JP2013234129A - ヒアルロン酸産生促進剤 - Google Patents
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Abstract
安全性の点で問題のないヒアルロン酸産生促進剤を提供することを課題とする。また、本発明は、そのような物質を配合したヒアルロン酸産生促進用飲食品及びヒアルロン酸産生促進用化粧料を提供することを課題とする。
【解決手段】
乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分をペプシンやパンクレアチン等のタンパク質分解酵素で分解して得られる乳塩基性タンパク質画分分解物をヒアルロン酸産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進用飲食品及びヒアルロン酸産生促進用化粧料の有効成分とする。この乳塩基性タンパク質画分や乳塩基性タンパク質画分分解物には、ヒアルロン酸量を増加させる働きがある。
【選択図】なし
Description
(1)乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤。
(2)前記乳塩基性タンパク質画分が、そのアミノ酸組成中に塩基性アミノ酸を15重量%以上含有している画分である(1)記載のヒアルロン酸産生促進剤。
(3)乳由来の塩基性タンパク質画分が、乳又は乳由来の原料を陽イオン交換樹脂に接触させて塩基性タンパク質を吸着させ、この樹脂に吸着した画分を塩濃度0.1M〜1Mの溶出液で溶出して得られる画分である(1)記載のヒアルロン酸産生促進剤。
(4)乳塩基性タンパク質画分分解物が、前記(1)乃至(3)のいずれかに記載の乳塩基性タンパク質画分をタンパク質分解酵素で分解して得られたものであることを特徴とする(1)記載のヒアルロン酸産生促進剤。
(5)前記タンパク質分解酵素が、トリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、カリクレイン、カテプシン、サーモライシン、V8プロテアーゼから選択されるいずれか1種以上であることを特徴とする(4)記載のヒアルロン酸産生促進剤。
(6)前記乳塩基性タンパク質画分分解物が、分子量500以上、8000以下であることを特徴とする(1)〜(4)のいずれかに記載のヒアルロン酸産生促進剤。
(7)乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を有効成分とするスキンケア剤。
(8)前記スキンケアが、肌荒れの予防及び/又は改善であることを特徴とする(7)記載のスキンケア剤。
(9)(1)〜(6)のいずれかに記載の乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を配合したヒアルロン酸産生促進用飲食品。
(10)(1)〜(6)のいずれかに記載の乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を配合したヒアルロン酸産生促進用化粧料。
(11)乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を経口摂取又は塗布することによる肌質の改善方法。
(12)乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を1日あたり10μg以上経口摂取するか、又は0.001〜2重量%配合した組成物を塗布することによる肌質の改善方法。
1)ソジウムドデシルサルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)によると分子量3,000〜80,000の範囲の数種のタンパク質よりなる。
2)95重量%以上がタンパク質であって、その他少量の脂肪、灰分を含む。
3)タンパク質は主としてラクトフェリン及びラクトパーオキシダーゼよりなる。
4)タンパク質のアミノ酸組成は、リジン、ヒスチジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸を15重量%以上含有する。
(ラクトフェリンの精製)
陽イオン交換樹脂のスルホン化キトパール(富士紡績株式会社製)400gを充填したカラム(直径5cm×高さ30cm)を脱イオン水で十分洗浄した後、このカラムに未殺菌脱脂乳40リットル(pH 6.7)を流速25ml/minで通液した。通液後、このカラムを脱イオン水で十分洗浄し、2.0M塩化ナトリウムを含む0.02M炭酸緩衝液(pH 7.0)で溶出した。そしてラクトフェリンを含有する溶出画分をS-Sepharose FFカラム(アマシャムバイオサイエンス社製)に吸着させ、脱イオン水で十分洗浄し、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)で平衡化した後、0〜2.0M塩化ナトリウムのリニアグラジエントで吸着した画分を溶出し、ラクトフェリンを含む画分を回収した。そしてその画分をHiLoad 16/60 Superdex 75 pg(アマシャムバイオサイエンス社製)を用いたゲル濾過クロマトグラフィーで処理し、ラクトフェリン8.0g(比較例品1)を得た。なお、このようにして得られたラクトフェリンの純度は96%であった。
