JP2013541560A - 組成物、抗体、喘息診断方法、及び抗体の調製方法 - Google Patents
組成物、抗体、喘息診断方法、及び抗体の調製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013541560A JP2013541560A JP2013535031A JP2013535031A JP2013541560A JP 2013541560 A JP2013541560 A JP 2013541560A JP 2013535031 A JP2013535031 A JP 2013535031A JP 2013535031 A JP2013535031 A JP 2013535031A JP 2013541560 A JP2013541560 A JP 2013541560A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- monohalotyrosine
- protein
- bromotyrosine
- amount
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6806—Determination of free amino acids
- G01N33/6812—Assays for specific amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/12—Pulmonary diseases
- G01N2800/122—Chronic or obstructive airway disorders, e.g. asthma COPD
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【選択図】 図1
Description
本願は、2010年10月19日に出願した米国仮出願第61/394,640号及び2011年4月28日に出願した米国仮出願第61/480,154号に対して優先権を主張し、これらの各米国仮出願の記載内容はすべて本明細書に援用される。
(政府権利声明)
本開示は、抗体の調製及びその使用に関する。本開示に特有な実施形態は、モノハロチロシン及びモノハロチロシン部分を有するタンパク質に対して親和性を有する抗体の調製に関連する。
ウシ血清アルブミン(BSA)を、Jackson ImmunoResearch Laboratoryから購入した。3−ブロモ−4−ヒドロキシ−安息香酸を、Indofine Chemical Company Incから購入した。3,5−ジブロモ−4−ヒドロキシベンズアルデヒド、3,5−ジクロロ−4−ヒドロキシ安息香酸、3,4−ジヒドロキシ安息香酸、3−ニトロチロシン、及びL−チロシンを、Sigma−Aldrichから購入した。キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)、腹水調整試薬、Melonモノクローナル抗体精製キット、及びビオチン化キットEZ−リンクスルホ−NHS−ビオチンを、Pierce−Thermo Scientific(イリノイ州ロックフォード)から購入した。次亜臭素酸ナトリウム溶液を、Fisher−Thermo Scientificから購入した。23ELISA用のキャプチャ抗体を、補助データに記載されているようにして購入した。
抗原の調製については、"A Simple Modified Carbodiimide Method for Conjugation of Small−Molecular−Weight Compounds to Immunoglobulin G with Minimal Protein Crosslinking", Minh−Tam B. Davis and James F. Preston, Analytical Biochemistry 116, 402−407 (1981)(この内容は本明細書に援用される)に説明されるような、カルボジイミド法の修正後プロトコルが用いられた。簡単に説明すると、0.12mMの3−Br−HBAが、2.5mlのメタノールに溶解されると共に、2分間室温において2.5mlの20mMリン酸カリウムバッファ(pH5.0)において0.75mMのEDCと組み合わされた。次にこの5ml溶液を、200mMリン酸カリウムバッファ(pH8.0)において8mlの2.5mg/mlKLHと混合し、室温で一晩インキュベートした。残っているEDC及び3−Br−HBAは、4℃で120mM PBSに対する透析により除去された。透析後、沈殿物を4℃で2時間かけて50,000gで遠心分離により除去した。pH8.0の200mMリン酸カリウムバッファにおいて、タンパク質濃度について280nmで吸光度を測定すると共に臭素化については310nmで測定することにより、修飾抗原を定量した。修飾KLHを、等分し−80℃で保存した。マウスを免疫して、血清を収集し、ハイブリドーマ細胞株及びそれらの上清、腹水生産、及び抗体アイソタイピングを、Washington State University Monoclonal Antibody Center(Pullman)において行った。BTK−94C抗体を、EZ−リンクスルホ−NHS−LC−ビオチン化キット(Pierce、ロックフォード、イリノイ)を使用し、製造者のプロトコルにしたがって、ビオチン化した。
