JP5543614B2 - プロガストリン及び肝臓病理 - Google Patents
プロガストリン及び肝臓病理 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5543614B2 JP5543614B2 JP2012547493A JP2012547493A JP5543614B2 JP 5543614 B2 JP5543614 B2 JP 5543614B2 JP 2012547493 A JP2012547493 A JP 2012547493A JP 2012547493 A JP2012547493 A JP 2012547493A JP 5543614 B2 JP5543614 B2 JP 5543614B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hpg
- liver
- patient
- antibody
- antibodies
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5767—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis non-A, non-B hepatitis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
- G01N2333/595—Gastrins; Cholecystokinins [CCK]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/08—Hepato-biliairy disorders other than hepatitis
- G01N2800/085—Liver diseases, e.g. portal hypertension, fibrosis, cirrhosis, bilirubin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本願は、米国仮出願第61/293,557号(2010年1月8日に出願)の利益を主張し、その内容はその全体において参照により組み入れられる。
配列リストを本明細書と同時に提出する。
本開示は、肝臓病理(肝臓の増殖及び変性疾患を含む)の診断及びスクリーニングのための方法及び材料、特に、肝臓病理を診断するためのプロガストリンレベルの定量化又は決定のための方法及び材料を提供する。
ガストリンは、胃酸分泌の刺激剤として機能する消化管ペプチドホルモンである。成体の哺乳動物において、それは主に胃前庭部のG細胞により、ならびに上部小腸及び膵臓においては変動する範囲で産生され、結腸においてかろうじて検出可能な量を伴う。最近では、結腸直腸発癌におけるペプチドのガストリンファミリーの役割において関心が増加している。特に、ガストリン(プロガストリン及びグリシン伸長ガストリン)の前駆体形態は、以前に不活性であると考えられていたが、結腸直腸癌の発生において役割を果たしているとの証拠がある。
プロガストリンの残基55−72に配列において対応するペプチド残基、およびG17−Glyとして言及される。G34−Gly及びG17−GlyのC末端グリシンの除去、それに続くC末端アミド化は、それぞれG34及びG17をもたらし、それらの両方がC末端アミド化されている。
多くの肝臓病理は、診断することが困難である。例えば、肝臓癌は定期的な血液検査により診断することはできない。腫瘍マーカーアルファ−フェトプロテイン(AFP)を用いた医師のスクリーニングが通常必要である。しかし、上昇AFPレベルは肝臓癌について特異的ではない。成人において、AFPの高い血液レベル(500ng/mLを上回る)は、3つの状況において見られる:肝臓癌、胚細胞腫瘍(精巣及び卵巣の癌)、及び肝臓の転移癌(他の臓器において生じる癌)。また、肝臓癌についてのAFPの感度は約60%である。言い換えれば、上昇AFP血液レベルは肝臓癌患者の約60%だけにおいて見られる;肝臓癌を伴う患者の40%は正常なAFPレベルを有する。肝臓病理を診断するための別の困難は、肝硬変(肝臓の瘢痕及び不良な肝臓機能により特徴付けられる慢性肝疾患の結果)である。診断のゴールドスタンダードは、肝生検、侵襲的技術による。
1つ又は2つの肝臓病理を伴う患者が、上昇したヒトプロガストリン(hPG)レベルを示しうるのに対し、肝臓癌、C型肝炎、及び肝硬変を伴う患者は、これらの状態の1つ又は2つだけを伴う患者により示されるhPGレベルの単なる付加的を上回るhPGの極度に上昇したレベルを示すことが発見されている。本開示に基づいて、患者のhPGの血漿又は血清レベルを使用して、肝臓病理についてのリスク因子を割り当てることができる。さらに、hPGの過剰な血清又は血漿レベルを使用して、肝臓癌、C型肝炎、及び肝硬変を患う患者を診断することができる。
6.1. 定義
他に示さない限り、以下の用語は、本開示の文脈において以下で考察される、それらの通常の意味を有することが意図される。
正常なプロガストリンレベルは、一般的に、20〜50pM未満、典型的には0〜5pMの間であると考えられる。本開示は、1つ又は2つの肝臓病理を伴う患者が上昇したヒトプロガストリン(hPG)レベルを示しうること、ならびに、肝臓癌、C型肝炎、及び肝硬変を伴う患者が極度に上昇したhPGレベルを示すことを実証する。
・「低リスク」は、患者の生物学的マーカーのレベルが所与の肝臓病理の存在を示さないことを意味する。
・「上昇リスク」は、患者の生物学的マーカーのレベルが所与の肝臓病理の増加リスクを示すことを意味する。リスクは、さらなるテストが是認されるような大きさである。
・「高リスク」は、患者の生物学的マーカーのレベルが所与の肝臓病理の大きな増加リスクを示すことを意味する。リスクは、さらなるテストが要求されるような大きさである。生物学的マーカーの特異性に基づく仮診断が正当化されうる。
・「重度リスク」は、患者の生物学的マーカーのレベルが明らかに異常であり、基礎病理を示すことを意味する。生物学的マーカーの特異性に供する診断を行うことができる。
