JP2013516183A - 固定された組織サンプルからの核酸またはタンパク質の回収のための方法、組成物、およびキット - Google Patents
固定された組織サンプルからの核酸またはタンパク質の回収のための方法、組成物、およびキット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013516183A JP2013516183A JP2012547332A JP2012547332A JP2013516183A JP 2013516183 A JP2013516183 A JP 2013516183A JP 2012547332 A JP2012547332 A JP 2012547332A JP 2012547332 A JP2012547332 A JP 2012547332A JP 2013516183 A JP2013516183 A JP 2013516183A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- solution
- scavenger
- group
- biological sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 74
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 74
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 13
- 238000011084 recovery Methods 0.000 title abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 85
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims abstract description 42
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims abstract 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 41
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims description 36
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 27
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 25
- HCOMFAYPHBFMKU-UHFFFAOYSA-N butanedihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCC(=O)NN HCOMFAYPHBFMKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 claims description 14
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 claims description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- HAMNKKUPIHEESI-UHFFFAOYSA-N aminoguanidine Chemical compound NNC(N)=N HAMNKKUPIHEESI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 7
- 125000005913 (C3-C6) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 6
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000001831 (C6-C10) heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- FQQQSNAVVZSYMB-UHFFFAOYSA-N 1,1-diaminoguanidine Chemical compound NN(N)C(N)=N FQQQSNAVVZSYMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ICGLPKIVTVWCFT-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenesulfonohydrazide Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NN)C=C1 ICGLPKIVTVWCFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- LJTFFORYSFGNCT-UHFFFAOYSA-N Thiocarbohydrazide Chemical compound NNC(=S)NN LJTFFORYSFGNCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N acetohydrazide Chemical compound C\C(O)=N\N OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VJRITMATACIYAF-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonohydrazide Chemical compound NNS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 VJRITMATACIYAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- XEVRDFDBXJMZFG-UHFFFAOYSA-N carbonyl dihydrazine Chemical compound NNC(=O)NN XEVRDFDBXJMZFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- XZBIXDPGRMLSTC-UHFFFAOYSA-N formohydrazide Chemical compound NNC=O XZBIXDPGRMLSTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- BRWIZMBXBAOCCF-UHFFFAOYSA-N hydrazinecarbothioamide Chemical compound NNC(N)=S BRWIZMBXBAOCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 5
- DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N semicarbazide group Chemical group NNC(=O)N DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 2
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 29
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 11
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- UBDZFAGVPPMTIT-UHFFFAOYSA-N 2-aminoguanidine;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=N[NH3+] UBDZFAGVPPMTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- -1 hydrazine compound Chemical class 0.000 description 7
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L magnesium;aluminum;dihydroxide;trihydrate Chemical compound O.O.O.[OH-].[OH-].[Mg+2].[Al] ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N potassium dichromate Chemical compound [K+].[K+].[O-][Cr](=O)(=O)O[Cr]([O-])(=O)=O KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- SNVRDQORMVVQBI-UPHRSURJSA-N (z)-but-2-enedihydrazide Chemical compound NNC(=O)\C=C/C(=O)NN SNVRDQORMVVQBI-UPHRSURJSA-N 0.000 description 3
- DHVLDKHFGIVEIP-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-2-(bromomethyl)pentanedinitrile Chemical compound BrCC(Br)(C#N)CCC#N DHVLDKHFGIVEIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- WSDISUOETYTPRL-UHFFFAOYSA-N dmdm hydantoin Chemical compound CC1(C)N(CO)C(=O)N(CO)C1=O WSDISUOETYTPRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 3
- ZNGSVRYVWHOWLX-KHFUBBAMSA-N (1r,2s)-2-(methylamino)-1-phenylpropan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CN[C@@H](C)[C@H](O)C1=CC=CC=C1.CN[C@@H](C)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 ZNGSVRYVWHOWLX-KHFUBBAMSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OLQJQHSAWMFDJE-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-nitropropane-1,3-diol Chemical group OCC(CO)(CO)[N+]([O-])=O OLQJQHSAWMFDJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLMKTBGFQGKQEV-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hexadecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO NLMKTBGFQGKQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 2
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol monoethoxylate Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCO)C=C1 JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N Acrolein Chemical compound C=CC=O HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical group O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N bis-tris propane Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCCNC(CO)(CO)CO HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N bronidox Chemical compound [O-][N+](=O)C1(Br)COCOC1 XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L chromic acid Substances O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M deoxycholate Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-b]pyrazine-5,7-dione Chemical compound C1=CN=C2C(=O)OC(=O)C2=N1 AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 108010087904 neutravidin Proteins 0.000 description 2
- 239000012285 osmium tetroxide Substances 0.000 description 2
- 229910000489 osmium tetroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- UKHVLWKBNNSRRR-TYYBGVCCSA-M quaternium-15 Chemical compound [Cl-].C1N(C2)CN3CN2C[N+]1(C/C=C/Cl)C3 UKHVLWKBNNSRRR-TYYBGVCCSA-M 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 238000000856 sucrose gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940058012 1,3-dimethylol-5,5-dimethylhydantoin Drugs 0.000 description 1
- CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 1-dodecoxydodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecoxyhexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCCCCCC FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBTIFBJEYFLFFW-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethylazaniumyl)acetate Chemical compound OCNCC(O)=O WBTIFBJEYFLFFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDIMQHBOTMWMJA-UHFFFAOYSA-N 4-amino-3-hydrazinyl-1h-1,2,4-triazole-5-thione Chemical compound NNC1=NNC(=S)N1N RDIMQHBOTMWMJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 1
- 239000007989 BIS-Tris Propane buffer Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde Chemical compound OC[C@@H](O)C=O MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- YNLCVAQJIKOXER-UHFFFAOYSA-N N-[tris(hydroxymethyl)methyl]-3-aminopropanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCCS(O)(=O)=O YNLCVAQJIKOXER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000034953 Twin anemia-polycythemia sequence Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O.OC(O)=O HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- HDFRDWFLWVCOGP-UHFFFAOYSA-N carbonothioic O,S-acid Chemical class OC(S)=O HDFRDWFLWVCOGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001728 carbonyl compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- SOROIESOUPGGFO-UHFFFAOYSA-N diazolidinylurea Chemical compound OCNC(=O)N(CO)C1N(CO)C(=O)N(CO)C1=O SOROIESOUPGGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001083 diazolidinylurea Drugs 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 230000005293 ferrimagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071206 hydroxymethylglycinate Drugs 0.000 description 1
- ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N imidurea Chemical compound O=C1NC(=O)N(CO)C1NC(=O)NCNC(=O)NC1C(=O)NC(=O)N1CO ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 1
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);zirconium(4+) Chemical compound [O-2].[O-2].[Zr+4] RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229940096792 quaternium-15 Drugs 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- CITBNDNUEPMTFC-UHFFFAOYSA-M sodium;2-(hydroxymethylamino)acetate Chemical compound [Na+].OCNCC([O-])=O CITBNDNUEPMTFC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002910 solid waste Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003458 sulfonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229910001928 zirconium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は2010年1月4日付で出願された米国仮特許出願第61/292,078号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
組織または細胞サンプルにおいて固定された核酸またはタンパク質の回収率を改善するための方法およびキットが記述される。
組織学、病理学および細胞生物学の分野において、固定は、生物学的サンプルが腐敗から保護される化学工程である。固定は、継続中のいかなる生化学反応も終結させ、処理サンプルの機械的強度または安定性を高めることもできる。固定の目的は、生物学的材料のサンプルをその天然状態にできるだけ近いように保存することである。固定サンプルは検査または分析に用いられる。
A) 生物学的サンプルと、
式
の少なくとも一つの末端ヒドラジン基を含む捕捉剤を含む捕捉溶液と
を接触させる段階; および
B) 生物学的サンプルから核酸またはタンパク質を放出するのに十分な条件の下で生物学的サンプルを処理する段階; および
C) 核酸またはポリペプチドである標的分子を、単離溶液から回収する段階
を含む。
a) 式Iに記載の化合物
; および
b) 式IIに記載の化合物
からなる群より選択され、
式中、R1がC1〜C12アルキル; C1〜C12アルケニル; C3〜C6シクロアルキル; C3〜C6シクロアルケニル; C6〜C10アリール; およびC6〜C10ヘテロアリールからなる群より選択され; R2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、
からなる群より選択され; mが0および1からなる群より選択される整数であり; かつnが1および2からなる群より選択される整数である。ある態様において、捕捉剤は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように当技術分野において公知の方法により改変することができる。例えば、R1は、R1構成要素の親水性を高める構成要素で置換されてもよい。
(i) 核酸プローブを、第2の核酸を有する標的核酸とハイブリダイズさせて核酸ハイブリッドを形成させる段階;
(ii) 核酸ハイブリッドを固相に結合させる段階;
(iii) 固相を捕捉溶液から分離する段階; および
(iv) 標的核酸を固相から溶出させる段階
を含む方法によって、捕捉溶液から回収される。
核酸ハイブリッドと、
核酸ハイブリッドに結合できる抗体であって、固相に結合されているかまたは固相に結合されるように適合されている該抗体と
を接触させる段階を含む方法によって、固相に結合される。
(i) 緩衝液;
(ii) 界面活性剤;
(iii) 式
の少なくとも一つの末端ヒドラジン基を含む捕捉剤; および
(iv) 任意で、タンパク質消化酵素。
a) 式Iに記載の化合物
; および
b) 式IIに記載の化合物
からなる群より選択され、
式中、
R1がC1〜C12アルキル; C1〜C12アルケニル; C3〜C6シクロアルキル; C3〜C6シクロアルケニル; C6〜C10アリール; およびC6〜C10ヘテロアリールからなる群より選択され、ここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよく;
R2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ
からなる群より選択され、かつ
mが0および1からなる群より選択される整数であり; かつ
nが1および2からなる群より選択される整数である。
本出願は概して、液体の細胞学用媒質中に保存された生物学的サンプルからの標的分子の回収率を高めるための捕捉化合物の使用に関する。
に記載の化学基であり、式中、波状の結合が化学構造の場合には残部への付着を示す。ヒドラジンはカルボニル(アルデヒドおよびケトン)と容易に反応して、ヒドラゾン結合を形成する。これらの結合はカルボニルの酸素を、他の因子と結合するアルデヒドの能力を制限する窒素官能基と置き換える。例示的な反応スキームは図1に記載されている。
式中、
R1 C1〜C12アルキル; C1〜C12アルケニル; C3〜C6シクロアルキル; C3〜C6シクロアルケニル; C6〜C10アリール; およびC6〜C10ヘテロアリール; ならびに
mが0および1からなる群より選択される整数である。
を含む化合物であり、
式中、波状の結合が中心化学構造への付着を示し、かつR2が
からなる群より選択される。
式中、
R1 C1〜C12アルキル; C1〜C12アルケニル; C3〜C6シクロアルキル; C3〜C6シクロアルケニル; C6〜C10アリール; およびC6〜C10ヘテロアリール; ここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよく、
R2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、
からなる群より選択され、かつ
mが1および2からなる群より選択される整数である。
A. 細胞およびサンプル
ヒトパピローマウイルス16核酸を含む生物学的サンプルを用いて本開示による材料および方法を試験した。いくつかの例では、SiHa細胞株を用い、これはヒト子宮頸がんに由来する。SiHa細胞は、組み込まれたHPV 16ゲノムを含むことが公知である。他の例では、HPV 16に感染しているものと判定された臨床サンプルを用いた。HPV 16アッセイ法の陰性対照として、HPV陰性であるものと判定された臨床サンプルまたはJurkat細胞を用いた。
いくつかの例では、陰イオン交換材料で処理された常磁性ビーズを使った、陰イオン交換クロマトグラフィーに基づく市販のDNA抽出技術であるHandyLabs(商標)抽出技術を用いて抽出を行った。以下の一般プロトコルを、本実施例において用いた。
いくつかの例では、カラム形式でのシリカゲル吸収に基づく市販のDNA抽出技術であるQiaAmp(登録商標) DNA抽出キット(Qiagen Inc., Hilden, Germany)を用いて、核酸抽出を行った。
本実施例では、10,000個のSiHa細胞(HPV16+)をスパイクしたSUREPATH陰性臨床例を用いて、ヒドラジン化合物の使用に関する最初の実現可能性を調査する。陰性臨床例だけを含むサンプルを、各条件に対する陰性対照として用いる。各サンプルをアジピン酸で処理し、溶解し、上記のHandyLabsプロトコルによる核酸単離のために加工処理した。他に指定のない限り、各サンプルはプロテイナーゼKを含有する。
塩酸アミノグアニジンがSUREPATH媒質中の捕捉剤として、10分間のプレインキュベーション時間で用いられる場合、95%〜100%のDNA回収率が得られる。
アミノグアニジン、アジピン酸ジヒドラジドおよびコハク酸ジヒドラジドを、HandyLabsプロトコルにおいて相互に比較した。20,000個のSiHa細胞をSurePath媒質またはDigene収集媒質(Collection Medium)のいずれかにスパイクし、上記のHandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。各条件に対して二つ組の実験を行った。SurePath媒質での各ヒドラジンに対する結果は、図2にて例証されている。いずれの場合でも分かるように、捕捉剤の添加は核酸の回収率を改善した。Digene収集媒質におけるサンプルと比べた場合、捕捉剤の非存在下での回収率は40%〜60%で変化したのに対し、捕捉剤の添加は回収率を85%〜100%にまで改善した。
さまざまな濃度のコハク酸ジヒドラジドおよびアジピン酸ジヒドラジドを同様に、HandyLabsプロトコルにおいて試験した。
細胞数(それゆえ標的核酸のコピー数)を変化させることの効果についても試験した。SurePath 500 μLあたり20,000、10,000、5,000、2,500および0個のSiHa細胞のストックを作出し、0.3 Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは等量の水のいずれかを用い、HandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。結果は図5にて示されている。
捕捉剤による前処理が回収率を改善するかどうかについても試験した。一部のサンプルを、プロテイナーゼKおよび溶解緩衝液の添加前に10分間0.3 Mアジピン酸ジヒドラジドもしくは0.5 Mアミノグアニジン(または等量の水)のいずれかとともにインキュベートしたことを除いては、20,000個のSiHa細胞をSurePath媒質またはDigene収集媒質のいずれかの中にスパイクし、上記のHandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。0.3 Mアジピン酸ジヒドラジド、0.3 Mコハク酸ジヒドラジド、または0.5 Mアミノグアニジンとの10分間または一晩のいずれかのプレインキュベーションを用いて、これを繰り返した。結果は図6および図7にて実証されている。
QiaAmpプロトコルはHandyLabsプロトコルよりもSurePath媒質との適合性が低いことが認められた。それゆえ、陰イオン交換カラムから核酸を溶出する温度を高くすることによって回収率が改善されうるかどうか調べた。20,000個のSiHa細胞をSurePath媒質500 μL中にスパイクし、捕捉剤として0.3 Mコハク酸ジヒドラジドまたは0.3 Mアジピン酸ジヒドラジドのいずれかを用い上記のHandyLabsプロトコルまたはQiaAmpプロトコルのいずれかにしたがって加工処理した。QiaAmpプロトコルの場合、溶出は室温または56℃のいずれかで行った。結果は図9にて示されている。
Claims (30)
- 以下の段階を含む、液体の細胞学用保存液中に保存された生物学的サンプルから標的分子を抽出するための方法:
A) 生物学的サンプルと、
少なくとも一つの末端ヒドラジン基を含む捕捉剤を含む捕捉溶液と
を接触させる段階;
B) 生物学的サンプルから核酸またはタンパク質を放出するのに十分な条件の下で生物学的サンプルを処理する段階; および
C) 標的分子を単離する段階。 - 捕捉剤が、
a) 式Iに記載の化合物
; および
b) 式IIに記載の化合物
からなる群より選択され、
式中、
R1 C1〜C12アルキル; C1〜C12アルケニル; C3〜C6シクロアルキル; C3〜C6シクロアルケニル; C6〜C10アリール; およびC6〜C10ヘテロアリール、ここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよく;
R2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ
からなる群より選択され、かつ
mが0および1からなる群より選択される整数であり; かつ
nが1および2からなる群より選択される整数であり、
該捕捉剤は、水中での溶解性を高めるように改変されていてもよい、
請求項1記載の方法。 - 捕捉剤が式Iの化合物であり、式中、R1がC1〜C12アルキルであり、かつmが1である、請求項2記載の方法。
- R1がC1〜C6アルキルである、請求項3記載の方法。
- R1がC2〜C4アルキルである、請求項3または請求項4記載の方法。
- R1がC1〜C6アルキルである、請求項6記載の方法。
- R1がC2〜C4アルキルである、請求項6または請求項7記載の方法。
- 捕捉剤が、セミカルバジド; チオセミカルバジド; カルバジド; チオカルバジド; N-アミノグアニジンおよびその塩; N,N-ジアミノグアニジンおよびその塩; アセチルヒドラジド; アジピン酸ジヒドラジド; コハク酸ジヒドラジド; ギ酸ヒドラジド; マレイン酸ジヒドラジド; マロン酸ジヒドラジド; ベンゼンスルホニルヒドラジド; トシルヒドラジド; メチルスルホニルヒドラジドからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 捕捉溶液が約0.1 M〜約1.0 Mの捕捉剤を含む、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
- 捕捉溶液が約0.1 M〜約0.5 Mの捕捉剤を含む、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
- 捕捉溶液が約0.2 M〜約0.4 Mの捕捉剤を含む、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
- 捕捉溶液が約0.3 Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは約0.3 Mのコハク酸ジヒドラジドを含む、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法。
- 捕捉溶液が液体の細胞学用保存液に直接添加される、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
- 捕捉溶液がタンパク質消化酵素をさらに含む、請求項1〜14のいずれか一項記載の方法。
- 生物学的サンプルが、該生物学的サンプルから標的分子が放出される前に捕捉溶液と接触される、請求項1〜15のいずれか一項記載の方法。
- 標的分子が、溶解溶液の存在下において生物学的サンプルを溶解させることにより生物学的サンプルから放出される、請求項1〜16のいずれか一項記載の方法。
- 捕捉溶液が溶解溶液である、請求項17記載の方法。
- 捕捉溶液が、生物学的サンプルへの溶解溶液の添加の前、添加の後、または添加と同時に、生物学的サンプルに添加される、請求項17記載の方法。
- 標的分子が標的核酸であり、かつ
C) 該標的核酸が、
(i) 核酸プローブを、第2の核酸を有する標的核酸とハイブリダイズさせて核酸ハイブリッドを形成させる段階;
(ii) 核酸ハイブリッドを固相に結合させる段階;
(iii) 固相を単離する段階; および
(iv) 標的核酸を固相から溶出させる段階
を含む方法によって、単離される、
請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。 - 核酸ハイブリッドがDNA:RNAハイブリッドであり、かつ
該DNA:RNAハイブリッドが、
核酸ハイブリッドと、
核酸ハイブリッドに結合できる抗体であって、固相に結合されているかまたは固相に結合されるように適合されている該抗体と
を接触させる段階を含む方法によって、固相に結合される、
請求項20記載の方法。 - 標的分子が標的核酸であり、かつ
C) 該標的核酸が、
(i) 標的核酸を陰イオン交換マトリックスに結合させる段階; および
(ii) 標的核酸を陰イオン交換マトリックスから溶出させる段階
を含む方法によって、単離される、
請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。 - 標的核酸が約20℃〜約70℃の溶出温度で陰イオン交換マトリックスから溶出される、請求項22記載の方法。
- 標的核酸が約50℃〜約60℃の溶出温度で陰イオン交換マトリックスから溶出される、請求項22または請求項23記載の方法。
- 以下を含む、溶解溶液:
(i) 緩衝液;
(ii) 界面活性剤;
(iii) 少なくとも一つの末端ヒドラジン基を含む捕捉剤; および
(iv) 任意で、タンパク質消化酵素。 - 捕捉剤が、
a) 式Iに記載の化合物
; および
b) 式IIに記載の化合物
からなる群より選択され、
式中、
R1がC1〜C12アルキル; C1〜C12アルケニル; C3〜C6シクロアルキル; C3〜C6シクロアルケニル; C6〜C10アリール; およびC6〜C10ヘテロアリールからなる群より選択され、ここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよく;
R2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、かつ
からなる群より選択され、かつ
mが0および1からなる群より選択される整数であり; かつ
nが1および2からなる群より選択される整数であり、
該捕捉剤は、水中での溶解性を高めるように改変されていてもよい、
請求項25記載の溶解溶液。 - 捕捉剤が、セミカルバジド; チオセミカルバジド; カルバジド; チオカルバジド; N-アミノグアニジンおよびその塩; N,N-ジアミノグアニジンおよびその塩; アセチルヒドラジド; アジピン酸ジヒドラジド; コハク酸ジヒドラジド; ギ酸ヒドラジド; マレイン酸ジヒドラジド; マロン酸ジヒドラジド; ベンゼンスルホニルヒドラジド; トシルヒドラジド; メチルスルホニルヒドラジドからなる群より選択される、請求項25または請求項26記載の溶解溶液。
- 約0.1 M〜約1.0 Mの捕捉剤を含む、請求項25〜27のいずれか一項記載の溶解溶液。
- 約0.1 M〜約0.5 Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは約0.1 M〜約0.5 Mのコハク酸ジヒドラジドを含む、請求項25〜28のいずれか一項記載の溶解溶液。
- 液体の細胞学用保存液中に保存された生物学的サンプルから標的分子を回収するためのキットであって、請求項25〜29のいずれか一項記載の溶解溶液を含み、かつ任意で、タンパク質消化酵素、固相、標的核酸とハイブリダイズできる核酸プローブ、および抗体からなる群より選択される少なくとも一つのさらなる成分を含む、前記キット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29207810P | 2010-01-04 | 2010-01-04 | |
US61/292,078 | 2010-01-04 | ||
PCT/US2011/020107 WO2011082415A2 (en) | 2010-01-04 | 2011-01-04 | Methods, compositions, and kits for recovery of nucleic acids or proteins from fixed tissue samples |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013516183A true JP2013516183A (ja) | 2013-05-13 |
JP5876834B2 JP5876834B2 (ja) | 2016-03-02 |
Family
ID=44168491
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012547332A Expired - Fee Related JP5876834B2 (ja) | 2010-01-04 | 2011-01-04 | 固定された組織サンプルからの核酸またはタンパク質の回収のための方法、組成物、およびキット |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8722328B2 (ja) |
EP (1) | EP2521778B1 (ja) |
JP (1) | JP5876834B2 (ja) |
CN (1) | CN102803490B (ja) |
AU (1) | AU2011203450B2 (ja) |
BR (1) | BR112012016451A2 (ja) |
CA (1) | CA2786322A1 (ja) |
WO (1) | WO2011082415A2 (ja) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2784011T3 (es) | 2002-10-16 | 2020-09-21 | Streck Inc | Procedimiento y dispositivo para recoger y preservar las células para su análisis |
TWI419974B (zh) * | 2008-10-27 | 2013-12-21 | Qiagen Gaithersburg Inc | 於自動平台上之快速結果雜交捕捉法 |
US11634747B2 (en) | 2009-01-21 | 2023-04-25 | Streck Llc | Preservation of fetal nucleic acids in maternal plasma |
EP3290530B1 (en) | 2009-02-18 | 2020-09-02 | Streck Inc. | Preservation of cell-free nucleic acids |
AU2011210734B2 (en) * | 2010-01-29 | 2017-02-09 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids |
WO2012151391A2 (en) | 2011-05-04 | 2012-11-08 | Streck, Inc. | Inactivated virus compositions and methods of preparing such compositions |
CA2835654A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Streck, Inc. | Rapid thermocycler system for rapid amplification of nucleic acids and related methods |
US9932632B2 (en) | 2012-08-10 | 2018-04-03 | Streck, Inc. | Real-time optical system for polymerase chain reaction |
EP3014251A1 (en) | 2013-06-28 | 2016-05-04 | Streck Inc. | Devices for real-time polymerase chain reaction |
ES2938048T3 (es) | 2013-07-24 | 2023-04-04 | Streck Llc | Composiciones y procedimientos para estabilizar las células tumorales circulantes |
US9771571B2 (en) | 2014-02-28 | 2017-09-26 | Gen-Probe Incorporated | Method of isolating nucleic acid from specimens in liquid-based cytology preservatives containing formaldehyde |
CN106133145B (zh) * | 2014-02-28 | 2020-04-14 | 简·探针公司 | 从含有甲醛的液基细胞学防腐剂中的样本分离核酸的方法 |
GB2559919B (en) * | 2014-02-28 | 2018-11-14 | Gen Probe Inc | Method of isolating nucleic acid from specimens in liquid-based cytology preservatives containing formaldehyde |
US9771572B2 (en) | 2014-02-28 | 2017-09-26 | Gen-Probe Incorporated | Method of isolating nucleic acid from specimens in liquid-based cytology preservatives containing formaldehyde |
US11168351B2 (en) | 2015-03-05 | 2021-11-09 | Streck, Inc. | Stabilization of nucleic acids in urine |
US20170145475A1 (en) | 2015-11-20 | 2017-05-25 | Streck, Inc. | Single spin process for blood plasma separation and plasma composition including preservative |
WO2018022991A1 (en) | 2016-07-29 | 2018-02-01 | Streck, Inc. | Suspension composition for hematology analysis control |
EP3662080B1 (de) * | 2017-08-02 | 2022-01-05 | Sarstedt AG & Co. KG | Verfahren und zusammensetzung zur stabilisierung zellfreier nukleinsäuren und zellen |
WO2019039545A1 (ja) * | 2017-08-23 | 2019-02-28 | Jsr株式会社 | クロマトグラフィー用担体、リガンド固定担体、クロマトグラフィーカラム、標的物質の精製方法、及びクロマトグラフィー用担体の製造方法 |
KR20230153706A (ko) * | 2022-04-29 | 2023-11-07 | 연세대학교 산학협력단 | 핵산의 검출 또는 분리용 조성물 및 이를 이용한 핵산의 검출 또는 분리 방법 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07500674A (ja) * | 1992-08-12 | 1995-01-19 | バイオジェネックス ラボラトリーズ | アルデヒド固定組織における免疫化学的染色の増強 |
JP2000509146A (ja) * | 1996-04-12 | 2000-07-18 | オンコール,インコーポレーテッド | 遅延クエンチングによりホルムアルデヒド固定を制御する方法および組成物 |
JP2004515752A (ja) * | 2000-09-15 | 2004-05-27 | バイオジェネックス ラボラトリーズ | insituハイブリダイゼーションの向上 |
JP2005048052A (ja) * | 2003-07-28 | 2005-02-24 | Matsushita Electric Works Ltd | アルデヒドキャッチャー剤 |
JP2005507997A (ja) * | 2001-10-26 | 2005-03-24 | イムニベスト・コーポレイション | 同一試料についての包括的核酸および形態学的特徴のマルチパラメーター分析 |
JP2009519027A (ja) * | 2005-12-16 | 2009-05-14 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 固定組織から生体分子を抽出する方法 |
Family Cites Families (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1260372A (en) | 1984-04-27 | 1989-09-26 | Elazar Rabbani | Hybridization method for the detection of genetic materials |
ES8707343A1 (es) | 1985-06-13 | 1987-07-16 | Amgen | Un metodo para aislar una secuencia de acido nucleico objetivo seleccionada |
CA1297431C (en) * | 1987-04-24 | 1992-03-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for the isolation of nucleic acids |
ATE108491T1 (de) | 1988-03-18 | 1994-07-15 | Baylor College Medicine | Mutationsnachweis durch kompetitiven oligonukleotid-priming. |
US5329000A (en) * | 1991-10-31 | 1994-07-12 | Becton, Dickinson And Company | Purification of DNA with silicon tetrahydrazide |
US20030104361A1 (en) | 1997-09-29 | 2003-06-05 | Susan Weininger | Method of detection of nucleic acids with a specific sequence composition |
US5843995A (en) | 1997-07-07 | 1998-12-01 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Inhibition of HIV-1 replication using oligocarbamate derivatives |
US6355424B1 (en) | 1997-12-12 | 2002-03-12 | Digene Corporation | Assessment of human papillomavirus-related disease |
US6200746B1 (en) | 1999-08-25 | 2001-03-13 | Pharmacia & Upjohn Company | Methods of identifying anti-viral agents |
US6248535B1 (en) * | 1999-12-20 | 2001-06-19 | University Of Southern California | Method for isolation of RNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissue specimens |
US7601497B2 (en) | 2000-06-15 | 2009-10-13 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Detection of nucleic acids by target-specific hybrid capture method |
US7439016B1 (en) | 2000-06-15 | 2008-10-21 | Digene Corporation | Detection of nucleic acids by type-specific hybrid capture method |
SI1421200T1 (sl) | 2001-08-23 | 2007-04-30 | Merck & Co Inc | Poskusi PCR fluorescentnih multipleks HPV-jev z uporabo vec fluoroforov |
US20050032105A1 (en) | 2001-10-12 | 2005-02-10 | Bair Robert Jackson | Compositions and methods for using a solid support to purify DNA |
NZ533703A (en) | 2002-01-07 | 2006-05-26 | Norchip As | Method for detecting human papillomavirus mRNA |
CA2525482C (en) | 2003-04-04 | 2015-02-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improved system for multicolor real-time pcr comprising 3 to 6 pairs of forester resonance energy transfer (fret) probes |
EP1641809B2 (en) | 2003-07-05 | 2018-10-03 | The Johns Hopkins University | Method and compositions for detection and enumeration of genetic variations |
US20060240449A1 (en) | 2005-01-19 | 2006-10-26 | Mcglennen Ronald C | Methods and compositions for preparation of biological samples |
JP2009517002A (ja) | 2005-04-06 | 2009-04-30 | ヴェレニウム コーポレイション | 化学及び生物兵器の広域特異性除染のための酵素及び処方物 |
WO2007130519A2 (en) | 2006-05-02 | 2007-11-15 | Government Of The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Viral nucleic acid microarray and method of use |
JPWO2008139938A1 (ja) | 2007-05-02 | 2010-08-05 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | ヒトパピローマウイルス16型遺伝子を標的とする二本鎖核酸分子及びそれを含む医薬 |
WO2009002937A2 (en) * | 2007-06-22 | 2008-12-31 | Response Genetics, Inc | Methods for isolating long fragment rna from fixed samples |
JP2009106220A (ja) | 2007-10-31 | 2009-05-21 | Genodive Pharma Kk | 基板上での等温増幅反応による標的塩基配列の捕捉及び検出方法 |
DK2209920T3 (en) | 2007-11-01 | 2016-08-15 | Self-Screen B V | NEW CERVIX-HPV DETECTION PROCEDURE |
WO2009123996A2 (en) | 2008-03-31 | 2009-10-08 | The Ohio State University Research Foundation | Hybridization quantitation method for modified micro-rna and -dna based oligonucleotides |
WO2010004251A1 (en) | 2008-06-16 | 2010-01-14 | Oncomethylome Sciences Sa | Dna methylomes |
WO2010028382A2 (en) | 2008-09-05 | 2010-03-11 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Collecting and processing complex macromolecular mixtures |
EP2184368A1 (en) | 2008-11-07 | 2010-05-12 | DKFZ Deutsches Krebsforschungszentrum | Diagnostic transcript and splice patterns of HPV16 in different cervical lesions |
JP5738278B2 (ja) | 2009-05-01 | 2015-06-24 | キアジェン ゲイサーズバーグ インコーポレイテッド | 試料中のrnaスプライシング形態を検出するための非標的増幅法 |
-
2011
- 2011-01-04 JP JP2012547332A patent/JP5876834B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-04 WO PCT/US2011/020107 patent/WO2011082415A2/en active Application Filing
- 2011-01-04 CA CA2786322A patent/CA2786322A1/en not_active Abandoned
- 2011-01-04 BR BR112012016451-1A patent/BR112012016451A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-01-04 AU AU2011203450A patent/AU2011203450B2/en not_active Ceased
- 2011-01-04 US US12/984,391 patent/US8722328B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-04 EP EP11700869.8A patent/EP2521778B1/en not_active Not-in-force
- 2011-01-04 CN CN201180012414.0A patent/CN102803490B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07500674A (ja) * | 1992-08-12 | 1995-01-19 | バイオジェネックス ラボラトリーズ | アルデヒド固定組織における免疫化学的染色の増強 |
JP2000509146A (ja) * | 1996-04-12 | 2000-07-18 | オンコール,インコーポレーテッド | 遅延クエンチングによりホルムアルデヒド固定を制御する方法および組成物 |
JP2004515752A (ja) * | 2000-09-15 | 2004-05-27 | バイオジェネックス ラボラトリーズ | insituハイブリダイゼーションの向上 |
JP2005507997A (ja) * | 2001-10-26 | 2005-03-24 | イムニベスト・コーポレイション | 同一試料についての包括的核酸および形態学的特徴のマルチパラメーター分析 |
JP2005048052A (ja) * | 2003-07-28 | 2005-02-24 | Matsushita Electric Works Ltd | アルデヒドキャッチャー剤 |
JP2009519027A (ja) * | 2005-12-16 | 2009-05-14 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 固定組織から生体分子を抽出する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112012016451A2 (pt) | 2020-09-08 |
CN102803490B (zh) | 2015-03-25 |
CA2786322A1 (en) | 2011-07-07 |
AU2011203450B2 (en) | 2016-01-07 |
EP2521778B1 (en) | 2014-03-19 |
JP5876834B2 (ja) | 2016-03-02 |
US8722328B2 (en) | 2014-05-13 |
CN102803490A (zh) | 2012-11-28 |
EP2521778A2 (en) | 2012-11-14 |
WO2011082415A2 (en) | 2011-07-07 |
AU2011203450A1 (en) | 2012-07-26 |
US20110196146A1 (en) | 2011-08-11 |
WO2011082415A3 (en) | 2011-09-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5876834B2 (ja) | 固定された組織サンプルからの核酸またはタンパク質の回収のための方法、組成物、およびキット | |
JP5826752B2 (ja) | 細胞学用培地に固定された組織サンプルから核酸またはタンパク質を回収するための組成物および方法 | |
JP5950415B2 (ja) | ワックス包埋サンプルからの核酸抽出 | |
JP2965131B2 (ja) | 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法 | |
US20090202998A1 (en) | Method for the extraction of biomolecules from fixed tissues | |
WO2011104027A1 (en) | Process for parallel isolation and/or purification of rna and dna | |
JP2011522529A (ja) | 短鎖核酸を単離する方法 | |
EP2094846B1 (en) | Use of tde for the isolation of nucleic acids | |
WO2008043551A1 (en) | Methods and kit for isolating nucleic acids | |
EP3347490A1 (en) | Compositions and methods for nucleic acid purification from blood samples | |
JPH10147592A (ja) | 核酸精製用水和珪酸ジルコニウム組成物 | |
JP4441262B2 (ja) | 改良された核酸の単離方法 | |
US8062843B2 (en) | Use of acetals for isolation of nucleic acids | |
US8809519B2 (en) | Method for nucleic acids isolation | |
JP2020531001A (ja) | パラフィン包埋試料から核酸を抽出するための方法およびキット | |
JP2010534467A (ja) | タンパク質性サンプルからの非タンパク質性生体分子、特に核酸の分離方法 | |
WO2022079236A1 (en) | Methods and kits for nucleic acid purification |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131225 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20150127 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150225 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150513 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20150601 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150907 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151126 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160106 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160122 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5876834 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |