KR101734994B1 - 장미잎 캘러스의 성장 유도와 항산화능 증가를 위한 배지 조성물 및 이를 이용한 장미잎 캘러스의 배양 방법 - Google Patents

장미잎 캘러스의 성장 유도와 항산화능 증가를 위한 배지 조성물 및 이를 이용한 장미잎 캘러스의 배양 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 장미잎 캘러스의 성장 유도와 항산화능 증가를 위한 배지 조성물 및 이를 이용한 배양 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 장미잎의 캘러스 유도 및 성장을 향상시키고, 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스를 유도할 수 있는 배지 조성물 및 이를 이용하여 장미잎 캘러스를 배양하는 방법에 관한 것이다.

Description

장미잎 캘러스의 성장 유도와 항산화능 증가를 위한 배지 조성물 및 이를 이용한 장미잎 캘러스의 배양 방법{A media composition for maximized anti-oxidant capacity and growth in rose leaf-induced callus, and cultivation methods thereof}
본 발명은 장미잎 캘러스의 성장 유도와 항산화능 증가를 위한 배지 조성물 및 이를 이용한 배양 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 장미잎의 캘러스 유도 및 성장을 향상시키고, 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스를 유도할 수 있는 배지 조성물 및 이를 이용하여 장미잎 캘러스를 배양하는 방법에 관한 것이다.
북반구의 한대·아한대·온대·아열대에 분포하며 약 100여종 이상의 야생종이 알려져 있으며, 오늘날 장미라고 하는 것은 이들 야생종의 자연잡종과 개량종을 의미한다. 장미는 아름다운 형태와 향기로 인하여 관상용과 향료용으로 재배해왔으며, 개량을 통하여 육성한 원예종(Rosa hybrida Hort.)을 말한다.
지금까지 2만 5000종이 개발되었으나 현존하는 것은 6~7000종이며, 해마다 200종 이상의 새 품종이 개발되고 있는 상황이다. 장미는 그리스·로마 시대에 서아시아에서 유럽지역의 야생종과 이들의 자연교잡에 의한 변종이 재배되고 있었으며, 이때부터 르네상스시대에 걸쳐 주로 유럽 남부에서 많이 재배되었다.
한국에서는 일찍부터 찔레꽃·돌가시나무·해당화·붉은인가목 등과 중국 야생종을 관상용으로 가꾸어왔으며, <양화소록>에서도 가우(佳友)라 하여 화목 9품계 중에서 5등에 넣고 있으며, 서양장미는 8·15광복 후에 유럽·미국 등지로부터 우량종을 도입하여 다양한 원예종을 재배하고 있다.
이러한 장미는 국화 등과 더불어 화전과 화채의 재료로도 사용되어 왔듯이, 다양한 약리효과가 있는 것으로 알려져 있다. 장미꽃은 맛이 달고, 성질은 따뜻하며, 독이 없으며, 혈액순환을 촉진시키고, 부기를 가라앉히는 효능이 있을 뿐만 아니라, 각종 비타민, 유기산, 탄닌 등 다양한 성분을 함유하여 강장효과, 노화방지, 혈압조절효과 등을 나타내는 것으로 알려져 있다.
한편, 최근 들어서는 식물의 줄기세포라고 불리우는 식물 캘러스 소재가 우수한 생리활성 효능을 지닌 식품 원료나 화장품의 원료로 각광받고 있다. 이러한 식물 캘러스는 최첨단 식물조직 배양기술을 응용하여 배양 및 대량 생산이 가능한 친환경 최첨단 소재임은 분명하나, 아직 기술개발에 한계가 있어 다양한 식물 캘러스 소재의 개발은 어려운 실정이다.
현재 개발된 캘러스 소재로는 튤립 구근 조직(대한민국 공개특허공보 제10-2016-0010064호), 땅콩(대한민국 공개특허공보 제10-2016-0001961호), 참취(취나물)(대한민국 공개특허공보 제10-2016-0023034호) 등이 있으나, 본 발명에서와 같이, 장미잎의 캘러스 유도 및 성장을 향상시키고, 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스를 유도할 수 있는 배지 조성물에 대해서는 알려진 바가 전혀 없다.