本開示の方法によって、患者のhPGレベルに基づいて1つ又は複数の肝臓病理を診断する及び/又は患者の肝臓病理のリスクを割り当てる。血漿及び血清プロガストリンレベルを、任意の公知の分析技術を使用して測定することができる。そのような技術は、しかし、限定しないが、以下を含む:ELISA、サンドイッチELISA、イムノブロッティング(ウエスタンブロッティング)、免疫沈降、BIACOREテクノロジーなど、ならびにタンパク質の特性に基づくアッセイ(しかし、限定しないが、酵素活性又は他のタンパク質パートナーとの相互作用を含む)。イムノアッセイ(アッセイの好ましいクラス)のために、開示の1つ又は複数の抗プロガストリン(抗PG)抗体(ポリクローナル又はモノクローナル及び中和又は非中和にかかわらず)を使用することができる。
hPGレベルを測定するためのイムノアッセイは、1つ又は複数のポリクローナル又はモノクローナル抗hPG抗体あるいはそれらの抗原結合フラグメントを利用することができる。
(a)配列において、MAb1、MAb2、MAb3、MAb4、MAb15、MAb16、MAb17、MAb18、MAb19、又はMAb20のVL CDRに対応するVL CDR、及び、配列において、MAb1、MAb2、MAb3、MAb4、MAb15、MAb16、MAb17、MAb18、MAb19、又はMAb20のVH CDRに対応するVH CDRを有する抗体;
(b)配列において、MAb1、MAb2、MAb3、MAb4、MAb15、MAb16、MAb17、MAb18、MAb19、又はMAb20のVL及びVH CDRに対応するVL CDR及びVH CDRを有する抗体;
(c)抗体、それにおいて:
(i)VL CDR 1はQSIVHSNGNTY(「VL CDR 1.3」;配列番号4)、QSLVHSSGVTY(「VL CDR 1.4」;配列番号10)、QSLLDSDGKTY(「VL CDR 1.16」;配列番号50)、及びSQHRTYT(「VL CDR 1.19」;配列番号51)より選択される;
(ii)VL CDR2はKVS(「VL CDR 2.3」及び「VL CDR 2.4」;配列番号5)、LVS(「VL CDR 2.16」;配列番号53)、及びVKKDGSH(「VL CDR 2.19」;配列番号54)より選択される;
(iii)VL CDR3はFQGSHVPFT(「VL CDR 3.3」;配列番号6)、SQSTHVPPT(「VL CDR 3.4」;配列番号11)、WQGTHSPYT(「VL CDR 3.16」;配列番号57)、及びGVGDAIKGQSVFV(「VL CDR 3.19」;配列番号58)より選択される;
(iv)VH CDR1はGYIFTSYW(「VH CDR 1.3」;配列番号1)、GYTFSSSW(「VH CDR 1.4」;配列番号7)、GYTFTSYY(「VH CDR 1.16」;配列番号39)、及びGYSITSDYA(「VH CDR 1.19」;配列番号40)より選択される;
(v)VH CDR2はFYPGNSDS(「VH CDR 2.3」;配列番号2)、FLPGSGST(「VH CDR 2.4」;配列番号8)、INPSNGGT(「VH CDR 2.16」;配列番号43)、及びISFSGYT(「VH CDR 2.19」;配列番号44)より選択される;及び
(vi)VH CDR3はTRRDSPQY(「VH CDR 3.3」;配列番号3)、ATDGNYDWFAY(「VH CDR 3.4」配列番号9)、TRGGYYPFDY(「VH CDR 3.16」;配列番号47)、及びAREVNYGDSYHFDY(「VH CDR 3.19」;配列番号48)より選択される;
(d)配列において、MAb1、MAb2、MAb3、MAb4、MAb15、MAb16、MAb17、MAb18、MAb19、又はMAb20のVLに対応するVL、及び、配列において、MAb1、MAb2、MAb3、MAb4、MAb15、MAb16、MAb17、MAb18、MAb19、又はMAb20のVHに対応するVHを有する抗体;及び
(e)配列において、MAb1、MAb2、MAb3、MAb4、MAb15、MAb16、MAb17、MAb18、MAb19、又はMAb20のVL及びVHに対応するVL及びVHを有する抗体。
(f)配列において、MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、MAb9、MAb10、MAb11、MAb12、MAb13、MAb14、MAb21、MAb22、又はMAb23のVL CDRに対応するVL CDR、及び、配列において、MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、MAb9、MAb10、MAb11、MAb12、MAb13、MAb14、MAb21、MAb22、又はMAb23のVH CDRに対応するVH CDRを有する抗体;
(g)配列において、MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、MAb9、MAb10、MAb11、MAb12、MAb13、MAb14、MAb21、MAb22、又はMAb23のVL及びVH CDRに対応するVL CDR及びVH CDRを有する抗体;
(h)抗体、それにおいて:
(i)VL CDR1はKSLRHTKGITF(「VL CDR 1.8」;配列番号49)及びQSLLDSDGKTY(「VL CDR 1.13」;配列番号50)より選択される;
(ii)VL CDR2はQMS(「VL CDR 2.8」;配列番号52)及びLVS(「VL CDR 2.13」;配列番号53)より選択される;
(iii)VL CDR3はAQNLELPLT(「VL CDR 3.8」;配列番号55)及びWQGTHFPQT(「VL CDR 3.13」;配列番号56)より選択される;
(iv)VH CDR1はGFTFTTYA(「VH CDR 1.8」;配列番号37)及びGFIFSSYG(「VH CDR 1.13」;配列番号38)より選択される;
(v)VH CDR2はISSGGTYT(「VH CDR 2.8」;配列番号41)及びINTFGDRT(「VH CDR 2.13」;配列番号42)より選択される;及び
(vi)VH CDR3はATQGNYSLDF(「VH CDR 3.8」;配列番号45)及びARGTGTY(「VH CDR 3.13」;配列番号46)より選択される;
