JP2014060995A - メチシリン耐性微生物の検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】セファロスポリン群(特に第二世代または第三世代)より選択される抗生物質と該微生物の増殖のための栄養分、及び微生物における活性酵素による加水分解後に発色団を放出する色原性物質を含む、メチシリン耐性微生物を検出するための新規固体培地。前記微生物はブドウ球菌、特に黄色ブドウ球菌である。
【選択図】なし
Description
ロスポリン系薬剤群、特に第二世代または第三世代のセファロスポリン系薬剤より選択さ
れる抗生物質、および前記微生物において活性のある酵素による加水分解後に放出される
発色団を有する色原性物質(chromogenic agent)を含む、培地に関する。
ylococcus aureus)(MRSA)の系統的な検出は重要である。
れるが、それによる感染症を治療するのはより困難である上に費用もかかる。これは、メ
チシリン耐性がすべてのβ-ラクタム系抗生物質に対する耐性を付与し、この耐性が非常
に多くの場合、他の多くの主要な抗ブドウ球菌抗生物質に対する耐性を伴うという事実に
起因する(Lyon and Skurry, Microbiol. Rev. 51; 88-134(非特許文献1))。
は、ある種のMRSA株、特に細菌集団がメチシリンに対する絶対的な耐性を有する細菌を非
常に低い割合でしか含まない異種混交性の菌株(104個または108個の細菌のうち1つが耐
性を発現する)をほとんど検出できないため、今では行われないことが多い。この方法で
は偽陰性の結果が多く得られる。
、ある種の菌株を検出することは困難である。
程度有効に機能するために、ある特定の増殖培地のみを用いることもできる。その結果と
して、使用者に推奨される培地には、例えば、ミュラー-ヒントン寒天培地(Muller Hint
on Agar)またはマンニトール塩寒天培地(Mannitol Salt Agar)の派生物がある。しか
し残念ながら、使用者にとって、これらの培地は黄色ブドウ球菌(S. aureus)種を比較
的識別しないため、感度および特異性はさらに低くなる。
の(例えば、マンニトール塩寒天培地に由来)または極めて識別性の高いCHROMagar Stap
h aureusをベースとして提唱されているが、メチシリン耐性との相関はそれほど高くない
ため、偽陽性および偽陰性が余分に生じる。
抗生物質を染み込ませたペーパーディスクを、被験菌を播いた寒天培地の上に置くことか
らなる。各ディスクの周囲の寒天内に抗生物質の濃度勾配が形成される。インキュベーシ
ョン後に各ディスクの周囲に阻止円(inhibition halo)が生じ、それにより、MIC(最小
阻止濃度、微生物増殖が検出されない最小濃度)の値を反映する直径を測定することが可
能になる。
ウ球菌、とりわけ黄色ブドウ球菌を検出するための寒天培地に関する。
ファロスポリンのファミリーに属する抗生物質の性質と組み合わせて利用し、それによっ
てメチシリン耐性微生物を検出することが可能になる。
生物の増殖のための栄養分に加えて、第二世代または第三世代のセファロスポリン系薬剤
の群より選択される少なくとも1つの抗生物質、および前記微生物において活性のある酵
素による加水分解後に発色団を放出する色原性物質を含む培地に関する。
生物の性質を明確にすることが可能であるため、メチシリン耐性微生物の直接検出を可能
にする。したがって、本発明による培地上で増殖する微生物の性質を確認するための補足
的な段階は必要でない。
出することを可能にするが、先行技術の方法の大半は、約104〜105個の細菌を寒天上に乗
せたものを用いる。本発明による培地は、患者からの試料から直接用いることもでき、ま
たは集積期(enriching phase)の後に用いることもできる。
生した式を有するセファロスポリン系抗生物質を指すことを意図している:
式中、R2はH基、アセトキシメチル基、メチルチオテトラゾール基、ジメチルアミノエチ
ルチオテトラゾール基、トリアジン基、アセトアミノピリジン(ピリジニウム)基もしく
はカルバモイル基により置換されたピリジニウム基、シクロペントピリジニウム基または
チオメチルアセトキシチアゾール基であり、R1はアミノ-2-チアゾール複素環、α-ピペラ
ジンジオンまたはα-スルホフェニルであり、R4はH基またはα-メトキシ遊離基である。
薬剤の作用機序(細菌構造から分子の構造へ)(Mecanisme d'Action des Beta-lactamin
es)(de la structure bacterienne a la structure de la molecule)[Mechanism of a
ction of beta-lactams (from bacterial structure to the structure of the molecule
]」, 1986, Roussel(Paris)publisher, chapter III, pages 47-62, and chapter IV,
pages 63-68)に、およびRichmondによる論文(「β-ラクタム系抗生物質(治療薬とし
ての使用の背景)(Beta-lactam antibiotics (the background to their use as therap
eutic aents)」, Hoechst Aktiengesellschaft, D-6230 Frankfurt(Main)80 publishe
r, 1981, chapter 3, pages 55-65)に記載されている。
