JP2013523691A5 - アルガンの木の脱分化した防御反応誘発されていない細胞のインビトロ培養物から生成される調製物、皮膚老化、炎症および瘢痕を処置するためのその使用、ならびにその製造 - Google Patents

Description

本発明の目的は、脱分化した防御反応誘発されていないアルガン細胞のインビトロ培養物に由来する調製物、前記調製物を含む美容組成物または皮膚科学的組成物、ならびに皮膚老化、炎症および瘢痕の処置のためのその使用である。

特許出願ＷＯ０３０７７８８１には、インビトロ培養物中の脱分化し、防御反応誘発された植物細胞（少なくとも１種のフィトアレキシンを合成する）の少なくとも１つのホモジネートを含む局所適用のための組成物が開示されている。その植物材料は、好ましくは、ブドウに由来する。

このように、この文書は、脱分化され、防御反応誘発され得る植物細胞の美容上の適用を開示しており、ここで、その防御反応誘発は、局所的使用において生物学的活性を可能にする十分量の二次代謝産物をもたらす。

驚いたことに、また予想外にも、本発明者らは、脱分化しているが防御反応誘発されていないアルガン細胞のインビトロ培養物に由来する調製物が、アンチエイジング、炎症および瘢痕形成の分野における優れた美容上のおよび／または皮膚科学的な活性を有することを証明した。

得られた結果は、アルガンの特定の場合において、アルガン細胞培養物（この場合、防御反応誘発されていない細胞）の別の応用法が、上記で述べられた状況において可能であることを示す。

さらに、本発明において開示されるような調製物を得ることによって、工業的に困難かつ高価な工程である防御反応誘発工程の必要性を無くすことができる；防御反応誘発は、細胞増殖の低下が原因で、かなり低いバイオマス収量をもたらす。

出願ＷＯ０３０７７８８１には、この防御反応誘発を行う様々な方法、例えば、３日間にわたるＵＶ照射；２４時間から２日間にわたる二酸化炭素；５日間にわたるＵＶ照射および二酸化炭素が述べられている。

ゆえに、本発明は、脱分化した防御反応誘発されていないアルガン細胞のインビトロ培養物に由来する調製物、前記調製物を含む美容組成物または皮膚科学的組成物、ならびに化粧品学および／または皮膚科学における（優先的には、皮膚老化、炎症および瘢痕の処置のための）その使用を目的としている。

当該分野の現在の状況において、概して、細胞培養物の防御反応誘発（化学的、物理的、生物学的）は、より多くの二次代謝産物を刺激、生成することができる。本発明による本発明者らの方法では、本発明者らは、ほとんどの場合とは異なり、驚いたことに、防御反応誘発は必要なく、防御反応誘発がバイオマスの増殖および求められる生物学的活性に有害であることを示す。

本発明の目的の１つは、脱分化した防御反応誘発されていないアルガン細胞のインビトロ培養物に由来する調製物に関する。

本発明は、上に記載されたように活性成分として防御反応誘発されていない脱分化したアルガン細胞の培養物に由来する調製物を含む美容組成物または皮膚科学的組成物にも関する。

本発明者らは、脱分化した防御反応誘発されていないアルガン細胞に由来する調製物が、以下の活性：
−内因性および外因性の加齢に関する酸化プロセスならびに炎症性プロセスを制限する抗酸化抗ラジカル活性
−コラーゲンを分解するメタロプロテアーゼの阻害によって、成熟した皮膚の力学的特性（堅さ、弾性、張度）を改善する、細胞外マトリックスに対する活性
を有し得ることも示した。

装置および方法
実施例２ａに係る防御反応誘発されていないバイオマスの生成
防御反応誘発されたバイオマスの調製物
成長因子（カイネチンおよび２４Ｄ）を含まないＭｕｒａｓｈｉｇｅ＆Ｓｋｏｏｇ培地を調製する。ＫＯＨを加えることによってこの培地をｐＨ６に調整した後、１２１℃（ｐ＝１ｂａｒ）で２０分間オートクレーブする。次いで、この培地を、増殖培養物に由来する細胞懸濁液を用いて１：５の体積で接種する。その直後に、カイネチンＤＭＳＯに６−ベンジルアミノプリン（ＢＡＰまたは（Ｎ−（フェニルメチル）−７Ｈ−プリン−６−アミン）およびエリシター剤（アセチルサリチル酸およびジャスモン酸メチル）の濃縮溶液を無菌的に加えることによって、防御反応誘発条件をもたらす。結果は、ＥＭＳ防御反応誘発培地である（表４を参照のこと）。次いで、その防御反応誘発された培養物を、１１５ＲＰＭおよび２９℃、暗黒下の振盪台上で１５日間維持する。次いで、新鮮バイオマスを回収し、ブフナー漏斗上で乾燥した後、粉砕および遠心分離を行い、浮遊物を凍結乾燥することによって安定化する。

ヒトＨａＣａＴケラチノサイトにおけるＴＧＦ−β１の合成に対する、実施例２ａに従って調製された防御反応誘発されていないアルガンバイオマスおよび防御反応誘発後に得られたアルガンバイオマスの作用を、添付の図１に示す。それらは、ＨａＣａＴケラチノサイトにおいて、実施例２ａに従って調製された防御反応誘発されていないアルガンバイオマス（５０μｇ／ｍＬ）が、ＴＧＦ−β１の合成を４８％刺激するが、防御反応誘発されたアルガンバイオマスは、ＴＧＦ−β１の合成を２６％阻害することを示している。

Claims (4)

1. 活性成分としての、防御反応誘発されていない脱分化したアルガン細胞の培養物から、防御反応誘発を経ることなく得られる調製物、および
   美容上または皮膚科学的に許容される賦形剤、
   を含んでなる美容組成物または皮膚科学的組成物であって、前記調製物が、培養培地を含まない細胞懸濁液、バイオマスまたは粉砕バイオマスの形態である、美容組成物または皮膚科学的組成物。
2. 前記調製物の量が、組成物の総重量の０．１〜１０％である、請求項１に記載の組成物。
3. 皮膚老化または皮膚炎症の処置において使用するための、請求項１または２に記載の組成物。
4. 請求項１に記載の美容組成物または皮膚科学的組成物を製造するための方法であって、以下の工程：
   ａ）アルガン細胞を含むアルガン植物材料を滅菌することにより、滅菌されたアルガン細胞を得る工程、
   ｂ）滅菌されたアルガン細胞を脱分化することにより、脱分化したアルガン細胞を得る工程、
   ｃ）脱分化したアルガン細胞を、エリシターを含まない培養培地中に懸濁させる工程、
   ｄ）エリシターを含まない培養培地中で脱分化したアルガン細胞を増殖させることにより、防御反応誘発されていない脱分化したアルガン細胞の集団を得る工程、
   ｅ）エリシターを含まない培養培地から防御反応誘発されていない脱分化したアルガン細胞の集団を収穫し、これにより、防御反応誘発されていない脱分化したアルガン細胞の培養物に由来する調製物を取得する工程、ならびに
   ｆ）防御反応誘発されていない脱分化したアルガン細胞の培養物に由来する調製物に、美容上または皮膚科学的に許容される賦形剤を添加する工程
   を含んでなる、方法。