(i)配列において、MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、MAb9、MAb10、MAb11、MAb12、MAb13、MAb14、MAb21、MAb22、又はMAb23のVLに対応するVL、及び、配列において、MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、MAb9、MAb10、MAb11、MAb12、MAb13、MAb14、MAb21、MAb22、又はMAb23のVHに対応するVHを有する抗体;及び
(j)配列において、MAb5、MAb6、MAb7、MAb8、MAb9、MAb10、MAb11、MAb12、MAb13、MAb14、MAb21、MAb22、又はMAb23のVL及びVHに対応するVL及びVHを有する抗体。
(a)本明細書に開示される任意の3つのVL CDR及び任意の3つのVH CDR;
(b)配列番号21に対応するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号22に対応するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;
(c)配列番号23に対応するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号24に対応するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;
(d)配列番号75、77、及び79からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号76及び78からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;
(e)配列番号80及び82からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号81及び83からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;
(f)配列番号84、86、及び88からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号85、87、及び89からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;及び
(g)配列番号90、92、及び94からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号91、93、及び95からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
開示の局面において、キットを、上に示唆する通りに、診断及び研究の適用における使用のために提供する。一部の実施態様において、サンプル中のhPGを検出及び/又は定量化するために必要な抗hPG抗体及び試薬を含むキットを提供し、アッセイ試薬及び緩衝剤を含むことができる。また、キットは、診断方法の実行のための指示(例、プロトコール)を含む指示材料を含むことができる。指示材料は、典型的には、書面の又は印刷された材料を含むが、それらはそのようなものに限定されない。そのような指示を保存し、それらをエンドユーザーに伝達することが可能である媒体が、本発明により熟慮される。そのような媒体は、しかし、限定しないが、電子保存媒体(例、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ)、光学媒体(例、CD ROM)などを含む。そのような媒体は、そのような指示材料を提供するインターネットサイトへのアドレスを含みうる。
開示の一部の実施態様において、1つ又は複数の肝臓病理について示したリスクを診断又は決定する方法を、全体的に又は部分的に機械により実施する。例えば、方法を、血液サンプルのインプットを含む診断ユニットにより実行することができる。血液サンプルを、次に、プロガストリンレベルを産生する機械により操作する。そのような操作は、血液サンプル中のプロガストリンと1つ又は複数の抗体との結合を含むことができる。プロガストリン−抗体サンプルは検出可能なマーカーを含むことができる。検出可能なマーカーの測定は、ディスプレイに送達することができるデータアウトプットを提供する。あるいは、データアウトプットは、プロガストリンレベルに従って、コンピューターにより1つ又は複数の肝臓病理と相関させることができる。別の実施態様において、データアウトプットは、hPGの閾値(例えば、400、450、500、550、600、650、又は700pM)と比較することができる。決定したhPGレベルが閾値を上回る場合、1つ又は複数の肝臓病理の診断を行う。
実施例1:血漿プロガストリンの定量化
96ウェルマイクロタイタープレートを、0.5〜10μg/mLの間のC末端抗hPG抗体、例えば、ウサギC末端抗hPGポリクローナル抗体を用いてコーティングし、次に、一晩インキュベートする。プレートを、次に、PBS−Tween(0.05%)中で3回洗浄し、PBS−Tween(0.05%)中の2%(w/v)脱脂乾燥ミルクを用いてブロックする。別々に、テストサンプル、コントロールサンプル(ブランク又はPG陰性血漿又は血清サンプル)、及び約5pM(0.5×10−11M)〜約0.1nM(1×10−10M)の間のhPG参照基準(PG陰性血漿又は血清中で希釈した凍結乾燥hPG)を適切な希釈剤(例、PBS−Tween 0.05%)中で調製する。サンプルを、コーティングしたプレート上で2〜4時間の間にわたり37℃で、又は、あるいは、12〜16時間の間21℃でインキュベートする。インキュベーション後、プレートを、PBS−Tween(0.05%)を用いて3回洗浄し、0.001〜0.1μg/mLの間のN末端抗hPGモノクローナル抗体(本明細書に記載する)を用いてインキュベートし、21℃で30分間にわたり西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)(Nakane et al., 1974, J. Histochem. Cytochem. 22(12): 1084-1091)に共役させる。プレートを次にPBS−Tween(0.05%)中で3回洗浄し、HRP基質を21℃で15分間にわたり加える。反応を、100μLの0.5M硫酸を加えることにより停止させ、光学密度測定値を405nMで取る。テストサンプルhPGレベルを、hPG参照基準に由来する測定値から構築された標準曲線との比較により決定する。
