JP2013530989A5

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Publication number: JP2013530989A5
Application number: JP2013516845A
Authority: JP
Filing date: 2011-06-25
Publication date: 2014-08-14
Anticipated expiration: 2031-06-25

Description

図面は単に説明の目的のためであり、制限のためのものではない。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、塩と、ポリソルベート界面活性剤とを含む、髄腔内腔内投与のための安定製剤。
（項目２）
前記Ｉ２Ｓタンパク質は、約１〜３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在する、項目１に記載の安定製剤。
（項目３）
前記Ｉ２Ｓタンパク質は、２ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で存在する、項目１または２に記載の安定製剤。
（項目４）
前記Ｉ２Ｓタンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の安定製剤。
（項目５）
前記塩がＮａＣｌである、項目１〜４のいずれか一項に記載の安定製剤。
（項目６）
前記ＮａＣｌが、約０〜３００ｍＭの範囲の濃度として存在する、項目５に記載の安定製剤。
（項目７）
前記ＮａＣｌが、約１３７〜１５４ｍＭの範囲の濃度として存在する、項目４に記載の安定製剤。
（項目８）
前記ＮａＣｌが、約１５４ｍＭの濃度として存在する、項目７に記載の安定製剤。
（項目９）
前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１〜８のいずれか一項に記載の安定製剤。
（項目１０）
前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０である、項目９に記載の安定製剤。
（項目１１）
前記ポリソルベート２０が、約０〜０．０２％の範囲の濃度で存在する、項目１０に記載の安定製剤。
（項目１２）
前記ポリソルベート２０が、約０．００５％の範囲の濃度で存在する、項目１１に記載の安定製剤。
（項目１３）
前記製剤が、緩衝剤を更に含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の安定製剤。
（項目１４）
前記緩衝剤が、リン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、トリストリス、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１３に記載の安定製剤。
（項目１５）
前記緩衝剤が、リン酸塩である、項目１４に記載の安定製剤。
（項目１６）
前記リン酸塩が、５０ｍＭを超えない濃度で存在する、項目１５に記載の安定製剤。
（項目１７）
前記リン酸塩が、２０ｍＭを超えない濃度で存在する、項目１３に記載の安定製剤。
（項目１８）
前記製剤が、約３〜８のｐＨを有する、項目１〜１７のいずれか一項に記載の安定製
剤。
（項目１９）
前記製剤が、約５．５〜６．５のｐＨを有する、項目１８に記載の安定製剤。
（項目２０）
前記製剤が、約６．０のｐＨを有する、項目１９に記載の安定製剤。
（項目２１）
前記製剤が、液体製剤である、項目１〜２０のいずれか一項に記載の安定製剤。
（項目２２）
前記製剤が、凍結乾燥された乾燥粉末として製剤化される、項目１〜２０のいずれか一項に記載の安定製剤。
（項目２３）
約１〜３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度でのイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、約１５４ｍＭの濃度でのＮａＣｌと、約０．００５％の濃度でのポリソルベート２０と、約６．０のｐＨとを含む髄腔内腔内投与のための安定製剤。
（項目２４）
前記Ｉ２Ｓタンパク質が、約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、項目２３に記載の安定製剤。
（項目２５）
前記Ｉ２Ｓタンパク質が、約３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、または３００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、項目２３に記載の安定製剤。
（項目２６）
項目１〜２５のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器。
（項目２７）
前記容器が、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、ｌｙｏ−ｊｅｃｔ、または前充填した注射器から選択される、項目２６に記載の容器。
