JP2014196340A

JP2014196340A - ヒト抗ｉｐ−１０抗体およびその使用

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Publication number: JP2014196340A
Application number: JP2014132130A
Authority: JP
Inventors: フィッシャーニコラス; Nicolas Fischer; コスコ−ヴィルボアマリー; Kosco-Vilbois Marie; レジェオリビエ; Olivier Leger
Original assignee: Novimmune SA
Current assignee: Novimmune SA
Priority date: 2007-02-28
Filing date: 2014-06-27
Publication date: 2014-10-16
Also published as: WO2008106200A2; US20090169561A1; IL200610A0; WO2008106200A3; US7786268B2; WO2008106200A9; AU2008219570A1; CA2678626A1; EP2139919A2; CN101668774B; IL200610A; US8258267B2; JP2013151571A; MX2009009261A; US20100322941A1; AU2008219570B2; US8110661B2; US20100330094A1; JP5385159B2; JP2010520203A

Abstract

【課題】ヒト抗ＩＰ−１０抗体およびその使用の提供。【解決手段】本発明は、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０、ＣＸＣＬ１０）に結合し、それによりＩＰ−１０とその受容体ＣＸＣＲ３との相互作用を調節し、および／またはＩＰ−１０の生物活性を調節する完全ヒト抗体およびそのフラグメントに関する。本発明はさらに、免疫関連障害の予防または処置および免疫関連障害に関連する１つまたは複数の症状の軽減に際してのそうした抗ＩＰ−１０抗体の使用に関する。【選択図】なし

Description

本発明は全般的に完全ヒト抗ＩＰ−１０モノクローナル抗体およびその使用方法に関する。

インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０、ＣＸＣＬ１０）は、ＣＸＣＲ３受容体を介してシグナルを伝達するＣＸＣケモカインである。ＩＰ−１０はＴｈ１リンパ球および単球を選択的に化学的に誘引し、サイトカインの刺激による造血前駆細胞の増殖を阻害する。ＩＰ−１０は、単球、線維芽細胞および内皮細胞においてＩＦＮ−ｇ誘導性遺伝子として最初に同定された。以来、ＩＰ−１０のｍＲＮＡはＬＰＳ、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１２およびウイルスにより誘導されることも明らかにされている。ＩＰ−１０を発現することが明らかになっている他の細胞型として、活性化Ｔリンパ球、脾細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、星状細胞および平滑筋細胞が挙げられる。

高レベルのＩＰ−１０の発現は、様々な疾患および障害に関係していると考えられている。したがって、ＩＰ−１０活性を標的とする療法剤が求められている。

本発明は、インターフェロン誘導タンパク質１０（ＩＰ−１０、本明細書ではＣＸＣＬ１０ともいう）に特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体を提供する。例示的なモノクローナル抗体として、以下のものが挙げられる。

あるいは、モノクローナル抗体は、ＮＩ−０８０１、Ｃ７、Ｇ１１、Ｂ５、Ｆ３、ＣＣ＿Ｆ１、Ｅ５、Ｈ６、Ｃ５、Ｄ３、Ｆ４、Ｃ１ａ、Ｃ１、Ｅ７、Ｊ９、ＣＢ＿Ｆ１、Ａ２、Ｇ７、Ｃ３またはＢ９と同じエピトープに結合する抗体である。本明細書では、この抗体をそれぞれｈｕＩＰ−１０抗体という。

本発明のｈｕＩＰ−１０抗体はまた、配列番号２、１２、１８、２６、３１、４１、５１、５４、６１、６８、７５、８３、９２、１０２、１０９、１１６、１２３または１３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である重鎖可変アミノ酸配列および／または配列番号４、１４、２３、２８、３３、４３、５６、６３、７０、７７、８５、９４、１０４、１１１、１１８、１２５、１３９または１４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である軽鎖可変アミノ酸を含有する抗体も含む。

好ましくは、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎ）は、（ｉ）配列番号５、３４、４４、６４、８６、９５および１２７からなる群から選択されるＶ_ＨのＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号６、１５、３５、４５、６５、８７、９６および１２８からなる群から選択されるＶ_ＨのＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号７、２１、３６、４６、５２、５７、６６、７８、８８、９７、１０５、１２９、１３２および１４０からなる群から選択されるＶ_ＨのＣＤＲ３配列の各々と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号８、１６、３７、４７、７１、７９、９８、１０６、１１２、１１９、１３３および１４１からなる群から選択されるＶ_ＬのＣＤＲ１配列；（ｖ）配列番号９、３８、４８、５８、７２、８０、８９、９９、１１３、１２０および１４２からなる群から選択されるＶ_ＬのＣＤＲ２配列；および（ｖｉ）配列番号１０、２４、２９、３９、４９、５９、７３、８１、９０、１００、１０７、１１４、１２１、１２６および１４３からなる群から選択されるＶ_ＬのＣＤＲ３配列の各々と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを持つ軽鎖を含む。

一実施形態では、本発明のｈｕＩＰ−１０抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

本発明のｈｕＩＰ−１０抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ１領域、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ２領域；および配列番号７のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ３領域を含む。ｈｕＩＰ−１０抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ２領域；および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ３領域を含む。好ましい実施形態では、ｈｕＩＰ−１０抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ１領域、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ２領域；配列番号７のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ３領域、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ２領域；および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ３領域を含む。

好ましくは、ｈｕＩＰ−１０抗体をＩｇＧアイソタイプに変換する。一層好ましくは、ｈｕＩＰ−１０抗体をＩｇＧ１アイソタイプに変換する。例示的なＩｇＧ１型抗体は、以下に示すような配列番号１３５の重鎖配列および配列番号１３４の軽鎖配列を含むＩｇＧ１型ＮＩ−０８０１抗体である：

本明細書に記載のｈｕＩＰ−１０抗体に最も近い生殖系列を以下の表１に示す：

別の態様では、本発明は、ｈｕＩＰ−１０抗体を対象に投与することにより免疫関連障害の症状を処置、予防または緩和する方法を提供する。たとえば、ｈｕＩＰ−１０抗体を用いて自己免疫疾患または炎症性障害に関連する症状を処置、予防または緩和する。さらに、任意に、以下に限定されるものではないが、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１などのサイトカインおよび／またはＭＩＰ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ）１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ（ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ）１、ＩＰ−１０、ＩＴＡＣ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅＴ−ｃｅｌｌ α ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ）、ＭＩＧ（ｍｏｎｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ）、ＳＤＦ（ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ）およびフラクタルカインなどのケモカインを認識する抗サイトカインまたは抗ケモカイン試薬などの第２の薬と共に対象に投与する。

対象は、たとえば、自己免疫疾患または炎症性障害などの免疫関連障害に罹患しているか、または発症しやすい。好ましくは、対象は、哺乳動物であり、一層好ましくは、対象はヒトである。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＩＰ−１０抗体またはそのフラグメントであって、この抗体は、
（ａ）配列番号５、３４、４４、６４、８６、９５または１２７のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ１領域；
（ｂ）配列番号６，１５、３５、４５、６５、８７、９６または１２８のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ２領域；および
（ｃ）配列番号７、２１、３６、４６、５２、５７、６６、７８、８８、９７、１０５、１２９、１３２または１４０のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ３領域
を含み、
この抗体はＩＰ−１０に結合する抗体またはそのフラグメント。
（項目２）
上記抗体は、
（ｄ）配列番号８、１６、３７、４７、７１、７９、９８、１０６、１１２、１１９、１３３または１４１のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ１領域；
（ｅ）配列番号９、３８、４８、５８、７２、８０、８９、９９、１１３、１２０または１４２のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ２領域；および
（ｆ）配列番号１０、２４、２９、３９、４９、５９、７３、８１、９０、１００、１０７、１１４、１２１、１２６または１４３のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ３領域
をさらに含む、項目１に記載の抗体。
（項目３）
上記抗体はＩｇＧアイソタイプである、項目１に記載の抗体。
（項目４）
上記抗体はＩｇＧ１アイソタイプである、項目１に記載の抗体。
（項目５）
上記抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ１領域；配列番号６のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ２領域、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ３領域；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ２領域；および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ３領域を含む、項目２に記載の抗体。
（項目６）
上記抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む、項目５に記載の抗体。
（項目７）
配列番号１３４のアミノ酸配列を含む重鎖配列および配列番号１３５のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、単離された完全ヒトモノクローナル抗体。
（項目８）
上記抗体はＩｇＧ１アイソタイプである、項目７に記載の抗体。
（項目９）
単離された完全ヒトモノクローナル抗体であって、この抗体は、配列番号２、１２、１８、２６、３１、４１、５１、５４、６１、６８、７５、８３、９２、１０２、１０９、１１６、１２３および１３７からなる群から選択される重鎖可変アミノ酸配列を含み、この抗体はＩＰ−１０に結合する、抗体。
（項目１０）
上記抗体は、配列番号４、１４、２３、２８、３３、４３、５６、６３、７０、７７、８５、９４、１０４、１１１、１１８、１２５、１３９および１４５からなる群から選択される軽鎖可変アミノ酸配列をさらに含み、この抗体はＩＰ−１０に結合する、項目９に記載の抗体。
（項目１１）
上記抗体はＩｇＧアイソタイプである、項目１０に記載の抗体。
（項目１２）
上記抗体はＩｇＧ１アイソタイプである、項目１１に記載の抗体。
（項目１３）
配列番号５のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ１領域；配列番号６のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ２領域、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ３領域；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ２領域；および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ３領域を含む、単離された完全ヒトモノクローナル抗体。
（項目１４）
上記抗体はＩｇＧアイソタイプである、項目１３に記載の抗体。
（項目１５）
上記抗体はＩｇＧ１アイソタイプである、項目１４に記載の抗体。
（項目１６）
項目１、７、９または１３のいずれか１項に記載の抗体およびキャリアを含む、医薬組成物。
（項目１７）
自己免疫疾患または炎症性障害の症状を緩和する方法であって、この方法は、被験体のこの自己免疫疾患または炎症性障害の症状を緩和する十分な量で項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体を緩和を必要とするこの被験体に投与することを含む、方法。
（項目１８）
上記被験体はヒトである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
上記抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ１領域；配列番号６のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ２領域、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶ_ＨのＣＤＲ３領域；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ２領域；および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶ_ＬのＣＤＲ３領域を含む、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
上記抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
上記抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む重鎖配列および配列番号１３５のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、項目１９に記載の方法。

ｈＩＰ−１０誘導性のカルシウム流に対する本発明のｈｕＩＰ−１０抗体の用量依存性の中和活性を示す一連のグラフである。ｈＩＰ−１０誘導性のカルシウム流に対する本発明のｈｕＩＰ−１０抗体の用量依存性の中和活性を示す一連のグラフである。細胞走化性に対する本発明のｈｕＩＰ−１０抗体の用量依存性の中和活性を示す一連のグラフである。組換えｈＩＰ−１０に対する用量依存性の中和活性を示す。

細胞走化性に対する本発明のｈｕＩＰ−１０抗体の用量依存性の中和活性を示す一連のグラフである。組換えｈＩＰ−１０に対する用量依存性の中和活性を示す。細胞走化性に対する本発明のｈｕＩＰ−１０抗体の用量依存性の中和活性を示す一連のグラフである。ネイティブなｈＩＰ−１０に対する用量依存性の中和活性を示す。細胞走化性に対する本発明のｈｕＩＰ−１０抗体の用量依存性の中和活性を示す一連のグラフである。ネイティブなｈＩＰ−１０に対する用量依存性の中和活性を示す。グリコサミノグリカン（ＧＡＧ：ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）の場合にｈＩＰ−１０に結合するｈｕＩＰ−１０抗体の能力を示すグラフである。抗体ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７（配列番号１２）と、ヒト生殖系列ＤＰ−４９（配列番号２０）またはＩＧＨＶ３−３０との免疫グロブリン重鎖可変遺伝子を比較した説明図である。Ｃ７のＶＨは、ＩＧＨＶ３−３０と比較した場合、５個の突然変異（ＣＤＲ１に３個、ＣＤＲ２に１個およびフレームワーク４に１個）を持つ。Ｃ７のＶＬ（配列番号１４）は、ＩＧＬＶ６−５７（配列番号１４６）と比較した場合、４個の突然変異（すべてＣＤＲ１に位置する）を持つ。図５では変異アミノ酸残基を枠で囲んである。図６Ａは、ｈＩＰ−１０に対する抗体ＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１の親和性を示すグラフである。図６Ｂは、ｈＩＰ−１０に対する抗体ＮＩ−０８０１の親和性を示すグラフである。ＮＩ−０８０１抗体と様々な種由来のＩＰ−１０および他のヒトケモカインとの交差反応性を示すグラフである。図８Ａは、ｈＣＸＣＲ３を発現するＬ１．２細胞の細胞走化性を誘導する組換えｈＩＴＡＣおよびｈＩＰ−１０の能力とこれらのケモカインの活性を中和するＮＩ−０８０１抗体の能力とを示すグラフである。図８Ｂは、ｈＣＸＣＲ３を発現するＬ１．２細胞の細胞走化性を誘導する組換えｈＭＩＧおよびｈＩＰ−１０の能力とこれらのケモカインの活性を中和するＮＩ−０８０１抗体の能力とを示すグラフである。様々な異なる種由来のＩＰ−１０に対するＮＩ−０８０１の中和ポテンシャルを示すグラフである。複数の種由来のＩＰ−１０タンパク質配列のアライメントを示す説明図である。ウサギＩＰ−１０の変異型に結合するＮＩ−０８０１抗体の能力を示すグラフである。

本発明は、インターフェロン誘導タンパク質１０（ＩＰ−１０、ＣＸＣＬ１０）に特異的な完全ヒトモノクローナル抗体を提供する。この抗体は、本明細書においてｈｕＩＰ−１０抗体と総称される。ｈｕＩＰ−１０抗体は、ＩＰ−１０に特異的に結合する。本明細書で使用する場合、「に特異的」、「特異的結合」、「を標的とする」（およびその文法的変形のすべて）という語は抗体の文脈において同義で使われる。その際、抗体は、平衡結合定数（Ｋ_ｄ）が、たとえば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、一層好ましくは≦１ｎＭのように≦１μＭのとき、ＩＰ−１０エピトープを認識し、結合する。たとえば、本明細書で提供されるｈｕＩＰ−１０抗体は、約２００ｐＭ以下から約１ｐＭの範囲のＫ_ｄを示す。

ｈｕＩＰ−１０抗体は、たとえば、ＩＰ−１０の少なくとも１つの生物活性を調節するＩＰ−１０アンタゴニストまたは阻害剤である。ＩＰ−１０の生物活性として、たとえば、ＩＰ−１０受容体（ＣＸＣＲ３）への結合、ＩＰ−１０誘導性カルシウム流、ＩＰ−１０誘導性細胞走化性、グリコサミノグリカンへのＩＰ−１０の結合およびＩＰ−１０オリゴマー化が挙げられる。たとえば、ｈｕＩＰ−１０抗体は、ＩＰ−１０受容体（ＣＸＣＲ３）に対するＩＰ−１０の結合を一部または完全に遮断することで、ＩＰ−１０活性を完全にまたは一部阻害する。ＩＰ−１０抗体は、本明細書に記載のｈｕＩＰ−１０抗体との結合が存在しない場合のＩＰ−１０活性レベルと比較して、ｈｕＩＰ−１０抗体の存在下でのＩＰ−１０活性のレベルが少なくとも９５％、たとえば、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％低下した場合、ＩＰ−１０活性を完全に阻害すると見なされる。ＩＰ−１０抗体は、本明細書に記載のｈｕＩＰ−１０抗体との結合が存在しない場合のＩＰ−１０活性のレベルと比較して、ｈｕＩＰ−１０抗体の存在下でのＩＰ−１０活性のレベルが９５％未満、たとえば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％または９０％低下した場合、ＩＰ−１０活性を部分的に阻害したと見なされる。