肝臓病理を有することが疑われる患者、又はスクリーニング(例、定期的な身体検査の一部として行うスクリーニング)を受けている患者は、生物学的サンプル(例えば血漿、血清、又は血液など)を提供する。プロガストリンレベルを定量化し(例えば、実施例1に示す通り)、血液サンプル中のプロガストリン濃度に対応する数字を産生する。開示の方法において、その数字は、一般的に、真のプロガストリンの数字の1%〜5%(又はそれ以下)内である。なぜなら、プロガストリン(その前駆体又は産物ではない)について特異的なアッセイを使用するからである。この数字を、次に、定められた範囲内のプロガストリンレベルと関連する肝臓病理のリストと比較する。言い換えれば、特定の肝臓病理を示しているプロガストリンレベルを、定量化した数字と比較する。特定の部分範囲は、異なるレベルのリスクを示しうる。例えば、低いが、しかし、上昇したプロガストリンレベルは1つ又は複数の病理の中程度のリスクを示しうるのに対し、高いプロガストリンレベルは1つ又は複数の病理の高リスクを示しうる。レベルを閾値と比較し、それにより、陽性又は陰性テスト結果を産生することができる。場合により、第2のバイオマーカーをテストして、診断又は指標を確認することができる。例えば、肝臓病理の中程度のリスク(しかし、高リスクではない)を呈する患者は、第2バイオマーカーをテストされうる。第2バイオマーカーが、また、同じ肝臓病理を示す場合、その時は、その病理の診断は正確である可能性がより高い。プロガストリンレベルを決定するための手段を、キット中に提供することができる。キットは、また、プロガストリンレベルを1つ又は複数の病理、特に肝臓病理と相関させる統計的データ又は他のデータを提供することができ、場合により、1つ又は複数の追加バイオマーカーにより補われる。
1つ又は複数の診断法を含む品目を、本明細書に記載する診断の方法において利用することができる。例えば、ブロッター又はクロマトグラフィーストリップを適応し、患者からの血液又は血液成分との結合時の色を変えることができ、それにおいて、プロガストリンレベルは閾値を上回っている。あるいは、キットは、血液中でマーカーをプロガストリンに結合させるための試薬を含むことができる。そのようなマーカーは、例えば、ラジオアイソトープ又は発色団でありうる。放射線(励起又は別の方法により誘導される)の検出及び定量化を次に使用して、マーカー発光が、閾値を上回るプロガストリンレベルを示す十分な強度である場合、陽性テスト結果を生成することができる。テスト結果を適応して、範囲(例えばリスク値など)を示すことができる。例えば、キットは、プロガストリンレベルの1つの範囲についての第1シグナル及びプロガストリンレベルの他の範囲についての追加シグナルを表示するように適応されたテストを含むことができる。
抗hPG抗体の特異性を、以下の通りにELISAアッセイを使用して便利に決定することができる。96ウェルプレートを、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の適切な濃度のテストポリペプチド(例、25及び50ngの組換えヒトPG、ならびに50及び250ngのCTFP又は他のガストリン由来の遺伝子産物)を用いて4℃で一晩インキュベートした。その後、ウェルを、洗浄溶液(PBS及び0.1%Tween−20)を用いて3回洗浄し、次に1ウェル当たり100μLのブロッキング溶液(PBS、0.1%Tween−20、0.1%ウシ血清アルブミン又はカゼイン加水分解物)を用いて22℃で2時間にわたりインキュベートした。ブロッキング後、ウェルを3回洗浄し、アッセイする抗体(テスト抗体)を加える。100μLのPBS中のテスト抗体(0.3〜1ng/mL)及び0.1%Tween−20を各ウェルに加える。プレートを次に22℃で2時間にわたりインキュベートし、その後、テスト抗体溶液を捨て、洗浄工程(3×100μLの洗浄溶液、上に記述する通り)後、二次抗体、西洋ワサビペルオキシダーゼに共役させたヤギ抗マウスIgG(Fc)抗体を含むブロッキング溶液を用いて置換する。二次抗体を用いた1時間のインキュベーション後、100μLの基質溶液(例、Fast OPD、又はO−フェニレンジアミン二塩酸塩、Sigma-Aldrich Co.から入手可能、製造者の指示に従って調製した)を各ウェルに加え、暗所で、22℃で20分間にわたりインキュベートした。反応は、50μLの4N硫酸を加えることにより停止させ、触媒された基質の量を、492nmでの光学密度(OD)を測定することにより決定する。基質変換は、抗原に結合した一次(テスト)抗体の量に比例する。実験を2通りに実行し、OD測定値を抗原濃度の関数としてプロットする。テスト抗体は、測定されたODがhPGについて0.2〜1.5の間であり、CTFP又は他のガストリン遺伝子由来ペプチドのいずれかを用いて、バックグラウンドを上回る統計的に有意なシグナルがない場合、PGについて高度に特異的であるとスコア化される(ここで、バックグラウンドはPBSだけを含むコントロールウェルからの平均シグナルである)。