（項目２８）
前記容器が、前充填した注射器である、項目２６〜２８のいずれか一項に記載の容器。
（項目２９）
前記前充填した注射器が、ベイクドシリコーン被覆膜を有するホウケイ酸ガラス注射器、噴霧シリコーンを有するホウケイ酸ガラス注射器、またはシリコーンを含有しないプラスチック樹脂注射器から選択される、項目２８に記載の容器。
（項目３０）
前記安定製剤が、約５．０ｍＬ未満の容積で存在する、項目２７に記載の容器。
（項目３１）
前記安定製剤が、約３．０ｍＬ未満の容積で存在する、項目２７に記載の容器。
（項目３２）
ハンター症候群の治療方法であって、
治療を必要とする被験者に、項目１〜２０のいずれか一項に記載の安定製剤を髄腔内投与するステップを含む、方法。
（項目３３）
ハンター症候群の治療方法であって、
治療を必要とする対象に、約１〜３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度でのイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、約１５４ｍＭの濃度でのＮａＣｌと、約０．００５％の濃度でのポリソルベート２０と、約６のｐＨと、を含む安定製剤を髄腔内腔内投与するステップを含む、方法。
（項目３４）
前記髄腔内腔内投与するステップが、前記対象において実質的な有害事象を生じさせない、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
前記髄腔内腔内投与が、前記対象において、実質的な適応性Ｔ細胞媒介性免疫反応を生じさせない、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、標的脳組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の送達を生じさせる、項目３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記脳標的組織が、白質および／または灰質内のニューロンを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記Ｉ２Ｓタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達される、項目３６または３７に記載の方法。
（項目３９）
前記Ｉ２Ｓタンパク質が、脊髄内のニューロンに更に送達される、項目３７〜３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、末梢標的組織内の前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達を更に生じさせる、項目３７〜３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記末梢標的組織が、肝臓、腎臓、および／または心臓から選択される、項目３３に記載の方法。
（項目４２）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるリソソーム局在化を生じさせる、項目３２〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、前記脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるＧＡＧ蓄積を減少させる、項目３２〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記ＧＡＧ蓄積が、対照と比較して、少なくとも２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍、または２倍まで減少される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、ニューロンにおける空胞化を減少させる、項目３２〜４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記ニューロンが、プルキンエ細胞を含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、前記脳標的細胞、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるＩ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせる、項目３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、対照と比較して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍まで増加される、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加は、少なくとも約１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５５０ｎｍｏ