世代セファロスポリン系薬剤よりも優れた効果を示す上にβ-ラクタマーゼによる分解に
対してより優れた抵抗性を示すこと、および第三世代セファロスポリン系薬剤はグラム陰
性菌に対してさらに広い作用スペクトルを有することが指摘される。
できる:ロラカルベフ、セファクロール、セフロキシム、セフプロジル、セフォキシチン
(セフォキシタン(cefoxitan))、セファマンドール、セフォチアン(cefotian)、セ
フォテタン、セフメタゾール、セフォシニド(cefocinide)、セフォラニド、セフポドキ
シム、セフィキシム、セフォタキシム、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフタジジ
ム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォペラゾン、セフェピム、セフピロム、セフス
ルフォニド(cefsulfonide)、セフタメート(cefetamete)、セフチブテン(ceftibuten
e)、モキサラクタム、ラタモキセフおよびフロモキセフ、特に塩(ナトリウム塩)の形
態にあるもの。当業者はこのような化合物のリストを入手することができ、これは特にイ
ンターネット上のサイトwww.biam2.orgまたはwww.fpnotebook.comで入手可能である。
セフォテタン、セフメタゾール、セフブトペラゾン(cefbutperazone)、セフミノクス)
の群およびオキサセフェム系薬剤(モキサラクタム、ラタモキセフまたはフロモキセフ)
の群より選択される。
1.5〜30mg/lであり、特に1.5〜15mg/lである。少数のルーチン的な試験により、当業者
はこれを、想定している抗生物質に対する、想定している微生物のMIC(最小阻止濃度、
微生物増殖が検出されない最小濃度)の関数として調整することができる。本発明の培地
の組成の一部を構成しうる抗生物質のうちいくつかは、前記培地に対してある特定の性質
を付与しうることに注目すべきである。例えば、セフォキシチンまたはセフメタゾールは
、前記培地に対して、少なくとも2カ月にわたる明確な安定性を付与する。
後者が48℃の温度にある時)に添加して調製された本発明による培地で観察されている。
本発明による培地の安定性は、前記培地を、セフメタゾールを2.5mg/lの濃度で培地(後
者が48℃の温度にある時)に添加して調製した場合には、少なくとも5カ月間に及んだ。
の全体を通じて同じ確実さで、メチシリン耐性微生物、特に黄色ブドウ球菌の選択的な検
出を可能にする能力を表すことを意図している。
度下においても、その抗生物質活性を保つ能力を示すことにも注目すべきである(その耐
性は121℃でも本発明者らによって実証されている)。
能であり、これにより、培地の調製のために無菌下で行わなければならない操作が大幅に
限定される。フロモキセフはこのため、調製しようとする培地に加熱前に混入することが
でき、それによってその調製が容易になる。この利点は、このような培地を調製する必要
のある任意の個人による作業を、その分野での経験にかかわらず、容易にすることが可能
であるため、決してわずかではない。
記載されたように、5-ブロモ-6-クロロ-3-インドキシルリン酸および5-ブロモ-4-クロロ-
3-インドキシルグルコシドからなる群より選択される色原性物質を用いることが好ましい
。
ited)」マニュアル、Wade Road, Basingstoke, Hampshire, RG24 0PW, Englandに詳細に
記載されている。これは例えば、本質的には酵母エキス、ペプトンおよび寒天を基にした
培地である「Nutrient Agar Oxoid CM3」であってもよい。
および5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルグルコシドの両方を含む。
-クロロ-3-インドキシルリン酸、好ましくは0.01〜0.20g/lの5-ブロモ-4-クロロ-3-イン
ドキシルグルコシド、好ましくは0.01〜0.20g/lの5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルガ
ラクトシド、好ましくは0.01〜0.20g/lの5-ブロモ-4-クロロ-3インドキシルグルクロニ
ドを含む。
なくとも1つをも含む:5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルガラクトシドおよび5-ブロモ-
4-クロロ-3-インドキシルグルクロニド。
ミンは実際、黄色ブドウ球菌を抑制せずに表皮ブドウ球菌を抑制することを可能にし、用
いる濃度は0.01〜0.10g/lであることが好ましいと考えられる。
方に対して耐性のある微生物の検出を目的として、ンコマイシン、テイコプラニンおよび
アボパルシンならびにそれらの混合物からなる群より選択される糖ペプチド抗生物質も含
む。おおよそ5mg/1〜50mg/lのこれらの抗生物質、より詳細には5mg/l〜30mg/l、10mg
/l〜30mg/lおよび約25mg/lを用いることができる。
を示した。すなわち、塩化ナトリウムを添加し、オキサシリンを抗生物質として用いるメ
チシリン耐性黄色ブドウ球菌を検出するための培地とは異なり、本発明の培地は、ナトリ
ウム濃度が3%未満で約2〜2.5%と等しくても機能を果たす。インキュベーション条件は
、培地中の塩化ナトリウムの量に応じて調整することができる(インキュベーション時間
、高温または低温など)。
関する。
―本発明による培地を前記試料または前記試料に由来する接種物に接種する段階、
