JP2014136693A - アミロイド形成阻害剤及びアミロイド形成阻害方法 - Google Patents

Abstract

【課題】ポリフェノール類に代わる新規のアミロイド形成阻害活剤及びかかるアミロイド形成阻害活剤を反復して投与するアミロイド形成阻害方法を提供する。
【解決手段】アミロイド形成阻害剤としてセサミノールを有効成分とするものを用いた。
【選択図】なし

Description

本発明はアミロイド形成阻害剤及びアミロイド形成阻害方法に関する。高齢社会化が進むなかで、アルツハイマー病や透析アミロイドーシス等、アミロイドの沈着によって引き起こされる疾病が社会問題化している。本発明は、アミロイドの形成を阻害するアミロイド形成阻害剤及びアミロイド形成阻害方法に関する。

従来、前記のようなアミロイドの形成を阻害するものとして、ポリフェノール類が知られており、かかるポリフェノール類を得る方法として、ウコン粉末に超臨界状態の二酸化炭素を２〜３時間接触させ、クルクミンを分離する方法（例えば、特許文献１参照）、ウコンのｃＤＮＡから選抜した４種類の遺伝子によってコードされるタンパク質であるＤＣＳ、ＣＵＲＳ１、ＣＵＲＳ２、ＣＵＲＳ３を単離し、これらのタンパク質を組み合わせてクルクミノイドを得る方法（例えば、特許文献２参照）、赤ワインからアルコールを除去したものを濃縮して吸収樹脂カラムに吸着させ、水性アルコールで溶離し、更にアルコールを除去した後、加熱により濃縮した抽出成分濃縮液を高速液体クロマトグラフフィーにて分離してポリフェノール類を得る方法（例えば、特許文献３参照）等が提案されている。

しかし、特許文献１のような従来法には、高温・高圧の超臨界状態の二酸化炭素を使用するため、相応の設備と熟練を要し、それでもなお作業の危険性が高いという問題があり、また特許文献２や３のような従来法には、方法それ自体が複雑であって効率が悪いだけでなく、化学試薬や微生物による汚染のおそれもあるという問題がある。

特開平６−９４７９号公報 特開２０１０−２００６３０号公報 特開２００５−１０４８５０号公報

本発明が解決しようとする課題は、それを得ることが容易ではないポリフェノール類に代わる新規のアミロイド形成阻害活剤及びかかるアミロイド形成阻害活剤を反復して投与するアミロイド形成阻害方法を提供する処にある。

本発明者らは、前記の課題を解決するべく研究した結果、セサミノールを有効成分として含有するものが正しく好適であることを見出した。

すなわち本発明は、セサミノールを有効成分として含有することを特徴とするアミロイド形成阻害剤に係る。また本発明は、かかるアミロイド形成阻害剤を反復して投与することを特徴とするアミロイド形成阻害方法に係る。

本発明に係るアミロイド形成阻害剤（以下、本発明のアミロイド形成阻害剤という）は、セサミノールを有効成分として含有するものである。かかるセサミノールとしては、ゴマ種子由来のものが好ましい。ゴマ種子としては、生ゴマ種子、煎りゴマ種子、練りゴマ種子、切りゴマ種子、脱脂ゴマ種子等の各種のゴマ種子が挙げられるが、なかでも生ゴマ種子、煎りゴマ種子及び脱脂ゴマ種子が好ましい。

本発明のアミロイド形成阻害剤に供するゴマ種子由来のセサミノールそれ自体は、公知の方法、例えば特開２００８−２１４２３４号公報に記載の方法により得ることができる。この方法によれば、まず、酸性触媒を用いて脱色処理したゴマ油を分子蒸留し、その留分からエタノール中で晶析するものを除去し、更にエタノール濃度６０〜８０質量％のエタノール水溶液に不溶なものを除去して精製する。次に、精製したエタノール水溶液を塩基性陰イオン交換樹脂製の吸着剤で分離し、精製することで目的のセサミノールを得ることができる。

またゴマ種子を粉砕し、有機溶媒例えば酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、メタノール、エタノール、好ましくはアセトンにより抽出し、抽出物を分別手段、例えばカラムクロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ、再結晶、蒸留など、好ましくはシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィに供して、目的のセサミノールを得ることもできる。

これら以外に、ゴマ種子を脱脂したゴマの脱脂粕から、セサミノール配糖体をアルコール−水等で抽出し、遊離型にした後、カラムクロマトグラフィ等に供して分離精製し、目的のセサミノールを得ることもできる。

本発明のアミロイド形成阻害剤は、好ましくは前記のようなゴマ種子由来のセサミノールを含有するものである。かかるアミロイド形成阻害剤の形態としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、ペレット剤、舌下剤、トローチ剤、各種液剤等が挙げられる。

次に、本発明に係るアミロイド形成阻害方法（以下、本発明のアミロイド形成阻害方法という）について説明する。本発明のアミロイド形成阻害方法は前記した本発明のアミロイド形成阻害剤を反復して投与する方法である。

かかるアミロイド形成阻害剤を反復して投与する期間は少なくとも８週間以上とすることが好ましい。また１日当たりアミロイド形成阻害剤の投与量は体重１ｋｇ当たり０．０３３〜０．０６６ｇの割合とすることが好ましい。更に投与方法としては経口投与が好ましい。経口投与の場合、摂取する食餌中のアミロイド形成阻害剤の濃度は、通常０．００１〜５質量％とするが、０．０１〜０．５％とすることが好ましい。