ｌ／時・ｍｇまたは６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、項目４７または４８に記載の方法。
（項目５０）
前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、腰部領域で増加される、項目４７に記載の方法。
（項目５１）
前記腰部領域における前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加が、少なくとも約２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、または１０，０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記製剤の前記髄腔内腔内投与が、ハンター症候群の少なくとも１つの症状または特徴の強度、重症度または頻度の低減、ならびに発症の遅延を生じさせる、項目３２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記ハンター症候群の前記症状または特徴の少なくとも１つは、認知障害；白質病巣；脳実質、脳梁、神経節、および／または脳幹内の膨張した血管周囲腔；ならびに／または脳室拡大である、項目３２に記載の方法。
（項目５４）
前記髄腔内腔内投与が、２週間に１回実施される、項目３２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記髄腔内腔内投与が、１ヶ月毎に１回実施される、項目３２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記髄腔内腔内投与が、２ヶ月に１回実施される、項目３２〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記髄腔内腔内投与が、静脈内投与と併せて用いられる、項目３２〜５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記静脈内投与が、１か月に１回以下の頻度である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記静脈内投与が、２ヶ月に１回以下の頻度である、項目５７に記載の方法。
（項目６０）
前記髄腔内腔内投与が、静脈内投与の不在下で用いられる、項目３２〜５６に記載の方法。
（項目６１）
前記髄腔内腔内投与が、同時免疫抑制療法の不在下で用いられる、項目３２〜６０に記載の方法。

Ｉ２Ｓの３用量の髄腔内腔内注射後の、脳の表面を覆う髄膜細胞（矢印先端部）の層内にＩ２Ｓを含む大脳皮質および小脳皮質のニューロン（矢印）内で検出されたＩＴ送達されたＩ２Ｓおよびを示す例示的図である。２用量注射された脳におけるＩ２ＳＩＨＣの染色は、より弱かった（写真表示せず）。陽性Ｉ２Ｓ染色は、ビヒクル対照動物の脳のいずれの型の細胞についても観察されなかった。（４０Ｘ）髄腔内腔内−腰椎Ｉ２Ｓ注射後のＩ２Ｓノックアウト（ＩＫＯ）マウスの脳における病変の回復を示す例示的図である。Ｈ＆Ｅ染色された脳組織は、ビヒクル対照動物において多数の細胞内蓄積空胞（矢印）を示した。細胞内空胞化は、２用量（写真表示せず）および３用量が注射されたマウスの双方で脳全体を通して減少された。著しい減少は、３用量が注射されたマウスで認められた。（４０Ｘ）ビヒクル対照マウスと比較して、Ｉ２Ｓの２用量（写真表示せず）および３用量処置後に脳内でのリソソーム活性の著しい減少がある、ＬＡＭＰ−１の免疫組織化学染色を示す例示的図である。この減少は、ＬＡＭＰ−１陽性細胞の数での減少および脳全体の領域でのより明るい染色強度によって特徴付けられた。（４０Ｘ）大脳皮質（Ｃｏｒｔｅｘ）、尾状核（ＣＰ）、視床（ＴＨ）、白質（ＷＭ）および小脳（ＣＢＬ）における、野生型（ＷＴ）、ビヒクル未処置およびＩ２Ｓ（２および３用量）マウスの中での平均ＬＡＭＰ−１陽性領域の比較からの形態計測結果を示す例示的図であり、評価された脳の全ての領域でＬＡＭＰ−１陽性染色での著しい減少があることを確認された。データは、平均値±標準偏差、＃Ｐ＜０．０５；^＊Ｐ＜０．０１；^＊＊Ｐ＜０．００１として表されている。超微細構造レベルでの病変改善を示した脳細胞の例示的電子顕微鏡写真である。ビヒクル処置マウスのニューロンは、板状封入体、ゼブラ小体様構造、および顆粒状蓄積物質（インサート）を含有する空胞を有したが、これがＩ２Ｓ注射マウスでは減少された。ビヒクル処置マウスの希突起グリア細胞は、大きなエレクトロンルーセント蓄積空胞（矢印）を示したが、Ｉ２Ｓ注射マウスは、最小の空胞を有した。（スケールバー：ニューロン内、２μｍ；希突起グリア細胞内、５００ｎｍ）Ｉ２Ｓの３用量の髄腔内腔内注射後に、肝臓のシヌソイド細胞内で検出されたＩ２Ｓを示している例示的に免疫組織化学の結果を示す。２用量注射された肝臓におけるＩ２ＳＩＨＣ染色は、より弱かった（写真表示せず）。ビヒクル対照動物の肝臓では、陽性Ｉ２Ｓ染色はなかった。（４０Ｘ）肝臓からの例示的組織を示す。