカルボニル基が、カルボキサミノ、カルバモイル、またはカルバミド基から独立して選択される、請求項1〜4のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基がピリミジンのC−5位またはプリンのC−8位で修飾される、請求項5に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾がカルボキサミノ基である、請求項5に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾が、C1〜C18アルキル、C1〜C18アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、および−(CH2)n−NR1R2〔式中、nは1〜6の整数であり、かつR1およびR2は、独立して、HまたはC1〜C6アルキルである〕から選択される置換基を含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾がペンダント親油性置換基を含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾がペンダント親水性置換基を含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾がカチオン性である、請求項10に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾が、フェニル、C4〜C20アルキルもしくはアルケニル、置換もしくは非置換のイミダゾール、置換もしくは非置換のモルホリノ、置換もしくは非置換のピペリジン、置換もしくは非置換のピペラジン、または第三級アミンから選択される置換基を含む、請求項6に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記塩基修飾が、1〜4炭素単位の連結基を任意に有するカルボキサミノリンケージを介して、ピリミジン塩基のC5位に結合する、請求項12に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記2’修飾が、糖をC3エンド配置にロックする2’−4’架橋である、請求項1〜13のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記2’修飾が、2’O−アルキル(C1〜C6)、F、Cl、NH2、CN、またはSHである、請求項1〜13のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 2’修飾を有する2つ以上のヌクレオチドと塩基修飾を有する2つ以上のヌクレオチドとを含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチドであって、前記2’修飾が、2’O−アルキル(C1〜C6)、F、Cl、NH2、CN、SH、および糖をC3エンド配置にロックする2’−4’架橋から独立して選択される、オリゴヌクレオチド。
- 前記アルキルがC1〜C6アルキルである、請求項17に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記2’修飾が2’−OMeである、請求項17に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記2’修飾と前記アミノカルボニル修飾塩基との両方を有する2〜約10ヌクレオチドを有する、請求項1〜19のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも25%のヌクレオチドがアミノカルボニル修飾塩基を有する、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも50%のヌクレオチドがアミノカルボニル修飾塩基を有する、請求項21に記載のオリゴヌクレオチド。
- 少なくとも75%のヌクレオチドがアミノカルボニル修飾塩基を有する、請求項21に記載のオリゴヌクレオチド。
- 50%未満または25%未満のヌクレオチドがアミノカルボニル修飾塩基を有する、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、2’OMeを有する塩基修飾ヌクレオチドの単一導入を有する、請求項24に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、2’−OMeを有する少なくとも6または少なくとも9ヌクレオチドを含む、請求項21〜25のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが1つまたは複数の2’デオキシヌクレオチドを有する、請求項1〜26のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- ウリジン塩基またはチミン塩基がアミノカルボニルにより修飾される、請求項21〜27のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- ピリミジンがアミノカルボニルにより修飾される、請求項21〜27のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 5’および/または3’キャップ構造を有する、請求項1〜29のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 1つまたは複数のホスホロチオエートリンケージを含む、請求項1〜30のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが完全ホスホロチオエート連結される、請求項31に記載のオリゴヌクレオチド。
- 1〜5つのホスフェートリンケージを有する、請求項31に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記ヌクレオチド配列が、miR−208a、miR−208b、miR−15b、またはmiR−21の配列に実質的に相補的である、請求項1〜33のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記ヌクレオチド配列が、表1に列記されたヒトmiRNAの配列に実質的に相補的である、請求項1〜34のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチド。
- 図5のオリゴヌクレオチドの配列および構造を有する、請求項35に記載のオリゴヌクレオチド。
- 有効量の、請求項1〜36のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤と、を含む医薬組成物。
- 前記薬学的に許容可能な担体が、生理食塩水、コロイド分散系、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、またはリポソームを含む、請求項37に記載の医薬組成物。
- 細胞を請求項1〜36のいずれか1項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項37もしくは38に記載の組成物に接触させることを含む、前記細胞内でmicroRNA活性を低減または阻害する方法。
- 前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項39に記載の方法。
- 前記細胞が心臓細胞である、請求項40に記載の方法。
- 前記細胞がin vivoまたはex vivoに存在する、請求項39に記載の方法。
- 対象に請求項37または38に記載の医薬組成物を投与することを含む、microRNAの発現に関連するかまたはそれにより媒介される前記対象の病状を予防または治療する方法。
- 前記病状が心臓または心臓血管の病状である、請求項43に記載の方法。
- 前記心臓の病状が、病的心肥大、心筋梗塞、または心不全であり、かつ前記miRNAが、miR−208aまたはbである、請求項43に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、非経口投与によりまたは心臓組織中への直接注入により投与される、請求項43〜45のいずれか1項に記載の方法。
- 前記非経口投与が、静脈内、皮下、腹腔、または筋内である、請求項46に記載の方法。
- 前記組成物が、経口投与、経皮投与、持続放出投与、制御放出投与、遅延放出投与、坐剤投与、カテーテル投与、または舌下投与により投与される、請求項43〜47のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象がヒトである、請求項43〜48のいずれか1項に記載の方法。
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