本発明のアミロイド形成阻害剤は、詳しくは後述するように、優れたアミロイド形成阻害活性を示し、なかでもβ−アミロイドペプチドからアミロイドが形成されるのを阻害する活性を示し、アミロイドの形成から引き起こされる疾病等、特にアルツハイマー病に対して有用である。

以上説明した本発明のアミロイド形成阻害剤には、優れたアミロイド形成阻害活性を有するという効果がある。

以下、本発明の構成及び効果をより具体的にするため、実施例及び比較例を挙げるが、本発明がこれらの実施例に限定されるというものではない。尚、以下の実施例等において、別に記載しない限り、％は質量％である。

試験区分１（セサミノールの分離）
未焙煎のゴマ種子から圧搾搾油して得た未精製ゴマ油を酸性触媒として活性白土を用いて脱色処理し、更に遠心式分子蒸留機に仕込み、温度２４５℃、圧力２７Ｐａの条件下で分子蒸留した。得られた留分から、エタノール中で晶析するものを除去し、更にエタノール濃度６０〜８０％のエタノール水溶液に不溶なものを除去して精製した。次に、この精製したエタノール水溶液を塩基性陰イオン交換樹脂製の吸着剤で分離し、精製して目的のセサミノールを得た。

試験区分２（セサミノール含有飼料の調製及び投与）
試験区分１で得たセサミノールを飼料ＭＦ（オリエンタル酵母工業社製）に０．０５％となるよう混合してセサミノール含有飼料を得た。セサミノール含有飼料を老化促進モデルマウスとしてＳＡＭＰ８マウス（日本エスエルシー社製）５匹に１６週齢から３２週齢の間、自由に摂取させた。比較のため、セサミノールを混合しない前記の飼料をＳＡＭＰ８マウス５匹に同条件下で摂取させた。

試験区分３（ＥＬＩＳＡ法による脳中アミロイド形成阻害活性の測定）
３３週齢で安楽死させた前記のＳＡＭＰ８マウスから全脳を採取した。この脳をプロテインインヒビターを含むＲＩＰＡバッファー（サンタクルズ社製）に懸濁してホモジナイズした後、遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間、４℃）により上清を回収した。この上清を全タンパク質抽出液とし、ヒト／ラットβ−アミロイド（４２）ＥＬＩＳＡキットワコー高感度品（和光純薬工業社製）を用いて、β−アミロイド含量を測定した。結果を表１にまとめて示した。

表１において、
Ｐ８セサミノール：セサミノールを混合した飼料を摂取させたＳＡＭＰ８マウス群
Ｐ８コントロール：セサミノールを混合しない飼料を摂取させたＳＡＭＰ８マウス群

試験区分３（脳中のＴＢＡ反応性生物量の測定）
組織の脂質過酸化度の指標として、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）反応生成物（ＴＢＡＲＳ）の濃度をＫｏｓｕｇｉ（１９９２）法により測定した。すなわち、前記のＳＡＭＰ８マウスの全脳を摘出し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後、湿重量を測定し、３０％（ｗ／ｖ）になるよう１．１５％ＫＣｌ溶液を加えてホモジナイズした。ホモジナイズした溶液０．１０ｍＬ、８．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液０．２０ｍＬ、２０％酢酸緩衝液（ｐＨ ３．５）１．５ｍＬ、０．８％酸化防止剤（ＢＨＴ）酢酸溶液５０μＬ、０．８％チオバルビツール酸（ＴＢＡ）溶液１．５ｍＬ及び蒸留水０．７ｍＬを加え、密栓してよく振り混ぜた。密栓したまま５℃で６０分間保持した後、沸騰水浴中で６０分間加熱した。冷却後、蒸留水１．０ｍＬ及びブタノール−ピリジン混液（１５：１、ｖ／ｖ）５．０ ｍＬを加えて振り混ぜた。遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）した後、上清の５３２ｎｍにおける吸光度Ａを分光光度計（島津製作所のＵＶ−１７００）で測定した。対照液についても同様の操作を行い、得られた上清液の吸光度Ａ０を測定した。以下の数１からＴＢＡ反応生成物（ＴＢＡＲＳ）量を求め、結果を表２に示した。

数１において、
吸光度Ａ：試料液（セサミノールを混合した飼料を摂取させたＳＡＭＰ８マウス群から調製した上清）の吸光度
吸光度Ａ０：（セサミノールを混合しない飼料を摂取させたＳＡＭＰ８マウス群から調製した上清）対照液の吸光度
１５６０００：ＴＢＡ反応生成物の分子吸光係数

表２において、
Ｐ８セサミノール，Ｐ８コントロール：表１の場合と同じ。

表１及び表２の結果からも明らかなように、本発明のアミロイド形成阻害剤及びアミロイド形成阻害方法によると、アミロイドの形成を有効に阻害できる。

Claims (5)

1. セサミノールを有効成分として含有することを特徴とするアミロイド形成阻害剤。
2. セサミノールがゴマ種子由来のものである請求項１記載のアミロイド形成阻害剤。
3. 請求項１又は２記載のアミロイド形成阻害剤を反復して投与することを特徴とするアミロイド形成阻害方法。
4. アミロイド形成阻害剤を体重１ｋｇ当たり０．０３３〜０．０６６ｇ／日の割合で投与する請求項３記載のアミロイド形成阻害方法。
5. アミロイド形成阻害剤を経口投与する請求項３又は４記載のアミロイド形成阻害方法。