JP2014080374A - イオントフォレーシス用組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、二糖単位−D−グルクロン酸−β−1,3−D−N−アセチルグルコサミン−β−1,4−が2つ結合したヒアルロン酸又はその塩を有効成分として含むイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物であって、当該組成物中でマイナスに荷電した当該ヒアルロン酸が、皮膚に流される電流との反発により経皮送達される、組成物である。
【選択図】図1
Description
[1]二糖単位−D−グルクロン酸−β−1,3−D−N−アセチルグルコサミン−β−1,4−が2つ結合したヒアルロン酸又はその塩を有効成分として含むイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物であって、当該組成物中でマイナスに荷電した当該ヒアルロン酸が、皮膚に流される電流との反発により経皮送達される、組成物。
[2]前記ヒアルロン酸の平均分子量が800以下である、[1]に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物。
[3]pHが3以上である、[1]又は[2]に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物。
[4]紫外線曝露された皮膚を処置するための、[1]〜[3]のいずれかに記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物。
[5][1]〜[4]のいずれかに記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物と、プラス極及びマイナス極の電極を備えたイオントフォレーシス用装置とを備えるイオントフォレーシス用キット。
[6][1]〜[4]のいずれかに記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物を塗布した皮膚に、[4]に記載のイオントフォレーシス用装置のマイナス極を接触させ、当該マイナス極から電流を流す工程を含んで成る美容方法。
[7]紫外線曝露された皮膚を処置するための、[6]に記載の美容方法。
1-1.材料
HA4 (分子量 776.3 Da) は糖質科学研究所 (東京、日本) より供与された。その他の試薬は、市販の特級もしくはHPLC用のものを、和光純薬工業 (大阪、日本) より購入した。
雄性ヘアレスマウス (HR-1、7週令、体重:23-30 g) は、株式会社星野試験動物飼育所 (茨城、日本) より購入した。12時間ごとに明暗サイクル (on-off時間:7:00-19:00) を設定した部屋で飼育し、水と餌は自由に飽食可能とした。なお、動物実験は城西大学動物実験管理委員会の承諾を得て、「城西大学動物実験規定」に従い行った。
HA4水溶液は、精製水で0.50%の濃度に調製した。調製後の溶液のpHは約4であった。
ヘアレスマウス (8-10週令) を頸椎脱臼し、腹部の正中線を避けるように皮膚を摘出して、真皮側の脂肪を丁寧に取り除いた。In vitro皮膚透過試験には、全層皮膚を用いた。
摘出した皮膚は、有効透過面積1.77 cm2 (直径:1.5 cm) のFranz型拡散セルに、表皮をドナー側、真皮をレシーバー側にして装着した。電極にはAg/AgClを用い、プラス極からのIP (anodal IP) を負荷する際はドナー側にAg、レシーバー側にAgClを装置し、マイナス極からのIP (cathodal IP) を負荷する際はドナー側にAgCl、レシーバー側にAgを装置した。電極は特別仕様イオン導入器JN-78に接続し、電流は0.05、0.1 mA/cm2、デューティー比は90%に設定し、試験期間(6時間又は8時間)中連続的に負荷した。ドナー側に0.5% HA4水溶液1mLを、レシーバー側に生理食塩液5 mLを適用した。拡散セル内は32℃に保ち、スターラーで攪拌した。経時的にレシーバー液300μLをサンプリングし、その都度、同量の精製水を補充した。レシーバー液中のHA4を定量し、希釈分を補正して皮膚透過量を算出した。
各サンプルをメタノールと1:1で混合し、15,000×g、4℃、10分の条件で遠心分離して上清を回収した。上清は、LC/MS/MSで測定した。LC/MSシステムは、イオントラップ型タンデム質量分析装置 (LCQ DECA XP plus) (Thermo Fisher Scientific Inc.、MA、USA)およびポンプ (Paradigm MS4) (Microm Bioresources Inc.、CA、USA)、オートインジェクター (CTC HTS-PAL) (Microm Bioresources Inc.)、カラム (TSK-gel ODS-80Ts、2.0×150 mm) (TOSOH、東京、日本) から成り、移動相は10 mM酢酸アンモニウム水溶液:メタノール (8:2)、流速を100μL/minとし、ネガティブイオン化モードで検出した。
2-1. IPを用いたHA4の皮膚透過促進
上記試験方法に従い、HA4のCathodal IP負荷によるHA4の皮膚透過促進を、全層皮膚を用いて評価した。電流は0.1 mA/cm2に設定し、その他の条件については上述のとおりIP負荷を行なった。コントロールとして同一の組成物を当該皮膚に適用した(以降、受動拡散)。その結果、6時間後のHA4累積透過量は、受動拡散で0.3±0.1μg/cm2、0.1 mA/cm2 IP負荷で2310.7±703.1 μg/cm2となった。すなわち、IP負荷は、受動拡散と比較して約2700倍HA4皮膚透過量を増加させた。更に、透過係数は受動拡散で0.01 × 10-6cm/sであったのに対し、IP負荷ではその約3650倍の36.5 × 10-6cm/sであった。
Cathodal IPがHA4水溶液の皮膚透過促進効果に及ぼす影響について、Anodal IPと比較検討した。電流は0.1 mA/cm2に設定し、その他の条件については上述のとおりIP負荷を行なった。その結果、Anodal IP負荷から6時間後のHA4累積透過量は2.0±703.1 μg/cm2であり、これは同様の条件で2310.7±703.1 μg/cm2となったCathodal IP負荷(上記2-1.を参照のこと)の1/1155であった(図2)。また、Anodal IP負荷の透過係数は0.01 × 10-6cm/sであり、これは同様の条件で36.5 × 10-6cm/sであったCathodal IP負荷(上記2-1.を参照のこと)の約1/3650であった。
電流の変化がHA4水溶液の皮膚透過促進に及ぼす影響について検討した。検討する電流は上記試験の0.1 mA/cm2に加え、0.05 mA/cm2を採用した。その他の条件は上述のものを使用した。各電流を用いてCathodal IPを行なった結果、6時間後のHA4累積透過量は0.05 mA/cm2の場合に797.9 ±0.1μg/cm2、そして0.1 mA/cm2の場合に2310.7±703.1 μg/cm2となった(図3)。また、透過係数は0.05 mA/cm2の場合に13.2 × 10-6cm/s、そして、0.1 mA/cm2の場合に36.5 × 10-6cm/sであった。すなわち、累積透過量及び透過係数は0.05 mA/cm2の場合と比較して0.1 mA/cm2の方が約3倍高い値を示した。
Claims (7)
- 二糖単位−D−グルクロン酸−β−1,3−D−N−アセチルグルコサミン−β−1,4−が2つ結合したヒアルロン酸又はその塩を有効成分として含むイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物であって、当該組成物中でマイナスに荷電した当該ヒアルロン酸が、皮膚に流される電流との反発により経皮送達される、組成物。
- 前記ヒアルロン酸の平均分子量が800以下である、請求項1に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物。
- pHが3以上である、請求項1又は2に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物。
- 紫外線曝露された皮膚を処置するための、請求項1〜3のいずれか1項に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物と、プラス極及びマイナス極の電極を備えたイオントフォレーシス用装置とを備えるイオントフォレーシス用キット。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載のイオントフォレーシス用皮膚外用剤組成物を塗布した皮膚に、請求項4に記載のイオントフォレーシス用装置のマイナス極を接触させ、当該マイナス極から電流を流す工程を含んで成る美容方法。
- 紫外線曝露された皮膚を処置するための、請求項6に記載の美容方法。
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