本発明のｈｕＩＰ−１０抗体については、ＩＰ−１０、たとえば、マウスＩＰ−１０、ヒトＩＰ−１０またはそれらの免疫原性フラグメント、誘導体もしくは変異体で動物を免疫して作製する。あるいは、ＩＰ−１０をコードする核酸分子を含むベクターをトランスフェクトした細胞で動物を免疫して、ＩＰ−１０を発現させ、トランスフェクト細胞の表面に結合させる。あるいは、ＩＰ−１０への結合に関して抗体または抗原結合ドメイン配列を含むライブラリーをスクリーニングして抗体を取得する。このライブラリーについては、たとえば、構築されたファージ粒子の表面に発現する、タンパク質またはペプチドとバクテリオファージコートタンパク質との融合体としてのバクテリオファージ、およびファージ粒子内に含まれるコードＤＮＡ配列を用いて調製する（すなわち、「ファージディスプレイライブラリー」）。

本発明のｈｕＩＰ−１０抗体は、たとえば、以下の表２に示す重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、表３に示す軽鎖ＣＤＲおよびこれらの組み合わせを含む。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＮＩ−０８０１抗体がある。以下に示すようにＮＩ−０８０１抗体は、配列番号１に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号２）および配列番号４に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号３）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。ＮＩ−０８０１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。ＮＩ−０８０１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７（「Ｃ７」）抗体がある。以下に示すようにＣ７抗体は、配列番号１１に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１２）および配列番号１３に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１４）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ｅｔａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｃ７抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｃ７抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＦ１Ｈ１Ｒ３Ｐ３＿Ｇ１１（「Ｇ１１」）抗体がある。以下に示すようにＧ１１抗体は、配列番号１７に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１８）および配列番号１９に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１４）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｇ１１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｇ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＦ１Ｈ１Ｒ３Ｐ４＿Ｂ５（「Ｂ５」）抗体がある。以下に示すようにＢ５抗体は、配列番号１７に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１８）および配列番号２３に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号２２）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｂ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｂ５抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＦ１Ａ１１Ｒ３Ｐ３＿Ｆ３（「Ｆ３」）抗体がある。以下に示すようにＦ３抗体は、配列番号１７に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１８）および配列番号２７に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号２８）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｆ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｆ３抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＢ１Ｒ３Ｐ４＿Ｄ３（「Ｄ３」）抗体がある。以下に示すようにＤ３抗体は、配列番号３０に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号３１）および配列番号３２に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号３３）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｄ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｄ３抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＢ２Ｒ２Ｐ４＿Ｃ３（「Ｃ３」）抗体がある。以下に示すようにＣ３抗体は、配列番号４０に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号４１）および配列番号４２に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号４３）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｃ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｃ３抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＢ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１（「ＣＢ＿Ｆ１」）抗体がある。以下に示すようにＣＢ＿Ｆ１抗体は、配列番号５０に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号５１）および配列番号１４４に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１４５）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。ＣＢ＿Ｆ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。ＣＢ＿Ｆ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＢ２１Ｒ３Ｐ３＿Ｅ５（「Ｅ５」）抗体がある。以下に示すようにＥ５抗体は、配列番号５３に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号５４）および配列番号５５に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号５６）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｅ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｅ５抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＢ２１Ｒ３Ｐ６＿Ｇ７（「Ｇ７」）抗体がある。以下に示すようにＧ７抗体は、配列番号６０に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号６１）および配列番号６２に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号６３）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｇ７抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｇ７抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ａ２（「Ａ２」）抗体がある。以下に示すようにＡ２抗体は、配列番号６７に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号６８）および配列番号６９に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号７０）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ａ２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ａ２抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｃ１ａ（「Ｃ１ａ」）抗体がある。以下に示すようにＣ１ａ抗体は、配列番号７４に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号７５）および配列番号７６に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号７７）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｃ１ａ抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｃ１ａ抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ３＿Ｃ１（「Ｃ１」）抗体がある。以下に示すようにＣ１抗体は、配列番号１０１に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１０２）および配列番号１０３に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１０４）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ｅｔａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｃ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｅ７（「Ｅ７」）抗体がある。以下に示すようにＥ７抗体は、配列番号８２に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号８３）および配列番号８４に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号８５）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｅ７抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｅ７抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｈ６（「Ｈ６」）抗体がある。以下に示すようにＨ６抗体は、配列番号９１に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号９２）および配列番号９３に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号９４）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｈ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｈ６抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ４＿Ｆ４（「Ｆ４」）抗体がある。以下に示すようにＦ４抗体は、配列番号１０８に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１０９）および配列番号１１０に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１１１）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｆ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｆ４抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ５＿Ｃ５（「Ｃ５」）抗体がある。以下に示すようにＣ５抗体は、配列番号１１５に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１１６）および配列番号１１７に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１１８）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｃ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｃ５抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＥ７Ｃ１Ｒ３Ｈ８＿Ｊ９（「Ｊ９」）抗体がある。以下に示すようにＪ９抗体は、配列番号１２２に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１２３）および配列番号１２４に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１２５）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄ
ＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｊ９抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｊ９抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｂ９（「Ｂ９」）抗体がある。以下に示すようにＢ９抗体は、配列番号１３６に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号１３７）および配列番号１３８に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号１３９）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義されたとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎ
Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。Ｂ９抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。Ｂ９抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

例示的なｈｕＩＰ−１０モノクローナル抗体として、本明細書に記載のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１（「ＣＣ−Ｆ１」）抗体がある。以下に示すようにＣＣ−Ｆ１抗体は、配列番号２５に示す核酸配列がコードする重鎖可変領域（配列番号２６）および配列番号２７に示す核酸配列がコードする軽鎖可変領域（配列番号２８）を含む。

相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらが定義したとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＰｒｉｎｔｉｎｇＯｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照されたい）。ＣＣ−Ｆ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。ＣＣ−Ｆ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：

を持つ。

また、本発明のｈｕＩＰ−１０抗体は、配列番号２、１２、１８、２６、３１、４１、５１、５４、６１、６８、７５、８３、９２、１０２、１０９、１１６、１２３または１３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である重鎖可変アミノ酸配列および／または配列番号４、１４、２３、２８、３３、４３、５６、６３、７０、７７、８５、９４、１０４、１１１、１１８、１２５、１３９または１４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である軽鎖可変アミノ酸を含有する抗体も含む。

あるいは、本モノクローナル抗体は、ＮＩ−０８０１、Ｃ７、Ｇ１１、Ｂ５、Ｆ３、ＣＣ＿Ｆ１、Ｂ９、Ｅ５、Ｈ６、Ｃ５、Ｄ３、Ｃ３、Ｆ４、Ｃ１ａ、Ｃ１、Ｅ７、Ｊ９、ＣＢ＿Ｆ１、Ａ２および／またはＧ７と同じエピトープに結合する抗体である。

他に定義しない限り、本発明に関連して用いられる科学技術用語は、当業者が一般に理解している意味を持つものとする。さらに、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形の用語を含むものとする。通常、本明細書に記載の細胞組織培養、分子生物学と、タンパク質およびオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド化学と、ハイブリダイゼーションとに関連して用いられる命名法およびそれらの技法は、当該技術分野において周知であり、一般に使用されるものである。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成ならびに組織培養および形質転換（たとえば、エレクトロポレーション、リポフェクション）には、標準的な技法を用いる。酵素反応および精製技法については、製造者の仕様に従って行うか、あるいは当該技術分野において一般に行われているとおり行うか、あるいは本明細書に記載のとおり行う。前述の技法および手順は通常、当該技術分野において周知の従来の方法に従い、種々の一般的な参考文献および本明細書を通じて引用および考察されているより具体的な参考文献に記載されているように行う。たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（２ｄｅｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ
ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。本明細書に記載の分析化学、有機合成化学ならびに医薬および製薬化学に関連して用いられる命名法と、それらの実験の手順および技法とは当該技術分野において周知であり、一般に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化、送達、および患者の処置には、標準的な技法を用いる。

本開示に従い用いられる場合、以下の用語は、他に記載がない限り下記の意味を持つものと理解すべきである。

本明細書で使用する場合、「抗体」という語は免疫グロブリン分子および、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子をいう。こうした抗体として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆ_ａｂフラグメント、Ｆ_ａｂ’フラグメントおよびＦ_{（ａｂ’）２}フラグメントおよびＦ_ａｂ発現ライブラリーがあるが、これに限定されるものではない。「特異的に結合する」または「免疫反応する」とは、抗体が、所望の抗原の１つまたは複数の抗原決定基と反応するが、他のポリペプチドと反応（すなわち、結合）しないか、他のポリペプチドと非常に低い親和性（Ｋ_ｄ＞１０^−６）で結合することを意味する。

抗体の基本的な構造単位は、４量体を含むことが知られている。４量体はそれぞれポリペプチド鎖の２つの同一対からなり、各鎖は１本の「軽」（約２５ｋＤａ）鎖と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）とを持つ。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を規定する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖とλ軽鎖に分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＥと規定する。軽鎖と重鎖内は、可変領域および定常領域が約１２またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域で連結され、重鎖はさらに約１０アミノ酸の「Ｄ」領域をさらに含む。ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＣｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅａ．，２ｎｄｅｄ．ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を全般的に参照されたい。軽／重鎖対の可変領域はそれぞれ抗体結合部位を形成する。

「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」という語は、本明細書で使用する場合、唯一の軽鎖遺伝子産物および唯一の重鎖遺伝子産物からなる１分子種の抗体分子のみを含む抗体分子の集団をいう。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団のすべての分子で同一である。ＭＡｂは、ＭＡｂに対する特有の結合親和性を特徴とする特定の抗原のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含む。

一般に、ヒトから得られる抗体分子は、分子に存在する重鎖の性質により互いに異なるクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤ）のいずれかに対応している。一部のクラスにはＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２などのサブクラスもある。また、ヒトの軽鎖はκ鎖またはλ鎖であり得る。

「抗原結合部位」または「結合部分」という語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の一部をいう。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖および軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基で形成される。「超可変領域」と呼ばれる重鎖および軽鎖のＶ領域内にある可変性が高い３つの配列が、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」と呼ばれる保存性がより高い配列の間にある。したがって、「ＦＲ」という語は、免疫グロブリンの超可変領域の間およびそれに隣接して自然に見られるアミノ酸配列をいう。抗体分子では、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域が三次元空間に相互に関連して配置されて抗原結合表面を形成している。抗原結合表面は、結合抗原の三次元表面と相補的であり、重鎖および軽鎖それぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。各ドメインにアミノ酸を割り当てる際は、ＫａｂａｔＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ａｎｄ１９９１）），ｏｒＣｈｏｔｈｉａ＆ＬｅｓｋＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。

本明細書で使用する場合、「エピトープ」という語は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖまたはＴ細胞受容体に特異的に結合できる任意のタンパク質決定基を含む。「エピトープ」という語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合できる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、ほとんどの場合、アミノ酸または糖側鎖などの化学的に活性な表面分子群からなり、特異的三次元構造特性および特異的電荷特性を持っているのが一般的である。抗体は、解離定数が≦１μＭ、たとえば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、一層好ましくは≦２００ｐＭのとき、抗原に特異的に結合するとされる。

本明細書で使用する場合、「免疫学的な結合」および「免疫学的な結合特性」という語は、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的である抗原との間で起こるタイプの非共有結合性相互作用をいう。免疫学的な結合の相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋ_ｄ）によって表すことができ、Ｋ_ｄが小さくなれば、親和性は高くなる。選択したポリペプチドの免疫学的な結合特性に関しては、当該技術分野において周知の方法を用いて定量する。そうした方法の１つでは、抗原結合部位／抗原複合体の形成および解離の速度を測定する。そうした速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性および両方向の速度に等しく作用する幾何学的パラメーターによって決まる。したがって、濃度と実際の会合および解離の速度とを計算して、「会合速度定数」（Ｋ_ｏｎ）および「解離速度定数」（Ｋ_ｏｆｆ）を決定してもよい。（Ｎａｔｕｒｅ３６１：１８６−８７（１９９３）を参照されたい）。Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎの比を用いれば親和性に関係のないすべてのパラメーターを排除できる。そして、この比は解離定数Ｋ_ｄに相当する。（Ｄａｖｉｅｓｅｔａｌ．（１９９０）ＡｎｎｕａｌＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５９：４３９−４７３の全般を参照されたい）。本発明の抗体は、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に知られている類似のアッセイなどのアッセイで測定した場合、平衡結合定数（Ｋ_ｄ）が≦１μＭ、たとえば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、一層好ましくは≦１ｎＭであるとき、ＩＰ−１０エピトープに特異的に結合するとされる。たとえば、本明細書に記載のｈｕＩＰ−１０抗体は、約２００ｐＭ以下から約１ｐＭの範囲のＫ_ｄを示す。

当業者であれば、あるヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体（たとえば、モノクローナル抗体ＮＩ−０８０１、Ｃ７、Ｇ１１、Ｂ５、Ｆ３、ＣＢ＿Ｆ１、Ｂ９、Ｅ５、Ｈ６、Ｃ５、Ｄ３、Ｃ３、Ｆ４、Ｃ１ａ、Ｃ１、Ｅ７、Ｊ９、ＣＣ＿Ｆ１、Ａ１またはＧ７）と同じ特異性を持つかどうかを、ＩＰ−１０抗原ポリペプチドに対する後者の結合を前者が妨げるかどうかを確認することで、過度の実験を行うことなく決定することができることを認識するであろう。検査対象のヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体と競合し、本発明のヒトモノクローナル抗体による結合の減少が示されれば、この２種のモノクローナル抗体は同一または密接に関連するエピトープに結合する。あるヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体の特異性を持つかどうかを決定する別の方法は、本発明のヒトモノクローナル抗体を、通常、前述のモノクローナル抗体と反応するＩＰ−１０抗原ポリペプチドとプレインキュベートし、次いで検査対象のヒトモノクローナル抗体を加えて、検査対象のヒトモノクローナル抗体のＩＰ−１０抗原ポリペプチドへの結合能が阻害されるかどうかを決定する。検査対象のヒトモノクローナル抗体が阻害されれば、ほぼ間違いなく、その抗体は本発明のモノクローナル抗体と同一または機能的に等価なエピトープ特異性を持っている。

ＩＰ−１０タンパク質などのタンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログホモログまたはオーソログに対するモノクローナル抗体の作製には、当該技術分野において知られている種々の手順が用いられる。（たとえば、参照によって本明細書に援用するＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＨａｒｌｏｗＥ，ａｎｄＬａｎｅＤ，１９８８，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹを参照されたい）。完全ヒト抗体は、ＣＤＲを含む軽鎖と重鎖との全配列がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。本明細書では、こうした抗体を「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」という。ヒトモノクローナル抗体については、たとえば、以下の実施例に記載する手順を用いて調製する。また、ヒトモノクローナル抗体に関しては、ヒトモノクローナル抗体を作製するためのトリオーマ手法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ手法（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ４：７２を参照）；およびＥＢＶハイブリドーマ手法（Ｃｏｌｅら、１９８５Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照）を用いても調製できる。ヒトモノクローナル抗体については利用してもよく、ヒトハイブリドーマを用いて（Ｃｏｔｅら、１９８３．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８０：２０２６−２０３０を参照）、あるいは、インビトロでヒトＢ細胞をエプスタインバーウイルスで形質転換することで（Ｃｏｌｅら、１９８５Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照）作製してもよい。

抗体に関しては、プロテインＡまたはプロテインＧを用いたアフィニティークロマトグラフィーなどよく知られている技法により精製する。それに続いて、あるいはその代わりに、対象となる免疫グロブリンの標的である特異的な抗原またはそのエピトープをカラム上に固定化し、イムノアフィニティークロマトグラフィーで免疫特異的抗体を精製してもよい。免疫グロブリンの精製については、たとえば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎにより考察されている（ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｙＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａＰＡ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（Ａｐｒｉｌ１７，２０００），ｐｐ．２５−２８）。