抗hPG抗体の親和性定数は、Proteon Technique(BioRad)を使用して、Nahshol et al., 2008, Analytical Biochemistry 383: 52-60(その全体において参照により本明細書により組み入れられる)に従って測定することができる。簡単には、マウス抗PG抗体について、抗マウスIgG抗体(50μg/mL)を最初にセンサーチップ上にコーティングし、抗体の注射後にチップにより検出されたシグナルが10,000〜11,500応答単位(RU)の間に入ることを確認する。目的のマウス抗hPG抗体(テスト抗体)を次に注射する(30μg/mLの典型的な濃度で)。テスト抗体が十分に結合する場合、少なくとも500RUの追加シグナルが観察される。テスト抗体とhPGの間での結合の時間経過を、次に、hPGの変動濃度、例えば、200nM、100nM、50nM、25nM、及び12.5nMを注射し、結合のレベルを検出することにより得る。典型的には、いくつかのチャンネルが、単一の実験において並行して複数の抗体をテストするために利用可能であり、hPGの異なる濃度で並行して単一のテスト抗体の結合をアッセイすることを可能にする。1つのチャネルを、非特異的結合についてのコントロールとして、hPGに特異的ではないマウスモノクローナル抗体を用いて注射すべきである。別のチャネルを、バックグラウンドシグナルについてのベースラインとして、希釈緩衝液単独を用いて注射すべきである。一般的に、結合は、非特異的マウス抗体を用いて注射したチャネルにおいて検出可能ではない。この設定において高レベルの結合を表示する抗体は、hPGによる捕捉モノクローナル抗体の飽和をもたらしうるが、より低いhPG濃度(50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、及び3.125nM)に対してテストすることができ、より洗練された測定を許す。
目的の抗体(テスト抗体)が、hPG結合について、ビオチン化参照抗hPG抗体と競合するか否かを評価するための特異性を伴うアッセイを、以下の通りに実施することができる。96ウェルプレートを、捕捉抗hPG抗体(ビオチン化参照抗hPG抗体により認識されるエピトープとは異なるhPGのN又はC末端領域を認識するポリクローナル又はモノクローナル抗体)を用いて、1〜10μg/mLの範囲内で選ばれる濃度で、4℃で一晩コーティングする(0.1〜1μg/ウェル)。22℃で2時間にわたるブロッキングバッファー(PBS中の0.1% Tween−20、0.1%BSA)を用いたブロッキング後、組換えhPGを、10pM〜1nM(10〜1000pg/ウェル)の間の範囲の濃度で加え、22℃で2時間にわたりインキュベートする。その後、ビオチン化参照抗hPG抗体(又はビオチン化参照抗hPG抗体を含む混合物)を、増加濃度の非標識テスト抗体濃度と共に加え、22℃で1時間にわたりインキュベートする。非結合抗体を除去するための洗浄後、結合した標識参照抗hPG抗体の検出を、混合物を、50ng/mLのストレプトアビジン(steptavidin)−HRPと22℃で1時間にわたりインキュベートすることにより実施し、西洋ワサビペルオキシダーゼ用の蛍光基質とのインキュベーション、及び、次に、ルミノメーターにおける相対的な光単位(RLU)の定量化が続く。アッセイを2通りに実施した。
に従って算出される。
式中、「IC50」は、参照抗体の結合における50%低下をもたらすテスト抗体の濃度であり、Rcは参照抗hPG Ab濃度であり、KDは参照抗hPG抗体の解離定数(hPGについてのその親和性の測定値)である。参照抗hPG抗体と競合する有用なテスト抗体(例えば、本明細書に記載する抗hPG抗体の1つ)は、典型的には、本明細書に記載するアッセイ条件下で10pM〜100nMの範囲のKiを有する。
Claims (7)
- 肝臓病理と既に診断された患者において、複数の肝臓病理の発生を検出する方法であって、
患者からのサンプルにおいてヒトプロガストリン(hPG)濃度を生化学的アッセイ又は少なくとも1つの抗hPG抗体を用いたイムノアッセイにより決定する工程を含み、前記ヒトプロガストリン(hPG)濃度が400pM以上である場合に、複数の肝臓病理の発生を検出し、前記肝臓病理が、肝臓癌、C型肝炎、及び肝臓の肝硬変からなる群より選択される、患者の複数の肝臓病理の発生を検出する方法。 - 前記複数の肝臓病理が、
肝臓癌及び肝硬変、
肝臓癌及びC型肝炎、又は
肝臓癌、肝硬変及びC型肝炎
である、請求項1記載の方法。 - 前記ヒトプロガストリン(hPG)濃度を決定する工程が、少なくとも1つの抗hPG抗体を用いたイムノアッセイにより行われる、請求項1又は2記載の方法。
- 前記ヒトプロガストリン(hPG)濃度が500pM以上である場合に、複数の肝臓病理の発生を検出する、請求項1〜3のいずれか1項記載の方法。
- 前記患者が平均より高いC型肝炎の発生率を有する集団に属するか、前記患者が平均より高いC型肝炎の発生率を有する地理的地域に居住するか、前記患者が薬物又はアルコール依存性状態を有する、請求項1〜4のいずれか1項記載の方法。
- 以下の工程:
(a)400pM以上の血液hPG濃度を伴う患者を同定すること;
(b)以下の状態の少なくとも2つについて前記患者をテストすること:
i)ラジオグラフィー又は画像技術を使用して、肝臓癌;
ii)核酸ベースのアッセイを使用して、C型肝炎ウイルス;及び
iii)線維症の1つ又は複数の血清マーカーについて前記患者からの血液サンプルをテストすることによる、肝臓の肝硬変、
を含む、請求項1記載の方法。 - 肝臓病理と既に診断された患者において複数の肝臓病理について患者のリスクを検出する方法であって、前記肝臓病理が、肝臓癌、C型肝炎、及び肝臓の肝硬変からなる群より選択され、以下:
(a)生化学的アッセイにより、患者の血清又は血漿hPGレベルを決定すること;及び
(b)(a)に基づき、患者に、複数の肝臓病理についての相対リスクを割り当てること、それにおいて:
i)100pMを下回るhPGレベルは、患者が複数の肝臓病理について「低リスク」にあることを示す;
ii)100pM〜400pMの間のhPGレベルは、患者が、肝臓癌を伴う又は伴わない肝硬変を有する「高リスク」にあり、及び、また、C型肝炎を有する「上昇リスク」にあることを示す;及び
iii)400pMを上回るhPGレベルは、患者が肝臓癌、肝硬変、及びC型肝炎を有する「重度リスク」にあることを示す;
(c)それにおいて、前記患者が、他の診断手段を使用してさらにテストされ、前記患者が100pMを下回るhPGレベルを有する場合、前記患者が肝臓癌を有さないことを確認する;及び
(d)それにおいて、前記患者が、他の診断手段を使用して、該患者が100pM〜400pMの間のhPGレベルを有する場合、肝臓癌及び/又はC型肝炎についてさらにテストされること
を含む、方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29355710P | 2010-01-08 | 2010-01-08 | |