―前記培地を前記微生物の増殖が可能な条件下でインキュベートする段階、
―有色コロニーの存在により、前記培地上の、前記メチシリン耐性微生物の存在を検出
する段階、
より構成される段階を含む方法にも関する。
の温度でのインキュベーションが一般に用いられる。
い、またはより長いインキュベーション時間を用いることが可能である。
に検出することを可能にする。本発明の文脈において選択した抗生物質と色原性物質の組
み合わせにより、実際に、偽陽性および偽陰性の数を減らし、それによって補足的な分析
を行う必要性を減らすことが可能である。
実施例1
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌を検出するための、本発明による培地の組成:
ペプトンおよび酵母エキス 40g/l
NaCl 25g/l
5-ブロモ-6-クロロ-3-インドキシルリン酸 0.10g/l
5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルグルコシド 0.05g/l
5-ブロモ-4-クロロ-3インドキシルガラクトシド 0.05g/l
5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルグルクロニド0.05g/l
デフェロキサミン 0.050g/l
寒天 15g/l
レーブ処理後に、培地が固形化する前(温度が約45℃の時点)に添加する。
ロモ-6-クロロ-3-インドキシルリン酸および5-ブロモ-4-クロロ-3インドキシルグルコシ
ドを含み、その上、接種物中に存在する可能性のある他の微生物を染色するための5-ブロ
モ-4-クロロ-3-インドキシルガラクトシドおよび5ブロモ-4クロロ-3-インドキシルグルク
ロニドも含む。
CHROMagar Staph aureus培地(CHROMagar社, 4, Place du 18 Juin 1940, 75006 Paris F
ranceより販売)上でのメチシリン耐性黄色ブドウ球菌株の増殖に関する試験
AR4295 MetiS:メチシリン感受性株
AR4297 MetiR:(均一な)メチシリン耐性株
MRhet:(異種混交的な)メチシリン耐性株
Z252:メチシリン耐性株、均一、耐性は低レベル
+=コロニー増殖;-=増殖せず;*=微小コロニー
リ皿に対して、皿に画線塗布を行うことによって細菌培養物を接種する。
球菌であることが確かめられる。
異種混成的な株または耐性レベルの低い株を含め、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌を直接
的に検出することを可能にする。
Claims (14)
- メチシリン耐性微生物を検出するための培地であって、該微生物の増殖のための栄養分
に加えて、第二世代または第三世代のセファロスポリン系抗生物質の群より選択される少
なくとも1つの抗生物質、および該微生物において活性のある酵素による加水分解後に発
色団(chromophore)を放出する色原性物質(chromogenic agent)を含む培地。 - 微生物がブドウ球菌、特に黄色ブドウ球菌であることを特徴とする、請求項1記載の培
地。 - 色原性物質が5-ブロモ-6-クロロ-3-インドキシルリン酸および5-ブロモ-4-クロロ-3-イ
ンドキシルグルコシドからなる群より選択される、請求項2記載の培地。 - 抗生物質がセファマンドールであることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項記載
の培地。 - 抗生物質がセファマイシン系薬剤およびオキサセフェム系薬剤より選択されることを特
徴とする、請求項1〜3のいずれか一項記載の培地。 - 抗生物質がセフォキシチン、セフメタゾール、モキサラクタム、セフォテタンおよびフ
ロモキセフからなる群より選択されることを特徴とする、請求項5記載の培地。 - 5-ブロモ-6-クロロ-3-インドキシルリン酸および5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルグ
ルコシドを含むことを特徴とする、請求項2〜6のいずれか一項記載の培地。 - 以下の2つの色原性物質のうち少なくとも1つをさらに含むことを特徴とする、請求項1
〜7のいずれか一項記載の培地:5-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルガラクトシドおよび5
-ブロモ-4-クロロ-3-インドキシルグルクロニド。 - バンコマイシン、テイコプラニンおよびアボパルシンならびにそれらの混合物からなる
群より選択される抗生物質をさらに含むことを特徴とする、請求項2〜8のいずれか一項記
載の培地。 - 塩化ナトリウムの濃度が3%未満であることを特徴とする、請求項2〜9のいずれか一項
記載の培地。 - 抗生物質の濃度が0.5〜50mg/lであることを特徴とする、請求項1〜10のいずれか一項
記載の培地。 - 色原性物質の濃度が0.01〜0.5g/lであることを特徴とする、請求項1〜11のいずれか一
項記載の培地。 - メチシリン耐性微生物を検出するための、請求項1〜12のいずれか一項記載の培地の使
用。 - 試料中のメチシリン耐性微生物を検出する方法であって、
請求項1〜12のいずれか一項記載の培地に該試料を接種する段階、
該培地を該微生物の増殖が可能な条件下でインキュベートする段階、
有色コロニーの存在により、該培地上の、該メチシリン耐性微生物の存在を検出する段
階、
より構成される段階を含む方法。
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