한국공개특허공보 제2016-0010064호 한국공개특허공보 제2016-0001961호 한국공개특허공보 제2016-0023034호
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 장미잎 캘러스의 유도 및 성장을 향상시킬 수 있는 최적의 조건을 정립하기 위해, 식물세포의 생장을 조절하는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid), 질산칼륨(potassium nitrate) 및 미오-이노시톨(myo-inositol)이 첨가된 Medium C를 유효성분으로 함유하는, 장미잎 캘러스의 성장 유도용 배지 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
또한, 본 발명은 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스 소재를 개발하기 위해 캘러스를 유도할 수 있는 배지 조성물 및 이를 이용하여 유도된 장미잎 캘러스를 추출하는 공정과 항산화능 조사를 통하여, 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스를 배양하는 방법을 제공하고자 하는 것이다.
이와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해, 본 발명에 따른 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물은, 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid), 질산칼륨(potassium nitrate), 및 미오이노시톨(myo-inositol)이 첨가된 medium C를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
이때 바람직하기로는, 상기 medium C에는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)가 0.02 ~ 0.04 중량%로 포함될 수 있고, 질산칼륨(potassium nitrate)은 70 ~ 85 중량%로 포함될 수 있으며, 미오이노시톨(myo-inositol)은 2.5 ~ 3.5 중량%로 포함될 수 있다.
여기서, 상기 배지 조성물은 pH 5.0 ~ 7.0인 것이 바람직하고, 본 발명에 따른 상기 배지 조성물에는 한천(agar), 수크로오스(sucrose), MOPS 등이 더 포함되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 장미잎 캘러스의 배양방법은 상기 배지 조성물에 살균된 장미잎을 치상하고 배양하여 캘러스를 유도하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
이상과 같은 구성의 본 발명에 따른 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물에 의하면, 장미잎 캘러스의 유도 및 성장을 향상시킬 수 있는 최적의 조건을 가진 배지 조성물의 제공이 가능하고, 장미잎 캘러스의 성장 뿐 아니라 항산화능까지 우수한 장미잎 캘러스를 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스의 배양 및 대량 생산이 가능하고, 성장 및 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스 소재의 개발로 인해 식품 및 화장품 분야에서 사용 가능한 최첨단 신소재의 개발이 가능하다는 효과가 있다.
도 1은 배지 조성에 따른 장미잎 캘러스의 성장곡선을 나타낸 그래프이다.
도 2는 장미잎 및 장미잎 캘러스의 현미경 사진으로 (A)는 장미잎, (B)는 MS modified medium으로 유도 배양한 장미잎 캘러스, (C)는 본 발명에 따른 medium C로 유도 배양한 장미잎 캘러스의 현미경 사진이다.
도 3은 장미잎 및 각 배지에서 유도된 장미잎 캘러스의 활성산소흡수능(Oxygen Radical Absorbance Capacity, ORAC)을 통해 항산화능을 비교한 그래프이다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예와 도면을 참조하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하되, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명하기 위한 것이지, 이로 인해 본 발명의 기술적인 사상 및 범주가 한정되는 것을 의미하지는 않는다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 장미잎 캘러스의 유도를 위해 본 발명에서는 마르샤 품종인 Rosa hybrida 장미잎을 살균 소독하여 준비한다.
먼저 장미잎을 살리실산 용액에 1~3분간 표면 소독한 후, 70% 에탄올로 5~20초간 침지한 뒤 꺼내어 1% 락스 용액에서 5~20초간 침지하면서 표면을 살균하고, 멸균수로 10~20분씩 3회 세척하고 1.5~3시간 동안 건조시켜 살균 소독한 장미잎을 준비하되 이에 제한되는 것은 아니며, 필요에 따라서는 상기 살균 소독 과정을 여러 번 반복할 수 있다.
장미잎의 살균 소독은 처리시간에 따라 시간이 길어질 경우 조직이 파괴되고, 시간이 부족할 경우 표면 조직의 각종 곰팡이 및 세균이 완전히 소독되지 않아 오염이 생길 수 있으므로 적당한 처리시간으로 살균 소독을 실시하는 것이 중요하다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 장미잎의 살균 소독은 5 mM 살리실산 용액에 2분간 표면 소독한 후, 70% 에탄올로 10초간 침지한 뒤 꺼내어 1% 락스 용액에서 10초간 침지하면서 표면을 살균하고, 멸균수로 15분씩 3회 세척하고 2시간 동안 건조시키는 살균 소독 과정을 2회 실시하는 것이 바람직하다.
본 발명에서 정의되는 ‘캘러스(callus)'란 기관, 조직 등을 조직배양하여 형성된 무정형의 미분화 세포 덩어리를 의미하며, 캘러스는 완전한 성체로 재분화할 수 있는 전능성(totipotency)를 가지고 있다.
본 발명에서 캘러스 유도용 배지는 통상적인 것을 사용할 수 있다. 예를 들면, MS(Murashige and Skoog) 배지, B5(Gamborg et al.) 배지, LS(Linsmaier and McCown) 배지, White 배지, SH(Schenk and Hildebrandt) 배지, WPM(McCown's Woody Plant Medium) 배지, Medium C(Carrot) 배지로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 이 중에서 Medium C를 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 배지 조성물에는 캘러스를 유도할 수 있는 기타의 조성물이 더 포함될 수 있으며, 그 예로 생장조절물질인 옥신 및 사이토키닌으로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 생장조절물질이 첨가될 수 있고, 한천(agar) 또는 젤란검(gellan gum)이나 탄소원으로 sorbitol, mannitol, fructose, glucose 또는 sucrose 등, 그리고 MOPS 등이 포함될 수 있다.
여기서 상기 생장조절물질로는 옥신계인 나프탈렌 아세트산(Naphthalene Acetic Acid, NAA), 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid), 인돌-3-아세트산(Indole-3-acetic acid, IAA), 및 인돌뷰트릭산(Indolebutric acid, IBA) 중에서 하나 이상을 사용할 수 있고, 사이토키닌계로는 벤질아데닌(Benzyl adenin, BA), 키네틴(kinetin), 및 제아틴(zeatin) 중에서 하나 이상을 사용할 수 있으나, 본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 생장조절물질로는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)이 포함되는 것이 바람직하고 이때 상기 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)의 농도는 medium C에 대해 0.02 ~ 0.04 중량%의 농도로 포함되는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 배지 조성물에는 질산칼륨(potassium nitrate) 또는 미오이노시톨(myo-inositol)이 첨가된 medium C를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는데, 여기서 상기 질산칼륨(potassium nitrate)은 세포 성장의 영양분으로 작용하는 것으로, 통상 식물세포의 질소 공급원으로써의 역할을 하는 것이고, 상기 미오이노시톨(myo-inositol)은 세포벽의 성장을 돕는 역할을 하는 물질로서 장미잎 캘러스의 유도 및 성장을 향상시키는 주요 조성 가운데 하나이다.
이때 바람직하기로는, 상기 medium C에는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)가 0.02 ~ 0.04 중량%로 포함될 수 있고, 질산칼륨(potassium nitrate)은 70 ~ 85 중량%로 포함될 수 있으며, 미오이노시톨(myo-inositol)은 2.5 ~ 3.5 중량%로 포함될 수 있다. 여기서 더욱 바람직하기로는, 상기 질산칼륨(potassium nitrate)은 75 ~ 80 중량%로 포함될 수 있으며, 미오이노시톨(myo-inositol)은 3.0 ~ 3.3 중량%로 포함될 수 있다.
여기서, 상기 배지 조성물의 pH는 5.0 ~ 7.0로 조정될 수 있는데, 이러한 조건에서 조직 배양 효율 및 캘러스 유도 효과가 우수할 수 있다. 이때, 바람직하기로는 pH 5.5 ~ 6.0으로 조정되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하기로는 pH 5.6 ~ 5.8로 조정되는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 실시예에 따른 장미잎 캘러스의 배양방법은 상기 배지 조성물에 살균된 장미잎을 치상하고 실온에서 4~6주 동안 배양하여 캘러스를 유도하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
이때, 조직의 세포가 세포 분열하여 세포의 덩어리인 캘러스가 형성되면, 장미잎 캘러스만을 따로 분리하여 상기 배지 조성물과 동일한 조건의 새로운 배지 위에 치상하여 배양할 수도 있다.
이렇게 유도 배양된 장미잎 캘러스는 우수한 성장능 뿐만 아니라 항산화능까지도 향상된 캘러스로 제공될 수 있으며, 나아가, 본 발명은 성장능 및 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스 소재의 개발로 인해 식품 및 화장품 분야에서 사용 가능한 최첨단 신소재의 개발이 가능하다.
본 발명의 또 다른 실시예에서 상기 장미잎 캘러스 배양물은 감압 및 농축 과정을 거쳐 추출물의 형태 또는 동결건조 후 분말 상태로 화장품 조성물에 포함될 수 있다. 이때 바람직하기로는 상기 장미잎 캘러스 배양물은 상기 화장품 조성물 전체 중량에 대하여 1~50 중량%로 포함될 수 있고, 이러한 범위로 포장시 인체에 무해하면서도 제형 안정성이 우수하고, 피부 보습, 항산화, 항염, 항노화 효과 면에서 우수하다.
본 발명의 장미잎 캘러스 배양물을 함유하는 화장품 조성물은 용액, 겔, 크림류, 로션류, 파우더, 화장수류, 파운데이션류 또는 고체화된 비누류 등의 화장품 제형으로 제제화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 통상 화장품 조성물의 원료로써 사용되는 일반적인 성분들이라면 함께 특정 제형의 제조를 위해 사용될 수 있으며, 구체적으로 용매, 용해제, 보습제, 겔화제, 점증제, 연화제, 안정화제, 유화제, 계면활성제, 항산화제, 방부제, 살균제, 비타민, 향료, 오일, 염료 등의 화장품 조성물 원료가 첨가될 수 있으며, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
그리고 본 발명의 일 실시예에 따른 장미잎 캘러스 배양물을 함유하는 화장품 조성물에 일반적으로 포함되는 성분 이외에 한방 또는 양약학적으로 사용할 수 있는 다른 성분 등도 본 발명의 효과에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 포함될 수 있음은 당연하다.
[실시예]
이하, 본 발명을 구체적인 실시예를 이용하여 보다 상세히 설명한다.
실시예 1 : 장미잎 캘러스 유도 준비
1. 장미잎 살균 소독
장미잎 캘러스의 유도를 위해 본 발명에서는 마르샤 품종인 Rosa hybrida 장미잎을 살균 소독하여 준비한다.
먼저 장미잎을 5 mM 살리실산 용액에 2분간 표면 소독한 후, 70% 에탄올로 10초간 침지한 뒤 꺼내어 1% 락스 용액에서 다시 10초간 침지하면서 표면을 살균하고, 멸균수로 15분씩 3회 세척하고 2시간 동안 건조시킨다. 건조된 장미잎은 다시 이러한 살균 소독 과정을 한번 더 반복한다.
2. 캘러스 유도 배지 준비
MS(Murashige and Skoog) meium(w/ Vitamins), MS(Murashige and Skoog) modified medium, Medium C를 아래 표 1에 기재된 성분대로 준비한다.
이때 Medium C에는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)가 0.0313 중량%로 포함되고, 질산칼륨(potassium nitrate)은 78.3579 중량%로 포함되며, 미오이노시톨(myo-inositol)은 3.1343 중량%로 포함되도록 한다.
1차 배지 성분표
Name MS Medium
(w/ Vitamins)		 MS Modified Medium Medium C
Content Content Content
Ammonium nitrate 37.407% 4.7636% 4.2%
Boric acid 0.141% 0.0179% 0.094%
Calcium chloride, anhydrous 7.531% 0.9591% 3.5493%
Cobalt chloride 6H2O 0.001% 0.0001% 0.0008%
Cupric sulfate 5H2O 0.001% 0.0001% 0.0008%
Ferric sodium EDTA 3H2O 0.955% 0.1216% 1.3199%
Magnesium sulfate, anhydrous 4.097% 0.5217% 3.8267%
Manganese sulfate H2O 0.383% 0.0488% 0.3134%
Molybdic acid(Sodium salt) 2H2O 0.006% 0.0007% 0.0078%
Potassium iodide 0.019% 0.0024% 0.0235%
Potassium nitrate 43.074% 5.4854% 78.3579%
Potassium phosphate, monobasic 3.854% 0.4908% 4.7015%
Sodium phosphate, monobasic - 0.4273% -
Zinc sulfate 7H2O 0.195% 0.0248% 0.0627%
Adenine hemisulfate - 0.231% -
Kinetin - 0.0029% -
Myo-Inositol 2.267% 0.2887% 3.1343%
a-Naphthalene acetic acid (NAA) - 0.0003% -
Sucrose - 86.6116% -
Thiamine HCl 0.002% 0.0012% 0.3135%
2,4-Dichlorophenoxyacetic acid
(2,4-D)		 - - 0.0313%
Nicotinic acid(Free acid) 0.011% - 0.0313%
Pyridoxine HCl 0.011% - 0.0313%
Glycine 0.045% - -
Total 100% 100% 100%
준비된 각 배지에 한천(agar), 수크로오스(sucrose), MOPS를 추가하여 pH를 5.6~5.8로 조정한 후 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 petri dish에 분주하여 장미잎 캘러스 유도 배지로 사용한다.
이때 각 배지에 추가되는 한천(agar), 수크로오스(sucrose), MOPS의 조성은 아래 표 2와 같다.
최종 배양 배지 성분표
MS Medium (w/ Vitamins) MS Modified Medium Medium C
1차 배지성분(표 1) 4.41g 34.64g 3.19g
agar 8g 8g 8g
sucrose 10.09g 10.09g 10.09g
MOPS 0.5g 0.5g 0.5g
3차 증류수 위 성분들을 3차 증류수 1L에 녹이고, 1M KOH로 pH 5.7로 조정 후 멸균
3. 장미잎 캘러스 유도 단계
살균 소독한 장미잎 조직을 약 0.5~1 ㎠ 크기로 자른 뒤 각각의 캘러스 유도용 배지 위에 치상하였다. 실온에서 4~6주 동안 배양하여 장미잎 캘러스를 유도하였다.
실시예 2 : 장미잎 캘러스의 성장 측정
각각의 배지에서 유도된 장미잎 캘러스를 4~5일 간격으로 자를 이용하여 캘러스의 크기를 측정하였다. 잎의 네 모서리로부터 형성된 캘러스를 측정하여 평균값과 ± 표준 오차(SE)를 구하였다.
그 결과, 모든 배지에서 장미잎 캘러스가 유도되었으나, 통상적인 MS medium에 비해 MS modified medium과 medium C에서 유도가 빠르게 진행되었으며, 특히 medium C에서 현저하게 빠른 장미잎 캘러스의 유도와 향상된 성장 속도를 확인할 수 있었다(도 1 참조).
이러한 결과는 배지에 포함된 생장조절물질(Kinetin, NAA, 2,4-D 등)의 첨가 유무에 의한 것으로 판단되며, 특히, 2,4-D와 질산칼륨(potassium nitrate), 미오이노시톨(myo-inositol)이 첨가된 medium C에서 우수한 장미잎 캘러스 유도 및 성장의 향상을 보였고, 현미경을 통해 확인한 결과 성체 장미잎에 비해 분화되지 않은 무정형의 미분화 세포 덩어리를 확인할 수 있었다(도 2 참조).
한편, 배지에 따른 캘러스의 외형적 특징은 아래 표 3과 같다.
배지에 따른 캘러스의 특징
Callus
(MS Medium, w/ Vitamins)		 Callus
(MS Modified Medium)		 Callus
(Medium C)
- Light-green and compact callus Whitish and globular callus
표 3의 결과로부터 알 수 있듯이, Medium C에서 유도된 장미잎의 캘러스는 MS modified medium에서 유도된 캘러스에 비해 희고 동그란 특성을 가지고 있어, Medium C 배지를 사용하게 되면 캘러스 분화를 빨리 유도할 수 있다는 것을 알 수 있다.
실시예 3 : 항산화능 측정
1. 장미잎 캘러스 추출
성체 장미잎과 각각의 배지에서 유도된 캘러스를 40℃에서 2시간 동안 인큐베이터에서 70% 에탄올로 추출하였다. 추출액을 원심분리(4℃, 8,000 rpm, 30분)한 후 여과하여 회전감압농축기로 60℃에서 농축하였고, 농축된 추출물은 동결건조하여 항산화능 측정 시료로 사용하였다.
2. 항산화능 측정(ORAC(Oxygen Radical Absorbance Capacity) 분석)
성체 장미잎 및 장미잎 캘러스의 항산화능을 알아보기 위해 ORAC 분석을 하였다. 96 well black plate의 각 well에 75 mM phosphate buffer에 녹인 80 nM fluorescein solution 100 ㎕와 phosphate buffer를 사용하여 희석한 각 측정 시료 50 ㎕를 첨가하고, 산화물질로 2,2’-Azobis(2-amidino-propane) dihydrochloride(AAPH) 50 ㎕를 추가하여 GENios fluorescence plate reader(TECAN Trading AG, Switzerland)를 이용해 37℃ 조건에서 2분 간격으로 100 cycle 동안 형광값을 측정하였다.
그 결과 캘러스는 성체잎에 비해 항산화능이 미비하다고 알려져 있으나, medium C 조성에 따른 캘러스 유도 추출물은 항산화제인 비타민 C와 비교할 때 30%를 보여, 우수한 항산화능을 가진 장미잎 캘러스의 유도 성장이 가능함이 확인할 수 있다(도 3 참조).
결국 2,4-D와 질산칼륨(potassium nitrate), 미오이노시톨(myo-inositol)이 첨가된 medium C에서, 우수한 장미잎 캘러스의 유도 및 성장의 향상과 함께, 항산화능 역시 우수한 장미잎 캘러스의 소재 개발이 가능함을 알 수 있었다.
통상 성체 장미잎에 비해 캘러스는 성장인자 등의 면에서는 우수하나 항산화능이 낮은 단점이 있었으나, medium C에서 유도 배양된 장미잎 캘러스는 이러한 단점을 극복할 수 있는 우수한 항산능 향상 효과를 보였다.
따라서 본 발명에 따른 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물에 의하면, 장미잎 캘러스의 유도 및 성장을 향상시킬 수 있는 최적의 조건을 가진 배지 조성물의 제공이 가능하고, 장미잎 캘러스의 성장 뿐 아니라 항산화능까지 우수한 장미잎 캘러스를 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스의 배양 및 대량 생산이 가능하고, 성장능 및 항산화능이 우수한 장미잎 캘러스 소재의 개발로 인해 식품 및 화장품 분야에서 사용 가능한 최첨단 신소재의 개발이 가능하다는 효과가 있다.
[제조예] 장미잎 캘러스 배양물을 함유하는 화장품 조성물의 제조
상기 실시예에서 배양된 장미잎 캘러스 배양물을 함유하는 화장품 조성물을 제조하기 위해 하기 표 4에 기재된 원료들을 사용하여 통상적인 방법으로 크림을 제조하였다.
상기 실시예 1의 배양물 10 중량부를 70% 에탄올 100중량부에 첨가하고 약 일주일간 실온에서 숙성시킨 다음, 필터링하여 여과액을 수득하였다. 상기 여과액을 회전감압농축기로 60℃에서 감압 및 농축하여, 농축된 추출물은 수득하여 준비하였다.
장미잎 캘러스 배양물을 함유하는 크림 화장품 성분표
성분명 content (중량 %)
정제수 70.29
실시예 1의 장미잎 캘러스 농축 추출물 5.0
카르복시메틸셀룰로스 15.0
글리세릴스테아레이트 2.0
스테아릭애씨드 3.0
1,3-부틸렌글라이콜 2.0
글리세린 1.0
세테아릴알코올 1.0
비즈왁스 0.6
구연산 0.1
방부제 0.01
Total 100
이와 같이 본 발명에 따른 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물에 대하여 설명하였으나, 본 명세서에 개시된 실시예와 도면에 의해 본 발명은 한정되지 않으며 그 발명의 기술사상 범위 내에서 당업자에 의해 다양한 변형이 이루어질 수 있음은 물론이다.

Claims (6)

  1. 캘러스 유도용 배지 조성물에 있어서, Ammonium nitrate 4.2 중량%, Boric acid 0.094 중량%, Calcium chloride anhydrous 3.5493 중량%, Cobalt chloride 6H2O 0.0008 중량%, Cupric sulfate 5H2O 0.0008 중량%, Ferric sodium EDTA 3H2O 1.3199 중량%, Magnesium sulfate, anhydrous 3.8267 중량%, Manganese sulfate H2O 0.3134 중량%, Molybdic acid(Sodium salt) 2H2O 0.0078 중량%, Potassium iodide 0.0235 중량%, Potassium nitrate 78.3579 중량%, Potassium phosphate monobasic 4.7015 중량%, Zinc sulfate 7H2O 0.0627 중량%, Myo-Inositol 3.1343 중량%, Thiamine HCl 0.3135 중량%, 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 0.0313 중량%, Nicotinic acid Free acid 0.0313 중량% 및 Pyridoxine HCl 0.0313 중량%를 포함하는 medium C를 유효성분으로 함유하는, 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제 1항에 있어서, 상기 배지 조성물은 pH 5.0 ~ 7.0인 것을 특징으로 하는, 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 배지 조성물에는 한천(agar), 수크로오스(sucrose), MOPS가 더 포함되는 것을 특징으로 하는, 장미잎 캘러스의 성장 유도 및 항산화능 증가를 위한 배지 조성물.
  6. 제 1항, 제 4항 및 제 5항 중 어느 한 항의 배지 조성물에 살균된 장미잎을 치상하고 배양하여 캘러스를 유도하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 장미잎 캘러스의 배양방법.
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