重篤な細胞空胞化および異常に高いリソソーム活性が、Ｈ＆Ｅ染色によって認められ、強いＬＡＭＰ−１免疫染色が、ＷＴ動物と比較してビヒクル対照動物で見出された。Ｉ２Ｓ処置の３用量および２用量（写真表示せず）での髄腔内腔内処置後に、細胞内空胞化およびＬＡＭＰ−１免疫染色の著しい減少が確認された。Ｈ＆Ｅ染色は、細胞質内空胞化が、ほとんど正常な肝臓細胞構造の状態で、ほぼ完全に消失することを示した。（Ｈ＆Ｅ、４０Ｘ；ＬＡＭＰ−１、２０Ｘ）生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：≦−６５℃および４０℃で１ヶ月について、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる凝集を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート −２０を含む）：≦−６５℃および４０℃で１ヶ月について、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる凝集を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：≦−６５℃および２５℃で６ヶ月について、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる凝集を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート −２０を含む）：≦−６５℃および２５℃で６ヶ月について、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる凝集を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：≦−６５℃および２〜８℃で２４ヶ月について、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる凝集を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：≦−６５℃および２〜８℃で２４ヶ月について、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる凝集を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースライン対４０℃で１ヶ月について、ＳＡＸ−ＨＰＬＣ法による変化を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースライン対４０℃で１ヶ月について、ＳＡＸ−ＨＰＬＣ法による変化を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースライン対２５℃で６ヶ月について、ＳＡＸ−ＨＰＬＣ法による変化を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースライン対２５℃で６ヶ月について、ＳＡＸ−ＨＰＬＣ法による変化を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースライン対２〜８℃で２４ヶ月について、ＳＡＸ−ＨＰＬＣ法による変化を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースライン対２〜８℃で２４ヶ月について、ＳＡＸ−ＨＰＬＣ法による変化を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：ベースラインおよび４０℃で１ヶ月について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート−２０を含む）：２５℃で６ヶ月および２〜８℃で１６ヶ月以上について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色を比較する例示的データを示す。生理食塩水製剤およびリン酸塩製剤（全て０．０１％のポリソルベート −２０を含む）：２５℃で６ヶ月および２〜８℃で１６ヶ月以上について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色を比較する例示的データを示す。３ｍｇ処置群動物の大脳を示している例示的組織を示す。髄膜細胞内に陽性Ｉ２Ｓ染色が認められた。（４Ｘ）３０ｍｇ処置群動物の大脳を示している例示的組織を示す。ニューロンおよび髄膜細胞内に陽性Ｉ２Ｓ染色が認められた。（４Ｘ）１００ｍｇ処置群動物の大脳を示している例示的組織を示す。陽性Ｉ２Ｓ染色ニューロンおよび髄膜細胞は、３および３０ｍｇ処置動物のものよりも強かった。（４Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物の大脳を示している例示的組織を示す。ニューロンの大集団が、強い陽性の髄膜細胞に沿って１２Ｓ陽性であった。３０ｍｇ処置群動物において、大脳の層ＩＩＩ内の髄膜細胞に沿ったＩ２Ｓ陽性のニューロンおよびグリア細胞を示している例示的組織を示す。