たとえば、免疫関連疾患における抗体の有効性を高めるため、エフェクター機能について本発明の抗体を修飾することが望ましい。たとえば、Ｆｃ領域にシステイン残基（単数または複数）を導入し、それによりこの領域に鎖間のジスルフィド結合を形成させることができる。こうして作製されたホモ二量体抗体は、インターナリゼーション能力を向上させ、および／または補体による細胞殺傷作用および抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ：ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｅｌｌｕｌａｒｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を増強することができる。（Ｃａｒｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）ａｎｄＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照されたい）。あるいは、二重のＦｃ領域を持つ抗体を設計してもよく、それにより補体の溶解能力およびＡＤＣＣ能力を増強することができる。（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎｅｔａｌ．，Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照されたい）。

さらに、本発明は、Ｆｖ、Ｆ_ａｂ、Ｆ_ａｂ’およびＦ_{（ａｂ’）２}のｈｕＩＰ−１０フラグメント、一本鎖ｈｕＩＰ−１０抗体、二重特異性ｈｕＩＰ−１０抗体およびヘテロコンジュゲートｈｕＩＰ−１０抗体を含む。

二重特異性抗体は、少なくとも２種類の抗原に対して結合特異性を持つ抗体である。本発明の場合、結合特異性の１つは、ＩＰ−１０に対する結合特異性である。もう１つの結合標的は任意の他の抗原であり、細胞表面タンパク質または受容体もしくは受容体サブユニットであると都合がよい。

二重特異性抗体の製造方法は、当該技術分野において公知である。二重特異性抗体の組換え体の作製は従来から、２本の重鎖の特異性が異なる２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基礎を置いている（ＭｉｌｓｔｅｉｎａｎｄＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖をランダムに組み合わせるため、こうしたハイブリドーマ（クアドローマ）からは、可能性のある１０種類の抗体分子の混合物が産生され、適切な二重特異性構造を持っているのはその中の１つだけである。適切な分子の精製は、ほとんどの場合、アフィニティークロマトグラフィーのステップにより行われる。類似の手順が１９９３年５月１３日公開の国際公開第９３／０８８２９号およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。

所望の結合特異性を持つ抗体可変ドメイン（抗体抗原結合部位）を、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合することができる。こうした融合は、少なくともヒンジ領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインと行われるのが好ましい。好ましくは、融合体の少なくとも１つに、軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が存在する。免疫グロブリン重鎖融合体（必要に応じて、さらに免疫グロブリン軽鎖）をコードするＤＮＡについては別々の発現ベクターに挿入し、好適な宿主生物にコトランスフェクトする。二重特異性抗体の作製の詳細に関しては、たとえば、Ｓｕｒｅｓｈｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。

二重特異性抗体を作製するための他のアプローチについては、たとえば、参照によってその全体を本明細書に援用する国際公開第９６／２７０１１号に記載されている。二重特異性抗体を、全長抗体または抗体フラグメント（たとえば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）として調製することができる。抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製する技法は、文献に記載されている。たとえば、化学結合を用いて二重特異性抗体を調製することができる。たとえば、参照によってその全体を本明細書に援用するＢｒｅｎｎａｎｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１（１９８５）を参照されたい。

加えて、Ｆａｂ’フラグメントを大腸菌から直接回収し、化学的に結合して二重特異性抗体を形成することもできる。たとえば、参照によってその全体を本明細書に援用するＳｈａｌａｂｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）を参照されたい。

また、組換え細胞培養から二重特異性抗体フラグメントを直接製造し、単離する種々の技法も記載されている。たとえば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて作製されている。たとえば、参照によってその全体を本明細書に援用するＫｏｓｔｅｌｎｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。参照によってその全体を本明細書に援用するＨｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載されている「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを製造する代替的機構になっている。さらに、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を用いて二重特異性抗体フラグメントを製造するための別の戦略も報告されている。参照によってその全体を本明細書に援用するＧｒｕｂｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。

２つより多い価数の抗体を意図している。たとえば、三重特異性抗体を作製してもよい。Ｔｕｔｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照されたい。

例示的な二重特異性抗体は２種類のエピトープに結合することができ、その少なくとも１つは本発明のタンパク質抗原に由来する。あるいは、特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機構を集中させるため、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームを、Ｔ細胞受容体分子（たとえば、ＣＤ２、ＩＦＮγ、ＣＤ２８またはＢ７）またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＩＦＮγ２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）のようなＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）など、白血球上のトリガー分子に結合するアームと組み合わせてもよい。さらに、二重特異性抗体を用いて細胞傷害性薬物を特定の抗原を発現する細胞に誘導することもできる。これらの抗体は、抗原結合アームと、細胞傷害性薬物またはＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡもしくはＴＥＴＡなどの放射性核種キレート剤と結合するアームとを持っている。注目すべき別の二重特異性抗体は、本明細書に記載のタンパク質抗原に結合し、組織因子（ＴＦ：ｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒ）にもさらに結合する。

また、ヘテロコンジュゲート抗体も本発明の範囲内にある。ヘテロコンジュゲート抗体は、共有結合で結合した２つの抗体からなる。こうした抗体は、たとえば、免疫系細胞を望ましくない細胞に向かわせ（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染を処置する（国際公開第９１／００３６０号；国際公開第９２／２００３７３号；欧州特許第０３０８９号）と考えられている。抗体については、架橋剤を含む方法などタンパク質合成化学の既知の方法を用いてインビトロで調製できると考えられる。たとえば、免疫毒素を、ジスルフィド交換反応を用いて構築してもよいし、チオエーテル結合を形成して構築してもよい。このために好適な試薬の例として、イミノチオラート、メチル−４−メルカプトブチルイミダートおよび、たとえば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている試薬が挙げられる。

本発明はまた、トキシン（たとえば、細菌、真菌、植物もしくは動物由来の酵素的に活性なトキシンまたはそのフラグメント）などの細胞傷害性薬物にコンジュゲートした抗体または放射性同位元素にコンジュゲートした抗体（すなわち、放射性コンジュゲート）を含む免疫コンジュゲートに関する。

使用してもよい酵素的に活性なトキシンおよびそのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、マイトジェリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）がある。放射性コンジュゲート抗体の作製には様々な放射性核種を利用することができる。例として、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙおよび^１８６Ｒｅが挙げられる。

抗体および細胞傷害性薬物のコンジュゲートについては、Ｎ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジプイミダートＨＣＬなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベラートなど）、アルデヒド（グルタレルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビスジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアナート（トリエン２，６−ジイソシアナートなど）およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製する。たとえば、リシン免疫毒素を、Ｖｉｔｅｔｔａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように調製することができる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体にコンジュゲートする典型的なキレート化剤である。（国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい）。

当業者であれば、あり得べき多種多様の部分を本発明により得られる抗体または他の分子に結合できることを認識するであろう。（たとえば、その内容全体を参照によって本明細書に援用する「ＣｏｎｊｕｇａｔｅＶａｃｃｉｎｅｓ」，ＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｔｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅａｎｄＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（ｅｄｓ），ＣａｒｇｅｒＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。

カップリングは、抗体および他の部分がそれぞれの活性を保持する限り、２個の分子を結合する任意の化学反応で行われる。こうした結合には、たとえば、共有結合、親和結合、インターカレーション、配位結合および複合体形成など多くの化学的機構を含めてもよい。ただし、好ましい結合は共有結合である。共有結合に関しては、すでに存在する側鎖の直接縮合により、あるいは外部の架橋分子の組み込みにより行う。本発明の抗体などのタンパク質分子と他の分子とのカップリングに有用な二価または多価の連結剤は多くある。たとえば、代表的なカップリング剤として、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアナート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物が挙げられる。ここに列挙したものは、当該技術分野において公知の様々なクラスのカップリング剤を網羅するものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤を例示したものである。（ＫｉｌｌｅｎａｎｄＬｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５−２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎｅｔａｌ．，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ６２：１８５−２１６（１９８２）；ａｎｄＶｉｔｅｔｔａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）を参照されたい。好ましいリンカーについては、文献に記載されている。（たとえば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの使用について記載したＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４４：２０１−２０８（１９８４）を参照されたい）。さらに、オリゴペプチドリンカーにより抗体に結合されたハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用について記載した米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。特に好ましいリンカーとして、（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミドヒドロクロリド；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−プリジル−ジチオ）−トルエン（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシニミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノアート（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ＃２１６５ＩＧ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピアンアミド］ヘキサノアート（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．カタログ。＃２１６５−Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートしたスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ＃２４５１０）が挙げられる。

上記のリンカーは異なる特性を持つ成分を含み、したがって、異なる生理化学的性質を持つコンジュゲートが形成される。たとえば、アルキルカルボキシラートのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシラートのスルホ−ＮＨＳエステルよりも安定している。ＮＨＳ−エステル含有リンカーは、スルホ−ＮＨＳエステルより溶解性が低い。さらに、リンカーＳＭＰＴは立体障害のあるジスルフィド結合を含み、安定性が高いコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド結合は一般に、インビトロで切断されるため他の結合よりも安定性が低く、コンジュゲートしにくい。スルホ−ＮＨＳはカルボドイミドカップリング薬の安定性を特に高めることができる。カルボドイミドカップリング薬（ＥＤＣなど）をスルホ−ＮＨＳと併用すると、カルボドイミドカップリング反応単独の場合よりも加水分解に対する抵抗性が強いエステルが形成される。

「単離されたポリヌクレオチド」という語は、本明細書で使用する場合、ゲノム起源、ｃＤＮＡ起源もしくは合成起源のポリヌクレオチドまたはこれらの何らかの組み合わせを意味するものとする。「単離されたポリヌクレオチド」は、その起源に照らして（１）自然界に見出されるポリヌクレオチドの全部または一部と結合していない、（２）自然界で連結されてないポリヌクレオチドに作動可能に連結されている、あるいは、（３）より大きな配列の一部として自然界に存在していない。

「単離されたタンパク質」という語は、ｃＤＮＡ起源、組換えＲＮＡ起源もしくは合成起源のタンパク質またはこれらの何らかの組み合わせを意味する。その誘導の起源または供給源に照らして、「単離されたタンパク質」は、（１）自然界に見出されるタンパク質に結合していない、（２）供給源が同じ他のタンパク質、たとえば、海洋性タンパク質を含まない、（３）異なる種の細胞に発現する、あるいは（４）自然界に存在しない。

本明細書では、「ポリペプチド」という語を、ポリペプチド配列のネイティブなタンパク質、フラグメントまたはアナログを指す総称として使用する。このため、ネイティブなタンパク質フラグメントおよびアナログは、ポリペプチド属の種になる。本発明による好ましいポリペプチドは、本明細書に示すヒト重鎖免疫グロブリン分子および本明細書に示すヒト軽鎖免疫グロブリン分子、さらにκ軽鎖免疫グロブリン分子などの軽鎖免疫グロブリン分子と共に重鎖免疫グロブリン分子を含む組み合わせ（その逆も同様である）により形成され抗体分子、さらにはこれらのフラグメントおよびアナログを含む。

本明細書で使用する場合、ある物体に対して用いる「天然の」という語は、物体が自然界に見出され得ることをいう。たとえば、自然の供給源から単離でき、かつ研究室であるいはそれ以外で意図的に人為的に修飾されていない、生体（ウイルスなど）内に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は天然である。

「作動可能に連結された」という語は、本明細書で使用する場合、作動可能に連結された各成分の位置が、各成分が意図した形で機能できる関係にあることをいう。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、制御配列に適合した条件下でコード配列が発現するようにライゲートされている。

「制御配列」という語は、本明細書で使用する場合、制御配列がライゲートされるコード配列の発現およびプロセシングに必要なポリヌクレオチド配列をいう。そうした制御配列の性質は、制御配列にプロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含むのが通常である原核生物の宿主生物と、制御配列にプロモーターおよび転写終結配列を含むのが通常である真核生物の宿主生物とで異なる。「制御配列」という語は、少なくともその存在が発現およびプロセシングに必須である成分をすべて含むことを意図しており、たとえば、リーダー配列および融合パートナー配列など、存在すると都合がよい追加成分をさらに含んでも構わない。「ポリヌクレオチド」という語は、本明細書で言及する場合、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはどちらかのタイプのヌクレオチドの修飾体である、少なくとも長さ１０塩基のヌクレオチドの重合性ホウ素を意味する。この語は、一本鎖形態と二本鎖形態のＤＮＡを含む。

本明細書で言及するオリゴヌクレオチドという語は、天然ヌクレオチドと、天然オリゴヌクレオチド結合と非天然オリゴヌクレオチド結合により結合された修飾ヌクレオチドとを含む。オリゴヌクレオチドは、通常２００塩基以下の長さを持つポリヌクレオチドのサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは長さ１０〜６０塩基、最も好ましくは長さ１２塩基、１３塩基、１４塩基、１５塩基、１６塩基、１７塩基、１８塩基、１９塩基または２０〜４０塩基である。オリゴヌクレオチドは通常、たとえば、プローブに適した一本鎖であるが、たとえば、遺伝子変異体の構築に使用される二本鎖であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドあるいはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。

本明細書で言及する「天然のヌクレオチド」という語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書で言及する「修飾ヌクレオチド」という語は、修飾糖基または置換糖基および同種のものを持つヌクレオチドを含む。本明細書で言及する「オリゴヌクレオチド結合」という語は、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレルロアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホショラニラダート、ホスホロンミダートおよび同種のものなどのオリゴヌクレオチド結合を含む。たとえば、ＬａＰｌａｎｃｈｅｅｔａｌ．Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃｅｔａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎｅｔａｌ．Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎｅｔａｌ．ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎｅｔａｌ．ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，ＯｘｆｏｒｄＥｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃｅｔａｌ．米国特許第５，１５１，５１０号；ＵｈｌｍａｎｎａｎｄＰｅｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、必要に応じて検出用の標識を含んでもよい。

本明細書で言及する「選択的にハイブリダイズする」という語は、検出可能で特異的に結合することを意味する。本発明によるポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびそのフラグメントは、非特異的核酸に対する検出可能な結合のかなりの量を最小限に抑えるハイブリダイゼーションおよび洗浄条件下で核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。当該技術分野において公知であり、本明細書で考察するような選択的ハイブリダイゼーション条件を達成するためにはハイストリンジェントな条件を用いてもよい。通常、本発明のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびフラグメントと目的の核酸配列との核酸配列の相同性は、少なくとも８０％であり、より一般には少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％および１００％の高い相同性が好ましい。２つのアミノ酸配列は、配列間に部分的または完全な同一性が存在すれば相同的である。たとえば、８５％相同性とは、マッチングが最大になるように２つの配列を整列させるとき、アミノ酸の８５％が同一であることを意味する。マッチングを最大にするには、（マッチングさせた２つの配列のどちらかに）ギャップがあってもよく、ギャップ長は５またはそれ以下が好ましく、２またはそれ以下が一層好ましい。あるいは好ましくは、２つのタンパク質配列（または少なくとも長さ３０アミノ酸の配列から得られるポリペプチド配列）は、変異データマトリックスを用いてギャップペナルティーを６またはそれ以上としてＡＬＩＧＮプログラムによりアライメントスコアが５を超える（標準偏差単位）場合、相同的（本明細書で使用する用語として）である。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｉｎＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１−１１０（Ｖｏｌｕｍｅ５，ＮａｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））ａｎｄＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ２ｔｏｔｈｉｓｖｏｌｕｍｅ，ｐｐ．１−１０を参照されたい。２つの配列またはその一部は、ＡＬＩＧＮプログラムを用いて最適に整列させたとき、そのアミノ酸が５０％以上同一である場合、相同的に一層好ましい。「相当する」という語は、本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチド配列が、参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部と相同的である（すなわち、同一であるが、厳密には進化的に関連していない）こと、またはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であることを意味する。これに対し、「相補的である」という語は、本明細書で使用する場合、相補的な配列が参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部と相同的であることを意味する。例として、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に相当し、参照配列「ＧＴＡＴＡ」と相補的である。

以下の用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間の配列関係を説明するために用いられる：「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の割合」および「実質的な同一性」。「参照配列」は配列比較の根拠として使用される規定の配列であり、参照配列は、より大きな配列のサブセット、たとえば、全長ｃＤＮＡまたは配列表に示す遺伝子配列のセグメントであってもよいし、完全なｃＤＮＡまたは遺伝子配列を含んでもよい。通常、参照配列の長さは、少なくとも１８ヌクレオチドまたは６アミノ酸、頻繁には少なくとも２４ヌクレオチドまたは８アミノ酸、多くの場合少なくとも４８ヌクレオチドまたは１６アミノ酸である。２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列はそれぞれ、（１）２個の分子間で類似した配列（すなわち、完全なポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の一部）を含んでもよく、（２）２つのポリヌクレオチド間またはアミノ酸配列間で異なる配列をさらに含んでもよいため、２個（またはそれ以上）分子間の配列比較は、「比較ウィンドウ」において２個の分子の配列を比較し、配列が類似する局所領域を同定および比較して行うのが一般的である。「比較ウィンドウ」とは、本明細書で使用する場合、隣接する少なくとも１８のヌクレオチド位置または６アミノ酸の概念的なセグメントをいう。その際、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列と、近接する少なくとも１８のヌクレオチドまたは６アミノ酸の配列の参照配列とを比較してもよく、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチド配列の一部は、２つの配列の最適なアライメントの参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して２０％またはそれ以下の付加、欠失、置換および同種のもの（すなわち、ギャップ）を含んでも構わない。比較ウィンドウを整列させるための配列の最適なアライメントについては、ＳｍｉｔｈａｎｄＷａｔｅｒｍａｎＡｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズム、ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法、これらのアルゴリズムのコンピューターインプリメンテーション（ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅＲｅｌｅａｓｅ７．０（ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＧｅｎｅｗｏｒｋｓまたはＭａｃＶｅｃｔｏｒｓｏｆｔｗａｒｅｐａｃｋａｇｅｓのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）または検査によって行ってもよく、種々の方法により得られる最良のアライメント（すなわち、比較ウィンドウにおいて最も高率の相同性が得られるもの）を選択する。

「配列同一性」という語は、２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が比較ウィンドウにおいて（すなわち、ヌクレオチド単位または残基単位で）同一であることを意味する。「配列同一性の割合」という語は、比較ウィンドウにおいて最適に整列させた２つの配列を比較し、２つの配列に同一の核酸塩基（たとえば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵまたはＩ）または残基が存在する位置の数を決定してマッチした位置数を得、マッチした位置数を比較ウィンドウの全位置数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性の割合を得ることで計算される。「実質的な同一性」という語は、本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の特徴を示す。この場合、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸は、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）位置の比較ウィンドウ、頻繁には少なくとも２４〜４８ヌクレオチド（８〜１６アミノ酸）位置のウィンドウにおいて参照配列と比較して配列同一性が少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より一般的には少なくとも９９％である配列を含み、配列同一性の割合については、参照配列と、比較ウィンドウにおいて全体で参照配列の２０％またはそれ以下の欠失または付加を含んでもよい配列とを比較して計算する。参照配列は、より大きな配列のサブセットであってもよい。

本明細書で使用する場合、従来の２０種のアミノ酸およびその略語は、従来の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−ＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂａｎｄＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，ＳｉｎａｕｅｒＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，ＳｕｎｄｅｒｌａｎｄＭａｓｓ．（１９９１））を参照されたい。従来の２０種のアミノ酸の立体異性体（たとえば、Ｄ−アミノ酸）、α−，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸および他の非従来型アミノ酸などの非天然型アミノ酸も、本発明のポリペプチドに好適な成分であり得る。非従来型アミノ酸の例として、４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニンおよび他の類似のアミノ酸ならびにイミノ酸（たとえば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使用するポリペプチドの表記は、標準的な用法および慣例に従って左方向がアミノ末端方向であり、右方向がカルボキシ末端方向である。

同様に、他に記載がない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側の末端が５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向を５’方向と呼ぶ。新生ＲＮＡ転写物が付加される５’から３’の方向を転写方向と呼び、ＲＮＡと同じ配列を持つＤＮＡの鎖にあり、ＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’側にある配列領域を「上流配列」と呼び、ＲＮＡと同じ配列を持つＤＮＡの鎖にあり、ＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’側にある配列領域を「下流配列」という。

ポリペプチドに用いられる場合、「実質的な同一性」という語は、２つのペプチド配列をデフォルトのギャップ加重を用いてＧＡＰプログラムまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムにより最適に整列させたとき、配列同一性が少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、一層好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％であることを意味する。

同一でない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なることが好ましい。

保存的アミノ酸置換とは、類似の側鎖を持つ残基の互換性をいう。たとえば、脂肪族側鎖を持つアミノ酸群はグリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を持つアミノ酸群はセリンおよびトレオニンであり；アミド含有側鎖を持つアミノ酸群はアスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を持つアミノ酸群はフェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり；塩基性側鎖を持つアミノ酸群はリジン、アルギニンおよびヒスチジンであり；硫黄含有側鎖を持つアミノ酸群はシステインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニンバリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。

本明細書で考察する場合、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列におけるわずかな変化は、本発明により包含されることを意図している。ただし、アミノ酸配列が変化しても、少なくとも７５％、一層好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、最も好ましくは９９％が維持される。特に、保存的アミノ酸置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）を意図している。保存的置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）は、側鎖に関係があるアミノ酸のファミリー内で起こるものである。遺伝的にコードされたアミノ酸は通常、（１）酸性アミノ酸（アスパルタート、グルタマート）；（２）塩基性アミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジン）；（３）非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）および（４）非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）のファミリーに分類される。親水性アミノ酸には、アルギニン、アスパラギン、アスパルタート、グルタミン、グルタマート、ヒスチジン、リジン、セリンおよびトレオニンがある。疎水性アミノ酸には、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンがある。アミノ酸の他のファミリーとして、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリー（セリンおよびトレオニン）；（ｉｉ）アミド含有ファミリー（アスパラギンおよびグルタミン）；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリー（アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン）；および（ｉｖ）芳香族ファミリー（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）が挙げられる。たとえば、ロイシンからイソロイシンまたはバリンへの単一置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、アスパルタートからグルタマートへの単一置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、トレオニンからセリンへの単一置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、またはあるアミノ酸から構造的に関連したアミノ酸への同様の置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）は、特に置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）にフレームワーク部位内のアミノ酸が含まれない場合、得られる分子の結合または特性に大きな影響を与えないと予想しても差し支えない。アミノ酸が変化して機能性ペプチドになったどうかは、ポリペプチド誘導体の比活性をアッセイすることで容易に決定することができる。アッセイについては、本明細書に詳細に記載する。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたはアナログに関しては、当業者であれば容易に調製することができる。フラグメントまたはアナログの好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界周辺に存在する。構造ドメインおよび機能ドメインに関しては、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを公共または民間の配列データベースと比較して同定できる。好ましくは、コンピューター化された比較方法を用いて、構造および／または機能が知られている他のタンパク質に存在する配列モチーフまたは予想されるタンパク質コンホメーションドメインを同定する。既知の三次元構造に折りたたまれたタンパク質配列の同定方法は公知である。Ｂｏｗｉｅｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：１６４（１９９１）を参照されたい。以上のとおり、上記の例から、本発明による構造ドメインおよび機能ドメインを規定するために使用してもよい配列モチーフおよび構造コンホメーションを当業者が認識できることが明らかになる。

好ましいアミノ酸置換とは、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させる、（２）酸化に対する感受性を低下させる、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる（４）結合親和性を変化させる、（４）こうしたアナログのこれ以外の物理化学的特性または機能特性を付与または修飾するアミノ酸置換である。アナログは、天然ペプチド配列以外の配列の様々なムテインを含む場合がある。たとえば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは保存的アミノ酸置換）を、天然の配列に（好ましくは分子間接触を形成するドメイン（単数または複数）の外側のポリペプチドの一部に導入してもよい。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造特性を実質的に変化させるべきでない（たとえば、置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）アミノ酸は、親配列に存在するヘリックスを破壊したり、親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を壊したりする傾向を持つべきでない）。当該技術分野で知られているポリペプチドの二次および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏｍｐａｎｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８４））；ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｏＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎａｎｄＪ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；ａｎｄＴｈｏｒｎｔｏｎｅｔａｔ．Ｎａｔｕｒｅ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。

「ポリペプチドフラグメント」という語は、本明細書で使用する場合、アミノ末端および／またはカルボキシ末端に欠失があるが、残りのアミノ酸配列が、たとえば、全長ｃＤＮＡ配列から推定される天然の配列の対応する位置において同一であるポリペプチドをいう。フラグメントは一般に、長さが少なくとも５、６、８または１０アミノ酸、好ましくは少なくとも１４アミノ酸、一層好ましくは少なくとも２０アミノ酸、ほとんどの場合少なくとも５０アミノ酸、さらに一層好ましくは少なくとも７０アミノ酸である。「アナログ」という語は、本明細書で使用する場合、推定アミノ酸配列の一部と実質的な同一性を有する少なくとも２５アミノ酸のセグメントからなり、かつ以下の特性（１）好適な結合条件下でのＩＰ−１０に対する特異的結合、（２）適切なＩＰ−１０結合を遮断する能力の少なくとも１つを持つポリペプチドをいう。一般に、ポリペプチドアナログは、天然の配列に対して保存的アミノ酸置換（または付加または欠失）を含む。アナログは一般に、長さが少なくとも２０アミノ酸、好ましくは少なくとも５０アミノ酸またはそれ以上であり、多くの場合、天然の全長ポリペプチドと同じ長さであることもある。

ペプチドアナログは、医薬品業界において鋳型ペプチドと類似の特性を持つ非ペプチド薬として一般に用いられる。こうしたタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体」または「ペプチド模造物」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＲｅｓ．１５：２９（１９８６），ＶｅｂｅｒａｎｄＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒＴＩＮＳｐ．３９２（１９８５）；ａｎｄＥｖａｎｓｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）を参照されたい。こうした化合物は、コンピューター分子モデリングを用いて開発されることが多い。治療上有用なペプチドと構造が類似したペプチド模倣体を用いると、同等の治療または予防効果が得られる場合がある。通常、ペプチド模造物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性または薬理活性を持つポリペプチド）と構造的に類似しているが、１つまたは複数のペプチド結合が、当該技術分野において周知の方法で−−ＣＨ_２ＮＨ−−、−−ＣＨ_２Ｓ−、−−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ_２−−、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−−および−ＣＨ_２ＳＯ−−からなる群から選択される結合により任意に置換されている。コンセンサス配列の１つまたは複数のアミノ酸を同じタイプのＤ−アミノ酸に系統的に置換（たとえば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）して、より安定なペプチドを作製してもよい。さらに、たとえば、ペプチドを環化させる分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部のシステイン残基を加えるなど、当該技術分野において公知の方法により（ＲｉｚｏａｎｄＧｉｅｒａｓｃｈＡｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））、コンセンサス配列または実質的に同一なコンセンサス配列の変形を含む規制されたペプチドを作製してもよい。

本明細書では、「薬」という語を化学物質、化学物質の混合物、生体高分子または生物材料から作製される抽出物という意味で用いる。

本明細書で使用する場合、「標識」または「標識された」という語は、検出可能なマーカーを取り込ませることをいう。たとえば、標識は、放射能標識アミノ酸を取り込ませたり、目印を付けたアビジン（たとえば、光学的方法または熱量測定法により検出できる蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）により検出できるビオチニル部分をポリペプチドに結合させたりして行う。状況によっては、標識またはマーカーは治療効果がある場合もある。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する種々の方法が当該技術分野において公知であり、それを使用してもよい。ポリペプチドの標識の例として、放射性同位元素または放射性核種（たとえば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ）、蛍光標識（たとえば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（たとえば、西洋わさびペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（たとえば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）があるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、標識を種々の長さのスペーサーアームで結合して立体障害が起こる可能性を低下させる。「医薬品または医薬剤」という語は、本明細書で使用する場合、患者に適切に投与されたときに、所望の治療効果をもたらすことができる化学物質または組成物をいう。

本明細書のこれ以外の化学用語については、ＴｈｅＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））など、当該技術分野において従来の用法に従い用いる。

本明細書で使用する場合、「実質的に純粋な」は、対象となる種が、存在する最大の種であり（すなわち、モル基準で組成物中の他のどの種よりも豊富である）を意味し、好ましくは実質的に精製された画分は、存在するすべての高分子種のうち対象となる種が少なくとも約５０％（モル基準）を構成する組成物である。

通常、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在するすべての高分子種の約８０％を超えて構成し、一層好ましくは約８５％、９０％、９５％および９９％を超えて構成する。最も好ましくは、対象となる種を本質的に均一になる（従来の検出方法では組成物中に汚染種を検出できない）まで精製し、組成物は本質的に単一の高分子種からなる。

患者という語は、ヒトおよび動物対象を含む。対象という語は、ヒトおよび他の哺乳動物を含む。

ヒト抗体および抗体のヒト化
たとえば、下記の実施例に記載する手順を用いて、ｈｕＩＰ−１０抗体を作製する。たとえば、ｓｃＦｖクローンをＩｇＧ型に転換してＩｇＧｈｕＩＰ−１０抗体を作製する（たとえば、実施例９を参照されたい）。たとえば、ｈｕＩＰ−１０抗体をＩｇＧ１アイソタイプに再変換する。

他の代替方法では、たとえば、ヒト配列のみを含む抗体を用いたファージ−ディスプレイ法によりｈｕＩＰ−１０抗体を発現させる。こうしたアプローチは、たとえば、参照によって本明細書に援用する国際公開第９２／０１０４７号および米国特許第６，５２１，４０４号など、当該技術分野において公知である。このアプローチでは、ＩＰ−１０の天然もしくは組換え供給源またはそのフラグメントを用いて、軽鎖および重鎖のランダムな対を持つファージのコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする。他のアプローチでは、プロセスの少なくとも１つのステップに、トランスジェニック非ヒト動物にヒトＩＰ−１０タンパク質を免疫することを含むプロセスにより、ｈｕＩＰ−１０抗体を作製することができる。このアプローチでは、この異種非ヒト動物の内因性の重鎖および／またはκ軽鎖遺伝子座の一部が機能破壊されており、抗原に反応して免疫グロブリンをコードする遺伝子の作製に必要な再編成ができない。また、この動物には少なくとも１つのヒト重鎖遺伝子座および少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座が安定してトランスフェクトされている。したがって、投与された抗原に反応して、ヒト遺伝子座が再編成され抗原に対して免疫特異的ヒト可変領域をコードする遺伝子が得られる。このため、免疫の時点でゼノマウスでは完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞が産生される。

異種非ヒト動物を作製するための様々な技法が当該技術分野において公知である。たとえば、参照によってその全体を本明細書に援用する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号を参照されたい。この一般的な戦略は、１９９４年に公表された最初のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）系統の作製に関連して明らかになった。参照によってその全体を本明細書に援用するＧｒｅｅｎｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ７：１３−２１（１９９４）を参照されたい。さらに、米国特許第６，１６２，９６３号、同第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５９８号、同第６，０７５，１８１号および同第５，９３９，５９８号と、日本特許第３０６８１８０Ｂ２号、同第３０６８５０６Ｂ２号および同第３０６８５０７Ｂ２号と、欧州特許第０４６３１５１Ｂ１号と、国際公開第９４／０２６０２号、国際公開第９６／３４０９６号、国際公開第９８／２４８９３号、国際公開第００／７６３１０号および関連するパテントファミリーを参照されたい。

代替アプローチでは、「ミニローカス」アプローチが用いられている。このアプローチの場合、Ｉｇ遺伝子座の断片（個々の遺伝子）を包含することで外因性Ｉｇ遺伝子座を模倣させる。したがって、１つまたは複数のＶＨ遺伝子、１つまたは複数のＤ_Ｈ遺伝子、１つまたは複数のＪ_Ｈ遺伝子、μ定常領域および第２の定常領域（好ましくはγ定常領域）が、動物に挿入できるコンストラクトとして形成される。たとえば、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５４５，８０７号；同第５，５９１，６６９号；同第５，６１２，２０５号；同第５，６２５，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６４３，７６３号；同第５，６６１，０１６号；同第５，７２１，３６７号；同第５，７７０，４２９号；同第５，７８９，２１５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７７；３９７号；同第５，８７４，２９９号；同第６，０２３，０１０号；および同第６，２５５，４５８号；および欧州特許第０５４６０７３Ｂ１号；および国際公開第９２／０３９１８号、国際公開第９２／２２６４５号、国際公開第９２／２２６４７号、国際公開第９２／２２６７０号、国際公開第９３／１２２２７号、国際公開第９４／００５６９号、国際公開第９４／２５５８５号、国際公開第９６／１４４３６号、国際公開第９７／１３８５２号および国際公開第９８／２４８８４号および関連するパテントファミリーを参照されたい。