実施例1で得られた実施例品A、及び実施例2で得られた実施例品B、実施例3で得られた実施例品C乃至Eについて、ラットを用いた動物実験によりヒアルロン酸産生促進作用を調べた。また、比較対象として、比較例品1のラクトフェリンを用いて同様の試験を実施した。7週齢のWistar系雄ラットを、生理食塩水投与群(コントロール群)、実施例1で得られた実施例品A、及び実施例2で得られた実施例品Bをラット体重1kg当たり10μg投与する群(A−1、B−1群)、実施例1で得られた実施例品A及び実施例2で得られた実施例品Bをラット体重1kg当たり100μg投与する群(A−2、B−2群)、実施例3で得られた実施例品C乃至Eをラット体重1kg当たり10μg投与する群(C−1〜E−1群)、実施例3で得られた実施例品C乃至Eをラット体重1kg当たり100μg投与する群(C−2〜E−2群)、比較例品1のラクトフェリンをラット体重1kg当たり10μg投与する群(F−1群)、比較例品1のラクトフェリンをラット体重1kg当たり100μg投与する群(F−2群)の13試験群(n=6)に分け、それぞれを毎日1回ゾンデで経口投与して10週間飼育した。皮膚のヒアルロン酸量については、試験前日に剃毛したラットを屠殺後速やかに回収した皮膚組織(各300mg)を測定に供した。加熱によりタンパク変性させた皮膚組織をアクチナーゼによりタンパク質を分解し、さらにヒアルロニダーゼにて分解したヒアルロン酸をHPLC法にて測定した。その結果を表4、表5に示す。
実施例1で得られた実施例品A及び実施例2で得られた実施例品B、及び実施例3で得られた実施例品C、D、Eについて、正常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取されたCCD45SK(ATCCRL 1506)〕を用いた実験によりヒアルロン酸産生促進作用を調べた。比較対象として、比較例品1のラクトフェリンを用いて同様の試験を実施した。10容量%ウシ胎児血清(以下FBSと略記)含有変法イーグル培地(MEM、10‐101、大日本製薬社製)を用いて、正常ヒト線維芽細胞株を4×104個/ウエル/0.4mlとなるように24ウエルプレートに播種して、5%炭酸ガス、飽和水蒸気下、37℃で24時間培養した後、0.6容量%FBS含有MEM培地に置換した。そして、実施例1で得られた実施例品A及び実施例2で得られた実施例品B、実施例3で得られた実施例品C、D、E、および比較例品1のラクトフェリンを各ウエルに0.1容量%となるように添加(n=6)して、72時間培養して培養液を得た。このようにして得られた培養液より、ヒアルロン酸量(バイオテック トレーディング パートナーズ社製)を測定した。なお、対照として、乳由来の塩基性タンパク質画分及び乳由来の塩基性タンパク質画分分解物を添加しないで同様の試験を行った。その結果を表5に示す。
実施例9で得られた化粧水及び実施例10で得られたクリームを用いて、実使用テストを行った。比較品としては、乳由来の塩基性タンパク質画分及び乳由来の塩基性タンパク質画分分解物を除いた以外は実施例7及び8と同じ配合のもの及び、ラクトフェリンを添加したものを用いた。顔面のたるみや小ジワが認められる乾燥肌を有する成人女性20人を、それぞれ10人ずつ無作為に2群(A、B群)に、また、手に肌荒れが認められる女性20人を、それぞれ10人ずつ無作為に2群(C、D群)に分け、A群の顔面には本発明品の化粧水2gを、B群の顔面には比較品の化粧水2gを、C群の手指には本発明品のクリーム2gを、D群の手指には比較品のクリーム2gを、それぞれ1日2回通常の使用状態と同様に10日間塗布した。結果を表11に示す。
変形性関節炎による軽度の痛みを有する患者20名を対象に、実施例6に示す被験食を1日1回飲用し、1年間の臨床試験を行った。関節の疼痛および機能の評価を、疼痛に対するビジュアルアナログスケール(VAS)、及び、関節炎の関節における疼痛、機能、および硬直に関するWestern Ontario and McMaster Universities(WOMAC)指標にて変形性関節症の評価を行った。結果を表12に示す。
Claims (12)
- 乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤。
- 前記乳塩基性タンパク質画分が、そのアミノ酸組成中に塩基性アミノ酸を15重量%以上含有している画分である請求項1記載のヒアルロン酸産生促進剤。
- 乳由来の塩基性タンパク質画分が、乳又は乳由来の原料を陽イオン交換樹脂に接触させて塩基性タンパク質を吸着させ、この樹脂に吸着した画分を塩濃度0.1M〜1Mの溶出液で溶出して得られる画分である請求項1記載のヒアルロン酸産生促進剤。
- 乳塩基性タンパク質画分分解物が、前記請求項1乃至3のいずれかに記載の乳塩基性タンパク質画分をタンパク質分解酵素で分解して得られたものであることを特徴とする請求項1記載のヒアルロン酸産生促進剤。
- 前記タンパク質分解酵素が、トリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、カリクレイン、カテプシン、サーモライシン、V8プロテアーゼから選択されるいずれか1種以上であることを特徴とする請求項4記載のヒアルロン酸産生促進剤。
- 前記乳塩基性タンパク質画分分解物が、分子量500以上、8000以下であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載のヒアルロン酸産生促進剤。
- 乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を有効成分とするスキンケア剤。
- 前記スキンケアが、肌荒れの予防及び/又は改善であることを特徴とする請求項7記載のスキンケア剤。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を配合したヒアルロン酸産生促進用飲食品。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を配合したヒアルロン酸産生促進用化粧料。
- 乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を経口摂取又は塗布することによる肌質の改善方法。
- 乳塩基性タンパク質画分及び/又は乳塩基性タンパク質画分分解物を1日あたり10μg以上経口摂取するか、又は0.001〜2重量%配合した組成物を塗布することによる肌質の改善方法。
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