（４０Ｘ）３０ｍｇ処置群動物において、大脳の層ＩＩＩ内の血管周囲細胞に沿ったＩ２Ｓ陽性のニューロン、グリア細胞を示している例示的組織を示す。（４０Ｘ）３０ｍｇ処置群動物において、白質に隣接する大脳の層ＶＩ内のＩ２Ｓ陽性のニューロンおよびグリア細胞を示している例示的組織を示す。（４０Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物のニューロン（大脳）内の強い陽性Ｉ２Ｓ染色を示している例示的組織を示す。（１００Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物の頚部脊髄のＩ２Ｓ免疫染色を示している例示的組織である。（４Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物の腰部脊髄での強いＩ２Ｓ免疫染色を示している例示的組織である。（４Ｘ）髄膜細胞、グリア細胞、およびエピ／ペリ／内神経鞘（結合細胞）の強く陽性のＩ２Ｓ免疫染色が、１５０ｍｇ処置群動物の腰部で見出されたことを示している例示的組織である。（４０Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物の腰部脊髄内のニューロンが強くＩ２Ｓ陽性であったことを示す。（４０Ｘ）３ｍｇ処置群動物に由来する肝臓からの例示的結果を示す。シヌソイド細胞のみがＩ２Ｓ陽性であった。（４０Ｘ）３０ｍｇ処置群動物に由来する肝臓からの例示的結果を示す。シヌソイド細胞および肝細胞がＩ２Ｓ陽性であった。（４０Ｘ）１００ｍｇ処置群動物に由来する肝臓からの例示的結果を示す。Ｉ２Ｓ免疫染色は、シヌソイド細胞および肝細胞で非常に強かった。（４０Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物に由来する肝臓からの例示的結果を示す。強く陽性のＩ２Ｓ染色が、シヌソイド細胞および肝細胞で特定された。（４０Ｘ）３ｍｇ処置群動物に由来する心臓からの例示的結果を示す。Ｉ２Ｓ免疫染色は陰性であった。（４０Ｘ）３０ｍｇ処置群動物からの心臓に由来する例示的結果を示す。間質細胞は、Ｉ２Ｓ陽性であった。（４０Ｘ）１００ｍｇ処置群動物に由来する心臓からの例示的結果を示す図である。Ｉ２Ｓについて、間質細胞染色は陽性であった。（４０Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物に由来する心臓からの例示的結果を示す。Ｉ２Ｓについて、間質細胞染色は強く陽性であった。（４０Ｘ）３ｍｇ処置群動物に由来する腎臓からの例示的結果を示す図である。Ｉ２Ｓ免疫染色は陰性であった。（４０Ｘ）３０ｍｇ処置群動物に由来する腎臓からの例示的結果を示す。糸球体細胞および間質細胞は、Ｉ２Ｓ陽性であった。１００ｍｇ処置群動物に由来する腎臓からの例示的結果を示す。Ｉ２Ｓについての糸球体細胞および間質細胞の染色の増加が認められた。（４０Ｘ）１５０ｍｇ処置群動物に由来する腎臓からの例示的結果を示す。近位細管細胞、糸球体細胞および間質細胞の陽性Ｉ２Ｓ染色が認められた。（４０Ｘ）イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の週単位用量を投与されたカニクイザルのＣＮＳ組織を評価する免疫組織化学（ＩＨＣ）試験の結果を示す。（ＩＨＣ）によって決定されたように、ＣＮＳ全体でＩ２Ｓの広範囲の細胞堆積があった。灰白質では、用量依存的様式で、全ての群の大脳、小脳、脳幹、および脊髄のニューロンでＩ２Ｓが検出された。高用量群の表面灰白質では、大多数の脳内ニューロンが、表面皮質においてＩ２Ｓについて陽性であった（図４０Ａ）。Ｉ２Ｓはまた、視床（図４０Ｂ）、海馬（図４０Ｃ）、尾状核（図４０Ｄ）および脊髄（図４０Ｅ）でも検出された。髄膜細胞および血管周囲細胞もまた、Ｉ２Ｓ染色陽性であった（図４０Ｆ）。特定されたスケールバーは２５μｍに相当する。投与後に頭蓋および脊髄プールでのＩ２Ｓの量を時間に対してプロットすることによって、頭蓋および脊髄プールにおけるイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の排泄をグラフで比較する。６ヶ月にわたり非ヒト霊長類に髄腔内腔内投与されたイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の用量依存的灰白質沈着を示す。図示された染色強度は、視床でのイズロン酸−２−スルファターゼの蓄積に相当する。この図４２では、ＤＡＰＩによって核が対抗染色され、青色で現れ、タンパク質（Ｉ２Ｓ）が緑色で現れた。単回注射および６ヶ月にわたる複数回注射後の非ヒト霊長類に髄腔内腔内投与されたイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の用量依存的灰白質沈着を示す図である。示した染色強度は、大脳皮質におけるイズロン酸−２−スルファターゼの蓄積に対応する。非ヒト霊長類の大脳全体を通してのイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の細胞内局在化を実証する。