CN115721582A - 一种含有外泌体的抗衰老精华液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有外泌体的抗衰老精华液及其制备方法,涉及护肤品技术领域,所述精华液的组分组成:甘油、丙二醇、丁二醇、泛醇、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖、水解透明质酸钠、卡波姆、透明质酸钠、烟酰胺、二裂酵母发酵产物溶胞物、甘油葡糖苷、糖类同分异构体、马齿苋提取物、β‑丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三氟乙酰三肽‑2、棕榈酰三肽‑1、五肽‑3、对羟基苯乙酮、1,2‑己二醇、1,2‑戊二醇、氨甲基丙醇、香精、脐带间充质干细胞外泌体,其他微量成分,其余为无菌水。本发明提供的抗衰老精华液通过内外协同的方法,滋养皮肤,修复肌肤屏障,抵抗衰老,改善肤质。
Description
技术领域
本发明涉及护肤品技术领域,更具体的说是涉及一种含有外泌体的抗衰老精华液及其制备方法。
背景技术
精华液作为一种常见护肤品,通常是通过添加含量较高的功效成分对皮肤进行修复、保养和改善。
外泌体是由活细胞分泌的40-200nm的小囊泡,携带各种蛋白质、mRNA、micro-RNA和脂质类物质,可以促进成纤维细胞增殖和胶原合成、角质化细胞再生,促进给皮肤细胞生长供给营养的血管生成,从而激活皮肤的自我修护系统,对皮肤问题进行自我修护,从皮肤细胞内部解决多种皮肤问题。
随着年龄的增长,肌肤也不可避免地出现衰老,而随之而来的就是肌肤出现皱纹,脸部出现下垂等现象。而一旦肌肤出现这些情况,则会给人以视觉上的衰老感,因此,抗皱抗衰是护肤的永恒主题。皮肤是一个多功能器官,随着皮肤年龄的增长,表皮层逐渐变薄,真-表皮连接区(DEJ)变扁平,真皮层逐渐变薄,并且胶原蛋白和弹性蛋白含量显著下降。胶原蛋白在皮肤中起着重要的作用,其含量对皮肤正常功能的维持起着重要作用。胶原蛋白为皮肤中主要的结构蛋白质,其主要为I型胶原蛋白(COL I),此外还含少量的III型或其他型胶原蛋白。I型和III型胶原蛋白(COL III)为皮肤提供强度和弹性。因此,真皮层的成纤维细胞及皮肤中胶原蛋白、弹性蛋白和细胞间基质蛋白的变化可以间接反映抗衰老产品的实际功效。
现有技术中对于抗皱抗衰产品基本都是添加人工合成的活性成分,例如肽类抗衰除皱成分中的乙酰化六肽(也称除皱肽),其本质上是通过阻断肌肉神经传递速度来抑制表情纹和细小皱纹的产生,而这类活性成分在使用后往往会产生依赖性,在不使用后肌肤即会恢复原状,甚至由于其本身对肌肤本身没有滋养调节作用,肌肤甚至会变差。同时,这类化学类活性成分从某种程度上来说也会对部分人群产生一定的刺激作用,造成皮肤肤质变差。
常见的抗衰老护肤成分有视黄醇,这种成分不稳定,时间长了容易分解,使用含有分解的视黄醇的护肤品会刺激皮肤,部分敏感肌肤人群肌肤不耐受,可能会出现干燥脱皮、瘙痒、红肿、刺痛等问题,因此不建议长期使用视黄醇类护肤品。还有一些含有植物多酚类原料的抗衰老护肤品,由于其稳定性差易被氧化,限制了其应用和效果。
因此,结合上述问题,提供一种内外协同的方法,滋养皮肤,含有外泌体的抗衰老精华液及其制备方法,是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种含有外泌体的抗衰老精华液及其制备方法,通过内外协同的方法,滋养皮肤,修复肌肤屏障,抵抗衰老,改善肤质。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
一种含有外泌体的抗衰老精华液,以总质量份为100份计,由下述质量份的组分组成:甘油1.0-5.0份、丙二醇1.0-5.0份、丁二醇1.0-5.0份、泛醇0.1-2.0份、银耳子实体提取物0.01-1.0份、可溶性蛋白多糖0.01-0.5份、水解透明质酸钠0.01-0.5份、卡波姆0.05-0.5份、透明质酸钠0.01-0.5份、烟酰胺0.2-2.