US61/293,557 | 2010-01-08 | ||
PCT/EP2011/000047 WO2011083089A1 (en) | 2010-01-08 | 2011-01-07 | Progastrin and liver pathologies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013516617A JP2013516617A (ja) | 2013-05-13 |
JP5543614B2 true JP5543614B2 (ja) | 2014-07-09 |
Family
ID=43567758
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012547493A Expired - Fee Related JP5543614B2 (ja) | 2010-01-08 | 2011-01-07 | プロガストリン及び肝臓病理 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8900817B2 (ja) |
EP (1) | EP2542898B8 (ja) |
JP (1) | JP5543614B2 (ja) |
KR (2) | KR101688106B1 (ja) |
CN (1) | CN102947707B (ja) |
AU (1) | AU2011204652B2 (ja) |
BR (1) | BR112012016767A2 (ja) |
CA (1) | CA2786437C (ja) |
EA (1) | EA023653B1 (ja) |
ES (1) | ES2636663T3 (ja) |
NZ (1) | NZ601593A (ja) |
PL (1) | PL2542898T3 (ja) |
SG (1) | SG182332A1 (ja) |
WO (1) | WO2011083089A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201205002B (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ606195A (en) * | 2010-07-26 | 2015-02-27 | Servier Lab | Methods and compositions for liver cancer therapy |
FR2980196B1 (fr) * | 2011-09-16 | 2013-10-04 | Univ Dauvergne Clermont I | Principe actif anticancereux issu de guiera senegalensis |
MX2018008175A (es) * | 2015-12-31 | 2019-02-20 | Syncerus S A R L | Composiciones y metodos para evaluar el riesgo de ocurrencia de cancer. |
EP3954998A1 (en) | 2015-12-31 | 2022-02-16 | Progastrine et Cancers S.à r.l. | Compositions and methods for detecting and treating gastric cancer |
PL3397964T3 (pl) | 2015-12-31 | 2022-02-07 | Progastrine Et Cancers S.À R.L. | Kompozycje i sposoby do wykrywania i leczenia raka jajnika |
EP3397967B1 (en) | 2015-12-31 | 2020-12-30 | Progastrine et Cancers S.à r.l. | Compositions and methods for detecting and treating esophageal cancer |
ES2926532T3 (es) * | 2017-03-30 | 2022-10-26 | Progastrine Et Cancers S A R L | Composiciones y métodos para tratar el cáncer de pulmón |
US11644468B2 (en) | 2017-03-30 | 2023-05-09 | Progastrine et Cancers S.à r.L | Compositions and methods for detecting and treating prostate cancer using progastrin binding molecule |
TW201940881A (zh) * | 2018-01-26 | 2019-10-16 | 瑞士商Ecs前胃泌激素公司 | 在癌症診斷中結合前胃泌激素檢測與其他癌症生物標記的技術 |
SG11202008271QA (en) | 2018-02-27 | 2020-09-29 | Ecs Progastrin Sa | Progastrin as a biomarker for immunotherapy |
RU2761729C1 (ru) * | 2021-04-26 | 2021-12-13 | Вячеслав Леонидович Коробка | Способ оценки риска смерти при циррозе печени |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4741900A (en) | 1982-11-16 | 1988-05-03 | Cytogen Corporation | Antibody-metal ion complexes |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
CA2384523C (en) | 1991-03-04 | 2007-01-09 | Bayer Corporation | Automated analyzer |