図４４Ａは、非ヒト霊長類の大脳から抽出された脳組織の横断図を示し、一方、図４４Ｂは、図４４Ａで同定された切片の白質組織の３つの領域（Ｗ１、Ｗ２およびＷ３と呼ぶ）、脳室付近の白質（ＶＷ）および表面灰白質（ＳＧ）組織に対応する特定領域を示す。６ヶ月間にわたる月１回注射後の非ヒト霊長類への髄腔内腔内投与イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のニューロンおよび希突起グリア細胞取込みおよび軸索会合を示す。特に、図４５Ａ、図４５Ｂ、図４５Ｃおよび図４５Ｄは、イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）を髄腔内腔内投与された非ヒト霊長類の大脳組織のフィラメント染色を示し、それぞれ、図４４Ｂで同定された白質の３つの領域（Ｗ１、Ｗ２およびＷ３）ならびに表面灰白質（ＳＧ）領域に対応する。図４５Ａは、白質（Ｗ１）組織中の髄腔内腔内投与Ｉ２Ｓの希突起グリア細胞取込みを示す。図４５Ｂおよび図４５Ｃは、それぞれＷ２およびＷ３白質組織における髄腔内腔内投与Ｉ２Ｓの希突起神経膠取込みおよび軸索会合を示す。図４５Ｄは、表面灰白質（ＳＧ）組織中の髄腔内腔内投与Ｉ２Ｓのニューロン取込みを示す。６ヶ月間にわたる月１回注射後の非ヒト霊長類への髄腔内腔内投与イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のニューロンおよび希突起グリア細胞取込みおよび軸索会合を示す。特に、図４５Ａ、図４５Ｂ、図４５Ｃおよび図４５Ｄは、イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）を髄腔内腔内投与された非ヒト霊長類の大脳組織のフィラメント染色を示し、それぞれ、図４４Ｂで同定された白質の３つの領域（Ｗ１、Ｗ２およびＷ３）ならびに表面灰白質（ＳＧ）領域に対応する。図４５Ａは、白質（Ｗ１）組織中の髄腔内腔内投与Ｉ２Ｓの希突起グリア細胞取込みを示す。図４５Ｂおよび図４５Ｃは、それぞれＷ２およびＷ３白質組織における髄腔内腔内投与Ｉ２Ｓの希突起神経膠取込みおよび軸索会合を示す。図４５Ｄは、表面灰白質（ＳＧ）組織中の髄腔内腔内投与Ｉ２Ｓのニューロン取込みを示す。非ヒト霊長類の脳室付近の白質（ＶＷ）中のイズロン酸−２−スルファターゼの細胞内同定を示す。補充画像に示すように、イズロン酸−２−スルファターゼはミエリンと会合されない（赤色）。本発明の図４６では、核はＤＡＰＩにより対比染色される（下左）。タンパク質（Ｉ２Ｓ）は上左枠で現れている。イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の単回注射を脳室内（ＩＣＶ）または髄腔内腔内（ＩＴ）投与された健常ビーグル犬の組織における染色を示す。図４７Ａ〜４７Ｈで示されるように、Ｉ２Ｓは、免疫組織化学（ＩＨＣ）により確定されるように、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方の灰白質全体に広範に分布された。図４７Ａおよび４７Ｂは、大脳皮質において、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方の表面分子層から深部内部層まで、６つのニューロン層すべてで、ニューロンがＩ２Ｓに関して陽性であったことを示す。図４７Ｃおよび４７Ｄは、ＩＴおよびＩＣＶ群の小脳皮質において、Ｉ２Ｓが、プルキンエ細胞を含めてニューロン中で検出されたことを示す。同様に、図４７Ｅおよび４７Ｆは、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方で、海馬中のニューロンの大集団がＩ２Ｓに関して陽性であったことを示す。最後に、画像ｇおよびｈは、Ｉ２Ｓ陽性ニューロンが、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方で、視床および尾状核においても見出されたことを実証する。本発明の図４７では、Ｉ２Ｓ染色は矢印で示されている。非処置のまたはＩ２Ｓを髄腔内腔内投与されたいずれかのイズロン酸−２−スルファターゼノックアウト（ＩＫＯ）マウスの脳梁組織を比較して示す。図示したように、処置ＩＫＯマウスは、Ｉ２Ｓ処置ＩＫＯマウスの脳梁および脳弓組織におけるある種のリソソーム貯蔵障害の特徴とする細胞内空胞化の低減を示した。図９３Ａは、非処置ＩＫＯ対照マウス（図４９Ｂ）に比して、処置ＩＫＯマウス（図４９Ａ）の表面大脳皮質組織中の、リソソーム病病理バイオマーカーであるリソソーム結合膜タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）の存在の顕著な低減を示す。倍率２０倍および４０倍。図９３Ａは、非処置ＩＫＯ対照マウス（図４９Ｂ）に比して、処置ＩＫＯマウス（図４９Ａ）の表面大脳皮質組織中の、リソソーム病病理バイオマーカーであるリソソーム結合膜タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）の存在の顕著な低減を示す。倍率２０倍および４０倍。例示的髄腔内腔内薬剤送達装置（ＩＤＤＤ）を示す。例示的ＰＯＲＴ−Ａ−ＣＡＴＨ（登録商標）低プロフィール髄腔内腔内埋込み可能アクセス系を示す。例示的髄腔内腔内薬剤送達装置（ＩＤＤＤ）を示す。ＣＮＳ酵素補充療法（ＥＲＴ）のための在宅投与を可能にする、髄腔内腔内薬剤送達装置（ＩＤＤＤ）を示す。ニューロン内（プルキンエ細胞）のイズルスルファーゼの単回脳内注射後の空胞形性の例示的作用を示す。用量および領域による脳中のＩ２Ｓ活性を示す例示図である。大脳皮質の異なる深度でのイズルスルファーゼの免疫組織化学的局在化のデータを示す例示図である。イズルスルファーゼを髄腔内腔内用量投与後のサルの脊髄中のＩ２Ｓ活性を示す例示図である。イズルスルファーゼを髄腔内腔内用量投与後のサルの肝臓、心臓および腎臓中のＩ２Ｓ活性を示す例示図である。拡大ハンターＩＴ試験プログラムのための例示的模式図を表す。３０ｍｇ用量投与後の脳組織の種々の切片におけるＩ２Ｓ濃度の測定値を示す例示図である。異なるプロットは、異なる測定時間に対応する。種々の生成物濃度に関して種々の投与経路で長時間投与後のＩ２Ｓ濃度の測定値を示す例示図である。ＩＶ、ＩＴ−ＬまたはＩＣＶ用量投与後ｔ＝５時間でのカニクイザルにおける^１２４Ｉ標識化イズルスルファーゼ−ＩＴのＰＥＴ画像を例示図である。髄腔内腔内薬剤送達装置ＩＤＤＤの例示的線図である。対象の体内（図６４Ａ）および平面での表示（図６４Ｂ）の双方でのＩＤＤＤの多様な特徴を示す。対象の体内（図６４Ａ）および平面での表示（図６４Ｂ）の双方でのＩＤＤＤの多様な特徴を示す。対象の体内（図６４Ａ）および平面での表示（図６４Ｂ）の双方でのＩＤＤＤの多様な特徴を示す。

Claims

ハンター症候群の治療のための安定製剤であって、前記製剤は、対象に髄腔内投与され、そして、前記安定製剤は、少なくとも５ｍｇ／ｍｌの濃度でのイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質およびポリソルベート界面活性剤とを含むことを特徴とする、安定製剤。
前記髄腔内投与が、前記対象において実質的な有害事象を生じさせず、任意に、前記髄腔内投与が、前記対象において、実質的な適応性Ｔ細胞媒介性免疫反応を生じさせない、請求項１に記載の安定製剤。
（ｉ）前記製剤の前記髄腔内投与が、標的脳組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の送達を生じさせ、任意に、
（ａ）前記脳標的組織が、白質および／または灰質内のニューロンを含む、あるいは、／そして、
（ｂ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達され、
（ｉｉ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、脊髄内のニューロンに更に送達され、
（ｉｉｉ）前記製剤の前記髄腔内投与が、末梢標的組織内の前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達を更に生じさせ、任意に、前記末梢標的組織が、肝臓、腎臓、および／または心臓から選択され、
（ｉｖ）前記製剤の前記髄腔内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるリソソーム局在化を生じさせ、
（ｖ）前記製剤の前記髄腔内投与が、前記脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるＧＡＧ蓄積を減少させ、任意に、前記ＧＡＧ蓄積が、対照と比較して、少なくとも２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍、または２倍まで減少され、そして／あるいは、
（ｖｉ）前記製剤の前記髄腔内投与が、ニューロンにおける空胞化を減少させ、任意に、前記ニューロンが、プルキンエ細胞を含む、
請求項１または２に記載の安定製剤。
前記製剤の前記髄腔内投与が、前記脳標的細胞、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織におけるＩ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせ、任意に、
（ｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、対照と比較して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍まで増加され、そして／あるいは、
（ｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加は、少なくとも約１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇであり、あるいは、
（ｉｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、腰部領域で増加され、
任意に、前記腰部領域における前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加が、少なくとも約２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、または１０，０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記製剤の前記髄腔内投与が、ハンター症候群の少なくとも１つの症状または特徴の強度、重症度または頻度の低減、ならびに発症の遅延を生じさせ、
任意に、前記ハンター症候群の前記症状または特徴の少なくとも１つは、認知障害；白質病巣；脳実質、神経節、脳梁、および／または脳幹内の膨張した血管周囲腔；ならびに／または脳室拡大である、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の安定製剤。
（ｉ）前記髄腔内投与が、静脈内投与と併せて用いられ、任意に、前記静脈内投与が、１か月に１回以下の頻度であるか、または２ヶ月に１回以下の頻度である、あるいは、
（ｉｉ）前記髄腔内投与が、静脈内投与の不在下で用いられる、そして／あるいは、
（ｉｉｉ）前記髄腔内投与が、２週間に１回、１ヶ月に１回、または２ヶ月に１回実施される、そして／あるいは、
（ｉｖ）前記髄腔内投与が、同時免疫抑制療法の不在下で用いられる、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の安定製剤。
イズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、塩と、ポリソルベート界面活性剤とを含む、髄腔内投与のための安定製剤。
前記Ｉ２Ｓタンパク質は、約１〜３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度、任意に、２ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記Ｉ２Ｓタンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記塩がＮａＣｌであり、
任意で、前記ＮａＣｌが、約０〜３００ｍＭの範囲の濃度として、任意に、約１３７〜１５４ｍＭの範囲の濃度として、任意に、約１５４ｍＭの濃度として存在する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
任意に、前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０であり、約０〜０．０２％の範囲の濃度で、任意に約０．００５％の範囲の濃度で存在する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記製剤が、緩衝剤を更に含み、
任意に、前記緩衝剤が、リン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、トリス、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、任意に、前記緩衝剤が、リン酸塩であり、５０ｍＭを超えない濃度、任意に、２０ｍＭを超えない濃度で存在する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記製剤が、約３〜８、約５．５〜６．５、または約６．０のｐＨを有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の安定製剤。
（ｉ）前記製剤が、液体製剤である、あるいは、
（ｉｉ）前記製剤が、凍結乾燥された乾燥粉末として製剤化される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の安定製剤。
前記製剤が、約１〜３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度でのイズロン酸−２−スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、約１５４ｍＭの濃度でのＮａＣｌと、約０．００５％の濃度でのポリソルベート２０と、約６．０のｐＨとを含み、
任意に、前記Ｉ２Ｓタンパク質が、約１０ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、または３００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の安定製剤。
請求項７〜１５のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器であって、
任意に、
（ｉ）前記容器が、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、ｌｙｏ−ｊｅｃｔ、または前充填した注射器から選択され、任意に、前記容器が、前充填した注射器であり、ベイクドシリコーン被覆膜を有するホウケイ酸ガラス注射器、噴霧シリコーンを有するホウケイ酸ガラス注射器、またはシリコーンを含有しないプラスチック樹脂注射器から任意に選択される、あるいは、
（ｉｉ）前記安定製剤が、約５．０ｍＬ未満、任意に約３．０ｍＬ未満の容積で存在する、
容器。