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物0.2-2.0份、甘油葡糖苷0.1-2.0份、糖类同分异构体0.5-5.0份、马齿苋提取物0.5-3.0份、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺0.0005%-0.005份、三氟乙酰三肽-20.0005-0.005份、棕榈酰三肽-10.00005-0.0005份、五肽-30.0001-0.001份、对羟基苯乙酮0.1-1.0份、1,2-己二醇0.1-1.0份、1,2-戊二醇0.1-1.0份、氨甲基丙醇0.02-0.2份、香精0.005-0.1份、脐带间充质干细胞外泌体终浓度为100-1000ug/mL,其余为无菌水;还包括其他微量成分:苯氧乙醇0.0018-0.018%、苯甲酸钠0.0004-0.004%、柠檬酸0.0005-0.005%、柠檬酸钠0.0005-0.005%、葡聚糖0.000012-0.0005%、精氨酸0.000012-0.0005%、聚丙烯酸0.00005-0.0005%、聚山梨醇酯-200.0015-0.015%、氯化钠0.0001-0.001%、羟苯甲酯0.0002-0.002%。
一种所述的含有外泌体的抗衰老精华液的制备方法,具体步骤如下:
在搅拌釜内加入无菌水,向其中加入卡波姆、透明质酸钠、水解透明质酸钠、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖,升温并浸泡,然后搅拌,保持温度为50-70℃,1-3小时,降至室温加入剩余成分,搅拌30分钟至2小时,所得混合液检测合格后,无菌灌装封存,得到含有外泌体的抗衰老精华液。
优选的,所述升温至70-90℃浸泡1-3小时。
优选的,所述搅拌的转速均为30-200r/min。
经由上述技术方案可知,与现有技术相比,本发明的有益效果如下:
甘油/丁二醇/丙二醇作为化妆品行业的传统保湿材料,最大可以吸收自身重量一倍的水分,主要由于分子结构中含有多个羟基基团,它们可以通过氢键与水结合达到使角质层长效保湿的效果。
糖类同分异构体是通过特定的结合机制调节角质形成细胞的水合性能及细胞间的脂质屏障结构来维护角质层的含水量。糖类同分异构体是将可食用玉米糖转化为与人皮肤角质层中发现的碳水化合复合物(NMF)相似的糖复合物而制成的。它可与角质细胞角蛋白中赖氨酸的ε-氨基结合,这种独特的绑定机制使其作为保湿活性成分不易被冲走,持续改善皮肤水合作用,直到角质形成细胞自然老化脱落而终止。故糖类同分异构体可在短时间内促进角质层的水合作用和保水能力,改善皮肤脱屑问题。同时DNA检测表明,糖异构体可有效刺激和改善皮肤屏障中起关键作用的基因表达:通过刺激丝蛋白和透明质酸合成酶-3的基因表达,提高了NMF和透明质酸水平,改善皮肤的水合作用能力;通过刺激叶黄素和酸性鞘磷脂酶的基因表达,刺激神经酰胺的合成,增强角质层构造。
大分子量透明质酸钠通过在皮肤表层形成一层透明的水化膜,阻止皮肤内部水分蒸发从而达到保湿的目的,而水解透明质酸钠可以深入皮肤角质层,达到深层补水的功能。
银耳子实体提取物可以在皮肤表面形成柔软的保护膜,同时具有锁水功能,使皮肤更加湿润。
β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三氟乙酰三肽-2通过调节成纤维细胞自噬溶酶体的相关基因、分子伴侣基因及Nrf2表达,提高细胞自噬力;减少降解胶原蛋白等的MMPs生成;促进I型胶原蛋白及Syndecan生成,提高修复力。
棕榈酰三肽-1的序列是来自于Ⅰ型胶原蛋白链上的片段,在皮肤细胞更新修复胶原蛋白合成过程中起重要调控作用,促进胶原蛋白合成,减轻皱纹,紧致肌肤。棕榈酰修饰后其脂溶性加强,皮肤渗透性更佳。
是一种含有特殊序列五胜肽物质,分子量700Da以下,具有新型的独特修饰结构,使得该产品比其他类似序列的抗皱纹短胜肽,分子基团更小,更溶于皮脂,也因此更容易穿透表皮直达肌底层,唤醒肌肤的活力;它能够有效促进透明质酸、胶原蛋白和弹力纤维增生,减少肌肤细纹,提高肌肤的含水量及保湿度,增加皮肤厚度,增强肌肤紧致感和光泽度,还能促进表皮内的纤维母细胞产生胶原蛋白和玻尿酸等重要成分。
蛋白多糖是由氨基聚糖与蛋白质构成的共价结合物,由成纤维细胞分泌,广泛分布于真皮层中,其主要功能是作为胶原和弹性蛋白的埋质或填充的基质,起到填充、弹性、锁水、润滑等作用,同时还能促进胶原蛋白I的合成和表皮细胞的增殖和迁移。
本发明通过小分子的甘油、丁二醇、丙二醇、糖类同分异构体、中分子量的水解透明质酸钠、大分子的透明质酸钠和银耳子实体提取物构建立体的保湿护肤屏障,抵御外界对皮肤的刺激。通过甘油葡糖苷促进水通道蛋白合成,维持渗透平衡。通过外泌体搭配β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺、三氟乙酰三肽-2、棕榈酰三肽-1、五肽-3、可溶性蛋白多糖抑制基质金属蛋白酶活性,修复光老化细胞,促进I型胶原蛋白的表达,提升皮肤紧致度和弹性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为脐带间充质干细胞外泌体用于小鼠皮肤伤口治疗结果示意图;
图2附图为胶原蛋白结果定量图;
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明实施例所用外泌体来源:
由河北森朗泰禾生物科技有限公司提供提纯后的脐带间充质干细胞外泌体,且原料按照现行《中国药典》、《人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡》(T/CRHA 001-2021)和《细胞外泌体通用技术要求》(T/SZJCH 0003-2022)生物制品试验规程进行。
实施例1:
一种含有外泌体的抗衰老精华液,以总质量份为100份计,包含以下质量份组份:甘油1份、丙二醇2份、丁二醇3份、泛醇1份、银耳子实体提取物0.5份、可溶性蛋白多糖0.1份、水解透明质酸钠0.2份、卡波姆0.3份、透明质酸钠0.2份、烟酰胺1份、二裂酵母发酵产物溶胞物2份、甘油葡糖苷2份、糖类同分异构体0.5份、马齿苋提取物1份、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺0.001份、三氟乙酰三肽-20.005份、棕榈酰三肽-10.0005份、五肽-30.001份、对羟基苯乙酮0.8份、1,2-己二醇1份、1,2-戊二醇0.7份、氨甲基丙醇0.1份、香精0.1份,其他微量成分:苯氧乙醇0.0018-0.018%、苯甲酸钠0.0004-0.004%、柠檬酸0.0005-0.005%、柠檬酸钠0.0005-0.005%、葡聚糖0.000012-0.0005%、精氨酸0.000012-0.0005%、聚丙烯酸0.00005-0.0005%、聚山梨醇酯-200.0015-0.015%、氯化钠0.0001-0.001%、羟苯甲酯0.0002-0.002%,脐带间充质干细胞外泌体终浓度为100ug/mL,其余为无菌水。
将搅拌釜内加入无菌水,向其中加入卡波姆、透明质酸钠、水解透明质酸钠、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖,升温至70℃浸泡3小时,然后搅拌,转速100r/min,温度60℃,1小时,降至室温加入剩余成分,搅拌,转速100r/min,30分钟,所得混合液检测合格后,无菌灌装封存,得到含有外泌体的抗衰老精华液。
实施例2:
一种含有外泌体的抗衰老精华液,以总质量份为100份计,包含以下质量份组份:甘油2份、丙二醇1份、丁二醇4份、泛醇2份、银耳子实体提取物0.4份、可溶性蛋白多糖0.2份、水解透明质酸钠0.3份、卡波姆0.4份、透明质酸钠0.1份、烟酰胺2份、二裂酵母发酵产物溶胞物1份、甘油葡糖苷1份、糖类同分异构体1份、马齿苋提取物1份、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺0.0005份、三氟乙酰三肽-20.003份、棕榈酰三肽-10.0004份、五肽-30.0005份、对羟基苯乙酮0.6份、1,2-己二醇0.8份、1,2-戊二醇0.2份、氨甲基丙醇0.2份、香精0.05份,其他微量成分:苯氧乙醇0.0018-0.018%、苯甲酸钠0.0004-0.004%、柠檬酸0.0005-0.005%、柠檬酸钠0.0005-0.005%、葡聚糖0.000012-0.0005%、精氨酸0.000012-0.0005%、聚丙烯酸0.00005-0.0005%、聚山梨醇酯-200.0015-0.015%、氯化钠0.0001-0.001%、羟苯甲酯0.0002-0.002%,脐带间充质干细胞外泌体终浓度为300ug/mL,其余为无菌水。
将搅拌釜内加入无菌水,向其中加入卡波姆、透明质酸钠、水解透明质酸钠、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖,升温至80℃浸泡2小时,然后搅拌,转速30r/min,温度50℃,2小时,降至室温加入其它成分,搅拌,转速30r/min,2小时,所得混合液检测合格后,无菌灌装封存,得到含有外泌体的抗衰老精华液。
实施例3:
一种含有外泌体的抗衰老精华液,以总质量份为100份计,包含以下质量份组份:甘油5份、丙二醇1份、丁二醇4份、泛醇0.5份、银耳子实体提取物0.3份、可溶性蛋白多糖0.2份、水解透明质酸钠0.1份、卡波姆0.5份、透明质酸钠0.2份、烟酰胺0.5份、二裂酵母发酵产物溶胞物1份、甘油葡糖苷0.5份、糖类同分异构体2份、马齿苋提取物2份、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺0.0002份、三氟乙酰三肽-20.004份、棕榈酰三肽-10.0003份、五肽-30.0005份、对羟基苯乙酮0.7份、1,2-己二醇0.6份、1,2-戊二醇0.3份、氨甲基丙醇0.1份、香精0.04份,其他微量成分:苯氧乙醇0.0018-0.018%、苯甲酸钠0.0004-0.004%、柠檬酸0.0005-0.005%、柠檬酸钠0.0005-0.005%、葡聚糖0.000012-0.0005%、精氨酸0.000012-0.0005%、聚丙烯酸0.00005-0.0005%、聚山梨醇酯-200.0015-0.015%、氯化钠0.0001-0.001%、羟苯甲酯0.0002-0.002%,脐带间充质干细胞外泌体终浓度为500ug/mL其余为无菌水。
将搅拌釜内加入无菌水,向其中加入卡波姆、透明质酸钠、水解透明质酸钠、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖升温至90℃浸泡1小时,然后搅拌,转速30r/min,温度70℃,2小时,降至室温加入其它成分,搅拌,转速100r/min,1小时。
实施例4
一种含有外泌体的抗衰老精华液,以总质量份为100份计,包含以下质量份组份:甘油3份、丙二醇1份、丁二醇3份、泛醇0.3份、银耳子实体提取物0.1份、可溶性蛋白多糖0.1份、水解透明质酸钠0.1份、卡波姆0.3份、透明质酸钠0.1份、烟酰胺0.7份、二裂酵母发酵产物溶胞物1.5份、甘油葡糖苷0.8份、糖类同分异构体1份、马齿苋提取物2份、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺0.0002份、三氟乙酰三肽-20.005份、棕榈酰三肽-10.0004份、五肽-30.0005份、对羟基苯乙酮0.9份、1,2-己二醇0.3份、1,2-戊二醇0.2份、氨甲基丙醇0.1份、香精0.05份,其他微量成分:苯氧乙醇0.0018-0.018%、苯甲酸钠0.0004-0.004%、柠檬酸0.0005-0.005%、柠檬酸钠0.0005-0.005%、葡聚糖0.000012-0.0005%、精氨酸0.000012-0.0005%、聚丙烯酸0.00005-0.0005%、聚山梨醇酯-200.0015-0.015%、氯化钠0.0001-0.001%、羟苯甲酯0.0002-0.002%,脐带间充质干细胞外泌体终浓度为1000ug/mL,其余为无菌水。
将搅拌釜内加入无菌水,向其中加入卡波姆、透明质酸钠、水解透明质酸钠、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖,升温至90℃浸泡1小时,然后搅拌,转速150r/min,温度70℃,1小时,降至室温加入其它成分,搅拌,转速150r/min,3小时,所得混合液检测合格后,无菌灌装封存,得到含有外泌体的抗衰老精华液。
实施例5
具体实施步骤描述如下:
步骤(1)小鼠皮肤伤口实验模型和治疗
6-8周龄雄性BALB/c小鼠(北京维通利华实验动物有限公司),接收小鼠后适应2周。将小鼠随机分为5组:盐水组,本底组,药物组1,药物组2,药物组3,药物组4,每组各3只,药物组1-4对应用药实施例1-4所得精华液。第0天5%水合氯醛麻醉小鼠,用皮肤打孔器在小鼠背部创造2个直径10毫米的圆形伤口,每天在伤口涂抹对应的药物剂型一次,每个伤口100微升,覆盖整个伤口,连续7天,之后停药观察7天。实验期间每2天拍照记录伤口变化。在第15天牺牲小鼠,取伤口周围及新生皮肤组织,4%多聚甲醛固定,待下一步分析。
步骤(2)胶原蛋白增生分析
皮肤组织在4%多聚甲醛中固定24小时,连续脱水浸蜡:75%乙醇4小时,85%乙醇2小时,90%乙醇2小时,95%乙醇1小时,无水乙醇30分钟,二甲苯Ⅰ10分钟,二甲苯Ⅱ10分钟,65℃石蜡Ⅰ1小时,65℃石蜡Ⅱ1小时,65℃石蜡Ⅲ1小时,石蜡包埋,制作5微米厚的组织切片。然后进行马松三色染色(Masson染色,索莱宝,货号:G1340)。步骤如下:脱蜡剂脱蜡2次,每次5分钟;用100%、95%、80%和60%乙醇连续复水,每次1分钟;用蒸馏水浸泡组织3次,每次小于1分钟;取等量weigert染液A和weigert染液B混合,成为weigert铁苏木素染液,不可预先配制后放置;用weigert铁苏木素染液染色5分钟;酸性乙醇分化液分化10秒,水洗;Masson蓝化液反蓝3分钟,水洗,蒸馏水浸泡1分钟;丽春红品红染液染色5分钟;按蒸馏水:弱酸溶液=2:1配制弱酸工作液,用配好的弱酸工作液洗1分钟;磷钼酸溶液洗2分钟,弱酸工作液洗1分钟;苯胺蓝染液染色2分钟,弱酸工作液洗1分钟;95%乙醇脱水3秒,无水乙醇脱水3次,每次5秒;脱蜡剂透明3次,每次1分钟,中性树胶封片。结果判读:胶原纤维呈蓝色,细胞浆、肌肉、红细胞呈红色,细胞核呈蓝黑色。
根据图1及图2结果显示:含有外泌体存在的情况能促进皮肤的胶原蛋白增生,且在外泌体含量在300ug/mL(药物组2)与500ug/mL时(药物组3)效果相较于本底组有显著差异(*P<0.05;#P<0.01)。
步骤(3)对实施例1-4进行稳定性测定
通过对实施例1-4进行稳定性测试,其配方在48℃加速试验,高低温冷冻循环试验,和4℃低温试验条件下显示了良好的稳定性。如表1所示。
表1实施例1-4外泌体精华稳定性测试
产品在各种加速条件测试下,稳定性良好,说明产品可以满足货架保质期的需求。化妆品稳定性测试是保证产品保持良好质量的一个重要环节,通过对稳定性的考察,用于在一定保藏条件下,特别是预测产品生命周期内的质量延续性,以提示相应的货架有效期,维持产品的有效、安全。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述,每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处,各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (4)
1.一种含有外泌体的抗衰老精华液,其特征在于,以总质量份为100份计,由下述质量份的组分组成:甘油1.0-5.0份、丙二醇1.0-5.0份、丁二醇1.0-5.0份、泛醇0.1-2.0份、银耳子实体提取物0.01-1.0份、可溶性蛋白多糖0.01-0.5份、水解透明质酸钠0.01-0.5份、卡波姆0.05-0.5份、透明质酸钠0.01-0.5份、烟酰胺0.2-2.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物0.2-2.0份、甘油葡糖苷0.1-2.0份、糖类同分异构体0.5-5.0份、马齿苋提取物0.5-3.0份、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酸苄胺0.0005%-0.005份、三氟乙酰三肽-20.0005-0.005份、棕榈酰三肽-10.00005-0.0005份、五肽-30.0001-0.001份、对羟基苯乙酮0.1-1.0份、1,2-己二醇0.1-1.0份、1,2-戊二醇0.1-1.0份、氨甲基丙醇0.02-0.2份、香精0.005-0.1份、脐带间充质干细胞外泌体终浓度为100-1000ug/mL,其余为无菌水;还包括其他微量成分:苯氧乙醇0.0018-0.018%、苯甲酸钠0.0004-0.004%、柠檬酸0.0005-0.005%、柠檬酸钠0.0005-0.005%、葡聚糖0.000012-0.0005%、精氨酸0.000012-0.0005%、聚丙烯酸0.00005-0.0005%、聚山梨醇酯-200.0015-0.015%、氯化钠0.0001-0.001%、羟苯甲酯0.0002-0.002%。
2.一种权利要求1所述的含有外泌体的抗衰老精华液的制备方法,其特征在于,具体步骤如下:
在搅拌釜内加入无菌水,向其中加入卡波姆、透明质酸钠、水解透明质酸钠、银耳子实体提取物、可溶性蛋白多糖,升温并浸泡,然后搅拌,保持温度为50-70℃,1-3小时,降至室温加入剩余成分,搅拌30分钟至2小时,所得混合液检测合格后,无菌灌装封存,得到含有外泌体的抗衰老精华液。
3.根据权利要求2所述的一种含有外泌体的抗衰老精华液的制备方法,其特征在于,所述升温至70-90℃浸泡1-3小时。
4.根据权利要求2所述的一种含有外泌体的抗衰老精华液的制备方法,其特征在于,所述搅拌的转速均为30-200r/min。
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