初期ビオチン信号を、ビオチニルチラミドと組み合わせて西洋わさびペルオキシダーゼ(Jackson ImmunoResearch Laboratories)に結合したヤギ抗マウスlgMにより生成した以外は、サンドイッチELISAマイクロアレイを前述したように実施した。簡潔に説明すると、遠心分離によって如何なる微粒子をも除去した後、唾液標本をPBSにおいて0.1%BSA中で5倍に希釈した。各希釈サンプル/チップの25μlを、3つのチップにおいて分析した。各チップが、各キャプチャ抗体に対する4つの複製スポットを含むようにすることによって、23ELISAのそれぞれについて合計12複製物/サンプルが存在するようにした(例えば下記の表1参照)。
ELISAマイクロアレイチップのプリント及び処理については、"An Internal Calibration Method for Protein−Array Studies", Don Simone Daly, et al, Statistical Applications in Genetics and Molecular Biology, Volume 9, Issue 1, 2010, Article 14(この内容は本明細書に援用される)において、以前に詳述した。緑蛍光タンパク質(100pg/mL)を、各唾液サンプルにスパイクし、チップにおいて別々のキャプチャ及び検出抗体を用いたサンドイッチELISAを使用して分析した。この分析データを用いて、他のELISAからのデータを正規化し、この正規化では、ProMAT Calibratorというカスタムのバイオインフォマティクスプログラムを用いた。このプログラムは、我々がこの目的のために特別に開発したもので、"An Internal Calibration Method for Protein−Array Studies", Don Simone Daly, et al, Statistical Applications in Genetics and Molecular Biology, Volume 9, Issue 1, 2010, Article 14、及び"Preparation and Characterization of a Polyclonal Antibody Against Brominated Protein", Yasuhiro Kambayashi, et al., J. Clin. Biochem. Nutr. 44, 95−103, January 2009(これらそれぞれの内容のすべてが本明細書に援用される)に説明されている。ProMAT Calibratorは、www.pnl.gov/statistics/ProMAT/において自由に利用できる。実質上マイクロアレイチップを処理する手順は、単一検出抗体のみを使用した以外は、"An Internal Calibration Method for Protein−Array Studies", Don Simone Daly, et al, Statistical Applications in Genetics and Molecular Biology, Volume 9, Issue 1, 2010, Article 14において以前に報告された手順と同じである。
一元配置分散分析(Chambers,1992)を用いて、統計比較を行った。統計的に有意な場合、Tukey's Honest Significant Difference法を用いて、どの喘息グループがブロモチロシンの高いレベルを有しているかを定義した。確率値p≦0.05を用いて、すべての分析についての統計的有意性を表現した。
ハロチロシンのモノクローナル抗体の評価
次亜臭素酸塩が、タンパク質チロシンと反応することにより、3−ブロモチロシンと3、5−ジブロモチロシン修飾との両方を生産する(図1B)。手順を用いて、3−臭素化チロシン又は関連するタンパク質修飾を含む抗原を発現させた。Aは、タンパク質への3−ブロモ安息香酸の結合であり、これはマウス免疫に用いたKLH抗原を生成するために使用された。Bは、どのようにして次亜臭素酸ナトリウムが、生体内でチロシン残基を改変すると考えられているかを示す図である。この同じ化学的性質を用いて、修飾BSA抗原を生成した。当該修飾BSA抗原は、ハイブリドーマ細胞株のスクリーニングに使用された。3、5−ジブロモチロシン修飾は生体外反応について優勢である一方、3−ブロモチロシンは、生体内で優勢である。したがって、生体外臭素化抗原に対して精製された以前の抗体が二臭化チロシン修飾のみを認識するという事実から、この障害が抗原を反映している可能性があることが示唆される。抗原については、3−ブロモチロシンを模倣するタンパク質修飾、すなわちKLHに付加された3−ブロモ−4−ヒドロキシ−安息香酸が用いられた。このようにして、かかる人工抗原が、生理学的関連臭素化タンパク質修飾を認識する抗体を生産したことが確認された。修飾KLH抗原で免疫したマウスの血清から回収された抗体が認められ、この抗体は臭素化BSAと結合する一方で、未修飾BSAとは結合しなかった(データは示されない)。これは、ブロモチロシン模倣体の結果、生物学的に関連するタンパク質修飾と反応する抗体が生じたことを示している。
BTK−94Cのアイソタイピングによって、これがIgM抗体であり、濃度依存的に臭素化BSAと反応したことが示された(図3)。図3では、臭素化BSAで生産された信号が、BTK−94C抗体の濃度と相関している。この細胞株からの腹水も、タンパク質マイクロアレイ分析を用いて特異性及び交差反応性について分析した。ハイブリドーマ上清からの結果と一致しており(上記参照)、腹水で生産されたBTK−94C抗体は、臭素化及び塩素化BSAを結合する一方で、未修飾又はペルオキシ亜硝酸で処理されたBSAとの反応性は観察されなかった(データは示されない)。したがって、この抗体が優先的にハロゲン化タンパク質と反応することがさらに確認された。
この抗体により喘息患者における好酸球活性を評価することができるかを決定するために、ELISAマイクロアレイプラットフォームを利用し、このプラットフォームでは、BTK−94Cを唯一の検出抗体として用いた。このELISAチップには、喘息に関連する可能性のある抗原に対する23のキャプチャ抗体がプリントされた(補足データ参照)。これらキャプチャ抗原のうち、健常対照者と比べると、喘息患者において唾液標本中の高い好酸球数又は低い好酸球数と共にAGT、ICAM、PDGF、及びRANTESの臭素化レベルについて統計学的に有意な増加が観察された(図5)。
Claims (32)
- モノハロチロシンに対する結合親和性を有することを特徴とする抗体。
- 請求項1に記載の抗体において、前記モノハロチロシンはブロモチロシンであることを特徴とする抗体。
- 請求項1に記載の抗体において、前記モノハロチロシンは、クロロチロシンであることを特徴とする抗体。
- 請求項1に記載の抗体において、前記モノハロチロシンは、タンパク質の構成部分であることを特徴とする抗体。
- 請求項1に記載の抗体において、前記抗体は、ジハロチロシンに対する結合親和性も有することを特徴とする抗体。
- モノハロチロシンと結合した抗体を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項6に記載の組成物において、前記モノハロチロシンは、タンパク質の構成部分であることを特徴とする組成物。
- 請求項6に記載の組成物において、前記モノハロチロシンは、ブロモチロシン及び/又はクロロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする組成物。
- 3−ブロモ−4−ヒドロキシ−安息香酸部分を有するタンパク質を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項9に記載の組成物において、前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)であることを特徴とする組成物。
- 喘息の重症度を評価するための方法であって、該方法は、
モノハロチロシンに対する結合親和性を有する抗体を用いて患者の唾液を分析し、
タンパク質に結合した抗体の量を測定する、
ことを具備することを特徴とする方法。 - 請求項11に記載の方法において、前記測定することは、定性的及び/又は定量的の一方又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項11に記載の方法において、前記モノハロチロシンは、タンパク質の構成部分であることを特徴とする方法。
- 請求項11に記載の方法において、前記モノハロチロシンは、ブロモチロシン及び/又はクロロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項11に記載の方法であって、さらに、炎症量を決定するために結合抗体の量を相関させることを具備することを特徴とする方法。
- 請求項11に記載の方法であって、さらに、喘息発作への薬物反応をモニタするために結合抗体の量を用いることを具備することを特徴とする方法。
- 体液中の好酸球活性を決定するための方法であって、該方法は、
モノハロチロシンに対する結合親和性を有する抗体に対して体液を晒し、
好酸球活性を決定するために結合抗体の量を測定する、
ことを具備することを特徴とする方法。 - 請求項17に記載の方法において、前記体液は、唾液であることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法において、前記モノハロチロシンは、タンパク質の構成部分であることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法において、前記モノハロチロシンは、ブロモチロシン及び/又はクロロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法であって、さらに、炎症及び/又は薬物反応を決定するために結合抗体の量を相関させることを具備することを特徴とする方法。
- 抗体を調製するための方法であって、該方法は、
3−ブロモ−4−ヒドロキシ−安息香酸をタンパク質へ組み込むことにより抗原を形成し、
前記抗原により哺乳類宿主に免疫性を与え、
前記宿主から前記抗原に対する親和性を有する抗体を回収する、
ことを具備することを特徴とする特徴とする方法。 - 請求項22に記載の方法において、前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)であることを特徴とする方法。
- 請求項22に記載の方法において、前記抗体は、モノハロチロシンに対する結合親和性を有することを特徴とする方法。
- 請求項24に記載の方法において、前記モノハロチロシンは、ブロモチロシン及び/又はクロロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項22に記載の方法において、前記抗体は、タンパク質ハロチロシンに対する結合親和性を有することを特徴とする方法。
- 請求項26に記載の方法において、前記ハロチロシンは、モノハロチロシン及び/又はジハロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項27に記載の方法において、前記モノハロチロシンは、3−ブロモチロシン及び/又は3−クロロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項27に記載の方法において、前記ジハロチロシンは、3、5−ジブロモチロシン及び/又は3、5−ジクロロチロシンのうちの1つ又は両方であることを特徴とする方法。
- 請求項22に記載の方法であって、さらに、好酸球活性を決定するために体液に対して抗体を晒すことを具備することを特徴とする方法。
- 請求項22に記載の方法であって、さらに、炎症を決定するために体液に対して抗体を晒すことを具備することを特徴とする方法。
- 請求項22に記載の方法であって、さらに、モノハロチロシン及び/又はジハロチロシン部分を有するタンパク質の量を決定するために体液に対して抗体を晒すことを具備することを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US39464010P | 2010-10-19 | 2010-10-19 | |
US61/394,640 | 2010-10-19 | ||
US201161480154P | 2011-04-28 | 2011-04-28 | |
US61/480,154 | 2011-04-28 | ||
PCT/US2011/056848 WO2012141737A1 (en) | 2010-10-19 | 2011-10-19 | Compositions, antibodies, asthma diagnosis methods, and methods for preparing antibodies |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013541560A true JP2013541560A (ja) | 2013-11-14 |
Family
ID=45934645
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013535031A Pending JP2013541560A (ja) | 2010-10-19 | 2011-10-19 | 組成物、抗体、喘息診断方法、及び抗体の調製方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9546220B2 (ja) |
EP (1) | EP2630161A1 (ja) |
JP (1) | JP2013541560A (ja) |
CN (1) | CN103228675A (ja) |
BR (1) | BR112013009459A2 (ja) |
WO (1) | WO2012141737A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2630161A1 (en) | 2010-10-19 | 2013-08-28 | Battelle Memorial Institute | Compositions, antibodies, asthma diagnosis methods, and methods for preparing antibodies |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001500257A (ja) * | 1996-09-09 | 2001-01-09 | ワシントン ユニバーシティー | 診断法「b」 |
US20060166295A1 (en) * | 2002-07-01 | 2006-07-27 | James Woods | Method for determination of likelihood of occurrence of preterm labor in pregnant females |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6623981B2 (en) | 1998-01-27 | 2003-09-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Detection of patients at risk for developing integrin antagonist/agonist mediated disease states |
US6306576B1 (en) | 1999-02-19 | 2001-10-23 | Cleveland Clinic Foundation | Diagnostic methods for asthma |
US7780950B2 (en) * | 2002-01-02 | 2010-08-24 | The Cleveland Clinic Foundation | Systemic marker for monitoring anti-inflammatory and antioxidant actions of therapeutic agents |
EP2630161A1 (en) | 2010-10-19 | 2013-08-28 | Battelle Memorial Institute | Compositions, antibodies, asthma diagnosis methods, and methods for preparing antibodies |
-
2011
- 2011-10-19 EP EP11849902.9A patent/EP2630161A1/en not_active Withdrawn
- 2011-10-19 WO PCT/US2011/056848 patent/WO2012141737A1/en active Application Filing
- 2011-10-19 BR BR112013009459A patent/BR112013009459A2/pt active Search and Examination
- 2011-10-19 JP JP2013535031A patent/JP2013541560A/ja active Pending
- 2011-10-19 US US13/276,608 patent/US9546220B2/en active Active
- 2011-10-19 CN CN2011800574782A patent/CN103228675A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001500257A (ja) * | 1996-09-09 | 2001-01-09 | ワシントン ユニバーシティー | 診断法「b」 |
US20060166295A1 (en) * | 2002-07-01 | 2006-07-27 | James Woods | Method for determination of likelihood of occurrence of preterm labor in pregnant females |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6015006220; J.Clin.Biochem.Nutr. Vol.44,p.95-103, 200901 * |
JPN6015006223; Free Radical Biology and Medicine Vol.38,p.24-31, 2005 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103228675A (zh) | 2013-07-31 |
WO2012141737A1 (en) | 2012-10-18 |
EP2630161A1 (en) | 2013-08-28 |
US9546220B2 (en) | 2017-01-17 |
US20120094860A1 (en) | 2012-04-19 |
BR112013009459A2 (pt) | 2016-07-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7022969B2 (ja) | SARS-CoV-2感染症を診断するための方法および試薬 | |
TWI283749B (en) | Antibody pair screening methods | |
JP5710699B2 (ja) | オートタキシン測定による慢性肝疾患の検査方法および検査薬 | |
JP5543614B2 (ja) | プロガストリン及び肝臓病理 | |
US8399207B2 (en) | Monoclonal antibodies against osteopontin | |
JP6735005B2 (ja) | グリピカンエピトープおよびその使用 | |
WO2016104439A1 (ja) | 抗活性型gip抗体 | |
JP5252339B2 (ja) | Pad4及び抗pad4抗体の測定方法並びに関節リウマチの検出方法 | |
JP6027744B2 (ja) | ヒトインスリン測定方法及び測定試薬 | |
WO2020158858A1 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び対象におけるnashの検出方法 | |
KR101338517B1 (ko) | 인간 간-카르복실에스터라제 1을 특이적으로 인식하는 단일클론 항체, 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도 | |
JP2013541560A (ja) | 組成物、抗体、喘息診断方法、及び抗体の調製方法 | |
JP5553603B2 (ja) | 新規肝癌マーカー | |
WO2015064348A1 (ja) | 糖鎖不全ヒトIgA1ヒンジ部を認識するモノクローナル抗体及びその用途 | |
JP2008249618A (ja) | 外分泌障害診断薬 | |
US10060925B2 (en) | Miox antibody and assay | |
WO2024014426A1 (ja) | 筋炎/皮膚筋炎に伴うリスクを検出する方法 | |
CA2771954A1 (en) | Pneumonia biomarkers | |
EP4194054A1 (en) | Camelid antibodies for use in therapy and diagnosis | |
US20230228763A1 (en) | Process for direct readout of immunoglobulins | |
WO2005054296A1 (ja) | メチルリジンを認識する抗体及びその製造方法並びにその利用 | |
JP2024070581A (ja) | Als検査用バイオマーカー及び検査方法 | |
JPWO2020179224A1 (ja) | App669−711の測定方法、及び測定用キット | |
JP2024009473A (ja) | 筋炎/皮膚筋炎やそれに併発する間質性肺炎を発症するモデル動物 | |
JP2021092555A (ja) | 動脈硬化病変の検出方法、検出試薬及び検出キット |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131205 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150217 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150511 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150616 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150717 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150821 |