ミクロセル融合により、大きな染色体断片または全染色体を導入してあるマウスからのヒト抗体の作製も紹介されている。欧州特許出願第７７３２８８号および同第８４３９６１号を参照されたい。

ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ：ｈｕｍａｎａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅａｎｔｉｂｏｄｙ）反応により、業界はヒト化キメラ抗体または別のヒト化抗体の調製に乗り出している。キメラ抗体は、ヒト定常領域および免疫可変領域を持つものであり、特に抗体の長期的利用または反復投与での利用の場合にある種のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ：ｈｕｍａｎａｎｔｉ−ｃｈｉｍｅｒｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ）反応が観察されることが予想される。したがって、ＨＡＭＡまたはＨＡＣＡ反応の懸念および／または作用を抑えるため、ＩＰ−１０に対する完全ヒト抗体を提供することが望ましいと考えられる。

免疫原性を低下させた抗体の作製は、適切なライブラリーを用いてヒト化技法およびディスプレイ技法によっても実現できる。当然のことながら、当該技術分野において周知の技法を用いてマウスの抗体または他の種由来の抗体をヒト化または霊長類化できる。たとえば、ＷｉｎｔｅｒａｎｄＨａｒｒｉｓＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ１４：４３４６（１９９３）ａｎｄＷｒｉｇｈｔｅｔａｌ．Ｃｒｉｔ，ＲｅｖｉｅｗｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２）参照されたい。目的の抗体を組換えＤＮＡ技法で操作して、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメインおよび／またはフレームワークドメインを対応するヒト配列と置換してもよい（国際公開第９２１０２１９０号および米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７９２号、同第５，７１４，３５０号および同第５，７７７，０８５号を参照されたい）。さらに、キメラ免疫グロブリン遺伝子の構築のためＩｇｃＤＮＡを使用することも当該技術分野において公知である（Ｌｉｕｅｔａｌ．Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８４：３４３９（１９８７）ａｎｄＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１（１９８７））。ハイブリドーマまたは抗体を産生する他の細胞からｍＲＮＡを単離し、それを用いてｃＤＮＡを作製する。特異的プライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応により目的のｃＤＮＡを増幅してもよい（米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号）。あるいは、ライブラリーを作成し、スクリーニングし、目的の配列を単離する。次いで、抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列をヒト定常領域配列に融合させる。ヒト定常領域遺伝子の配列については、Ｋａｂａｔ
ｅｔａｌ．（１９９１）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎ．Ｉ．Ｈ．ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｎｏ．９１−３２４２で確認できる。ヒトＣ領域遺伝子については、既知のクローンから容易に入手することができる。補体結合または抗体依存性細胞傷害の活性など、所望のエフェクター機能（ｅｆｆｅｃｔｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎ）を基にアイソタイプの選択を行う。好ましいアイソタイプはＩｇＧ１、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域に関してはκ鎖またはλ鎖のどちらを用いてもよい。次いで、従来の方法によりヒト化キメラ抗体を発現させる。

インタクトなタンパク質の切断、たとえば、プロテアーゼ切断または化学的切断によりＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦａｂなどの抗体フラグメントを調製してもよい。あるいは、切断された遺伝子を設計する。たとえば、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントの一部をコードするキメラ遺伝子であれば、Ｈ鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域に続いて翻訳終止コドンをコードするＤＮＡ配列を含んでおり、切断された分子が得られると考えられる。

Ｈ鎖およびＬ鎖のＪ領域のコンセンサス配列を用いて、有用な制限部位をＪ領域に導入するためのプライマー（ｐｒｉｅｒ）として使用するオリゴヌクレオチドを設計してから、Ｖ領域セグメントとヒトＣ領域セグメントとを結合してもよい。部位特異的変異誘発によりＣ領域のｃＤＮＡを修飾して、ヒト配列に類似の位置に制限部位を配置することができる。

発現ベクターには、プラスミド、レトロウイルス、ＹＡＣ（ｙｅａｓｔａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）、ＥＢＶ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ）由来のエピソームおよび同種のものがある。簡便なベクターとして、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードし、任意のＶＨまたはＶＬ−３１配列を容易に挿入して発現させることができるように制限部位が適切に設計されたベクターがある。そうしたベクターでは、スプライシングが、ほとんどの場合、挿入されたＪ領域のスプライス供与部位とヒトＣ領域に先行するスプライス受容部位との間で起こり、さらにヒトＣＨエクソン内に存在するスプライス領域でも起こる。ポリアデニル化および転写終結は、コード領域の下流のネイティブな染色体部位で起こる。得られたキメラ抗体については、たとえば、ＳＶ−４０初期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａｅｔａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．３：２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ）（Ｇｏｒｍａｎｅｔａｌ．Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．７９：６７７７（１９８２））およびモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ
ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ４１：８８５（１９８５））のようなレトロウイルスＬＴＲなど、任意の強力なプロモーターに結合してもよい。また、理解されているように、ネイティブなＩｇプロモーターおよび同種のものを用いてもよい。

さらに、当該技術分野において周知の技術を用いて、以下に限定されるものではないが、ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイおよび他の技法などのディスプレイ型技法により、ヒト抗体または他の種由来の抗体を作製することができる。得られた分子に関しては、親和性成熟など、さらに成熟させることができる。そうした技法は、当該技術分野において周知である。ＷｒｉｇｈｔａｎｄＨａｒｒｉｓ，ｓｕｐｒａ．，ＨａｎｅｓａｎｄＰｌｕｃｔｈａｕＰＥＡＳＵＳＡ９４：４９３７−４９４２（１９９７）（リボソームディスプレイ），ＰａｒｍｌｅｙａｎｄＳｍｉｔｈＧｅｎｅ７３：３０５−３１８（１９８８）（ファージディスプレイ），ＳｃｏｔｔＴＩＢ５１７：２４１−２４５（１９９２），Ｃｗｉｒｌａｅｔａｌ．ＰＮＡＳＵＳＡ８７：６３７８−６３８２（１９９０），Ｒｕｓｓｅｌｅｔａｌ．Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ２１：１０８１−１０８５（１９９３），Ｈｏｇａｎｂｏｏｍｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ１３０：４３−６８（１９９２），ＣｈｉｓｗｅｌｌａｎｄＭｃＣａｆｆｅｒｔｙＴＩＢＴＥＣＨ；１０：８０−８Ａ（１９９２）および米国特許第５，７３３，７４３号を参照されたい。ディスプレイ技法を利用してヒトでない抗体を作製しても、そうした抗体を上記のようにヒト化することができる。

こうした技法を用いることで、ＩＰ−１０を発現する細胞、ＩＰ−１０自体、各形態のＩＰ−１０、そのエピトープまたはペプチドおよびその発現ライブラリーについて抗体を作製することができ（たとえば、米国特許第５，７０３，０５７号を参照されたい）、その後、上記の活性について上記のようにスクリーニングすることができる。

他の治療剤の設計および生成
本発明によれば、ＩＰ−１０に対して本明細書で作製され特徴付けが行われる抗体の活性に基づき、抗体部分の範囲を超えた他の治療方式が設計しやすくなる。こうした方式として、以下に限定されるものではないが、先進的な抗体治療剤（二重特異性抗体、免疫毒素および放射能標識治療剤など）、ペプチド治療剤の生成、遺伝子療法剤（特にイントラボディ、アンチセンス治療剤）および小分子がある。

たとえば、二重特異性抗体の場合、（ｉ）一緒にコンジュゲートする２つの抗体（１つはＩＰ−１０に対して特異性を持つ抗体、もう１つは第２の分子に対して特異性を持つ抗体）、（ｉｉ）ＩＰ−１０に対して特異的な第１の鎖および第２の分子に対して特異的な第２の鎖を持つ単一抗体、または（ｉｉｉ）ＩＰ−１０および他の分子に対して特異性を持つ一本鎖抗体を含む二重特異性抗体を作製することができる。こうした二重特異性抗体については、よく知られた技法を用いて作製する。たとえば、（ｉ）および（ｉｉ）に関しては、Ｆａｎｇｅｒｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ４：７２−８１（１９９４）ａｎｄＷｒｉｇｈｔａｎｄＨａｒｒｉｓ，ｓｕｐｒａを、（ｉｉｉ）に関しては、たとえば、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（Ｓｕｐｐｌ．）７：５１−５２（１９９２）を参照されたい。

免疫毒素に関しては、当該技術分野において周知の技法を用いて抗体を免疫毒素として働くように修飾することができる。たとえば、ＶｉｔｅｔｔａＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ１４：２５２（１９９３）を参照されたい。さらに、米国特許第５，１９４，５９４号も参照されたい。放射能標識抗体の調製に関しては、そうした修飾抗体を、当該技術分野において周知の技法を用いて容易にさらに調製することができる。たとえば、Ｊｕｎｇｈａｎｓｅｔａｌ．ｉｎＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙａｎｄＢｉｏｔｈｅｒａｐｙ６５５−６８６（２ｄｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒａｎｄ
Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＲａｖｅｎ（１９９６））を参照されたい。さらに、米国特許第４，６８１，５８１号、同第４，７３５，２１０号、同第５，１０１，８２７号、同第５，１０２，９９０号（米国再発行特許第３５，５００号）、同第５、６４８，４７１号および同第５，６９７，９０２号も参照されたい。免疫毒素および放射能標識分子はそれぞれ、ＩＰ−１０を発現する細胞および特に本発明の抗体が効果を発揮するそうした細胞を死滅させる可能性があると考えられる。

治療用ペプチドの生成に関しては、ＩＰ−１０およびその抗体（本発明の抗体など）に関する構造情報またはペプチドライブラリーのスクリーニングを利用することで、ＩＰ−１０を標的とする治療用ペプチドを作製することができる。ペプチド治療剤の設計およびスクリーニングについては、Ｈｏｕｇｈｔｅｎｅｔａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１３：４１２−４２１（１９９２），ＨｏｕｇｈｔｅｎＰＮＡＳＵＳＡ８２：５１３１−５１３５（１９８５），Ｐｉｎａｌｌａｅｔａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１３：９０１−９０５（１９９２），ＢｌａｋｅａｎｄＬｉｔｚｉ−ＤａｖｉｓＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．３：５１０−５１３（１９９２）に関連して考察されている。また、免疫毒素および放射能標識分子も、抗体に関連して上記で論じたペプチド部分と一緒に同様の要領で調製することができる。ＩＰ−１０分子（またはスプライスバリアントまたは別の形態などの形態）が疾患の過程で機能的に活性であると想定すると、従来の技法によりその遺伝子治療剤およびアンチセンス治療剤を設計することも可能であろう。こうした方式を用いてＩＰ−１０の機能を調節することができる。本発明の抗体をそうした方式と併用すれば、関連する機能アッセイの設計および使用が容易になる。アンチセンス治療剤の設計および戦略については、国際公開第９４／２９４４４号に詳細に考察されている。遺伝子治療の設計および戦略はよく知られているが、特に、イントラボディを含む遺伝子治療の技法を使用すれば、とりわけ良好な結果がもたらせるであろう。たとえば、Ｃｈｅｎｅｔａｌ．ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ５：５９５−６０１（１９９４）ａｎｄＭａｒａｓｃｏＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ４：１１−１５（１９９７）を参照されたい。遺伝子治療剤の一般的な設計およびそれに関する検討も、国際公開第９７／３８１３７号に考察されている。

ＩＰ−１０分子の構造およびＩＰ−１０分子と本発明による他の分子（本発明の抗体など）との相互作用などから収集された知識を用いて、新たな治療方式を合理的に設計することができる。この場合、Ｘ線結晶解析、コンピューター支援（または利用）分子モデリング（ＣＡＭＭ：ｃｏｍｐｕｔｅｒ− ａｉｄｅｄ（ｏｒａｓｓｉｓｔｅｄ）ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｅｌｉｎｇ）、定量的または定性的構造活性相関（ＱＳＡＲ：ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｏｒｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ− ａｃｔｉｖｉｔｙｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ）および類似の技法などの合理的な薬剤設計技法を用いれば、創薬活動に集中することができる。合理的な設計が行われれば、ＩＰ−１０の活性の修飾または調節に使用できる分子またはその特異的形態と相互作用できるタンパク質または合成構造体を予測できる。こうした構造体は、化学的に合成したり、生物系に発現させたりすることができる。このアプローチは、Ｃａｐｓｅｙｅｔａｌ．ＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙＥｎｇｉｎｅｅｒｅｄＨｕｍａｎＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＤｒｕｇｓ（ＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８））に概説されている。さらに、ハイスループットスクリーニング作業などのスクリーニングプログラムでは、コンビナトリアルライブラリーを設計し、合成し、使用することもできる。

治療投与および製剤
当然のことながら、本発明による治療物質は、好適なキャリア、賦形剤ならびに移行性、送達性、忍容性および同種のものを向上させるため製剤に加えられる他の薬と共に投与される。すべての薬剤師に知られている処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（１５ｔｈｅｄ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５））、特にその中のＣｈａｐｔｅｒ
８７ｂｙＢｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒで、数多くの適切な製剤を確認することができる。こうした製剤として、たとえば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）を含む小胞（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型乳剤、エマルジョンカルボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲルおよびカルボワックスを含む半固体混合物が挙げられる。本発明による処置および療法には、前述の混合物のいずれも適当であり得る。ただし、製剤により製剤中の活性成分が不活化されず、かつ製剤が生理的に適合し、投与経路に対して問題がないことが条件となる。さらに、ＢａｌｄｒｉｃｋＰ．「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｅｘｃｉｐｉｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅｎｅｅｄｆｏｒｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅ．」Ｒｅｇｕｌ．ＴｏｘｉｃｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００），ＷａｎｇＷ．「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｓｏｌｉｄｐｒｏｔｅｉｎｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００），ＣｈａｒｍａｎＷＮ「Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃｄｒｕｇｓ，ａｎｄｏｒａｌｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅｅｍｅｒｇｉｎｇｃｏｎｃｅｐｔｓ．」Ｊ
ＰｈａｒｍＳｃｉ．８９（８）：９６７−７８（２０００）、Ｐｏｗｅｌｌｅｔａｌ．「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓｆｏｒｐａｒｅｎｔｅｒａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡＪＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８）およびそこでの引用（薬剤師によく知られている製剤、賦形剤およびキャリアに関する追加情報）を参照されたい。

本発明のｈｕＩＰ−１０抗体および本発明のｈｕＩＰ−１０抗体を含む治療用製剤を用いて、たとえば、自己免疫疾患または炎症性障害などの免疫関連障害に関連する症状を処置したり、緩和したりする。

自己免疫疾患には、たとえば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ：ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ、自己免疫性成分によるウイルス性疾患）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ：ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｉｎｎｅｒｅａｒｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ：ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ：ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃｐｕｒｐｕｒａ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルー−疱疹状皮膚炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓｈｅｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ）；慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ：ｃｈｒｏｎｉｃｆａｔｉｇｕｅｉｍｍｕｎｅｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＰＤ：ｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、ドゴー病、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ：ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａｐｕｒｐｕｒａ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スチル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血（ｐｅｒｎａｃｉｏｕｓａｎｅｍｉａ）、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（全身性硬化症（ＳＳ：ｓｙｓｔｅｍｉｃｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）とも呼ばれる進行性全身性硬化症（ＰＳＳ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｓｙｓｔｅｍｉｃｓｃｌｅｒｏｓｉｓ））、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性大動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、白斑およびウェゲナー肉芽腫症がある。

炎症性障害としては、たとえば、慢性および急性の炎症性障害が挙げられる。炎症性障害の例として、アルツハイマー病、喘息、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム性動脈硬化症、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、移植片対宿主病、溶血性貧血、変形性関節症、敗血症、脳卒中、組織および臓器の移植、血管炎、糖尿病性網膜症および人工呼吸器による肺損傷がある。

ｈｕＩＰ−１０抗体は、たとえば、ヒト被験者などの対象の免疫応答を調節する。一実施形態では、免疫関連障害の処置に使用するｈｕＩＰ−１０抗体組成物を様々な抗サイトカイン薬または抗ケモカイン薬のいずれかと一緒に投与する。好適な抗サイトカイン試薬または抗ケモカイン試薬は、たとえば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１などのサイトカインおよび／またはＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＩＰ−１０、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦおよびフラクタルカインなどのケモカインを認識する。

一実施形態では、免疫関連障害の処置に使用するｈｕＩＰ−１０抗体およびｈｕＩＰ−１０抗体組成物を、１種または複数種の追加薬または追加薬の組み合わせと共に投与する。たとえば、ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬を単一の治療用組成物として製剤化し、ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬を同時に投与する。あるいは、ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬は相互に分離しており、たとえば、各々を別々の治療用組成物として製剤化し、ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬を同時に投与したり、処置レジメンの間の異なる時間にｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬を投与したりする。たとえば、追加薬の投与前にｈｕＩＰ−１０抗体を投与したり、追加薬の投与後にｈｕＩＰ−１０抗体を投与したり、ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬を交互に投与したりする。本明細書に記載のように、ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬については単回投与で投与したり、反復投与で投与したりする。

たとえば、多発性硬化症の処置では、ｈｕＩＰ−１０抗体またはその治療用製剤を、インターフェロンβ１ａ、インターフェロンβ１ｂ、グラチラマーアセタート、ナタリズマブ、コパクソンおよびこれらの組み合わせなどの１種または複数種の追加薬と共に投与する。ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬については、同時に投与したり、処置レジメンの間の異なる時間に投与したりする。

クローン病の処置では、ｈｕＩＰ−１０抗体またはその治療用製剤を、抗生物質、アミノサリチラート、インフリキシマブ、アダリムマブおよびこれらの組み合わせなど１種または複数種の追加薬と共に投与する。好適な抗生物質には、たとえば、メトロニダゾールおよび／またはシプロフロキサシンがある。好適なアミノサリチラートには、たとえば、メサラミンおよび／またはスルファサラジンがある。ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬については、同時に投与したり、処置レジメンの間の異なる時間に投与したりする。

潰瘍性大腸炎の処置では、ｈｕＩＰ−１０抗体またはその治療用製剤を、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、インフリキシマブおよびこれらの組み合わせなどの１種または複数種の追加薬と共に投与する。ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬については、同時に投与したり、処置レジメンの間の異なる時間に投与したりする。

乾癬の処置では、ｈｕＩＰ−１０抗体またはその治療用製剤を、アレファセプト、エファリズマブ、アダリムマブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、メトトレキサートおよびこれらの組み合わせなどの１種または複数種の追加薬と共に投与する。ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬については、同時に投与したり、処置レジメンの間の異なる時間に投与したりする。

アテローム性動脈硬化症の処置では、ｈｕＩＰ−１０抗体またはその治療用製剤を、ワルファリン、コレステロール低下薬およびこれらの組み合わせなどの１種または複数種の追加薬と共に投与する。好適なコレステロール低下薬には、たとえば、スタチン類およびフィブラート類がある。ｈｕＩＰ−１０抗体および追加薬については、同時に投与したり、処置レジメンの間の異なる時間に投与したりする。

免疫関連障害に関連する症状を処置または緩和する方法では、ｈｕＩＰ−１０抗体およびその治療用製剤を使用する。たとえば、本発明の組成物を用いて本明細書に記載の自己免疫疾患および炎症性障害のいずれかの症状を処置または緩和する。免疫関連障害に関連する症状として、たとえば、炎症、発熱、食欲不振、体重減少、腹部症状（たとえば、腹痛、下痢または便秘など）、関節の疼痛または痛み（関節痛）、疲労、発疹、貧血、寒冷に対する極端な感受性（レイノー現象）、筋力低下、筋肉疲労、皮膚または組織の張りの変化、息切れまたは他の異常な呼吸パターン、胸痛または胸部筋肉の収縮、異常な心拍数（たとえば、増加または低下）、光感受性、霧視または他の視覚異常および臓器機能の低下が挙げられる。

ｈｕＩＰ−１０抗体およびその治療用製剤については、自己免疫疾患または炎症性障害などの免疫関連障害に罹患している対象に投与する。当該技術分野において公知の方法により、自己免疫疾患または炎症性障害に罹患している対象を同定する。免疫状態を評価するため様々な臨床試験および／または実験室試験（理学的検査、放射線学的検査、血液分析、尿分析および便分析など）のいずれかを用いて、たとえば、クローン病、ループスまたは乾癬などの自己免疫疾患に罹患している対象を同定する。たとえば、細胞核に対する自己抗体が血液中に存在するかどうかを決定するため抗核抗体検査（ＡＮＡ：ａｎｔｉ−ｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ）を用いて、ループスなどに罹患している患者を同定する。たとえば、小腸および大腸をそれぞれ評価するため上部消化管（ＧＩ：ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）撮影および／または結腸鏡検査を用いて、クローン病に罹患している患者を同定する。たとえば、患部皮膚の斑から採取した組織の顕微鏡検査により乾癬に罹患している患者を同定し、たとえば、血液検査および／またはＸ線もしく他の画像評価により関節リウマチに罹患している患者を同定する。たとえば、血液検査、心電図（ＥＣＧ：ｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍ）、ストレス試験、冠動脈造影、超音波およびコンピューター断層撮影（ＣＴ：ｃｏｍｐｕｔｅｄｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）によりアテローム性動脈硬化症に罹患している患者を同定する。

様々な実験室での結果または臨床の成果のいずれかが得られれば、自己免疫疾患または炎症性障害などの免疫関連障害に罹患している患者へのｈｕＩＰ−１０抗体の投与は成功と考えられる。たとえば、自己免疫疾患または炎症性障害などの免疫関連障害に罹患している患者へのｈｕＩＰ−１０抗体の投与は成功と考えられ、障害に関連する１つまたは複数の症状が緩和されたり、軽減されたり、阻害されたり、さらなる状態、すなわち、より悪い状態に進行しない。たとえば、自己免疫障害のような障害が寛解に入るか、さらなる状態、すなわち、より悪い状態に進行しないならば、自己免疫疾患または炎症性障害などの免疫関連障害に罹患している患者へのｈｕＩＰ−１０抗体の投与は成功と考えられる。

診断用製剤および予防用製剤
診断用製剤および予防用製剤中で本発明の完全ヒト抗ＩＰ−１０ＭＡｂを用いる。一実施形態では、本発明のｈｕＩＰ−１０ＭＡｂを、前述の自己免疫疾患の１つを発症するリスクがある患者に投与する。遺伝子型マーカー、血清学的マーカーまたは生化学的マーカーを用いて、前述の自己免疫疾患のうちの１つまたは複数の患者の素因を決定することができる。

本発明の別の実施形態では、前述の自己免疫疾患の１つまたは複数と診断されたヒト個体にｈｕＩＰ−１０抗体を投与する。診断時にｈｕＩＰ−１０抗体を投与して自己免疫の作用を軽減したり、消失させたりする。

さらに、本発明の抗体は患者サンプル中のＩＰ−１０の検出にも有用であり、そのため診断薬としても有用である。たとえば、ＥＬＩＳＡのようなインビトロアッセイにおいて本発明のｈｕＩＰ−１０抗体を用い患者サンプル中のＩＰ−１０レベルを検出する。

一実施形態では、本発明のｈｕＩＰ−１０抗体を固体支持体（たとえば、マイクロタイタープレートのウェル（単数または複数））上に固定化する。固定化した抗体は、被検サンプル中に存在するかもしれない任意のＩＰ−１０に対して捕捉抗体としての役割を果たす。固定化した抗体と患者サンプルとを接触させる前に固体支持体をリンスし、ミンクタンパク質またはアルブミンなどの遮断剤で処理し、アナライトの非特異的吸着を防止する。

その後、抗原を含む疑いがある被検サンプル、または標準量の抗原を含む溶液でウェルを処理する。こうしたサンプルは、たとえば、循環抗原が病変の症状を示すと見なせるレベルにあると疑われる対象の血清サンプルである。被検サンプルまたは標準物質を洗い流した後、検出可能に標識した第２の抗体で固体支持体を処理する。標識した第２の抗体は、検出抗体として機能する。検出可能な標識のレベルを測定し、標準サンプルから作成した標準曲線と比較して被検サンプル中のＩＰ−１０抗原の濃度を決定する。

当然のことながら、インビトロ診断アッセイにおいて本発明のｈｕＩＰ−１０抗体を用いて得られた結果を踏まえて、ＩＰ−１０抗原の発現レベルに基づき対象の疾患（たとえば、自己免疫障害または炎症性障害）の病期を決定できることが理解されよう。ある疾患では、疾患進行の種々の段階で、および／または疾患の治療処置の種々の時点でその疾患と診断された対象から血液サンプルを採取する。進行または治療の各段階に関して統計学的に有意な結果が得られるサンプルの母集団を用いて、各段階の特徴と見なしてもよい一定範囲の抗原の濃度を指定する。

本明細書に引用する刊行物および特許文書についてはすべて、参照によって援用するためにそうした１つ１つの刊行物または文書を具体的に個々に示しているかのように参照によって本明細書に援用する。刊行物および特許文書の引用は、そのいずれかが適当な従来技術であること認めることを意図するものでも、刊行物または文書の内容または日付を承認するものでもない。さて、書面による説明により本発明を記載してきたが、当業者であれば、様々な実施形態で本発明を実施することができ、かつ、以上の説明と以下の実施例は説明のためのものであり、後に記載する特許請求の範囲を限定するものではないことを認識するであろう。

以下の実施例は、行った実験および得られた結果を含め、説明のみを目的としたものであり、本発明を限定するものと解釈してはならない。

（実施例１）
ヒトＩＰ−１０のクローニング、発現および精製
クローニング
成熟タンパク質ヒトＩＰ−１０（ｈＩＰ１０）（ＮＭ００１５６５）をコードする遺伝子をＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）増幅により発現プラスミドｐＥＴ４３（ＮｏｖａｇｅｎＭａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）にクローニングした。ＦａｃｔｏｒＸプロテアーゼ切断部位の配列をＮｕｓＡのＣ末端に導入した。ＡｖｉＴａｇ（Ａｖｉｄｉｔｙ，ＤｅｎｖｅｒＣＯ）ビオチン化部位の配列をケモカインコード配列のＣ末端に導入した。このｐＥＴ系プラスミドを用いて、ビオチンリガーゼ遺伝子をコードするｐＡＣＹＣ１８４−ＢｉｒＡプラスミドを菌株ＯｒｉｇａｍｉＢに同時形質転換した。

ＮｕｓＡ−ｈＩＰ−１０融合タンパク質の発現
発現コンストラクトを持つ細菌の一晩培養液を、５０μｇ／ｍＬのアンピシリン、１０μｇ／ｍＬのカナマイシン（Ｋａｎａｍｉｃｉｎ）、５μｇ／ｍＬのテトラサイクリン、２０μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールおよび５０μＭのビオチンを含むＴｅｒｒｉｆｉｃブロス（ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ）で１：３０に希釈した。この培養液を振盪させながらＯＤ（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ）６００＝０．７に達するまで３７℃でインキュベートした。次いでＩＰＴＧ（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ）を最終濃度１ｍＭまで加え、３７℃で１５分間および２５℃で一晩インキュベートした。

融合タンパク質の精製および切断
細菌ペレットをベンゾナーゼヌクレアーゼおよびプロテアーゼ阻害剤ＣｏｍｐｌｅｔｅＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ（Ｒｏｃｈｅ）を含むＢｕｇｂｕｓｔｅｒ（Ｎｏｖａｇｅｎ）に再懸濁し、４℃で１時間インキュベートした。可溶性および不可溶性画分を１０，０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離して分離した。可溶性および不可溶性タンパク質画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ−ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）（Ｎｏｖｅｘｇｅｌｓ，ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ）で解析した。可溶性画分を緩衝液Ａ（トリス−ＨＣｌ１００ｍＭｐＨ８．０、ＮａＣｌ６００ｍＭ、ＣａＣｌ_２１０ｍＭ、イミダゾール４０ｍＭ）で１／２に希釈し、予めＢｕｆｆｆｅｒＢ（トリス−ＨＣｌ５０ｍＭｐＨ８．０、ＮａＣｌ３００ｍＭ、ＣａＣｌ_２５ｍＭ、イミダゾール２０ｍＭ）で平衡処理しておいた５０％（ｖ／ｖ）Ｎｉ−ＮＴＡアガロース（Ｑｉａｇｅｎ）と混合した。緩やかに振盪させながらこの混合物を室温で３０分間インキュベートした。遠心分離後に得られたビーズをＰｏｌｙ−Ｐｒｅｐクロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏｒａｄ）に充填し、５容量の緩衝液Ｂで３回洗浄し、緩衝液Ｃ（トリス−ＨＣｌ５０ｍＭｐＨ８．０、ＮａＣｌ２００ｍＭ、ＣａＣｌ_２５ｍＭ、イミダゾール４００ｍＭ）で溶出した。タンパク質を含む溶出画分をプールし、ＰＤ−１０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて脱塩した。切断緩衝液（トリス−ＨＣｌ５０ｍＭｐＨ８．０、ＮａＣｌ２００ｍＭ、ＣａＣｌ_２５ｍＭ）中で１ｍｇのタンパク質を２５ＵのＦａｃｔｏｒＸと３０℃で最大２４時間インキュベートして、ＮｕｓＡ−ケモカイン融合タンパク質をＦａｃｔｏｒＸ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）により切断した。融合タンパク質の一部では、最適切断のパラメーターがやや異なったが、インキュベーションの時間（４〜２４時間）および／または温度（２５〜３７℃）を変えたことで容易に決定できた。切断したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより解析し、活性を走化性により検査した。

（実施例２）
ｈＩＰ−１０の受容体ｈＣＸＣＲ３のクローニング、発現
ケモカイン受容体を安定発現するマウスのプレＢリンパ腫Ｌ１．２細胞株をトランスフェクションにより作製した。リンパ節ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）を鋳型としてｈＣＸＣＲ３をコードするｃＤＮＡをＰＣＲによりクローニングした。このＰＣＲ産物をＸｂａＩおよびＮｏｔＩで消化し、哺乳動物の発現ベクターｐＣＤＮＡ３．１−Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にライゲートした受容体のコード領域の配列をシーケンシングにより確認した。Ｌ１．２細胞（５×１０^６）に２０μｇの直線化したＣＸＣＲ３発現プラスミドをエレクトロポレーションによりトランスフェクトした。１ｍｇ／ｍＬのジェネテシンの存在下で限界希釈法により受容体発現Ｌ１．２細胞の安定なクローンを樹立した。

受容体の発現レベルを、ｈＣＸＣＲ３に対するモノクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いてフローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ，ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）により決定した。

（実施例３）
ネイティブなヒトＩＰ−１０の作製。

ＴＨＰ１細胞を、濃度１×１０^６／ｍｌで５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトインターフェロンγ（ＩＦＮγ）を含む１０ｍｌの培地で培養した。３７℃で一晩インキュベートした後、細胞を遠心し、上清を集めて、ＥＬＩＳＡアッセイによりＩＰ−１０の濃度を算出した。

（実施例４）
細胞表面にヒトＩＰ−１０を発現する細胞
チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ：ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙ）細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ：ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手可能）に、ネオマイシン耐性遺伝子を含むｐＣＤＮＡ３．１プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣａｒｌｓｂａｄＣＡ）にサブクローニングしたｃ−ｍｙｃタグ付きヒトＩＰ−１０ｃＤＮＡを安定にトランスフェクトした。この抗生物質を用いてトランスフェクタントを選択し、抗６ｘＨｉｓ（Ｓｉｇｍａ）抗体を用いてフローサイトメトリーにより連続的な細胞選別を行った。抗ＩＰ−１０ｍＡｂ２６６（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，ＭｉｎｎｅａｐｏｌｉｓＭＮ）を用いてフローサイトメトリーによりヒトＩＰ−１０の表面発現を確認した。

（実施例５）
ヒトｓｃＦｖライブラリーのスクリーニング
ヒトｓｃＦｖライブラリーの構築および取り扱いに関する一般的な手順は、参照によってその全体を本明細書に援用するＶａｕｇｈａｎｅｔａｌ．，（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９６，１４：３０９−３１４）に記載されている。以下の手順に従ってヒトｓｃＦｖのライブラリーをｈＩＰ−１０に対してスクリーニングした。

液相の選択。

ＣａｍｂｒｉｄｇｅＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から入手したｓｃＦｖファージライブラリー（１０^１２Ｐｆｕ）のアリコートを、回転ミキサー上で３％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含むＰＢＳにて室温で１時間ブロッキングした。次いでブロッキングしたファージを、回転ミキサー上でストレプトアビジン磁性ビーズ（ＤｙｎａｌＭ−２８０）にて室温で１時間選別した。次いで選別したファージを、インビボでビオチン化したｈＩＰ−１０（１００ｎＭ）と回転ミキサー上で室温にて２時間インキュベートした。この選択ステップを、ＮｕｓＡ−ｈＩＰ−１０ビオチン化融合タンパク質あるいはタンパク質分解切断により融合体から遊離したビオチン化ｈＩＰ−１０について行った。磁気スタンドを用いてビーズを捕捉し、続いてＰＢＳ／０．１％ツイーン２０で４回洗浄し、ＰＢＳで３回洗浄した。次いでビーズを、指数関数的に増殖する１０ｍｌのＴＧ１細胞に直接加え、ゆっくりと振盪させながら（１００ｒｐｍ）３７℃で１時間インキュベートした。感染ＴＧ１のアリコートを段階（ｓｅｒｉａｌ）希釈して選択アウトプットの力価を測定した。残りの感染ＴＧ１を３０００ｒｐｍで１５分間回転させ、０．５ｍｌの２ｘＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｉｎ）および２％グルコースを含む２ｘＴＹ培地）に再懸濁し、２ｘＴＹＡＧ寒天バイオアッセイプレートに広げた。３０℃で一晩インキュベートした後、１０ｍｌの２ｘＴＹＡＧをプレートに加え、細胞を表面から（ｆｏｒｍ）かき取り、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。この細胞懸濁液に、最終濃度が１７％グリセロールになるように５０％グリセロールを含む２ｘＴＹＡＧを加えた。この選択ラウンドのアリコートを−８０℃で保管した。

細胞表面の選択。

ＣａｍｂｒｉｄｇｅＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から入手したｓｃＦｖファージライブラリー（１０^１２Ｐｆｕ）のアリコートを、回転ミキサー上で３％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含むＰＢＳにて室温で１時間ブロッキングした。次いでブロッキングしたファージを、空のｐＤｉｓｐｌａｙベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（Ｔ７５フラスコで８０％コンフルエンス）上で３７℃／５％ＣＯ_２にて１時間選別した。ＣＨＯ細胞については予め２％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含むＰＢＳでブロッキングしておいた。次いで選別したファージを緩やかに振盪させながらＣＨＯ−ｐＤｉｓｐｌａｙ−ｈＩＦＮγ細胞と室温で１時間インキュベートした。次いで細胞をＰＢＳで１０回洗浄した。指数関数的に増殖している１０ｍｌのＴＧ１をＴ７５フラスコに直接加え、ゆっくりと振盪させながら３７℃で１時間インキュベートして、結合ファージを溶出した。感染ＴＧ１のアリコートを段階（ｓｅｒｉａｌ）希釈して選択アウトプットの力価を測定した。感染ＴＧ１を３０００ｒｐｍで１５分間回転させ、０．５ｍｌの２ｘＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｉｎ）および２％グルコースを含む２ｘＴＹ培地）に再懸濁し、２ｘＴＹＡＧ寒天バイオアッセイプレートに広げた。３０℃で一晩インキュベートした後、１０ｍｌの２ｘＴＹＡＧをプレートに加え、細胞を表面から（ｆｏｒｍ）かき取り、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。この細胞懸濁液に、最終濃度が１７％グリセロールになるように５０％グリセロールを含む２ｘＴＹＡＧを加えた。この選択ラウンドのアリコートを−８０℃で保管した。

ファージレスキュー。

以前の選択ラウンドで得られた１００μｌの細胞懸濁液を２０ｍｌの２ｘＴＹＡＧに加え、ＯＤ_６００が０．３〜０．５になるまで撹拌しながら（２４０ｒｐｍ）３７℃で増殖させた。次いでこの培養液を３．３×１０^１０ＭＫ１３Ｋ０７ヘルパーファージに重感染させ、３７℃で１時間インキュベートした（１５０ｒｐｍ）。次いでこの培地を交換した。その際、細胞を２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、培地を除去し、ペレットを２０ｍｌの２ｘＴＹ−ＡＫ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｉｎ）；５０μｇ／ｍｌのカナマイシン）に再懸濁した。その後、培養液を３０℃で一晩増殖させた（２４０ｒｐｍ）。

ＥＬＩＳＡ用のモノクローナルファージレスキュー。

単一クローンを、１ウェル当たり１５０μｌの２ｘＴＹＡＧ培地（２％グルコース）を含むマイクロタイタープレートに蒔き、３７℃（１００〜１２０ｒｐｍ）で５〜６時間増殖させた。感染多重度（ＭＯＩ：ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）が１０（すなわち、培養液中の細胞ごとに１０ファージ）になるようにＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージを各ウェルに加えて、３７℃（１００ｒｐｍ）で１時間インキュベートした。増殖後、プレートを３，２００ｒｐｍで１０分間遠心した。上清を慎重に除去し、細胞を１５０μｌの２ｘＴＹＡＫ培地に再懸濁し、一晩３０℃（１２０ｒｐｍ）で増殖させた。ＥＬＩＳＡの場合、ファージを、５％スキムミルク粉末を含む１５０μｌの２×濃度のＰＢＳに加え、続いて室温で１時間インキュベートしてブロッキングする。次いでプレートを３０００ｒｐｍで１０分遠心し、ファージを含む上清をＥＬＩＳＡ用に使用する。

ファージのＥＬＩＳＡ。

ＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ，ＮＵＮＣ）を、ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌのｈＩＦＮγで一晩コートした。対照プレートを２μｇ／ｍｌのＢＳＡでコートした。次いでプレートを３％スキムミルク／ＰＢＳで室温にて１時間ブロッキングした。プレートをＰＢＳ０．０５％ツイーン２０で３回洗浄してから、予めブロッキングしておいたファージ上清を移し、室温で１時間インキュベートした。次いでプレートをＰＢＳ０．０５％ツイーン２０で３回洗浄した。各ウェルに（ＨＲＰ）コンジュゲート抗Ｍ１３抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ、１：１０，０００希釈）を含む５０μｌの３％スキムミルク／ＰＢＳ。室温で１時間インキュベートした後、プレートをＰＢＳ０．０５％ツイーン２０で５回洗浄した。次いでＥＬＩＳＡを、５０μｌのＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）および５０μｌの２ＮのＨ_２ＳＯ_４を加えて確認し、反応を止めた。４５０ｎｍで吸収強度を読み取った。

ファージクローンのシーケンシング
単一クローンを、１ウェル当たり１５０μｌの２ｘＴＹＡＧ培地（２％グルコース）を含むマイクロタイタープレートに蒔き、３０℃（１２０ｒｐｍ）で一晩増殖させた。翌日、５μｌの培養液を、４５μｌのｄＨ_２Ｏを含む別のプレートに移し、混合した。次いでプレートを−２０℃で凍結させた。解凍後、この懸濁液１μｌを用いて、標準的なＰＣＲプロトコルによりＰＣＲ増幅を行った。その際、ｐＣＡＮＴＡＢ６に対して特異的プライマー：

を使用した。

ＭｏｎｔａｇｅＰＣＲμ９６システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて９６ウェルフォーマットでＰＣＲ反応物を精製した。ｍｙｃｓｅｑおよびｇｅｎｅ３１ｅａｄｅｒプライマーを用いて溶出ＤＮＡ５μｌのシーケンシングを行った。

機能テストのためのｓｃＦｖのペリプラズムでの調製。

各クローンを、１ウェル当たり０．９ｍｌの２ｘＴＹＡＧ培地（０．１％グルコース）を含むディープウェルマイクロタイタープレートに播種し、３７℃で５〜６時間増殖させた（２５０ｒｐｍ）。次いで２ｘＴＹ培地中の０．２ｍＭのＩＰＴＧ（１ウェル当たり１００μｌ）を加え、０．０２ｍＭＩＰＴＧの最終濃度とした。次いでプレートを振盪させながら２５０ｒｐｍ、３０℃で一晩インキュベートした。ディープウェルプレートを２，５００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を慎重に除去した。ペレットを１５０μｌのＴＥＳ緩衝液（５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８）、２０％スクロース、Ｃｏｍｐｌｅｔｅｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｒｏｃｈｅを添加）に再懸濁した。１５０μｌの希釈ＴＥＳ緩衝液（１：５ＴＥＳ：水希釈）を加えて低張ショックを起こさせ、氷上で３０分間インキュベートした。次いでプレートを４０００ｒｐｍで１０分間遠心して細胞および破片を除去した。上清を別のマイクロタイタープレートに慎重に移し、機能アッセイまたはＥＬＩＳＡにおいてすぐに試験を行うため氷上で保持した。

ｓｃＦｖの大量精製
１ｍｌの２ｘＴＹＡＧのスターター培養液に、２ｘＴＹＡＧ寒天プレートで新たに画線培養した単一コロニーを播種し、振盪させながら（２４０ｒｐｍ）３７℃で５時間インキュベートした。この培養液０．９ｍｌを用いて同じ培地の培養液４００ｍｌに播種し、激しく振盪させながら（３００ｒｐｍ）一晩３０℃で増殖させた。

翌日、この培養液を、１ＭのＩＰＴＧ４００μｌを加えて誘導し、インキュベーションをさらに３時間継続した。５，０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離を行って細胞を集めた。ペレット状の細胞を、上記のようなプロテアーゼ阻害剤を添加した１０ｍｌの氷冷ＴＥＳ緩衝液に再懸濁した。１５ｍｌの１：５希釈ＴＥＳ緩衝液を加えて浸透圧ショックを起こさせ、氷上で１時間インキュベートした。細胞を、１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心して細胞片をペレット状にした。上清を新しいチューブに慎重に移した。最終濃度１０ｍＭまで上清にイミダゾールを加えた。ＰＢＳで平衡処理した１ｍｌのＮｉ−ＮＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）を各チューブに加え、回転ミキサー上（２０ｒｐｍ）で４℃にて１時間インキュベートした。

このチューブを２，０００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を慎重に除去した。ペレット状の樹脂を１０ｍｌの冷たい（４℃）洗浄用緩衝液１（５０ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０に調整）に再懸濁した。この懸濁液をｐｏｌｙｐｒｅｐカラム（Ｂｉｏｒａｄ）に加えた。このカラムを、８ｍｌの冷たい洗浄用緩衝液２（５０ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０に調整）を用いて重力流で洗浄した。２ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０に調整）によりｓｃＦｖをカラムから溶出した。２８０ｎｍの吸収により画分を解析し、タンパク質含有画分をプールしてから、ＰＢＳで平衡処理したＰＤ１０脱塩カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の緩衝液を交換した。ＰＢＳ中のｓｃＦｖをＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析し、２８０ｎｍの吸収により定量した。精製したｓｃＦｖを小分けにして−２０℃および４℃で保存した。

（実施例６）
ｈＩＰ−１０誘導性のカルシウム流のｓｃＦｖ抽出物による阻害
様々なｈＩＰ−１０のｓｃＦｖのペリプラズム抽出物を上記のように作製した。ｈＣＸＣＲ３を発現するＬ１．２細胞を、１０％ＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。ｓｃＦｖを含む抽出物を２〜１０ｎＭのｈＩＰ−１０（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ
ＨｉｌｌＮＪ）と室温で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、これに２μＭのＦｕｒａ２／ＡＭをロードした。ロード済みの細胞１００μｌを９６ウェル黒（透明平底）プレートの各ウェルに加え、カルシウム流の動態を、ＦｌｅｘｓｔａｔｉｏｎＩＩ機器（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）を用いて３４０または３８０ｎｍで励起し５１４ｎｍの蛍光を測定して記録した。各ｓｃＦｖ抽出物の阻害活性を、無関係のｓｃＦｖを含む抽出物と比較して評価した。ｓｃＦｖの陽性候補を上記の実施例５のように大量に発現させ、カルシウム流アッセイを用いて用量反応実験で確認した（表４）。

（実施例７）
ｈＩＰ−１０誘導性の細胞走化性のｓｃＦｖによる阻害
野生型Ｌ１．２細胞およびｈＣＸＣＲ３を発現するＬ１．２細胞を、１０％ＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。実験の前日に細胞を０．６ｍｇ／ｍｌの酪酸とインキュベートした。様々な濃度の精製ｓｃＦｖを０．２〜１０ｎＭのｒｈＩＰ−１０とインキュベートし、走化性９６ウェルプレート（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ）のボトムチャンバーに入れた。フィルタープレートを走化性プレートの上に置き、各ウェルの表面に１０^６細胞／ｍｌの懸濁液２０μｌを加えた。このプレートを３７℃で２時間インキュベートした。フィルターを通過する細胞をＤＲＡＱ５（ＡｌｅｘｉｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で染色し、ＦＭＡＴ８２００リーダー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙＣＡ）でカウントした。候補抗体ごとのＩＣ_５０（ｈＩＰ−１０誘導性の細胞遊走の５０％を阻害する濃度、すなわち、５０％阻害濃度）を決定した（表４）。

（実施例８）
ＩｇＧ型へのｓｃＦｖの再変換
選択したｓｃＦｖのＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を、５’末端にリーダー配列およびＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を導入した特異的オリゴヌクレオチドを用いて増幅させた。ＡｐａＩまたはＡｖｒＩＩ部位を重鎖および軽鎖配列それぞれの３’末端に導入した。増幅Ｖ_Ｈ配列をＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｐａＩで消化し、ｐＣｏｎ＿ｇａｍｍａ１発現ベクター（ＬＯＮＺＡ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）にクローニングした。増幅Ｖ_Ｌ配列をＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｖｒＩＩで消化し、ｐＣｏｎ＿ｌａｍｂｄａ２発現ベクター（ＬＯＮＺＡ）にクローニングした。構築物をシーケンシングにより確認してから哺乳動物細胞にトランスフェクトした。

適切な発現ベクターのＶ_ＨおよびＶ_ＬのｃＤＮＡ配列を、Ｆｕｇｅｎｅ６ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて哺乳動物細胞にトランスフェクトした。簡単に説明すると、６ウェルプレートにおいてＰｅａｋ細胞を、１ウェル当たり６×１０^５細胞の濃度でウシ胎仔血清を含む２ｍｌの培地（ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａ）中で培養した。この細胞に候補Ｖ_Ｈ配列およびＶ_Ｌ配列をコードする発現ベクターを製造者の指示に従ってＦｕｇｅｎｅ６ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔを用いてコトランスフェクトした。トランスフェクションの１日後、培地（ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａ）を吸引し、３ｍｌの新鮮な無血清培地を細胞に加え、３７℃で３日間培養した。３日間の培養期間後、上清を回収し、製造者の指示に従いＩｇＧをＰｒｏｔｅｉｎＧ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ高流速カラム（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で精製した。簡単に説明すると、トランスフェクト細胞の上清をＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（Ｇ）ＩｇＧ結合緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ，ＲｏｃｋｆｏｒｄＩＬ）と４℃で一晩インキュベートした。次いでサンプルをＰｒｏｔｅｉｎＧ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ高流速カラムに通し、その後、溶出緩衝液を用いてＩｇＧを精製した。次いで溶出したＩｇＧ画分をＰＢＳに対して透析し、２８０ｎｍの吸収によりＩｇＧ量を定量した。純度およびＩｇＧの完全性をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確認した。

ＩｇＧ１再変換ＮＩ−０８０１抗体の核酸およびアミノ酸配列を以下に示す：

（実施例９）
ＩｇＧ１型に再変換したｓｃＦｖによるｈＩＰ−１０誘導性のカルシウム流または細胞走化性の阻害
上記の実施例８のようにｓｃＦｖをＩｇＧ型に再変換した。実施例６および８に記載した細胞ベースのアッセイを用いて、ｈＩＰ−１０誘導性のカルシウム流または細胞走化性に対するＩｇＧの中和ポテンシャルを評価した。図１、図２および図３に示すように、これらのＩｇＧクローンは、組換えｈＩＰ−１０とネイティブなｈＩＰ−１０の活性を共に用量依存的に阻害する。こうしたアッセイにおける各抗体のＩＣ_５０値を表５および表６にまとめてある。

（実施例１０）
グリコサミノグリカンに固定化されたｈＩＰ−１０に対する抗体結合
ｈＩＰ−１０は多くのケモカインと同様にオリゴマー化し、内皮細胞などの細胞の表面に発現するグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合することができる。この状況で本抗体がｈＩＰ−１０に結合できることを確認するため、以下のアッセイで抗体を検査した。検査対象のヒトＩｇＧの捕捉試薬としての抗ヒトＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ，ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，ＰＡ）でＭａｘｉｓｏｒｂ９６ウェルプレートをコートした。原型ＧＡＧとしてＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）標識ヘパリン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用い、ｈＩＰ−１０とインキュベートしてから捕捉対象の抗ｈＩＰ１０抗体を加えた。ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）結合抗ＦＩＴＣＦａｂ（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて結合を確認した。図４に示すように、ｈＩＰ−１０がＧＡＧに結合したときｈＩＰ−１０に結合できる抗体があった一方、結合できない抗体もあった。おそらくオリゴマー構造内のｈＩＰ−１０のエピトープがすでに認識できないものになっているためであろう。抗体がＧＡＧの状況でｈＩＰ−１０に結合する能力を表７にまとめてある。

（実施例１１）
抗体ＣＣ＿Ｆ１の親和性成熟
ｈＩＰ−１０中和アッセイにおけるｈＩＰ−１０に対する親和性および効力を高めるため、選択した有力な候補（ＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１）を親和性成熟させた。重鎖または軽鎖のＣＤＲ３における５つの残基配列をランダムに組み合わせて６つのライブラリー（ライブラリーサイズの範囲は５×１０^７〜２×１０^８）を作成した。実施例５に記載されているようにハイストリンジェントな選択ラウンドを３回行った。エピトープ競合アッセイにおいてｓｃＦｖペリプラズム抽出物を用いて改良変異体のスクリーニングを行った。簡単に説明すると、親抗体（ＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１）をプレート上にコートし、希釈したペリプラズムｓｃＦｖ抽出物を各ウェルに加えた。次いでビオチン化ｈＩＰ−１０を加え、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、コートした親抗体に結合したままのｈＩＰ−１０をストレプトアビジン結合ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ，ＷｅｓｔＧｒｏｖｅＰＡ）を用いて確認した。改良変異体を同定する参照として、ＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１のｓｃＦｖを用いて、コートしたＩｇＧ型のＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１と競合させた。競合アッセイならびに（ａｓｗｅｌｌ）走化性およびカルシウム流アッセイにおいても、クローンＣＦ１Ａ１１Ｒ３Ｐ３＿Ｆ３をより強力な抗体として同定した。

クローンＣＦ１Ａ１１Ｒ３Ｐ３＿Ｆ３について２回目の親和性成熟を、その重鎖とＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１親和性成熟プロセスにおいて選択された軽鎖とを組み合わせて行った。この２回目のラウンドにより、クローンＣＦ１Ｈ１Ｒ３Ｐ４＿Ｂ５およびＣＦ１Ｈ１Ｒ３Ｐ３＿Ｇ１１が同定される。クローンＣＦ１Ｈ１Ｒ３Ｐ３＿Ｇ１１の重鎖ＣＤＲ３について３回目の親和性成熟を行ったところ、さらに改良された抗体変異体ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７が単離された。（表４、表５および表６）
並行して第２の候補ＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｅ７についても、軽鎖のＣＤＲ３を標的にする同様の親和性成熟プロセスを行った。このプロセスでは、クローンＣＥ７Ｃ１Ｒ３Ｈ８＿Ｊ９が単離され、走化性アッセイでは親抗体と比較してより強力であった。

（実施例１２）
生殖系列配列へのｈＩＰ−１０抗体クローンＣ７の復帰突然変異
本明細書に記載の研究では、ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７クローンの核酸およびアミノ酸配列におけるヌクレオチドおよびアミノ酸残基を変異させて、生殖系列配列に見られるヌクレオチドまたはアミノ酸残基に一致させた。本明細書ではこのプロセスを「復帰突然変異」という。

ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７重鎖：抗体ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７の免疫グロブリンの重鎖可変遺伝子は、ヒト生殖系列のＤＰ−４９またはＩＧＨＶ３−３０（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ９９６６３）に対する相同性が９６％であった。ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７のＶＨは、ＩＧＨＶ３−３０と比較した場合、５個の突然変異（ＣＤＲ１に３個、ＣＤＲ２に１個およびフレームワーク４に１個）を持つ。図５に変異アミノ酸残基を枠で囲んである。５個の突然変異は、Ｋａｂａｔ位置３１のＳｅｒからＡｓｎ；Ｋａｂａｔ位置３２のＴｙｒからＳｅｒ；Ｋａｂａｔ位置３４のＭｅｔからＩｌｅ；Ｋａｂａｔ位置５８のＴｙｒからＰｈｅおよびＫａｂａｔ位置９４のＡｒｇからＬｙｓである。ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７のＶＨの５個のアミノ酸をすべて個々に、生殖系列の対応するアミノ酸に復帰変異させ、抗体の効力に対するその変異の影響を走化性およびカルシウム流機能アッセイにおいて評価した。ＣＤＲ１ではすべての変化に効力の著しい低下が観察された。したがって、最終的なＮＩ−０８０１配列ではＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７に見られるアミノ酸を変更しなかった。ＣＤＲ２の突然変異およびフレームワーク４の末端の突然変異は、抗体の効力を変化させなかった。したがって、この変異をＮＩ−０８０１のＶＨ配列に導入した。ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７の免疫グロブリン重鎖結合（ＩＧＨＪ：ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｈｅａｖｙｊｏｉｎｉｎｇ）領域を６つの機能的なヒトＩＧＨＪ領域と比較した。ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７のＩＧＨＪ領域を、ＣＤＲ３コード領域を除けば相同性が１００％のＩＧＨＪ４として同定した。

ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７の軽鎖：抗体ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７の免疫グロブリンλ鎖可変遺伝子（ＶＬ）は、ＩＧＬＶ６−５７またはＶ１−２２サブグループ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｚ７３６７３）に属する。ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７−ＶＬは、ＩＧＬＶ６−５７と比較した場合、４個の突然変異を持ち、すべてＣＤＲ１に位置している。この変異アミノ酸残基を図５に枠で示す。４個の突然変異は、Ｋａｂａｔ位置２５のＡｒｇからＧｌｙ；Ｋａｂａｔ位置２７のＳｅｒからＧｌｙ；Ｋａｂａｔ位置２９および３０のそれぞれＡｌａからＡｓｐおよびＳｅｒからＡｒｇである。フレームワーク領域の４個の突然変異を対で（すなわち、Ｇｌｙ２５Ａｒｇ／Ｇｌｙ２７ＳｅｒおよびＡｓｐ２９Ａｌａ／Ａｒｇ３０Ｓｅｒ）変化させた。Ｇｌｙ２５Ａｒｇ／Ｇｌｙ２７Ｓｅｒ変異体では効力の著しい低下が観察された。したがって、ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７のこれらの位置で見られるアミノ酸を変更しなかった。突然変異Ａｓｐ２９Ａｌａ／Ａｒｇ３０Ｓｅｒは抗体の効力を変化させなかった。これら２個のアミノ酸を、ＮＩ−０８０１のＶＬ配列におけるその生殖系列のアミノ酸に変異させた。

ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７の免疫グロブリン重鎖結合（ＩＧＬＪ）領域を７つの機能的なヒトＩＧＬＪ領域と比較した。ＣＦ１Ｎ１Ｒ３Ｐ４＿Ｃ７のＩＧＬＪ領域を、ＣＤＲ３コード領域を除けば相同性が１００％のＩＧＬ３Ｊ４として同定した。

（実施例１３）
ｈＩＰ−１０抗体の親和性および結合動態
Ｂｉａｃｏｒｅ２０００機器（ＢｉａｃｏｒｅＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いてＮＩ−０８０１およびＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１の親和性および結合動態の特徴付けを行った。２００ＲＵ（反応単位）のヤギ抗ヒトポリクローナルＩｇＧ（ａｈＩｇＧ；ＢｉａｃｏｒｅＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）をＣ１Ｂｉａｃｏｒｅチップ上にＥＤＣ／ＮＨＳ化学で固定化した。この表面を用いてＮＩ−０８０１または特徴付けを行った他のヒトＩｇＧ１を捕捉した。この表面を各サイクル後に再生させた。その際、１０ｍＭのグリシン（ｐＨ＝１．５）を３０μＬ／分で３０秒間注入し、続いてＨＢＳ−ＥＰ緩衝液による安定化のための時間を１分設けた。ｈＩＰ−１０（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，ＲｏｃｋｙＨｉｌｌＮＪ）あるいはＮｕｓＡ−ｈＩＰ−１０融合タンパク質を以下の濃度：３４．７ｎＭ、１１．６ｎＭ、３．８５ｎＭ、１．２８ｎＭ、０．４２８ｎＭ、０．１４２ｎＭおよび０ｎＭで通過させて結合を測定した。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＢｉａｃｏｒｅＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）で溶液をすべて希釈した。注入を５０μｌ／分で３分間行い、続いて解離時間を１２分設けて、温度を２５℃に設定した。データを、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィッティングさせ、Ｋ_ｏｎ値、Ｋ_ｏｆｆ値およびＫ_Ｄ値を決定した。ｒｈＩＰ−１０またはＮｕｓＡ−ｈＩＰ−１０融合体を用いた場合、非常に類似した値が得られたが、融合タンパク質の場合、サイズがより大きくＢｉａｃｏｒｅでの応答が高まるため、より良好な応答シグナルが得られた。ｈＩＰ−１０に対する抗体およびＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１およびＮＩ−０８０１の親和性は、それぞれ９０．２ｎＭおよび１０９ｐＭである（図６）。したがって、親和性成熟プロセスにおいてＣＣ２１Ｒ３Ｐ１＿Ｆ１の親和性は９０倍高まったと考えられる。２つの抗体の親和性および速度定数を表８にまとめてある。

（実施例１４）
ｈＩＰ−１０抗体の交差反応性
結合アッセイ：捕捉ＥＬＩＳＡフォーマットアッセイを用いて、異なる種由来のＩＰ−１０に結合するＮＩ−０８０１の能力を検査した。簡単に説明すると、マウス、ラット、ウサギおよびカニクイザルから単離されたｃＤＮＡからクローニングしたＩＰ−１０、さらに一連のヒトケモカインを発現させ、実施例１に記載されているように精製した。ＮＩ−０８０１をコートし、一定の濃度範囲の組換えＮｕｓＡ融合タンパク質とインキュベートした。抗ＮｕｓＡ抗体を用いて結合のレベルを確認した。図７に示すように、ＮＩ−０８０１はカニクイザルＩＰ−１０とのみ交差反応したが、他の種由来のＩＰ−１０とも、検査対象の他のヒトケモカインのいずれとも交差反応しなかった。

機能アッセイ：ヒトＩＴＡＣおよびヒトＭＩＧもやはりｈＣＸＣＲ３を介してシグナル伝達を行うケモカインである。実施例７に記載する走化性アッセイにおいて、こうした他のｈＣＸＣＲ３リガンドを中和するＮＩ−０８０１の能力について検査した。組換えｈＩＴＡＣ、ｈＭＩＧおよびｈＩＰ−１０（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）はすべて、ｈＣＸＣＲ３を発現するＬ１．２細胞の細胞走化性を誘導することができたが、ＮＩ−０８０１が活性を中和できたのはｈＩＰ−１０のみであった（図８Ａ〜図８Ｂ）。異なる種由来のＩＰ−１０に対するＮＩ−０８０１の中和ポテンシャルも機能的に評価した。図９に示すように、組換えヒト、マウス、ラットおよびウサギのＩＰ−１０は、細胞走化性を誘導することができるが、飽和用量のＮＩ−０８０１（５０μｇ／ｍｌ）により中和できたのはｈＩＰ−１０の活性のみであった。

（実施例１５）
ｈＩＰ−１０抗体のエピトープマッピング
ＥＬＩＳＡアッセイでは、ＮＩ−０８０１は同等の見かけの親和性でヒトＩＰ−１０とカニクイザルＩＰ−１０とに結合する（図７）。ＮＩ−０８０１に対する結合に際してｈＩＰ−１０に潜在的に必要な残基を同定するため、図１０に示すように複数の種のＩＰ−１０タンパク質配列を整列させた。このアライメントでは、ヒト配列とカニクイザル配列との間で保存されている残基であって、ＮＩ−０８０１が結合できない種のＩＰ−１０において異なっている残基を調べた。ウサギＩＰ−１０の配列はヒトＩＰ−１０配列に近いが、ＮＩ−０８０１はこのタンパク質を中和することができない。本発明らは、ヒトＩＰ−１０とカニクイザルＩＰ−１０とを比較してウサギＩＰ−１０と異なる複数の残基（Ｎ１３、Ｋ１７、Ｄ４８、Ｌ４８、Ｋ６３、Ｆ６８、Ｒ７４、Ｇ７５およびＳ７７）を同定した。ヒト残基をそれらの位置に回復させるため、ウサギＩＰ−１０の以下の４つのミュータント：［Ｎ１３Ｓ／Ｋ１７Ｑ］；［Ｄ４８Ｋ］；［Ｌ４８Ｓ／Ｋ６３Ｎ／Ｆ６８Ｖ］および［Ｌ４８Ｓ／Ｋ６３Ｎ／Ｆ６８Ｖ／Ｒ７４Ｋ／Ｇ７５Ｒ／Ｓ７７Ｐ］を部位特異的変異誘発により作製した。これらのウサギＩＰ−１０のミュータント形態を実施例１に記載されているようにＮｕｓＡ融合タンパク質として発現させた。次いでこれら残基を導入したことでウサギＩＰ−１０に対するＮＩ−０８０１の結合が回復できたかどうかをＥＬＩＳＡアッセイで検査した。ＮｕｓＡ−ｈＩＰ−１０および各ＮｕｓＡ−ウサギＩＰ−１０ミュータントをＭａｘｉｓｏｒｂプレート（Ｎｕｎｃ）に５μｇ／ｍｌで４℃にて一晩コートした。３％ＰＢＳ−ＢＳＡでブロッキングし、用量範囲のＮＩ−０８０１とインキュベートした後、プレートを洗浄し、西洋わさびペルオキシダーゼと結合したヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ）とインキュベートした。洗浄後、シグナルをＴＭＢ（Ｒｏｃｈｅ）により確認し、Ｈ_２ＳＯ_４で止めた。プレートを４５０ｎｍで読み取った。図１１に示すように、［Ｎ１３Ｓ／Ｋ１７Ｑ］ミュータントでは、ウサギＩＰ−１０に対するＮＩ−０８０１の結合が回復しており、ヒトＩＰ−１０に対するＮＩ−０８０１のエピトープの完全性にはＳ１３およびＱ１７が極めて重要であることが示される。

他の実施形態
本発明をその詳細な説明と共に記載してきたが、上記の記載は本発明を説明するためのものであり、添付の特許請求の範囲の範囲により規定される本発明の範囲を限定することを意図するものではない。他の態様、利点および改変も以下の特許請求の範囲の範囲内にある。

Claims

本願明細書に記載された発明。