JP2013242284A

JP2013242284A - 高速向流クロマトグラフィーによるトリゴネリンの分離方法

Info

Publication number: JP2013242284A
Application number: JP2012129325A
Authority: JP
Inventors: Masayuki Konuma; 雅之小沼
Original assignee: BROOKS HOLDINGS KK
Current assignee: BROOKS HOLDINGS KK
Priority date: 2012-05-21
Filing date: 2012-05-21
Publication date: 2013-12-05

Abstract

【課題】コーヒー、紅茶、お茶、ココア等から簡便な方法で純度の高い低分子有用成分、例えばトリゴネリンを分離精製する技術の開発。
【解決手段】
前記原料から得た抽出液をブタノール／水／酢酸からなる組成の溶液を用いて固定相と移動層を作成し高速向流クロマトグラフィーにて分離精製する。
【選択図】なし

Description

本発明は高速向流クロマトグラフィーを用いたコーヒー、紅茶、お茶、ココア等の抽出物からの一段階操作によるトリゴネリンの分離精製および分離されたトリゴネリンに関するものである。

これまでガスクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析計等の開発の発展に伴って、有機化合物や天然物質、たんぱく質類の分析および定性定量技術はめまぐるしく進歩してきた。しかしながら高精度に分析された物質についての大量分離方法の技術は遅れていた。現実は全く進歩していない。このため前記成分を分離するためには多くの分離方法を組み合わせて分離を行なっていた。
とくに、コーヒー、紅茶、お茶、ココア類は、クロロゲン酸、カフェイン、トリゴネリン等をはじめとする多くの低分子有用成分が数百種類以上含まれている。しかしながら、これらの有用成分を簡便に高度に純度の高い状態で製造する分離方法はこれまで知られていなかった。

このような状況下で本発明者は高速勾流分配クロマトグラフィーによってクロロゲン酸の分離に成功した［特許文献１］。
特願２０１１−２９０７４５今回はトリゴネリンの分離についてである。トリゴネリンはコーヒー生豆中に比較的高濃度に存在することが知られていた。しかしながら従来法では分離方法が困難であった。このためかその機能についての研究がほとんどなされていない。

本発明者は、コーヒー、紅茶、お茶、ココア等から簡便な方法で純度の高い低分子有用成分、例えばトリゴネリンを分離する精製技術を提供することを課題とする。

本発明者等は上記課題を解決するため様々な試みを行なった。その結果、岡田（ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ，Ｖｏｌ．３１Ｎｏ．１（２０１０））によって開発された高速向流クロマトグラフィー（Ｈｉｇｈ−Ｓｐｅｅｄｃｏｕｎｔｅｒ−ｃｕｒｒｅｎｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ＨＳＣＣＣ）を利用して、分離条件を検討して、精製分離を行なうことによって一段階の操作で純度の高いトリゴネリンの単離を行うことができた。
さらに具体的にはコーヒー豆、お茶の葉、カカオ種子等から水ないしアルコール抽出を行い、固形不純物をフィルターで除去した後に、ＨＳＣＣＣに充填して分離し純度分析を行なって単離を確認した。

コーヒー、紅茶、お茶、ココア等から簡便な方法で医薬原料にも使えるほどに純度の高い低分子有用成分、例えばトリゴネリンの単離を行うことが可能となった。

本発明の好ましい形態として、コーヒー豆は焙煎、生豆のいずれでも良く、種類はアラビカ種、ロブスタ種、リベリカ種のいずれでも良く、種類および産地を問わない、お茶も生茶葉、蒸した葉いずれでもよく、カカオ種子も生種子あるいは加工をおこなったものいずれでも良い。前記原料を水、アルコールまたはこれらの混合溶液等で抽出、好ましくは減圧下で５０から２００度、さらに好ましくは８０から１５０度に加熱して抽出処理をおこなうとよい。
抽出後、固形不純物をフィルター、好ましくは０．４５μｍのフィルター、又は珪藻土等からなるフィルターで除去する。

ＨＳＣＣＣのための固定相および移動相を形成するための溶液の組成は、メタノール、エタノール、ブタノール、プロパノール等の有機アルコール類のいずれか１種類の６から２０容、好ましくは８から１２容と、水の５から１５容、好ましくは６から１１容と、酢酸、蟻酸，酪酸等の有機酸のいずれか１種類の０．５から５容、好ましくは１．３から１．７容からなる。
ＨＳＣＣＣの回転数は容量に応じて適時変更する。
分離後、各分画を分取してＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＡＳさらにＮＭＲによって純度解析を行なった。

以下に本発明の実施例を述べるが、本発明はこれによって限定されるものではない。

コーヒー生豆（インドネシア産ロブスタ種ＡＰ−１）の１００ｇをアイボトルに入れ、純粋８７５ｍｌを加える。温度１２０〜１６０度で、圧力０．１５から０．３ＭＰａで２０分間抽出する。
続いてアドバンテックフィルターでろ過する。エバポレーターで濃縮して後、０．４５μｍのミリポアーフィルターでろ過して固形不純物を完全に除去して試料とした。
ブタノール／水／酢酸８００ｍｌ／１０００ｍｌ／２００ｍｌの組成からなる溶液を用いて、固定相／移動相を高速向流クロマトグラフィー上に作成し前記試料を充填した。高速向流クロマトグラフィーの回転速度は９００ｒｐｍで流速は２．００ｍｌ／ｍｉｎで、前記試料の充填量は２．０ｍｌであった。
図１にＨＳＣＣＣによるコーヒー豆抽出物有用成分のトリゴネリン分離パターンを示す。実線はコーヒー生豆由来のトリゴネリン分画を破線は同条件で処理した市販のトリゴネリンの分離パターンを示す。
図２ａは同図１で得られたトリゴネリン分画のＬＣ／ＭＳスペクトルを図２ｂは同条件で処理した市販のトリゴネリンのＬＣ／ＭＳスペクトルを示す。さらに図３ａは市販のトリゴネリンのＬＣスペクトルを示し、図３ｂはコーヒー生豆から分離前のＬＣスペクトルを示す。
こうしてＨＳＣＣＣを用いることによって、コーヒー生豆からの純粋なトリゴネリンの分離に成功した。

ＨＳＣＣＣによるコーヒー豆抽出物有用成分のトリゴネリン分離パターンを示す。実線はコーヒー生豆由来のトリゴネリン分画を、破線は同条件で処理した市販のトリゴネリンの分離パターンを示す。ａ：図１で得られたトリゴネリン分画のＬＣ／ＭＳスペクトルを示す。ｂ：同条件で処理した市販のトリゴネリンのＬＣ／ＭＳスペクトルを示す。ａ：市販のトリゴネリンのＬＣスペクトルを示す。Ｂ：コーヒー生豆から分離前のＬＣスペクトルを示す。

コーヒー、お茶、紅茶、ココア由来の抽出物からトリゴネリン分離することができた。分離されたトリゴネリンは純度が高いので医薬原料としての使用も可能となる。また不純物の影響が排除されるので食品原料、工業原料としても多くの用途が開ける。

Claims

高速向流クロマトグラフィーを用いた、コーヒー、お茶、紅茶、ココア由来の抽出物からのトリゴネリンの新規分離精製方法と分離されたトリゴネリン。
［請求項１］記載の高速向流クロマトグラフィーにおいて固定相と移動相を形成する溶液がブタノール／水／酢酸からなる請求項１記載のトリゴネリン分離精製方法。