JP2013253058A - サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ（Usnea）属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤の製造方法を提供する。
【解決手段】サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類の抽出物の製造方法、及びサルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、エンドセリン作用抑制剤の製造方法。
【選択図】なし
【解決手段】サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類の抽出物の製造方法、及びサルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、エンドセリン作用抑制剤の製造方法。
【選択図】なし
Description
本発明は、サルオガセ（Usnea）属地衣類抽出物の製造方法に関する。
エンドセリンは、内皮細胞由来のペプチドホルモンで、受容体を通して種々の細胞や組織に作用する。例えば、血管平滑筋細胞等において細胞内カルシウム濃度上昇を引き起こすことが知られている（非特許文献１）。
近年、エンドセリンが表皮メラノサイト（メラニン細胞）に対し細胞内カルシウム濃度上昇を促し、細胞内のシグナル伝達系を介して細胞増殖を促進するとともに、メラニン合成の律速酵素であるチロシナーゼの活性を増強することが報告されている（非特許文献２参照）。また、エンドセリンは表皮角化細胞（ケラチノサイト）が産生するメラノサイト活性化因子の１つであること（非特許文献３）、紫外線誘導性色素沈着や老人性色素斑形成の重要な要因であることが報告されている（非特許文献４、５）。
このようなエンドセリンの生体作用から、エンドセリンの作用を抑制しうる物質は、メラニン生成や色素沈着等を抑制し、美白剤として有用である。
近年、エンドセリンが表皮メラノサイト（メラニン細胞）に対し細胞内カルシウム濃度上昇を促し、細胞内のシグナル伝達系を介して細胞増殖を促進するとともに、メラニン合成の律速酵素であるチロシナーゼの活性を増強することが報告されている（非特許文献２参照）。また、エンドセリンは表皮角化細胞（ケラチノサイト）が産生するメラノサイト活性化因子の１つであること（非特許文献３）、紫外線誘導性色素沈着や老人性色素斑形成の重要な要因であることが報告されている（非特許文献４、５）。
このようなエンドセリンの生体作用から、エンドセリンの作用を抑制しうる物質は、メラニン生成や色素沈着等を抑制し、美白剤として有用である。
一方、ウメノキゴケ（Parmeliaceae）科サルオガセ属の地衣類の抽出物がメラニン生成阻害作用を有することが知られている（特許文献１〜３、並びに非特許文献６参照）。なお、特許文献１〜３には、メラニン生成阻害物質の製造方法として、地衣類を培養し、その培養物を凍結乾燥した後０℃〜１５℃の温度で溶媒抽出することが記載されている。
Hirata Y．et al.，Biochem．Biophys．Res．Commun.，1988，vol．154，p．868-875
Yada Y．et al.，J．Biol．Chem.，1991，vol．266，p．18352-18357
Imokawa G．et al.，J．Biol．Chem.，1992，vol．267，p．24675-24680
Imokawa G．et al.，J．Invest．Dermatol.，1995，vol．105，p．32-37
Kadono S．et al.，J．Invest．Dermatol.，2001，vol．116，p．571-577
Moo-Sung Kim et al.，J．Microbiology，2007，vol．45，p．578-582
本発明は、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤の製造方法の提供を課題とする。
本発明者らは上記課題に鑑み、サルオガセ属地衣類抽出物からの美白成分の探求と、当該成分を高濃度に含有しうる抽出方法について鋭意検討を行った。その結果、サルオガセ属地衣類の抽出物に含まれ、下記式で表されるジフラクタ酸が、エンドセリンの作用によって引き起こされるメラノサイト内のカルシウム（イオン）濃度上昇の抑制効果を有することを見出した。
さらに、本発明者らは、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができる、サルオガセ属地衣類の抽出条件について検討を行った。その結果、アルコール含有率の高いアルコール水溶液を抽出溶媒として用いてサルオガセ属地衣類を抽出するとジフラクタ酸高含有のサルオガセ属地衣類抽出物が得られるが、抽出溶媒のアルコール含有率が高すぎる場合下記式で表されるウスニン酸の濃度も上昇することを見出した。
前記ウスニン酸は、肝毒性物質として知られている（例えば、Frankos VH（January 2005），"NTP nomination for usnic acid and Usnea barbata herb"，National Toxicology Program，http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/htdocs/Chem_Background/ExSumPdf/UsnicAcid.pdf参照）。したがって、ジフラクタ酸の含有量が高くても、ウスニン酸の含有量も高いサルオガセ属地衣類抽出物は、安全性の観点から美白剤などの皮膚外用剤に用いることは問題である。
サルオガセ属地衣類は、ジフラクタ酸やウスニン酸を含有することが知られている（例えば、Phytochemistry，1987，vol．26，No．12，p．3181-3185；Bull．Kochi．Gakuen College.，1992，vol．23，p．687(9)-697(19)参照）。
そこで、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができ、毒性を有するウスニン酸の含有量を低減した、サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られる製造方法について検討を行った。その結果、アルコール含有率が一定範囲のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いてサルオガセ属地衣類を抽出することにより、ジフラクタ酸濃度が有意に上昇し、肝毒性物質であるウスニン酸濃度が有意に低下し、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができる、サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られるとの知見を得た。
本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
そこで、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができ、毒性を有するウスニン酸の含有量を低減した、サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られる製造方法について検討を行った。その結果、アルコール含有率が一定範囲のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いてサルオガセ属地衣類を抽出することにより、ジフラクタ酸濃度が有意に上昇し、肝毒性物質であるウスニン酸濃度が有意に低下し、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができる、サルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られるとの知見を得た。
本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
すなわち、本発明は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法に関する。
また、本発明は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、エンドセリン作用抑制剤の製造方法に関する。
さらに、本発明は、前記製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤に関する。
また、本発明は、サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、エンドセリン作用抑制剤の製造方法に関する。
さらに、本発明は、前記製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤に関する。
本発明の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は、エンドセリン作用抑制剤の有効成分であるジフラクタ酸を高含有するとともに、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が低減されている。したがって、本発明の製造方法は、美白剤などの皮膚外用剤に好適に用いることができるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
本発明のジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法及びエンドセリン作用抑制剤の製造方法において、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いてサルオガセ属地衣類を抽出する。
当該方法により、エンドセリン作用抑制効果を有するジフラクタ酸を高濃度で含有し、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が低いサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られる。このようにして得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は、ジフラクタ酸の美白効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、化粧料等に好適に用いることができる。
当該方法により、エンドセリン作用抑制効果を有するジフラクタ酸を高濃度で含有し、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が低いサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤が得られる。このようにして得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は、ジフラクタ酸の美白効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、化粧料等に好適に用いることができる。
本明細書において、「ジフラクタ酸高含有サルオガセ属地衣類抽出物」とは、同条件で抽出を行った場合、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が、本発明で規定する抽出溶媒よりもアルコール含有率の低い抽出溶媒を用いて得られる抽出物中のジフラクタ酸含有量よりも多いことを意味し、同一の溶媒種を用い同条件で抽出した場合にアルコール含有率を変化させたときの抽出物中のジフラクタ酸濃度を比較したものである。
また、「ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物」とは、同条件で抽出を行った場合、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物中のウスニン酸含有量が、本発明で規定する抽出溶媒よりもアルコール含有率の高い抽出溶媒を用いて得られる抽出物中のウスニン酸含有量よりも少ないことを意味し、同一の溶媒種を用い同条件で抽出した場合にアルコール含有率を変化させたときの抽出物中のウスニン酸濃度を比較したものである。
なお、後述の実施例で示すように、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が、本発明で規定する抽出溶媒よりもアルコール含有率の高い抽出溶媒を用いて得られる抽出物中のジフラクタ酸含有量よりも低い場合であっても、ウスニン酸の含有率を比較した場合、その含有率が、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られる抽出物の方が低い場合には、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物は本明細書における「ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物」に含むものとする。
また、「ウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物」とは、同条件で抽出を行った場合、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物中のウスニン酸含有量が、本発明で規定する抽出溶媒よりもアルコール含有率の高い抽出溶媒を用いて得られる抽出物中のウスニン酸含有量よりも少ないことを意味し、同一の溶媒種を用い同条件で抽出した場合にアルコール含有率を変化させたときの抽出物中のウスニン酸濃度を比較したものである。
なお、後述の実施例で示すように、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が、本発明で規定する抽出溶媒よりもアルコール含有率の高い抽出溶媒を用いて得られる抽出物中のジフラクタ酸含有量よりも低い場合であっても、ウスニン酸の含有率を比較した場合、その含有率が、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られる抽出物の方が低い場合には、本発明で規定する抽出溶媒を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物は本明細書における「ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物」に含むものとする。
本発明の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤において、ジフラクタ酸は塩の形態で存在してもよい。ジフラクタ酸の塩としては特に限定されないが、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン等のアルキルアミン塩及び４級アンモニウム塩、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン等のアルカノールアミン塩、又はリジン、ヒスチジン、アルギニン等のアミノ酸塩などが挙げられ、好ましくは、アルカリ金属塩、アルカノールアミン塩、アミノ酸塩である。
本発明で用いるサルオガセ属地衣類は、ウメノキゴケ（Parmeliaceae）科の地衣類である。本発明では、天然に存在するサルオガセ属地衣類を採取して用いてもよいし、市販品を入手して用いてもよい。本発明に用いられるサルオガセ属地衣類としては特に制限はなく、ナガサルオガセ（Usnea longissima）、ヨコワサルオガセ（Usnea diffracta Vain.）、フジサルオガセ（Usnea trichodeoides）、ニセフジサルオガセ（Usnea pseudomontis-fuji）、クシノハサルオガセ（Usnea pectinata）などが挙げられる。本発明で用いる前記サルオガセ属地衣類としては、ナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる１種又は２種以上が好ましく、ナガサルオガセ及びヨコワサルオガセからなる群より選ばれる１種又は２種がより好ましく、ナガサルオガセ又はヨコワサルオガセがさらに好ましい。
本発明において、前記サルオガセ属地衣類の全ての任意の部位（全体、地衣体、仮根、シリア、臍状体（さいじょうたい）等）を用いることができ、各部位を複数組み合わせて用いてもよい。また地位培養細胞（菌細胞、藻細胞、又は両者の混在した未分化共生培養組織）を用いることもできる。本発明において、サルオガセ属地衣類を抽出するには、地衣体を用いるのが好ましい。
本発明に用いるサルオガセ属地衣類は、天然に存在するそのままの状態でもよいが、抽出効率を高めるために、乾燥、凍結乾燥、細断、粉砕などの処理を施したものを用いるのが好ましい。
本発明において、前記サルオガセ属地衣類の全ての任意の部位（全体、地衣体、仮根、シリア、臍状体（さいじょうたい）等）を用いることができ、各部位を複数組み合わせて用いてもよい。また地位培養細胞（菌細胞、藻細胞、又は両者の混在した未分化共生培養組織）を用いることもできる。本発明において、サルオガセ属地衣類を抽出するには、地衣体を用いるのが好ましい。
本発明に用いるサルオガセ属地衣類は、天然に存在するそのままの状態でもよいが、抽出効率を高めるために、乾燥、凍結乾燥、細断、粉砕などの処理を施したものを用いるのが好ましい。
本発明の製造方法において、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いる。
本発明において抽出溶媒として用いるアルコール水溶液としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の低級アルコール類（好ましくは、炭素数１〜４の低級アルコール類）の水溶液、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール、2,3-ブタンジオール、エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の多価アルコール類の水溶液が挙げられる。本発明では、これらの溶媒を単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。本発明においては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール、2,3-ブタンジオール等の水溶液を用いるのが好ましく、メタノール、エタノール、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール又は2,3-ブタンジオールの水溶液を用いるのがより好ましく、エタノール水溶液又は1,3-ブタンジオール水溶液がさらに好ましい。
本発明において抽出溶媒として用いるアルコール水溶液のアルコール含有率は、４０体積％以上が好ましく、７０体積％以下が好ましく、６０体積％以下がより好ましい。また、３０体積％以上７０体積％以下が好ましく、４０体積％以上７０体積％以下がさらに好ましく、４０体積％以上６０体積％以下が特に好ましい。
本発明において抽出溶媒として用いるアルコール水溶液としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の低級アルコール類（好ましくは、炭素数１〜４の低級アルコール類）の水溶液、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール、2,3-ブタンジオール、エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の多価アルコール類の水溶液が挙げられる。本発明では、これらの溶媒を単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。本発明においては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール、2,3-ブタンジオール等の水溶液を用いるのが好ましく、メタノール、エタノール、1,2-ブタンジオール、1,3-ブタンジオール、1,4-ブタンジオール又は2,3-ブタンジオールの水溶液を用いるのがより好ましく、エタノール水溶液又は1,3-ブタンジオール水溶液がさらに好ましい。
本発明において抽出溶媒として用いるアルコール水溶液のアルコール含有率は、４０体積％以上が好ましく、７０体積％以下が好ましく、６０体積％以下がより好ましい。また、３０体積％以上７０体積％以下が好ましく、４０体積％以上７０体積％以下がさらに好ましく、４０体積％以上６０体積％以下が特に好ましい。
サルオガセ属地衣類の抽出条件については特に制限はなく、使用する抽出溶媒によって適宜設定できる。例えば、抽出温度は、０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、５０℃以下が好ましく、４０℃以下がより好ましく、２０℃以下がさらに好ましい。あるいは、０〜５０℃が好ましく、５〜４０℃がより好ましく、５〜２０℃がさらに好ましい。抽出時間は、１時間以上が好ましく、１日以上がより好ましく、２０日以下が好ましく、７日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜２０日間が好ましく、１〜７日間がより好ましい。抽出効率を上げるため、抽出の際に攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。なお、抽出溶媒の使用量に特に制限はないが、抽出原料のサルオガセ属地衣類に対し質量比で１倍量以上であることが好ましく、５倍量以上であることがより好ましく、５０倍量以下であることが好ましく、３０倍量以下であることがより好ましい。あるいは、１〜５０倍量であることが好ましく、５〜３０倍量であることがより好ましい。
上記溶媒で抽出して得られた抽出物はそのまま使用してもよいが、必要に応じて更に適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により活性の高い画分を分画してもよい。あるいは、得られた抽出物の溶媒を別の溶媒（例えば、アルコール水溶液）に置換してもよい。本発明の製造方法により得られる抽出物には、このようにして得られた各種抽出物、その希釈液、その濃縮液、その精製物又はそれらの乾燥末等が包含される。
抽出溶媒としてアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤を皮膚外用剤に用いることを考慮して、サルオガセ属地衣類抽出物に対してさらにウスニン酸の選択的低減処理を施すことが好ましい。
ウスニン酸の選択的低減処理としては特に制限はなく、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理、加熱処理などが挙げられる。本発明では、これらの処理工程を単独で用いてもよいし、２種以上を組合わせて用いてもよく、これらの処理工程を繰返し行ってもよい。
なお、ウスニン酸の選択的低減処理によりサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が低下しても、ジフラクタ酸含有量の低下率と比較してウスニン酸含有量の低下率が十分に高ければよい。
ウスニン酸の選択的低減処理としては特に制限はなく、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理、加熱処理などが挙げられる。本発明では、これらの処理工程を単独で用いてもよいし、２種以上を組合わせて用いてもよく、これらの処理工程を繰返し行ってもよい。
なお、ウスニン酸の選択的低減処理によりサルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸含有量が低下しても、ジフラクタ酸含有量の低下率と比較してウスニン酸含有量の低下率が十分に高ければよい。
ウスニン酸の選択的低減処理としての低温保存について説明する。
ウスニン酸は結晶性が高く、水溶液に対する溶解性が低く、低温では析出しやすい。そのため、本発明の方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を低温保存すると、ウスニン酸が溶けにくくなりウスニン酸の結晶が析出する。このようにして析出したウスニン酸を常法により除去することで、サルオガセ属地衣類抽出物からのウスニン酸の選択的低減が可能となる。
サルオガセ属地衣類抽出物の保存温度としては−１０℃以上が好ましく、−５℃以上がより好ましく、５℃以下が好ましい。あるいは、−１０〜５℃が好ましく、−５〜５℃がより好ましい。また、ナガサルオガセ抽出物の保存時間としては１時間以上が好ましく、６時間以上がより好ましく、１４日以下が好ましく、５日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜１４日間が好ましく、６時間〜５日間がより好ましい。
ウスニン酸は結晶性が高く、水溶液に対する溶解性が低く、低温では析出しやすい。そのため、本発明の方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を低温保存すると、ウスニン酸が溶けにくくなりウスニン酸の結晶が析出する。このようにして析出したウスニン酸を常法により除去することで、サルオガセ属地衣類抽出物からのウスニン酸の選択的低減が可能となる。
サルオガセ属地衣類抽出物の保存温度としては−１０℃以上が好ましく、−５℃以上がより好ましく、５℃以下が好ましい。あるいは、−１０〜５℃が好ましく、−５〜５℃がより好ましい。また、ナガサルオガセ抽出物の保存時間としては１時間以上が好ましく、６時間以上がより好ましく、１４日以下が好ましく、５日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜１４日間が好ましく、６時間〜５日間がより好ましい。
ウスニン酸の選択的低減処理としての加水処理について説明する。
ウスニン酸は結晶性が高く、水溶液に対する溶解性が低い。そのため、本発明の方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を含水率の高い溶液中で保存すると、ウスニン酸が溶けにくくなりウスニン酸の結晶が析出する。このようにして析出したウスニン酸を常法により除去することで、サルオガセ属地衣類抽出物からのウスニン酸の選択的低減が可能となる。
サルオガセ属地衣類抽出物に対する加水量としては、加水後にジフラクタ酸が析出等によりロスしない量であれば特に制限はなく、加水後のアルコール含有率が２５体積％以上となるように加水するのが好ましく、３０体積％以上となるように加水するのがさらに好ましく、４５体積％以下となるように加水するのが好ましく、４０体積％以下となるように加水するのがさらに好ましい。あるいは、加水後のアルコール含有率が２５〜４５体積％となるように加水するのが好ましく、３０〜４０体積％となるように加水するのがさらに好ましい。
ウスニン酸は結晶性が高く、水溶液に対する溶解性が低い。そのため、本発明の方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を含水率の高い溶液中で保存すると、ウスニン酸が溶けにくくなりウスニン酸の結晶が析出する。このようにして析出したウスニン酸を常法により除去することで、サルオガセ属地衣類抽出物からのウスニン酸の選択的低減が可能となる。
サルオガセ属地衣類抽出物に対する加水量としては、加水後にジフラクタ酸が析出等によりロスしない量であれば特に制限はなく、加水後のアルコール含有率が２５体積％以上となるように加水するのが好ましく、３０体積％以上となるように加水するのがさらに好ましく、４５体積％以下となるように加水するのが好ましく、４０体積％以下となるように加水するのがさらに好ましい。あるいは、加水後のアルコール含有率が２５〜４５体積％となるように加水するのが好ましく、３０〜４０体積％となるように加水するのがさらに好ましい。
ウスニン酸の選択的低減処理としての活性炭処理について説明する。
ジフラクタ酸とウスニン酸とでは、分子サイズ及び化合物の物性（極性）が異なる。これらの違いから、ウスニン酸の方がジフラクタ酸よりも活性炭に吸着されやすい。したがって、本発明の方法で得られるサルオガセ属地衣類抽出物に活性炭処理を施すことで、抽出物中のウスニン酸を選択的に除去することができる。
活性炭の使用量に特に制限はないが、サルオガセ属地衣類抽出物の固形分に対して、１重量％以上が好ましく、１０重量％以上がより好ましく、５０重量％以上がさらに好ましく、２００重量％以下が好ましく、１５０重量％以下がさらに好ましい。あるいは、１〜２００重量％が好ましく、１０〜２００重量％がより好ましく、５０〜１５０重量％がさらに好ましい。また、処理時間にも特に制限はないが、１０分以上が好ましく、３０分以上がより好ましく、２４時間以下が好ましく、１時間以下がより好ましい。あるいは、１０分〜２４時間が好ましく、３０分〜１時間がより好ましい。活性炭処理を行う際、サルオガセ属地衣類抽出物と活性炭とを混合して撹拌してもよい。本発明において、活性炭としては通常のものでよく、市販のものを用いることができる。
ジフラクタ酸とウスニン酸とでは、分子サイズ及び化合物の物性（極性）が異なる。これらの違いから、ウスニン酸の方がジフラクタ酸よりも活性炭に吸着されやすい。したがって、本発明の方法で得られるサルオガセ属地衣類抽出物に活性炭処理を施すことで、抽出物中のウスニン酸を選択的に除去することができる。
活性炭の使用量に特に制限はないが、サルオガセ属地衣類抽出物の固形分に対して、１重量％以上が好ましく、１０重量％以上がより好ましく、５０重量％以上がさらに好ましく、２００重量％以下が好ましく、１５０重量％以下がさらに好ましい。あるいは、１〜２００重量％が好ましく、１０〜２００重量％がより好ましく、５０〜１５０重量％がさらに好ましい。また、処理時間にも特に制限はないが、１０分以上が好ましく、３０分以上がより好ましく、２４時間以下が好ましく、１時間以下がより好ましい。あるいは、１０分〜２４時間が好ましく、３０分〜１時間がより好ましい。活性炭処理を行う際、サルオガセ属地衣類抽出物と活性炭とを混合して撹拌してもよい。本発明において、活性炭としては通常のものでよく、市販のものを用いることができる。
ウスニン酸の選択的低減処理としてのヘキサン洗浄処理について説明する。
ジフラクタ酸はヘキサンに溶解しづらいのに対し、ウスニン酸はヘキサンに溶解しやすい。そのため、サルオガセ属地衣類抽出物に対してヘキサン洗浄処理し、ヘキサン層を分離することで、サルオガセ属地衣類抽出物中のウスニン酸を選択的に除去することができる。
ヘキサン洗浄処理の方法に特に制限はなく、サルオガセ属地衣類抽出物及びヘキサン、並びに必要によりエタノールなどのアルコール溶液と混合して、２層に分離し、サルオガセ属地衣類抽出物を含む層を常法により回収すればよい。また、ヘキサン洗浄処理を繰返し行ってもよい。
ジフラクタ酸はヘキサンに溶解しづらいのに対し、ウスニン酸はヘキサンに溶解しやすい。そのため、サルオガセ属地衣類抽出物に対してヘキサン洗浄処理し、ヘキサン層を分離することで、サルオガセ属地衣類抽出物中のウスニン酸を選択的に除去することができる。
ヘキサン洗浄処理の方法に特に制限はなく、サルオガセ属地衣類抽出物及びヘキサン、並びに必要によりエタノールなどのアルコール溶液と混合して、２層に分離し、サルオガセ属地衣類抽出物を含む層を常法により回収すればよい。また、ヘキサン洗浄処理を繰返し行ってもよい。
ウスニン酸の選択的低減処理としての加熱処理について説明する。
サルオガセ属地衣類抽出物に対して加熱処理を行うことで、サルオガセ属地衣類抽出物中の他の成分とウスニン酸とが反応し、ウスニン酸の分解等が起こり、ウスニン酸の含有量が低下すると考えられる。
サルオガセ属地衣類抽出物の加熱温度としては５０℃以上が好ましく、６０℃以上がさらに好ましく、１００℃以下が好ましく、９０℃以下がより好ましく、８０℃以下がさらに好ましい。あるいは、５０℃〜１００℃が好ましく、５０℃〜９０℃がより好ましく、６０℃〜８０℃がさらに好ましい。また、サルオガセ属地衣類抽出物の加熱時間は加熱温度により適宜設定でき、１時間以上が好ましく、６時間以上がより好ましく、７日以下が好ましく、３日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜７日間が好ましく、６時間〜３日間がより好ましい。
サルオガセ属地衣類抽出物に対して加熱処理を行うことで、サルオガセ属地衣類抽出物中の他の成分とウスニン酸とが反応し、ウスニン酸の分解等が起こり、ウスニン酸の含有量が低下すると考えられる。
サルオガセ属地衣類抽出物の加熱温度としては５０℃以上が好ましく、６０℃以上がさらに好ましく、１００℃以下が好ましく、９０℃以下がより好ましく、８０℃以下がさらに好ましい。あるいは、５０℃〜１００℃が好ましく、５０℃〜９０℃がより好ましく、６０℃〜８０℃がさらに好ましい。また、サルオガセ属地衣類抽出物の加熱時間は加熱温度により適宜設定でき、１時間以上が好ましく、６時間以上がより好ましく、７日以下が好ましく、３日以下がより好ましい。あるいは、１時間〜７日間が好ましく、６時間〜３日間がより好ましい。
本発明において、抽出溶媒としてアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて得られるサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる１種以上の処理によりウスニン酸の選択的低減処理を行うことが好ましく、より好ましいウスニン酸の選択的低減処理方法としては、下記のものが挙げられる。しかし、本発明はこれらに制限するものではない。
（１）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理及び低温保存処理を行う。
（２）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理を行う。
（３）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理、加水処理及び低温保存処理をこの順で行う。
（４）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理及び低温保存処理をこの順で行う。
（５）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理、低温保存処理及び活性炭処理をこの順で行う。
（６）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で行う。
（７）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理及び活性炭処理をこの順で行う。
（８）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で行う。
（９）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理、低温保存処理及び加熱処理をこの順で行う。
（１）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理及び低温保存処理を行う。
（２）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理を行う。
（３）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理、加水処理及び低温保存処理をこの順で行う。
（４）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理及び低温保存処理をこの順で行う。
（５）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理、低温保存処理及び活性炭処理をこの順で行う。
（６）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で行う。
（７）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理及び活性炭処理をこの順で行う。
（８）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で行う。
（９）抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対してさらに加水処理、低温保存処理及び加熱処理をこの順で行う。
本発明の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤において、ウスニン酸に対するジフラクタ酸の含有比率に特に制限はないが、得られたサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上であるのが好ましく、５以上がより好ましい。また、ウスニン酸の絶対量に特に制限はないが、ウスニン酸含有量は１５０ｐｐｍ以下であることが好ましく、１２０ｐｐｍ以下であることがさらに好ましい。
本発明において、前記アルコール水溶液を用いてサルオガセ属地衣類の抽出を行う前に水系溶媒を用いてサルオガセ属地衣類を処理し、前記水系溶媒を除去して得られるサルオガセ属地衣類の残渣に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行ってもよい。水系溶媒を用いてサルオガセ属地衣類を処理することによりサルオガセ属地衣類に含まれる水溶性成分を除去することができ、不純物が少なくジフラクタ酸濃度が特に高いサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
本明細書において「水系溶媒」とは、サルオガセ属地衣類に含まれる水溶性成分を除去するだけの含水率を含む溶媒であれば特に制限はなく、水、アルコール水溶液（例えば、メタノール水溶液、エタノール水溶液、プロパノール水溶液、イソプロパノール水溶液）等が挙げられる。このうち、水、又は、アルコール含有率が１０体積％以下、好ましくは５体積％以下、より好ましくは１体積％以下、のアルコール水溶液が好ましい。
前記水系溶媒を用いたサルオガセ属地衣類の処理方法については特に制限はなく、水系溶媒にサルオガセ属地衣類を浸漬させる方法、水系溶媒でサルオガセ属地衣類を洗浄する方法、などが挙げられる。
水系溶媒にサルオガセ属地衣類を浸漬させる場合は、サルオガセ属地衣類に含まれる水溶性成分を除去する効率を上げるため、処理の際に攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
水系溶媒にサルオガセ属地衣類を浸漬させる場合は、サルオガセ属地衣類に含まれる水溶性成分を除去する効率を上げるため、処理の際に攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
水系溶媒を用いたサルオガセ属地衣類の処理条件については特に制限はなく、使用する溶媒によって適宜設定できる。例えば、処理温度は、０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、５０℃以下が好ましく、３０℃以下がより好ましい。あるいは、０〜５０℃が好ましく、０〜３０℃がより好ましい。処理時間は、５時間以上が好ましく、１日間以上がより好ましく、１０日間以下が好ましく、７日間以下がより好ましい。あるいは、５時間〜１０日間が好ましく、１〜７日間がより好ましい。
本発明において、前記アルコール水溶液を用いてサルオガセ属地衣類の抽出を行う前にヘキサン等の疎水性有機溶媒を用いてサルオガセ属地衣類を処理し、ウスニン酸等の疎水性物質を除去して得られるサルオガセ属地衣類の残渣に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行っても良い。疎水性有機溶媒を用いてサルオガセ属地衣類を処理することによりサルオガセ属地衣類に含まれる疎水性成分を除去することができ、不純物が少なくジフラクタ酸濃度が特に高いサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
本明細書において「疎水性有機溶媒」とは、サルオガセ属地衣類に含まれる疎水性成分を除去できれば特に制限はなく、n-ペンタン、シクロペンタン、n-ヘキサン、シクロヘキサン、n-ヘプタン、シクロヘプタン、オクタン等の直鎖又は環状の常温、常圧で液体のアルカンが挙げられ、このうちn-ヘキサンが好ましい。
前記疎水性有機溶媒を用いたサルオガセ属地衣類の処理方法については特に制限はなく、疎水性有機溶媒にサルオガセ属地衣類を浸漬させる方法、疎水性有機溶媒でサルオガセ属地衣類を洗浄する方法、などが挙げられる。
疎水性有機溶媒にサルオガセ属地衣類を浸漬させる場合は、サルオガセ属地衣類に含まれる疎水性物質を除去する効率を上げるため、処理の際に攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
疎水性有機溶媒にサルオガセ属地衣類を浸漬させる場合は、サルオガセ属地衣類に含まれる疎水性物質を除去する効率を上げるため、処理の際に攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
疎水性有機溶媒を用いたサルオガセ属地衣類の処理条件については特に制限はなく、使用する溶媒によって適宜設定できる。例えば、処理温度は、０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、５０℃以下が好ましく、３０℃以下がより好ましい。あるいは、０〜５０℃が好ましく、０〜３０℃がより好ましい。処理時間は、５時間以上が好ましく、１日間以上がより好ましく、１０日間以下が好ましく、７日間以下がより好ましい。あるいは、５時間〜１０日間が好ましく、１〜７日間がより好ましい。
後述の実施例で示すように、前記抽出工程により、ジフラクタ酸の含有量が高くウスニン酸の含有量が低いサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤を得ることができる。したがって、ジフラクタ酸はメラノサイトに対するエンドセリンの作用を抑制することでメラニン生成を抑制しうるため、本発明の製造方法で得られるサルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は、優れたエンドセリン作用抑制効果及び美白効果を奏する。なお、本明細書において「美白（作用）」とは、メラニン色素生成や色素沈着を抑え、余分なメラニンのない本来の透明な肌色に戻すこと、または皮膚の黒化若しくはシミ・ソバカス等の色素沈着を防止、抑制することを意味する。また、肝毒性物質であるウスニン酸の含有量が少ないため、前記サルオガセ属地衣類抽出物及びエンドセリン作用抑制剤は安全性が高く美白剤などの皮膚外用剤として好適に用いることができる。
本発明により得られるサルオガセ属地衣類抽出物は、そのままエンドセリン作用抑制剤又は美白剤として用いてもよい。また、本発明により得られるサルオガセ属地衣類抽出物と、例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体または固体の賦形剤または増量剤とを混合して用いてもよい。さらには、その他のエンドセリン作用抑制剤、その他の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、色材種、油性物質、高分子化合物、防腐剤、粉体、色素、香料、乳化安定剤、pH調整剤等、通常の美白剤に用いられる成分と混合して用いてもよい。
本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤は、皮膚化粧料、外用医薬品、外用医薬部外品等として皮膚等に適用することができ、その剤型も水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。例えば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ローション、ジェル、エッセンス（美容液）、パック、マスク、ファンデーション、軟膏、シート状製品等の形態が挙げられる。
本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤におけるサルオガセ属地衣類抽出物の含有量に特に制限はなく、サルオガセ属地衣類抽出物中のジフラクタ酸濃度に依存して適宜設定することができる。
また、本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤の使用量に特に制限はなく、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１μｇ以上が好ましく、５μｇ以下が好ましい。あるいは、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１〜５μｇが好ましい。液状製剤の場合、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１μｇ以上が好ましく、１０μｇ以下が好ましい。あるいは、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１〜１０μｇが好ましい。
また、本発明の方法により得られるエンドセリン作用抑制剤及び本発明の美白剤の使用量に特に制限はなく、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１μｇ以上が好ましく、５μｇ以下が好ましい。あるいは、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１〜５μｇが好ましい。液状製剤の場合、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１μｇ以上が好ましく、１０μｇ以下が好ましい。あるいは、皮膚面１ｃｍ2当たり０．１〜１０μｇが好ましい。
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の抽出物の製造方法、エンドセリン作用抑制剤、美白剤、方法及び使用を開示する。
＜１＞サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上、好ましくは４０体積％以上、かつ８０体積％以下、好ましくは７０体積％以下、より好ましくは６０体積％以下、のアルコール水溶液を用いて抽出する、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法。
＜２＞前記アルコール水溶液がエタノール水溶液又は1,3-ブタンジオール水溶液である、前記＜１＞項記載の製造方法。
＜３＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１＞又は＜２＞項記載の製造方法。
＜４＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ又はヨコワサルオガセである、前記＜１＞〜＜３＞項のいずれか記載の製造方法。
＜５＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる１種以上の処理によりウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜１＞〜＜４＞項のいずれか記載の製造方法。
＜６＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理を施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜７＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理を施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜８＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理、加水処理及び低温保存処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜９＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１０＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１１＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１２＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１３＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１４＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び加熱処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１５＞水系溶媒（好ましくは水、又はアルコール含有率が１０体積％以下（好ましくは５体積％以下、より好ましくは１体積％以下）のアルコール水溶液（好ましくは、メタノール水溶液、エタノール水溶液、プロパノール水溶液、又はイソプロパノール水溶液））を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１＞〜＜１４＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１６＞疎水性有機溶媒（好ましくはn-ペンタン、シクロペンタン、n-ヘキサン、シクロヘキサン、n-ヘプタン、シクロヘプタン及びオクタンからなる群より選ばれる少なくとも１種の疎水性有機溶媒、より好ましくはn-ヘキサン）を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１７＞得られた抽出物中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上、好ましくは５以上、である、前記＜１＞〜＜１６＞項のいずれか記載の製造方法。
＜３＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１＞又は＜２＞項記載の製造方法。
＜４＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ又はヨコワサルオガセである、前記＜１＞〜＜３＞項のいずれか記載の製造方法。
＜５＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる１種以上の処理によりウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜１＞〜＜４＞項のいずれか記載の製造方法。
＜６＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理を施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜７＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理を施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜８＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理、加水処理及び低温保存処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜９＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１０＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１１＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１２＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１３＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１４＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び加熱処理をこの順で施して前記ウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜５＞項記載の製造方法。
＜１５＞水系溶媒（好ましくは水、又はアルコール含有率が１０体積％以下（好ましくは５体積％以下、より好ましくは１体積％以下）のアルコール水溶液（好ましくは、メタノール水溶液、エタノール水溶液、プロパノール水溶液、又はイソプロパノール水溶液））を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１＞〜＜１４＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１６＞疎水性有機溶媒（好ましくはn-ペンタン、シクロペンタン、n-ヘキサン、シクロヘキサン、n-ヘプタン、シクロヘプタン及びオクタンからなる群より選ばれる少なくとも１種の疎水性有機溶媒、より好ましくはn-ヘキサン）を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１＞〜＜１５＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１７＞得られた抽出物中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上、好ましくは５以上、である、前記＜１＞〜＜１６＞項のいずれか記載の製造方法。
＜１８＞サルオガセ属地衣類を、アルコール含有率がアルコール含有率が３０体積％以上、好ましくは４０体積％以上、かつ８０体積％以下、好ましくは７０体積％以下、より好ましくは６０体積％以下、のアルコール水溶液を用いて抽出する、エンドセリン作用抑制剤の製造方法。
＜１９＞前記アルコール水溶液がエタノール水溶液又は1,3-ブタンジオール水溶液である、前記＜１８＞項記載の製造方法。
＜２０＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１８＞又は＜１９＞項記載の製造方法。
＜２１＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ又はヨコワサルオガセである、前記＜１８＞〜＜２０＞項のいずれか記載の製造方法。
＜２２＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる１種以上の処理により該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜１８＞〜＜２１＞項のいずれか記載の製造方法。
＜２３＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理を施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２４＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理を施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２５＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理、加水保存処理及び低温保存処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２６＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２７＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２８＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２９＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜３０＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜３１＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び加熱処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜３２＞水系溶媒（好ましくは水、又はアルコール含有率が１０体積％以下（好ましくは５体積％以下、より好ましくは１体積％以下）のアルコール水溶液（好ましくは、メタノール水溶液、エタノール水溶液、プロパノール水溶液、又はイソプロパノール水溶液））を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１８＞〜＜３１＞項のいずれか記載の製造方法。
＜３３＞疎水性有機溶媒（好ましくはn-ペンタン、シクロペンタン、n-ヘキサン、シクロヘキサン、n-ヘプタン、シクロヘプタン及びオクタンからなる群より選ばれる少なくとも１種の疎水性有機溶媒、より好ましくはn-ヘキサン）を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１８＞〜＜３２＞項のいずれか記載の製造方法。
＜３４＞得られたエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上、好ましくは５以上、である、前記＜１８＞〜＜３３＞項のいずれか記載の製造方法。
＜２０＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ、ヨコワサルオガセ、フジサルオガセ、ニセフジサルオガセ及びクシノハサルオガセからなる群より選ばれる少なくとも１種である、前記＜１８＞又は＜１９＞項記載の製造方法。
＜２１＞前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ又はヨコワサルオガセである、前記＜１８＞〜＜２０＞項のいずれか記載の製造方法。
＜２２＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる１種以上の処理により該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜１８＞〜＜２１＞項のいずれか記載の製造方法。
＜２３＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理を施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２４＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理を施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２５＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理、加水保存処理及び低温保存処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２６＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理及び低温保存処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２７＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２８＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜２９＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及び活性炭処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜３０＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して低温保存処理及びヘキサン洗浄処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜３１＞抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して加水処理、低温保存処理及び加熱処理をこの順で施して該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、前記＜２２＞項記載の製造方法。
＜３２＞水系溶媒（好ましくは水、又はアルコール含有率が１０体積％以下（好ましくは５体積％以下、より好ましくは１体積％以下）のアルコール水溶液（好ましくは、メタノール水溶液、エタノール水溶液、プロパノール水溶液、又はイソプロパノール水溶液））を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１８＞〜＜３１＞項のいずれか記載の製造方法。
＜３３＞疎水性有機溶媒（好ましくはn-ペンタン、シクロペンタン、n-ヘキサン、シクロヘキサン、n-ヘプタン、シクロヘプタン及びオクタンからなる群より選ばれる少なくとも１種の疎水性有機溶媒、より好ましくはn-ヘキサン）を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、前記＜１８＞〜＜３２＞項のいずれか記載の製造方法。
＜３４＞得られたエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上、好ましくは５以上、である、前記＜１８＞〜＜３３＞項のいずれか記載の製造方法。
＜３５＞前記＜１＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤。
＜３６＞エンドセリン作用抑制剤又は美白剤としての、前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物の使用。
＜３７＞エンドセリン作用抑制剤又は美白剤の製造のための、前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物の使用。
＜３８＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を、エンドセリン作用抑制剤又は美白剤として使用する方法。
＜３９＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を用いる、エンドセリン作用抑制方法。
＜４０＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を用いる、美白方法。
＜４１＞メラノサイト内のカルシウムイオン濃度の上昇を抑制してエンドセリン作用を抑制する、前記＜３６＞〜＜４０＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜４２＞前記サルオガセ属地衣類抽出物を化粧料の形態で適用する、前記＜３６＞〜＜４１＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜３７＞エンドセリン作用抑制剤又は美白剤の製造のための、前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物の使用。
＜３８＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を、エンドセリン作用抑制剤又は美白剤として使用する方法。
＜３９＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を用いる、エンドセリン作用抑制方法。
＜４０＞前記＜１＞〜＜１７＞項のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ属地衣類抽出物を用いる、美白方法。
＜４１＞メラノサイト内のカルシウムイオン濃度の上昇を抑制してエンドセリン作用を抑制する、前記＜３６＞〜＜４０＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜４２＞前記サルオガセ属地衣類抽出物を化粧料の形態で適用する、前記＜３６＞〜＜４１＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜４３＞美白剤としての、前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤の使用。
＜４４＞美白剤の製造のための、前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤の使用。
＜４５＞前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤を、美白剤として使用する方法。
＜４６＞前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤を用いる、美白方法。
＜４７＞メラノサイト内のカルシウムイオン濃度の上昇を抑制してエンドセリン作用を抑制する、前記＜４３＞〜＜４６＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜４８＞前記エンドセリン作用抑制剤を化粧料の形態で適用する、前記＜４３＞〜＜４７＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜４４＞美白剤の製造のための、前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤の使用。
＜４５＞前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤を、美白剤として使用する方法。
＜４６＞前記＜１８＞〜＜３４＞項のいずれか記載の製造方法により得られるエンドセリン作用抑制剤を用いる、美白方法。
＜４７＞メラノサイト内のカルシウムイオン濃度の上昇を抑制してエンドセリン作用を抑制する、前記＜４３＞〜＜４６＞項のいずれか記載の使用又は方法。
＜４８＞前記エンドセリン作用抑制剤を化粧料の形態で適用する、前記＜４３＞〜＜４７＞項のいずれか記載の使用又は方法。
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
製造例１ ジフラクタ酸の製造
ナガサルオガセ（新和物産社より購入）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８９１ｍＬ（固形分３．１０ｇ）を得た。この抽出物中の固形分５５．３ｍｇをＨＰＬＣで分画し、ジフラクタ酸５．１０ｍｇ（収率９．２２％）を得た。
単離成分の構造解析は、ＮＭＲにより行った。単離成分のＮＭＲスペクトルデータが文献で報告されているジフラクタ酸のスペクトルデータ（Phytochemistry，1987，Vol．26，No．12，p．3181-3185参照）とほぼ一致したことから、単離された成分はジフラクタ酸であると同定した。なお、ＮＭＲによる構造解析の結果を表１に示す。
ナガサルオガセ（新和物産社より購入）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８９１ｍＬ（固形分３．１０ｇ）を得た。この抽出物中の固形分５５．３ｍｇをＨＰＬＣで分画し、ジフラクタ酸５．１０ｍｇ（収率９．２２％）を得た。
単離成分の構造解析は、ＮＭＲにより行った。単離成分のＮＭＲスペクトルデータが文献で報告されているジフラクタ酸のスペクトルデータ（Phytochemistry，1987，Vol．26，No．12，p．3181-3185参照）とほぼ一致したことから、単離された成分はジフラクタ酸であると同定した。なお、ＮＭＲによる構造解析の結果を表１に示す。
参考例 ジャーマンカミツレ抽出物の調製
ジャーマンカミツレ（和名：カミツレ、新和物産社より入手）の花部４０ｇと、５０体積％エタノール水溶液４００ｍＬとを混合して、室温で１４日間抽出後ろ過し、ジャーマンカミツレ抽出物（２２１ｍＬ）を得た（蒸発残分２．６３％）。
ジャーマンカミツレ（和名：カミツレ、新和物産社より入手）の花部４０ｇと、５０体積％エタノール水溶液４００ｍＬとを混合して、室温で１４日間抽出後ろ過し、ジャーマンカミツレ抽出物（２２１ｍＬ）を得た（蒸発残分２．６３％）。
試験例 エンドセリン作用抑制効果の検証
ジフラクタ酸及びジャーマンカミツレ抽出物について、下記の評価系を用いてエンドセリン作用抑制効果を検証した。なお、エンドセリンはメラノサイトに作用してカルシウム濃度を上昇させ、メラニン産生を増加させることが知られており（Yada Y．et al.，J．Biol．Chem.，1991，vol．266，p．18352-18357；Imokawa G．et al.，J．Biol．Chem.，1992，vol．267，p．24675-24680など参照）、エンドセリンの当該作用を抑制する物質は美白成分として有用である。
ジフラクタ酸及びジャーマンカミツレ抽出物について、下記の評価系を用いてエンドセリン作用抑制効果を検証した。なお、エンドセリンはメラノサイトに作用してカルシウム濃度を上昇させ、メラニン産生を増加させることが知られており（Yada Y．et al.，J．Biol．Chem.，1991，vol．266，p．18352-18357；Imokawa G．et al.，J．Biol．Chem.，1992，vol．267，p．24675-24680など参照）、エンドセリンの当該作用を抑制する物質は美白成分として有用である。
正常ヒト新生児表皮由来メラノサイト（ＮＨＥＭｓ；クラボウ社製）を、蛍光検出用の９６穴プレートに３×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（２００μＬ／ｗｅｌｌ）で播種し、５％ＣＯ2下にて３７℃で培養した。培地には、ＰＭＡ（−）の増殖用添加剤（ＨＭＧＳ）を含むＭｅｄｉｕｍ ２５４を用いた。
３日間培養後、培養プレートからデカントで培地を除去し、細胞内Ｃａ2++測定試薬Fluo4-AMを含むアッセイバッファーに置換し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＦＤＳＳ（Functional Drug Screening System）機器において測定開始２０秒後に所定濃度のジフラクタ酸又はジャーマンカミツレ抽出物で１分間前処理した後、リガンドであるエンドセリン（ＥＴ−１、終濃度１００ｎＭ）を添加し、Fluo4-AMの蛍光をＥｘ．４８０ｎｍ／Ｅｍ．５４０ｎｍの測定波長で測定開始から５分後まで経時的に検出した。
コントロールにおけるFluo4-AMの蛍光増加比（Max．ratio-Min．ratio）を１００とした場合の相対値（％）で、各化合物又は抽出物における、エンドセリン刺激による細胞内カルシウム（カルシウムイオン）濃度上昇率（％）を算出し、エンドセリン作用抑制効果を評価した。なお、コントロールとして、５０体積％エタノール水溶液を添加したものを用いた。
その結果を表２に示す。
３日間培養後、培養プレートからデカントで培地を除去し、細胞内Ｃａ2++測定試薬Fluo4-AMを含むアッセイバッファーに置換し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＦＤＳＳ（Functional Drug Screening System）機器において測定開始２０秒後に所定濃度のジフラクタ酸又はジャーマンカミツレ抽出物で１分間前処理した後、リガンドであるエンドセリン（ＥＴ−１、終濃度１００ｎＭ）を添加し、Fluo4-AMの蛍光をＥｘ．４８０ｎｍ／Ｅｍ．５４０ｎｍの測定波長で測定開始から５分後まで経時的に検出した。
コントロールにおけるFluo4-AMの蛍光増加比（Max．ratio-Min．ratio）を１００とした場合の相対値（％）で、各化合物又は抽出物における、エンドセリン刺激による細胞内カルシウム（カルシウムイオン）濃度上昇率（％）を算出し、エンドセリン作用抑制効果を評価した。なお、コントロールとして、５０体積％エタノール水溶液を添加したものを用いた。
その結果を表２に示す。
ジャーマンカミツレ抽出物は、エンドセリンの作用によるメラノサイトのＣａ濃度上昇を抑制し、メラニン産生を抑制することが知られている（例えば、Pigment Cell Res.，1997，vol．10，p．218-228参照）。表２から明らかなように、ジャーマンカミツレ抽出物を添加した系では、濃度依存的なカルシウム濃度上昇抑制作用が確認された。特に濃度が１ｖ／ｖ％の系では、２０％以上もカルシウム濃度上昇が抑制され、優れたエンドセリン抑制作用が確認された。
これに対して、表２から明らかなように、ジフラクタ酸を添加した系では、エンドセリン刺激によるメラノサイト内のカルシウム濃度上昇が抑制された。すなわち、ジフラクタ酸は、公知の美白成分であるジャーマンカミツレ抽出物と同等またはそれ以上の、優れたエンドセリン抑制作用を有し、美白成分として有用であることがわかる。
これに対して、表２から明らかなように、ジフラクタ酸を添加した系では、エンドセリン刺激によるメラノサイト内のカルシウム濃度上昇が抑制された。すなわち、ジフラクタ酸は、公知の美白成分であるジャーマンカミツレ抽出物と同等またはそれ以上の、優れたエンドセリン抑制作用を有し、美白成分として有用であることがわかる。
比較例１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０７．３５ｇ（蒸発残分０．２０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０７．３５ｇ（蒸発残分０．２０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０６．５９ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０６．５９ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例３
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０８．２６ｇ（蒸発残分０．２８０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０８．２６ｇ（蒸発残分０．２８０（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例４
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと２０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０１．４９ｇ（蒸発残分０．１７２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと２０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０１．４９ｇ（蒸発残分０．１７２（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと３０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．９０ｇ（蒸発残分０．１４６（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと３０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．９０ｇ（蒸発残分０．１４６（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと４０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２００．７０ｇ（蒸発残分０．１９０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと４０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２００．７０ｇ（蒸発残分０．１９０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例３
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０１．６７ｇ（蒸発残分０．１７８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０１．６７ｇ（蒸発残分０．１７８（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例４
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して１５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０２．５７ｇ（蒸発残分０．１９２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して１５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２０２．５７ｇ（蒸発残分０．１９２（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．６９ｇ（蒸発残分０．２９８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．６９ｇ（蒸発残分０．２９８（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２００．５４ｇ（蒸発残分０．２５８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物２００．５４ｇ（蒸発残分０．２５８（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例７
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．４９ｇ（蒸発残分０．３１６（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９９．４９ｇ（蒸発残分０．３１６（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例８
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９８．６９ｇ（蒸発残分０．２４２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９８．６９ｇ（蒸発残分０．２４２（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例９
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと７０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９５．１ｇ（蒸発残分０．２３２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと７０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１９５．１ｇ（蒸発残分０．２３２（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例１０
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８５．６ｇ（蒸発残分０．２１６（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８５．６ｇ（蒸発残分０．２１６（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例５
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８３．４ｇ（蒸発残分０．１９２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８３．４ｇ（蒸発残分０．１９２（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例６
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８４．２４ｇ（蒸発残分０．１２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８４．２４ｇ（蒸発残分０．１２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例７
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して１５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８４．０ｇ（蒸発残分０．１５４（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して１５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８４．０ｇ（蒸発残分０．１５４（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例８
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８４．２２ｇ（蒸発残分０．１７４（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８４．２２ｇ（蒸発残分０．１７４（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例９
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８６．４２ｇ（蒸発残分０．２１８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８６．４２ｇ（蒸発残分０．２１８（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例１０
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８５．０６ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８５．０６ｇ（蒸発残分０．２６６（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例１１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）２５ｇと９９．５体積％エタノール水溶液５００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物３６８．０ｇ（蒸発残分０．１５８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）２５ｇと９９．５体積％エタノール水溶液５００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物３６８．０ｇ（蒸発残分０．１５８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の測定
上記実施例１〜１０及び比較例１〜１１で得られた各ナガサルオガセ抽出物中のジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を、ＨＰＬＣを用いて下記の条件で分析した。測定に用いた装置及び測定条件は下記のとおりである。
測定機器(HPLC)：Agilent Technologies Open LAB CDS LC02-1260、オートサンプラーG1329B 1260 ALS、カラムオーブンG1316A 1260 TCC、検出器G1315D 1260 DAD VL、ポンプG1312B 1260 Bin pump、G1379B 1260 μ-Degasser
＜HPLC分析条件＞
流速：０．７５ｍＬ/ｍｉｎ
使用したカラム：Inertsil ODS-3 ５μｍ(GL Science)、3.0I.D.×１５０ｍｍ
検出波長：２５４ｎｍ
カラム温度：４０℃
移動相：
Ａ：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液、Ｂ：0.1%トリフルオロ酢酸含有メタノール
０〜１０分：70%Ｂ
１０〜１５分：70％Ｂ→100%Ｂ
１５〜２０分：100％Ｂ
結果を表３に示す。
上記実施例１〜１０及び比較例１〜１１で得られた各ナガサルオガセ抽出物中のジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を、ＨＰＬＣを用いて下記の条件で分析した。測定に用いた装置及び測定条件は下記のとおりである。
測定機器(HPLC)：Agilent Technologies Open LAB CDS LC02-1260、オートサンプラーG1329B 1260 ALS、カラムオーブンG1316A 1260 TCC、検出器G1315D 1260 DAD VL、ポンプG1312B 1260 Bin pump、G1379B 1260 μ-Degasser
＜HPLC分析条件＞
流速：０．７５ｍＬ/ｍｉｎ
使用したカラム：Inertsil ODS-3 ５μｍ(GL Science)、3.0I.D.×１５０ｍｍ
検出波長：２５４ｎｍ
カラム温度：４０℃
移動相：
Ａ：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液、Ｂ：0.1%トリフルオロ酢酸含有メタノール
０〜１０分：70%Ｂ
１０〜１５分：70％Ｂ→100%Ｂ
１５〜２０分：100％Ｂ
結果を表３に示す。
表３の結果から明らかなように、本発明の方法によれば、ジフラクタ酸含有量が十分に高くウスニン酸含有量が低減した、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のナガサルオガセ抽出物を得ることができる。これに対して、アルコール含有率の低すぎる抽出溶媒を用いてナガサルオガセを抽出すると、ウスニン酸含有量は低下したが、ジフラクタ酸含有量も大きく低下した（比較例１〜４）。また、アルコール含有率の高すぎる抽出溶媒を用いてナガサルオガセを抽出すると、ジフラクタ酸含有量は上昇するが、ウスニン酸含有量も上昇した（比較例５〜１１）。
以上のように、サルオガセ属地衣類をアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出することで、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のサルオガセ属地衣類抽出物を製造することができる。ウスニン酸は肝毒性を有する一方、ジフラクタ酸は優れたエンドセリン抑制作用を有する。したがって、本発明によれば、エンドセリン作用抑制効果を有し安全性に優れたエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
以上のように、サルオガセ属地衣類をアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出することで、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のサルオガセ属地衣類抽出物を製造することができる。ウスニン酸は肝毒性を有する一方、ジフラクタ酸は優れたエンドセリン抑制作用を有する。したがって、本発明によれば、エンドセリン作用抑制効果を有し安全性に優れたエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
実施例１１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で８日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５８．５ｇ（蒸発残分０．３７４（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた抽出物を−５℃で１２日間保存後ろ過し、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８３３．４ｇ（蒸発残分０．３６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で８日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５８．５ｇ（蒸発残分０．３７４（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた抽出物を−５℃で１２日間保存後ろ過し、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８３３．４ｇ（蒸発残分０．３６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
低温保存処理前後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表４に示す。
表４の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、低温保存処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例１２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で８日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５２．８ｇ（蒸発残分０．２６８（ｗ／ｖ）％）を得た。得られた抽出物を−５℃で１３日間保存後、ろ過することにより、ナガサルオガセ抽出物処理前品８３７．２ｇ（蒸発残分０．２５６（ｗ／ｖ）％）を得た。
次に、ナガサルオガセ抽出物処理前品１０ｍＬと蒸留水２．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１１．１ｇ（蒸発残分０．１３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で８日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５２．８ｇ（蒸発残分０．２６８（ｗ／ｖ）％）を得た。得られた抽出物を−５℃で１３日間保存後、ろ過することにより、ナガサルオガセ抽出物処理前品８３７．２ｇ（蒸発残分０．２５６（ｗ／ｖ）％）を得た。
次に、ナガサルオガセ抽出物処理前品１０ｍＬと蒸留水２．５ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１１．１ｇ（蒸発残分０．１３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ抽出物処理前品、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表５に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表５に示す。
表５の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、低温保存処理、加水処理及び低温保存処理をこの順で行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例１３
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物８３８．５ｇ（蒸発残分０．２１８（ｗ／ｖ）％）を得た。
次に、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物８００ｍＬと蒸留水２００ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で７日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物９１６．２ｇ（蒸発残分０．１３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物８３８．５ｇ（蒸発残分０．２１８（ｗ／ｖ）％）を得た。
次に、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物８００ｍＬと蒸留水２００ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で７日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物９１６．２ｇ（蒸発残分０．１３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表６に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表６に示す。
表６の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、加水処理及び低温保存処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例１４
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）０．６５ｍｇ（抽出物中固形分に対して１０重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０８（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）０．６５ｍｇ（抽出物中固形分に対して１０重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０８（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１５
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）３．２５ｍｇ（抽出物中固形分に対して５０重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）３．２５ｍｇ（抽出物中固形分に対して５０重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１６
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）６．５０ｍｇ（抽出物中固形分に対して１００重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）６．５０ｍｇ（抽出物中固形分に対して１００重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１７
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）９．７５ｍｇ（抽出物中固形分に対して１５０重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）９．７５ｍｇ（抽出物中固形分に対して１５０重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１８
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１３．０ｍｇ（抽出物中固形分に対して２００重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭２００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物）５ｍＬ（固形分６．５ｍｇ）と９９．５体積％エタノール水溶液４５ｍＬとを混合して希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１３．０ｍｇ（抽出物中固形分に対して２００重量％）を添加し、室温で４５分間撹拌後、ろ過することにより活性炭２００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で５ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．０７（ｗ／ｖ）％））。その結果を表７に示す。
表７の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、加水処理、低温保存処理及び活性炭処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例１９
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（ヘキサン洗浄処理前抽出物）５０ｍＬにヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄１回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物（ヘキサン洗浄処理前抽出物）５０ｍＬにヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄１回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。
実施例２０
実施例１９で得られたナガサルオガセ抽出物５０ｍＬに、再度ヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄２回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。
実施例１９で得られたナガサルオガセ抽出物５０ｍＬに、再度ヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄２回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。
実施例２１
実施例２０で得られたナガサルオガセ抽出物４５ｍＬに、再度ヘキサン４５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄３回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。
実施例２０で得られたナガサルオガセ抽出物４５ｍＬに、再度ヘキサン４５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄３回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表８に示す。
表８の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、加水処理、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例２２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で３日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５８．３ｇ（蒸発残分０．４６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたナガサルオガセ抽出物を−５℃で１２日間保存後、ろ過することにより活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物８４９．２ｇ（蒸発残分０．３６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表９に示す。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で３日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５８．３ｇ（蒸発残分０．４６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたナガサルオガセ抽出物を−５℃で１２日間保存後、ろ過することにより活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物８４９．２ｇ（蒸発残分０．３６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表９に示す。
実施例２３
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１．０８ｍｇ（抽出物中固形分に対して１０重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２８０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１．０８ｍｇ（抽出物中固形分に対して１０重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２８０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２４
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）５．４０ｍｇ（抽出物中固形分に対して５０重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２８０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）５．４０ｍｇ（抽出物中固形分に対して５０重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２８０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２５
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１０．８０ｍｇ（抽出物中固形分に対して１００重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１０．８０ｍｇ（抽出物中固形分に対して１００重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２６
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１６．２０ｍｇ（抽出物中固形分に対して１５０重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）１６．２０ｍｇ（抽出物中固形分に対して１５０重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭１５０ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２７
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）２１．６０ｍｇ（抽出物中固形分に対して２００重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭２００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
実施例２２で得られた活性炭処理前のナガサルオガセ抽出物３ｍＬ（固形分１０．８ｍｇ）に９９．５体積％エタノール水溶液２７ｍＬを加え、希釈した後、活性炭（商品名：白鷺Ｍ、日本エンバイロケミカルズ社製）２１．６０ｍｇ（抽出物中固形分に対して２００重量％）を添加し、室温で３０分間撹拌後、ろ過することにより活性炭２００ｗｔ％処理後品を得た。得られた活性炭処理品は活性炭処理時の希釈前品と同容量とすべく減圧下で溶媒を留去した後で３ｍＬの５０体積％エタノール水溶液に溶解し、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％））。その結果を表９に示す。
表９の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、低温保存処理及び活性炭処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を大幅にロスすることなく、ウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例２８
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で８日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５５．８ｇ（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたナガサルオガセ抽出物を−５℃で１３日間保存後、ろ過することによりヘキサン洗浄処理前のナガサルオガセ抽出物８３９．５ｇ（蒸発残分０．３６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたヘキサン洗浄処理前のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）５０ｇと５０体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で８日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物８５５．８ｇ（蒸発残分０．２７０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたナガサルオガセ抽出物を−５℃で１３日間保存後、ろ過することによりヘキサン洗浄処理前のナガサルオガセ抽出物８３９．５ｇ（蒸発残分０．３６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られたヘキサン洗浄処理前のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。
実施例２９
実施例２８で得られたヘキサン洗浄処理前のナガサルオガセ抽出物５０ｍＬにヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄１回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。
実施例２８で得られたヘキサン洗浄処理前のナガサルオガセ抽出物５０ｍＬにヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄１回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。
実施例３０
実施例２９で得られたナガサルオガセ抽出物５０ｍＬに、再度ヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄２回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。
実施例２９で得られたナガサルオガセ抽出物５０ｍＬに、再度ヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄２回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１０に示す。
実施例３１
実施例３０で得られたナガサルオガセ抽出物５０ｍＬに、再度ヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄３回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２８６（ｗ／ｖ）％）。その結果を表１０に示す。
実施例３０で得られたナガサルオガセ抽出物５０ｍＬに、再度ヘキサン５０ｍＬ及び９９．５体積％エタノール水溶液５ｍＬを加え、分液ロートを使用して２層に分離後、下層を回収し（ヘキサン洗浄３回品）、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した（蒸発残分０．２８６（ｗ／ｖ）％）。その結果を表１０に示す。
表１０の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、低温保存処理及びヘキサン洗浄処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を大幅にロスすることなく、ウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例３２〜３９
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬを６０℃で静置保存し、表１１に示した各保存時間後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸とウスニン酸の含有量を測定した。その結果を表１１に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬを６０℃で静置保存し、表１１に示した各保存時間後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸とウスニン酸の含有量を測定した。その結果を表１１に示す。
実施例４０〜４３
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１５０ｍＬを７０℃で表１２に示した時間で攪拌を行い、得られたナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸とウスニン酸の含有量を測定した。その結果を表１２に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１５０ｍＬを７０℃で表１２に示した時間で攪拌を行い、得られたナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸とウスニン酸の含有量を測定した。その結果を表１２に示す。
実施例４４〜４６
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１５０ｍＬを８０℃で表１３に示した時間で攪拌を行い、得られたナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸とウスニン酸の含有量を測定した。その結果を表１３に示す。
実施例１３で得られた加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１５０ｍＬを８０℃で表１３に示した時間で攪拌を行い、得られたナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸とウスニン酸の含有量を測定した。その結果を表１３に示す。
表１１〜１３の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、加水処理、低温保存処理及び加熱処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例４７
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７５．６２ｇ（蒸発残分０．２９０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７５．６２ｇ（蒸発残分０．２９０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例４８
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７４．２５ｇ（蒸発残分０．３４０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７４．２５ｇ（蒸発残分０．３４０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例４９
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７７．５７ｇ（蒸発残分０．４１０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７７．５７ｇ（蒸発残分０．４１０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５０
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７８．１９ｇ（蒸発残分０．２６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７８．１９ｇ（蒸発残分０．２６０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５１
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７９．８２ｇ（蒸発残分０．３００（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して３０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７９．８２ｇ（蒸発残分０．３００（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８２．１４ｇ（蒸発残分０．３８０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８２．１４ｇ（蒸発残分０．３８０（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例１２
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８２．５５ｇ（蒸発残分０．１２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと９５体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２５℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８２．５５ｇ（蒸発残分０．１２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の測定
上記実施例４７〜５２及び比較例１２で得られた各ナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１４に示す。
上記実施例４７〜５２及び比較例１２で得られた各ナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１４に示す。
表１４の結果から明らかなように、本発明の方法によれば、ジフラクタ酸含有量が十分に高くウスニン酸含有量が低減した、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のナガサルオガセ抽出物を得ることができる。これに対して、アルコール含有率の高すぎる抽出溶媒を用いてナガサルオガセを抽出すると、ジフラクタ酸濃度は上昇するが、ウスニン酸濃度も上昇した（比較例１２）。
以上のように、サルオガセ属地衣類をアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出することで、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のサルオガセ属地衣類の抽出物を製造することができる。ウスニン酸は肝毒性を有する一方、ジフラクタ酸は優れたエンドセリン抑制作用を有する。したがって、本発明によれば、エンドセリン作用抑制効果を有し安全性に優れたエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
以上のように、サルオガセ属地衣類をアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出することで、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のサルオガセ属地衣類の抽出物を製造することができる。ウスニン酸は肝毒性を有する一方、ジフラクタ酸は優れたエンドセリン抑制作用を有する。したがって、本発明によれば、エンドセリン作用抑制効果を有し安全性に優れたエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
実施例５３
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７７．６ｇ（蒸発残分０．４２０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた抽出物１０ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８．９ｇ（蒸発残分０．３８０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７７．６ｇ（蒸発残分０．４２０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた抽出物１０ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８．９ｇ（蒸発残分０．３８０（ｗ／ｖ）％）を得た。
低温保存処理前後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表１５に示す。
表１５の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、低温保存処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例５４
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１７７．６ｇ（蒸発残分０．４２０（ｗ／ｖ）％）を得た。
次に、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水１ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物９．５ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８．６ｇ（蒸発残分０．３５０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で７日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１７７．６ｇ（蒸発残分０．４２０（ｗ／ｖ）％）を得た。
次に、加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水１ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物９．５ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８．６ｇ（蒸発残分０．３５０（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。加水処理後のナガサルオガセ抽出物中の各化合物の含有量の測定は、抽出物の一部をろ過後に測定した。その結果を表１６に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１６に示す。
実施例５５
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水２．５ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物１２ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１０．５ｇ（蒸発残分０．３００（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水２．５ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物１２ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１０．５ｇ（蒸発残分０．３００（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。加水処理後のナガサルオガセ抽出物中の各化合物の含有量の測定は、抽出物の一部をろ過後に測定した。その結果を表１７に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１７に示す。
実施例５６
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水５ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物１４ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１２．６ｇ（蒸発残分０．２４０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水５ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物１４ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１２．６ｇ（蒸発残分０．２４０（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。加水処理後のナガサルオガセ抽出物中の各化合物の含有量の測定は、抽出物の一部をろ過後に測定した。その結果を表１８に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１８に示す。
実施例５７
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水７．５ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物１６ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１４．１ｇ（蒸発残分０．２００（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水７．５ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物１６ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１４．１ｇ（蒸発残分０．２００（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。加水処理後のナガサルオガセ抽出物中の各化合物の含有量の測定は、抽出物の一部をろ過後に測定した。その結果を表１９に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表１９に示す。
実施例５８
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水１０ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物のうち１８ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１５．９ｇ（蒸発残分０．１７０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５４と同様にして調製した加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物１０ｍＬと蒸留水１０ｍＬとを混合することにより希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物のうち１８ｍＬを−５℃で５日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物１５．９ｇ（蒸発残分０．１７０（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。加水処理後のナガサルオガセ抽出物中の各化合物の含有量の測定は、抽出物の一部をろ過後に測定した。その結果を表２０に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表２０に示す。
表１６〜２０の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、加水処理及び低温保存処理をこの順で行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
比較例１２
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１７０．２４ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと１０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１７０．２４ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５９
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１５６．７９ｇ（蒸発残分０．４０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１５６．７９ｇ（蒸発残分０．４０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６０
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１６２．１８ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１６２．１８ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６１
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１６６．６１ｇ（蒸発残分０．２５０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１６６．６１ｇ（蒸発残分０．２５０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６２
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１７６．５５ｇ（蒸発残分０．２３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと８０体積％1,3-ブタンジオール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１７６．５５ｇ（蒸発残分０．２３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例１３
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１４６．４５ｇ（蒸発残分０．４０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１４６．４５ｇ（蒸発残分０．４０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
比較例１４
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１４３．９５ｇ（蒸発残分０．２８８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと９５体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、ヨコワサルオガセ抽出物１４３．９５ｇ（蒸発残分０．２８８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の測定
上記実施例５９〜６２及び比較例１２〜１４で得られた各ヨコワサルオガセ抽出物中のジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を、前記と同様の方法により測定した。その結果を表２１に示す。
上記実施例５９〜６２及び比較例１２〜１４で得られた各ヨコワサルオガセ抽出物中のジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を、前記と同様の方法により測定した。その結果を表２１に示す。
表２１の結果から明らかなように、本発明の方法によれば、ジフラクタ酸含有量が十分に高くウスニン酸含有量が低減した、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のヨコワサルオガセ抽出物を得ることができる。これに対して、アルコール含有率の低すぎる抽出溶媒を用いてヨコワサルオガセを抽出すると、ウスニン酸含有量は低下したが、ジフラクタ酸含有量も大きく低下した（比較例１２）。また、アルコール含有率の高すぎる抽出溶媒を用いてヨコワサルオガセを抽出すると、ジフラクタ酸含有量は上昇するが、ウスニン酸含有量も上昇した（比較例１３及び１４）。
以上のように、サルオガセ属地衣類をアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出することで、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のサルオガセ属地衣類抽出物を製造することができる。ウスニン酸は肝毒性を有する一方、ジフラクタ酸は優れたエンドセリン抑制作用を有する。したがって、本発明によれば、エンドセリン作用抑制効果を有し安全性に優れたエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
以上のように、サルオガセ属地衣類をアルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出することで、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有のサルオガセ属地衣類抽出物を製造することができる。ウスニン酸は肝毒性を有する一方、ジフラクタ酸は優れたエンドセリン抑制作用を有する。したがって、本発明によれば、エンドセリン作用抑制効果を有し安全性に優れたエンドセリン作用抑制剤を製造することができる。
実施例６３
実施例５９で得られた抽出物（加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物）８８．５７ｇを−５℃で３日間保存後、ろ過することにより低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８１．６８ｇ（蒸発残分０．３９０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８０ｍＬと蒸留水２０ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８６．１２ｇ（蒸発残分０．３２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５９で得られた抽出物（加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物）８８．５７ｇを−５℃で３日間保存後、ろ過することにより低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８１．６８ｇ（蒸発残分０．３９０（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８０ｍＬと蒸留水２０ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８６．１２ｇ（蒸発残分０．３２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物、低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表２２に示す。なお、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表２２に示す。
実施例６４
実施例５９で得られたヨコワサルオガセ抽出物（加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物）４０ｍＬと蒸留水１０ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で３日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物４１．０３ｇ（蒸発残分０．２８６（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例５９で得られたヨコワサルオガセ抽出物（加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物）４０ｍＬと蒸留水１０ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で３日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物４１．０３ｇ（蒸発残分０．２８６（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表２３に示す。なお、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表２３に示す。
実施例６５
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物１６２．１８ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物８０ｍＬと蒸留水２０ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８６．９４ｇ（蒸発残分０．３２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
ヨコワサルオガセ（ハイケム社より入手）１０ｇと５０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して４０℃で４日間抽出後ろ過し、加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物１６２．１８ｇ（蒸発残分０．３４８（ｗ／ｖ）％）を得た。
得られた加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物８０ｍＬと蒸留水２０ｍＬとを混合してエタノールの体積が４０％となるよう希釈し、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を得た。
さらに、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物を−５℃で２日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物８６．９４ｇ（蒸発残分０．３２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のヨコワサルオガセ抽出物、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のヨコワサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表２４に示す。なお、加水処理後のヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表２４に示す。
表２２〜２４の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるヨコワサルオガセ抽出物について、加水処理及び低温保存処理を行なうことにより、ヨコワサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸の含有量を保持したままウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
実施例６６
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で２９時間処理した後ろ過し、ろ液９６１．９８ｇ（蒸発残分０．０８０（ｗ／ｖ）％）を分離した。次に、ろ液から溶媒を分離して、ナガサルオガセの残渣を得た。
前記ナガサルオガセの残渣３２．４８ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７８．４４ｇ（蒸発残分０．１７０（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと５体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で２９時間処理した後ろ過し、ろ液９６１．９８ｇ（蒸発残分０．０８０（ｗ／ｖ）％）を分離した。次に、ろ液から溶媒を分離して、ナガサルオガセの残渣を得た。
前記ナガサルオガセの残渣３２．４８ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７８．４４ｇ（蒸発残分０．１７０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６７
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で２９時間処理した後ろ過し、ろ液９５９．０１ｇ（蒸発残分０．０７６（ｗ／ｖ）％）を分離した。次に、ろ液から溶媒を分離して、ナガサルオガセの残渣を得た。
前記ナガサルオガセの残渣３５．４７ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８０．０３ｇ（蒸発残分０．１５２（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと１体積％エタノール水溶液１Ｌとを混合して２０℃で２９時間処理した後ろ過し、ろ液９５９．０１ｇ（蒸発残分０．０７６（ｗ／ｖ）％）を分離した。次に、ろ液から溶媒を分離して、ナガサルオガセの残渣を得た。
前記ナガサルオガセの残渣３５．４７ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１８０．０３ｇ（蒸発残分０．１５２（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６８
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと蒸留水１Ｌとを混合して２０℃で２９時間処理した後ろ過し、ろ液９５０．０１ｇ（蒸発残分０．０８０（ｗ／ｖ）％）を分離した。次に、ろ液から溶媒を分離して、ナガサルオガセの残渣を得た。
前記ナガサルオガセの残渣３２．７５ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７９．０３ｇ（蒸発残分０．１４４（ｗ／ｖ）％）を得た。
ナガサルオガセ（新和物産社より入手）１０ｇと蒸留水１Ｌとを混合して２０℃で２９時間処理した後ろ過し、ろ液９５０．０１ｇ（蒸発残分０．０８０（ｗ／ｖ）％）を分離した。次に、ろ液から溶媒を分離して、ナガサルオガセの残渣を得た。
前記ナガサルオガセの残渣３２．７５ｇと６０体積％エタノール水溶液２００ｍＬとを混合して２０℃で５日間抽出後ろ過し、ナガサルオガセ抽出物１７９．０３ｇ（蒸発残分０．１４４（ｗ／ｖ）％）を得た。
上記実施例６６〜６８で得られた各ナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりＨＰＬＣでジフラクタ酸及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表２５に示す。
表２５の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出を行う前に、水系溶媒を用いてサルオガセ属地衣類を処理することにより、ウスニン酸含有量に対してジフラクタ酸含有量が特に高いサルオガセ属地衣類抽出物を得ることができる。
実施例６９
実施例６６で得られた抽出物（加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物）８０ｍＬと蒸留水２０ｍＬとを混合してエタノールの体積が約４０〜５０％となるよう希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８４．３３ｇ（蒸発残分０．１４０（ｗ／ｖ）％）を得た。
実施例６６で得られた抽出物（加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物）８０ｍＬと蒸留水２０ｍＬとを混合してエタノールの体積が約４０〜５０％となるよう希釈して澱出しを行い、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を得た。さらに、加水処理後のナガサルオガセ抽出物を−５℃で４日間保存後ろ過し、加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物８４．３３ｇ（蒸発残分０．１４０（ｗ／ｖ）％）を得た。
加水・低温保存処理前のナガサルオガセ抽出物、加水処理後のナガサルオガセ抽出物、及び加水・低温保存処理後のナガサルオガセ抽出物について、前記と同様の方法によりジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量を測定した。その結果を表２６に示す。なお、加水処理後のナガサルオガセ抽出物に含まれるジフラクタ酸含有量及びウスニン酸含有量の理論値も併せて表２６に示す。
表２６の結果から明らかなように、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を抽出溶媒として用いて得られるナガサルオガセ抽出物について、加水処理及び低温保存処理を行なうことにより、ナガサルオガセ抽出物に含まれるウスニン酸含有量を選択的に低減することができる。
（処方例）
前記実施例で得られた抽出物を有効成分とする、下記に示す組成のローション、乳液、美容液及びクリームの形態の美白剤を常法により各々調製出来る。
前記実施例で得られた抽出物を有効成分とする、下記に示す組成のローション、乳液、美容液及びクリームの形態の美白剤を常法により各々調製出来る。
１．ローションの調製
（組成） （配合：質量％）
1,3-ブチレングリコール ８．０
グリセリン ５．０
エタノール ３．０
実施例５で得られたナガサルオガセ抽出物 ３．０
カミツレエキス ３．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．１
リン酸二ナトリウム ０．１
リン酸二水素ナトリウム ０．１
アスコルビン酸2-グルコシド ２．０
精製水 残部
香料 適量
防腐剤 適量
（組成） （配合：質量％）
1,3-ブチレングリコール ８．０
グリセリン ５．０
エタノール ３．０
実施例５で得られたナガサルオガセ抽出物 ３．０
カミツレエキス ３．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．１
リン酸二ナトリウム ０．１
リン酸二水素ナトリウム ０．１
アスコルビン酸2-グルコシド ２．０
精製水 残部
香料 適量
防腐剤 適量
２．乳液の調製
（組成） （配合：質量％）
実施例６で得られたナガサルオガセ抽出物 １．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
アルテアエキス ２．０
スクワラン ３．０
オリブ油 ３．０
グリセリン ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：40）１．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
水酸化カリウム ０．１
キサンタンガム ０．２
エデト酸二ナトリウム ０．０２
精製水 残部
防腐剤 適量
（組成） （配合：質量％）
実施例６で得られたナガサルオガセ抽出物 １．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
アルテアエキス ２．０
スクワラン ３．０
オリブ油 ３．０
グリセリン ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：40）１．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
水酸化カリウム ０．１
キサンタンガム ０．２
エデト酸二ナトリウム ０．０２
精製水 残部
防腐剤 適量
３．美容液の調製
（組成） （配合：質量％）
実施例７で得られたナガサルオガセ抽出物 １．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．２
水酸化カリウム ０．２
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．２
クエン酸ナトリウム ０．１５
クエン酸 ０．０３
グリセリン １０．０
1,3-ブチレングリコール ５．０
エデト酸二ナトリウム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
（組成） （配合：質量％）
実施例７で得られたナガサルオガセ抽出物 １．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．２
水酸化カリウム ０．２
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．２
クエン酸ナトリウム ０．１５
クエン酸 ０．０３
グリセリン １０．０
1,3-ブチレングリコール ５．０
エデト酸二ナトリウム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
４．美容液の調製
（組成） （配合：質量％）
実施例２で得られたナガサルオガセ抽出物 ３．０
カミツレエキス １．０
チョウジエキス １．０
キキョウエキス １．０
キサンタンガム ０．２
カルボキシメチルセルロース ０．２
カルボキシビニルポリマー ０．２
水酸化カリウム ０．１
クエン酸 ０．０３
クエン酸ナトリウム ０．１５
グリセリン ５．０
プロピレングリコール ３．０
ポリエチレングリコール（分子量１５００） １．０
モノステアリン酸ポリエチレングリコール ０．５
精製水 残部
防腐剤 適量
（組成） （配合：質量％）
実施例２で得られたナガサルオガセ抽出物 ３．０
カミツレエキス １．０
チョウジエキス １．０
キキョウエキス １．０
キサンタンガム ０．２
カルボキシメチルセルロース ０．２
カルボキシビニルポリマー ０．２
水酸化カリウム ０．１
クエン酸 ０．０３
クエン酸ナトリウム ０．１５
グリセリン ５．０
プロピレングリコール ３．０
ポリエチレングリコール（分子量１５００） １．０
モノステアリン酸ポリエチレングリコール ０．５
精製水 残部
防腐剤 適量
５．クリームの調製
（組成） （配合：質量％）
実施例８で得られたナガサルオガセ抽出物 ３．０
カミツレエキス ２．０
キキョウエキス ２．０
チョウジエキス ２．０
メチルポリシロキサン ３．０
スクワラン ２．０
ジカプリン酸ネオペンチルグリコール ３．０
ステアリルアルコール １．５
セタノール １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：60）０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．３
水酸化カリウム ０．１５
キサンタンガム ０．１
エデト酸二ナトリウム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
（組成） （配合：質量％）
実施例８で得られたナガサルオガセ抽出物 ３．０
カミツレエキス ２．０
キキョウエキス ２．０
チョウジエキス ２．０
メチルポリシロキサン ３．０
スクワラン ２．０
ジカプリン酸ネオペンチルグリコール ３．０
ステアリルアルコール １．５
セタノール １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：60）０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．３
水酸化カリウム ０．１５
キサンタンガム ０．１
エデト酸二ナトリウム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
Claims (13)
- サルオガセ（Usnea）属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、ジフラクタ酸高含有かつウスニン酸低含有サルオガセ属地衣類抽出物の製造方法。
- 前記アルコール水溶液がエタノール水溶液又は1,3-ブタンジオール水溶液である、請求項１記載の製造方法。
- 前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ（Usnea longissima）又はヨコワサルオガセ（Usnea diffracta Vain.）である、請求項１又は２記載の製造方法。
- 抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる１種以上の処理によりウスニン酸の選択的低減処理を行う、請求項１〜３のいずれか記載の製造方法。
- 水系溶媒を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、請求項１〜４のいずれか記載の製造方法。
- 得られた抽出物中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上である、請求項１〜５のいずれか記載の製造方法。
- サルオガセ（Usnea）属地衣類を、アルコール含有率が３０体積％以上８０体積％以下のアルコール水溶液を用いて抽出する、エンドセリン作用抑制剤の製造方法。
- 前記アルコール水溶液がエタノール水溶液又は1,3-ブタンジオール水溶液である、請求項７記載の製造方法。
- 前記サルオガセ属地衣類がナガサルオガセ（Usnea longissima）又はヨコワサルオガセ（Usnea diffracta Vain.）である、請求項７又は８記載の製造方法。
- 抽出したサルオガセ属地衣類抽出物に対して、低温保存処理、加水処理、活性炭処理、ヘキサン洗浄処理及び加熱処理からなる群より選ばれる少なくとも１種の処理により該サルオガセ属地衣類抽出物に含まれるウスニン酸の選択的低減処理を行う、請求項７〜９のいずれか記載の製造方法。
- 水系溶媒を用いて前記サルオガセ属地衣類を処理し、処理したサルオガセ属地衣類に対して前記アルコール水溶液を用いた抽出を行う、請求項７〜１０のいずれか記載の製造方法。
- 得られたエンドセリン作用抑制剤中のウスニン酸含有量を質量基準で１とした場合、ジフラクタ酸含有量が３以上である、請求項７〜１１のいずれか記載の製造方法。
- 請求項１〜１２のいずれか記載の製造方法により得られるサルオガセ（Usnea）属地衣類抽出物又はエンドセリン作用抑制剤を有効成分とする、美白剤。
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