DE69233482T2 (de) | 1991-05-17 | 2006-01-12 | Merck & Co., Inc. | Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen |
ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
US6063026A (en) | 1995-12-07 | 2000-05-16 | Carbon Based Corporation | Medical diagnostic analysis system |
WO1999059631A1 (en) * | 1998-05-15 | 1999-11-25 | Aphton Corporation | Prevention and treatment of hypergastrinemia |
US7668661B2 (en) * | 2000-04-28 | 2010-02-23 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Liver disease-related methods and systems |
EP1372717A2 (en) * | 2001-03-23 | 2004-01-02 | Aphton Corporation | Combination treatment of pancreatic cancer |
US7381370B2 (en) | 2003-07-18 | 2008-06-03 | Dade Behring Inc. | Automated multi-detector analyzer |
CN101048659B (zh) * | 2004-09-22 | 2013-03-13 | 受体生物技术公司 | 抗前胃泌素单克隆抗体 |
AU2007252986B2 (en) | 2006-05-22 | 2013-03-21 | Centre National De La Recherche Scientifique - Cnrs- | Progastrin inhibitors in the treatment of colon cancer |
WO2008076454A1 (en) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Immunogenic compositions comprising progastrin and uses thereof |
EP3421493B1 (en) | 2009-10-16 | 2024-01-17 | Progastrine et Cancers S.à r.l. | Monoclonal antibodies to progastrin and their uses |
NZ606195A (en) | 2010-07-26 | 2015-02-27 | Servier Lab | Methods and compositions for liver cancer therapy |
-
2011
- 2011-01-04 US US12/984,507 patent/US8900817B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-07 NZ NZ601593A patent/NZ601593A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-01-07 ES ES11700114.9T patent/ES2636663T3/es active Active
- 2011-01-07 WO PCT/EP2011/000047 patent/WO2011083089A1/en active Application Filing
- 2011-01-07 CA CA2786437A patent/CA2786437C/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-07 EA EA201200997A patent/EA023653B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-01-07 EP EP11700114.9A patent/EP2542898B8/en active Active
- 2011-01-07 JP JP2012547493A patent/JP5543614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-07 PL PL11700114T patent/PL2542898T3/pl unknown
- 2011-01-07 KR KR1020147030287A patent/KR101688106B1/ko active IP Right Grant
- 2011-01-07 KR KR1020127020828A patent/KR20120102157A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-01-07 AU AU2011204652A patent/AU2011204652B2/en not_active Ceased
- 2011-01-07 BR BR112012016767A patent/BR112012016767A2/pt active Search and Examination
- 2011-01-07 CN CN201180010319.7A patent/CN102947707B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-07 SG SG2012049151A patent/SG182332A1/en unknown
-
2012
- 2012-07-04 ZA ZA2012/05002A patent/ZA201205002B/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20140132418A (ko) | 2014-11-17 |
CA2786437A1 (en) | 2011-07-14 |
PL2542898T3 (pl) | 2017-10-31 |
EA201200997A1 (ru) | 2013-02-28 |
CN102947707B (zh) | 2016-06-01 |
WO2011083089A1 (en) | 2011-07-14 |
ZA201205002B (en) | 2013-10-30 |
EA023653B1 (ru) | 2016-06-30 |
NZ601593A (en) | 2014-08-29 |
JP2013516617A (ja) | 2013-05-13 |
KR20120102157A (ko) | 2012-09-17 |
EP2542898B8 (en) | 2017-08-09 |
AU2011204652B2 (en) | 2014-04-03 |
AU2011204652A1 (en) | 2012-07-26 |
ES2636663T3 (es) | 2017-10-06 |
BR112012016767A2 (pt) | 2017-09-05 |
SG182332A1 (en) | 2012-08-30 |
EP2542898A1 (en) | 2013-01-09 |
CN102947707A (zh) | 2013-02-27 |
KR101688106B1 (ko) | 2016-12-20 |
CA2786437C (en) | 2020-09-01 |
US8900817B2 (en) | 2014-12-02 |
US20110229488A1 (en) | 2011-09-22 |
EP2542898B1 (en) | 2017-05-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5543614B2 (ja) | プロガストリン及び肝臓病理 | |
US11719697B2 (en) | Immunoassay and antibodies for the detection of chromogranin A | |
US10114028B2 (en) | Biomarkers for pneumonia and acute decompensated heart failure | |
WO2020141608A1 (ja) | 潰瘍性大腸炎及び原発性硬化性胆管炎の検査方法 | |
JP5252339B2 (ja) | Pad4及び抗pad4抗体の測定方法並びに関節リウマチの検出方法 | |
WO2020158858A1 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び対象におけるnashの検出方法 | |
US9116152B2 (en) | Monoclonal antibodies which specifically recognize human liver-carboxylesterase 1, hybridoma cell lines which produce monoclonal antibodies, and uses thereof | |
CN108780079A (zh) | 不稳定型心绞痛的诊断 | |
WO2004081029A2 (en) | Novel non-invasive marker for liver disease | |
WO2015064348A1 (ja) | 糖鎖不全ヒトIgA1ヒンジ部を認識するモノクローナル抗体及びその用途 | |
WO2021097684A1 (zh) | 新的抗可溶性cd14亚型抗体及其应用 | |
JP2018080114A (ja) | 抗ヒトvap−1モノクローナル抗体 | |
CA2771954A1 (en) | Pneumonia biomarkers | |
CN113939533B (zh) | 抗可溶性cd14亚型抗体、试剂盒及其应用 | |
JP2024060569A (ja) | 本態性高血圧症を検出するためのバイオマーカー、それを用いた検出方法及び検出試薬 | |
US20090081714A1 (en) | Assays | |
WO2012113718A1 (en) | A diagnostic method for type ii diabetes | |
JP2019210211A (ja) | ウシプロカルシトニンを特異的に認識する抗体、その抗原結合断片、および、その使用 | |
JP2013541560A (ja) | 組成物、抗体、喘息診断方法、及び抗体の調製方法 | |
JP2003180345A (ja) | 遊離型肝細胞増殖因子受容体の測定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20130418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130418 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20131018 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131029 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140127 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140203 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140227 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140430 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140508 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5543614 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |