JP2013224328A - オゾンストレス付与酵母溶解物を含有するパーソナルケア用組成物 - Google Patents
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Abstract
核酸、細胞外基質タンパク質、ビタミンリザーバーなどを含む、皮膚細胞及び皮膚細胞成分にオゾン防護を提供する製品。
【解決手段】
オゾンストレス付与酵母溶解物、及び保存料を含み、保存料がアルコール類、グリコール類、パラベン類、ヒダントイン類、4級窒素含有化合物、イソチアゾリノン類、アルデヒド解除剤、ハロゲン化合物、及びその組合せからなる群から選択されるパーソナルケア用組成物。
【選択図】図1
Description
O2+O→O3
したがって、当分野で必要とされるものは、それだけには限らないが核酸、細胞外基質タンパク質、ビタミンリザバー(vitamin reservoir)などを含む、皮膚細胞及び皮膚細胞成分にオゾン防護を提供する製品である。
本発明のさらに別の態様は、皮膚細胞に使用されたときに、オゾンにより誘発された皮膚劣化の減少又は最小化に有効な、オゾンストレス付与酵母溶解物を含有するパーソナルケア用組成物の調製方法に関する。この方法は、発酵培養液中で酵母を培養するステップ;約5分から約72時間の間、発酵培養液の全量に対して約0.0001ミリモル(mM)から約1.0ミリモル(mM)のオゾン濃度を有する通気ガスを用いて酵母に通気することにより酵母をオゾンに曝露してオゾンストレス付与酵母を産生するステップ;このオゾンストレス付与酵母を溶解してオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップ;及びこのオゾンストレス付与酵母溶解物をパーソナルケア用組成物中に混合するステップを含む。
微生物及び培地
本研究に使用された微生物は、S.セレヴィシエ(Red Star baker’s yeast)であった。保存培養物は、酵母ペプチドデキストロース(YPD)寒天斜面(Difco)で維持した。使用培養物は、YPD培養液中で4℃で維持した。発酵は、10g/L酵母抽出物、8g/L NH4SO4、3g/L KH2PO4、2g/L MgSO4、及び0.5mL/L Antifoam Aを含有する培地で実施した。別段の記載のないかぎり、発酵の使用体積は2リットル(L)であった。
自動pH、温度、攪拌、溶存酸素(DO)及び消泡制御(antifoam control)を備えたNew Brunswick Bioflo 110卓上生物反応器(米国、ニュージャージー州、Edison市)を使用した。この2L容器に、空気取入及び排出ポート、アルカリ及び培地添加ポート、及び溶出液サイドポートを据え付けた。4モルNaOH及び/又は4モルH2SO4を添加することにより、培地pHを5.5に保った。通気を、1vvm(空気体積/発酵槽の作業体積/分)で保ち、DOレベルはカスケーディング(cascading)により攪拌まで60%に保った。この発酵装置に、250g/Lのグルコース溶液を毎時1.2mLの速度で供給した。
オゾンは、精製された特に乾燥した空気からオゾン発生装置(米国、ニュージャージー州、Elmwood Park市、Ozonia、Model Lab2B)により発生させた。入口空気流速を、毎分0.5Lで保った。オゾン発生装置は、毎時0.5gのオゾンを発生するように設定した。オゾン発生装置からのオゾン−空気流は、毎分1.5Lの空気と混合された。オゾン及び空気(0.5部/1.5部)の混合物を、発酵培地中に通気した。インジゴ色素(図1参照)及び/又は258nmの周波数のオゾンを示すUV分光法を用いて、オゾン濃度を測定した。オゾンを用いた全ての実験作業は、ドラフト下で実施した。活性炭カラムが余剰オゾンを吸収した。
48時間の発酵(1.0×109細胞/mL)後のS.セレヴィシエの細胞をオゾンで処理した。空気及びオゾンの混合物(1.5部/0.5部)を、15分間及び45分間、発酵培養液に通気した。細胞を、処理前及び処理後に集めた。オゾン濃度は、およそ0.01mg/L(0.002mM)に保った。次の酵母溶解物のサンプルは、非処理(A)、15分(B)、及び45分(C)であった。
1.0×109細胞/mLにおける48時間後の発酵培養液から、分析試験用のS.セレヴィシエのサンプルを採取した。45ミリリットル(mL)の培養物サンプルを遠心分離機(15000rpmで10分間)にかけ蒸留水で洗浄した。この沈殿物をpH7の10mMリン酸緩衝液45mL中に再懸濁し、フェニルメチルスルホニルフルオライド(米国、ミズーリ州、セントルイス市、Sigma Chemical Co.)を追加して1mMとし、ペプスタチンA(Sigma)を追加して10μMの濃度とした。45mLのガラスビーズ(米国、Biospec Products、0.5mm直径)を、細胞懸濁液に添加した。この懸濁液を90mLの容器中に入れ、Beadbeater(Biospec Products)にはめ込み、均一化速度で3分間振とうした。サンプルチャンバーを、均一化ステップの間は氷浴で冷却した。サンプルのタンパク質濃度を、BCAタンパク質アッセイ(Sigma)により定量した。各溶解物のサンプルは下記のとおり分析した。
二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動法
二次元電気泳動法が、Kendrick Labs,Inc.(Madison,WI)によりO’Farrellの方法(J.Biol.Chem.250:4007〜4021頁、1975年)に従って次のとおり実施された。等電点電気泳動法が、内径2.0mmのガラス管中でpH4〜8、2.0%アンフォライン(米国、ニューヨーク州、Garden City市、Gallard Schlesinger Industries)を用いて9600ボルト時(volt−hr)の間実施された。IEF内部標準のトロポマイシン(tropomycin)50ナノグラムが各サンプルに添加された。トロポマイシンは、類似のpI(イオン電荷)の2つのポリペプチドスポットを示し;分子量33,000及びpI5.2のより低いスポットが染色ゲル上に矢印でマークされた。この組のアンフォライン用のチューブゲルpHグラジエントプロットが、表面pH電極を用いて測定された。
二組のゲルが上記のように二次元の手順により得られた。各組からの1つのゲルが、レーザー濃度計(Model PDSI、米国、カルフォルニア州、Sunnyvale市、Molecular Dynamics Inc.)で走査された。このスキャナーは、走査の前に較正したNeutral Density Filter Set(米国、カルフォアルニア州、Irvine市、Melles Griot)を用いて直線性を確かめられた。これらの画像は、全ての主要なスポット及び全ての変化スポットが、輪郭が描かれ、定量化され、すべてのゲルに照合されるようにProgenesis Discovery software(version 2003.3,Nonlinear Technology)を用いて分析された。これらの組のためのコンピューター利用の分析の一般的方法には、スポット検知及び照合機能の詳細な手動確認と共に、自動スポット検知及び定量、自動背景控除(Progenesisアルゴリズム)及び自動スポット照合が含まれていた。
表1 非処理酵母溶解物中にのみ存在し15分間のオゾン処理をした酵母溶解物中に存在しないタンパク質の一覧。
表2 15分間のオゾン処理をした酵母溶解物中にのみ存在し非処理酵母溶解物中に存在しないタンパク質の一覧。
表3 15分間のオゾンストレス付与酵母溶解物中でアップレギュレート(即ち、存在し増加した)したが非処理酵母溶解物中で増加しなかったタンパク質の一覧。
表4 15分間のオゾンストレス付与酵母溶解物中でダウンレギュレート(即ち、存在し減少した)したが非処理酵母溶解物中で減少しなかったタンパク質の一覧。
表5 非処理酵母溶解物中にのみ存在するが45分間のオゾン処理をした酵母溶解物中に存在しないタンパク質の一覧。
表6 45分間のオゾン処理をした酵母溶解物中にのみ存在するが非処理酵母溶解物中に存在しないタンパク質の一覧。
表7 45分間のオゾンストレス付与酵母溶解物中でアップレギュレート(即ち、存在し増加した)したが非処理酵母溶解物中で増加しなかったタンパク質の一覧。
表8 45分間のオゾンストレス付与酵母溶解物中でダウンレギュレート(即ち、存在するが減少した)したが非処理酵母溶解物中で減少しなかったタンパク質の一覧。
酵母が過酸化水素に感応するのに比べてオゾンが酵母に異なる感応を生じさせるかを測定するために、酵母をオゾン又は過酸化水素のいずれかに同じ時間だけ曝露した。次いで、処理の結果どの遺伝子がアップレギュレートされ、どれがダウンレギュレートされたかを測定するために、酵母をマイクロアレイ解析にかけた。次の試験プロトコルをこの研究に用いた。
S.セレヴィシエの細胞培養物を、上により詳細に記載のとおり培養した。処理後の所望の時間において、酵母培養物の3〜6mlのアリコットを得て、細胞密度を600nmにおいて分光光度法で測定した。1から2の光学濃度(OD)を有する培養物サンプルを、この範囲内にするために必要な培地で希釈し、アリコットの最終体積を記録した。アリコットを、次いで遠心分離機にかけて酵母細胞をペレットにした。遠心分離後、この上澄み液を廃棄した。このペレットを、元の培養物体積(遠心分離前に記録された体積)の1ml当たり100μlの溶解緩衝液の割合を用いて、溶解緩衝液中に再懸濁させた。追加の約200μlの0.4〜0.5mmガラスビーズを、溶解手順を助けるために添加した。
上記のとおり調製された酵母細胞溶解物のサンプルに等量の64%エタノールを添加し、この試験管をボルテックスした。全ての試験管を1つの容器中に一緒にした後、この混合物の最高700μlを、ガラス繊維フィルターカートリッジに移した。このカートリッジを、1.5mlコレクションチューブに載せ、1分間14,000RPMで遠心分離した。このフロースルー(flow−through)は廃棄し、残りの混合物をフィルターカートリッジ中に入れ、この遠心分離プロセスを、混合物の全てがおわるまで繰り返した。次いで700μlの洗浄溶液1(1回)及び500μlの洗浄液2(2回)をこのフィルターカートリッジにつけ、14,000RPMで1分間遠心分離して各洗浄液をカートリッジに通して、このフィルターを洗浄してガラス繊維に付着したRNAからの残余の細胞破片を除去した。各洗浄後、フロースルーを廃棄した。最終の洗浄後、1回の最終の回転を洗浄溶液なしで実施して、フィルターカートリッジ中の残余の洗浄溶液を除去した。カートリッジ内のガラス繊維に付着したRNAを、次いで30μlのトリス−EDTA緩衝液(70〜80℃に予熱した10mM Tris−HCI、1mM EDTA)をこのカートリッジにつけ、このカートリッジを新しいコレクションチューブ中で14,000RPMで1分間遠心分離することにより溶離した。細胞溶解物及び小さな組織から作られたサンプルについては、さらなる30μlの予熱したTE緩衝液を用いて溶離プロセスを繰り返した。より大きな組織から作られたサンプル(即ち全層組織)については、溶離プロセスをさらに2回繰り返した。RNAを溶離したのち、その濃度をRibogreen評価を用いて定量し、その質をゲル電気泳動法で評価した。
Ribogreen試薬がDMSO中の原液として提供された。使用の前に、この試薬をTE緩衝液で2000倍に希釈した。このRNA評価は、試験対象のサンプル当たり200μlの希釈したRibogreen試薬を必要とし、この試薬1mlを標準として必要とする。調製後、この希釈した試薬を暗所に貯蔵した。一連のRNA標準を、大腸菌(E.coli)に由来する精製したリボソームRNAを2μg/ml、1μg/ml、200ng/ml、40ng/ml及び0ng/ml(ブランク)の濃度に希釈することにより調製した。評価の前に、上記の調製したRNAサンプルを、TE緩衝液で1000倍に希釈した。RNA評価のために、希釈したサンプル又は標準の100μlを、黒色の96ウエルプレートのウエルに移した。サンプル及び標準は二組で評価した。サンプル/標準をプレートに添加した後、希釈したRibogreen評価試薬の100μlをウエルに添加し、このプレートをゆっくりと混合し、5〜10分間、暗所でインキュベートさせた。このインキュベーション後、500nmの励起波長及び525nmの放射波長を用いた蛍光光度計で読んだ。
1%RNAゲルを、ジエチルピロカルボネート(DEPC)で処理した水21.6mlにアガロース0.3gを添加することにより調製した。アガロースを、電子レンジ中で水を沸かすことにより溶解させた。この溶液を約55℃に冷却した後、5.4mlのホルムアルデヒド及び3.0mlの10×MOPS(DEPC H2O中で作製しろ過殺菌した0.2M MOPS[pH 7.0]、20mM 酢酸ナトリウム、10mM EDTA)を添加した。混合の後、このアガロースゲルをゲルの負端子に最も近い側に配置されたローディングスロットを備えた水平型ゲル装置に注いだ。このゲルを室温で少なくとも1時間固化させた。このゲルが固化する間、1xMOPSの175mlを10×原液の希釈により調製した。このゲルが固化後、コームを取り除き、ゲル器具の緩衝液チャンバーを1xMOPSの150〜175mlで満たした(このゲルを約3mmの緩衝液で覆うのに十分な緩衝液を添加した)。この装置に覆いをして、電気リード線を電源に接続して、何も含まれていないゲルを40V(4V/cm)において5〜10分間処理した。このゲルを処理している間、約1μgの各サンプルRNAを600μlのPCRチューブに移すことにより、RNAサンプルを調製した。全てのサンプルの総体積を共通レベルにするためにDEPC H2Oを使用し、次いでゲルローディング緩衝液(即ち5%グリセロール、1mM EDTA、0.025%ブロモフェノールブルー、0.025%キシレンシアノールFF、20%ホルムアルデヒド、50%ホルムアミド、10μg/ml臭化エチジウム)の1〜3体積を添加した。これらのサンプルは、65〜70℃に5〜15分間置き次いで氷上に置いて冷却することにより変性した。これらのサンプルを注意深くレーンに載せて(各ローディングスロットはゲルの厚みに応じてサンプル10〜15μlを保持することができる)、ゲルを40Vで1〜3時間処理した。処理の最後に、RNAはゲルをUVライトボックスに置くことにより目に見えるようにした。18S及び28Sのリボソームバンドの両方がはっきりと見ることができ、18Sのバンドを下回る着色が殆どないか皆無である場合、RNAサンプルを続いてのプロセスに使用した。
第1ストランドcDNA合成:第1のストランド合成を開始するために、各サンプルのための全RNAの5μgを、600μlのPCRチューブに添加し、チューブの中の液体の総体積をDEPC H2Oで12μlに調節した。各チューブに、1μlのT7 Oligo(dT)プライマーを添加し、このチューブを70±2℃で10分間インキュベートしてRNAを変性し、次いで氷上に置いてプライマーがmRNAのpoly A末端にアニールするようにした。冷却後、2μlの10×第1ストランド緩衝液、1μlのリボヌクレアーゼ阻害剤及び4μlのdNTP Mixを各チューブに添加し、このチューブを42℃に置いた。このチューブを加熱次第、逆転写酵素の1μlを添加し、このチューブを2時間かけて42±2℃に戻した。2時間の最後に、このチューブを簡単に遠心分離機にかけて全ての流体をチューブの底に集め、次いで氷上に置いた。
ラベリング:Cy3ラベリング(緑)用の1本及びCy5ラベリング(赤)用の1本の2本のチューブをラベリングプロセス用に用意した。Cy3管に対して、非処理/対照サンプルから調製したaRNAの2μgを添加し(各サンプル用の実際の色の割り当ては重要ではないが、一貫性を保つためにCy3は一般的に非処理サンプル用に使用することに留意されたい)、十分なDEPC H2Oを添加して4μlまでの総量を得た。Cy5チューブに対して、試験材料で処理したサンプルから調製したaRNAの2μgを添加し、十分なDEPC H2Oを添加して4μlまでの総量を得た。両方のチューブに、ASAPラベリングバッファーの5μl及びチューブ(Cy3又はCy5)用の固有の色素の1μlを添加した。これらのチューブを85±2℃で15分間インキュベートした。15分間の最後に、これらのチューブを氷上に置いて冷却し、次いでASAP停止溶液の2.5μlを各チューブに添加した。本明細書で与えられた比は、1つのマイクロアレイチップを評価するのに十分であった。
ハイブリダイゼーションのために、10×対照ターゲットRNAの45μlをDEPC水の160μl及び25×Agilent Fragmentation Bufferの9μlと混合した。この混合物を60℃で約30分間ハイブリダイゼーションオーブン中でインキュベートした。インキュベーションの最後に、Agilent Hybridization Bufferの225μlを上記で調製した蛍光aRNAプローブと一緒に添加した。この混合物を70℃で5〜10分間水浴中でインキュベートした。このインキュベーション期間の間、Agilent SUREHYBハイブリダイゼーションチャンバーを、チャンバーのボトムハーフ(bottom half)にガラスガスケットスライド(glass gasket slide)を挿入することにより作製した。インキュベーション期間の最後に、このハイブリダイゼーション混合物(約450μl)を、ガラスガスケットスライドに塗布し、Yeast Microarray Chip(米国、ノースカロライナ州、High Point市)を、ハイブリダイゼーション溶液がガラスガスケットスライド及びチップのマイクロアレイ面の間で挟まれるように、このガスケットの上面に表を下にして置いた。チャンバーのトップハーフ(top half)を次いで取り付け、接続用つまみねじを締めた。チャンバー中に良好な気泡形成があることを確認後、これをハイブリダイゼーションオーブン中に約17時間(60℃及び4RPMの回転)置いた。ハイブリダイゼーション期間の最後に、このマイクロアレイ/ガラスガスケットを、SUREHYBチャンバーから取り出し、洗浄溶液1(室温、6×SSC、0.005% Triton X−102)の50ml中に置いた。ガスケットがマイクロアレイから脱離した後、このアレイを電磁攪拌プレート上の新たな洗浄溶液の300mlに移した。この溶液を中速で10分間混合しながらこのアレイを洗浄し、次いで300mlの洗浄溶液2(0.1×SSX、0,005% Triton X−102,4℃)に移し5分間洗浄した。最終の洗浄後、このアレイを500RPMで5分間遠心分離してこれを乾燥した。
マイクロアレイを、走査解像度を10μmに設定したAxon GenePix4100A Scannerで走査し、GenePix Pro softwareで分析した。最初の走査の間、cy5/cy3イメージカウント比(image count ratio)が0.88から1.12となるようにスキャナー用PMTゲイン(PMT gain)を調節した。
RNA Ribogreen評価
Ribogreen評価用の標準曲線を得るために、相対蛍光単位(relative fluorescent unit)対標準用のμg/ml単位の既知のRNA濃度をプロットし、回帰分析にかけてこれらの点に最も適合する線を定めた。試験材料及び非処理サンプルの平均RFU値を使用して各サンプル中に存在するRNAの量を推定した。
遺伝子発現のレベルは、マイクロアレイ上の探査された遺伝子マーカーの蛍光強度に関係していた。Cy3及びCy5プローブを作製するときにラベリング効率に違いを有することはあり得るので、遺伝子発現の違いを見る前に、2種のそれぞれの色素の間の蛍光測定値を標準化することが一般的である。マイクロアレイの蛍光強度は、広域の標準化にかけられた。両方の色素の総蛍光信号は、両方の色素の総強度の比を1にする補正率で標準化された。蛍光測定値を標準化した後、遺伝子発現の変化を見つけることが可能であった。遺伝子発現の変化の評価基準は研究毎に異なるが、一般的に3つの基準が求められる。
1.Cy3/Cy5(非処理/処理)蛍光強度の比は、1.5を超えているか0.66未満である。これは少なくとも+/−30%の遺伝子発現の変化に関連性がある。
2.遺伝子マーカーの蛍光強度は、背景強度を超えている。
3.遺伝子の特徴は、特異的にaRNAプローブにより明確にマークされ、非特異性の蛍光によらない(即ちSDSストリークは蛍光トレイルを離れる)。
最初の2つの基準のデータは、データのコンピューター分析によりフィルターをかけた。最後の基準は、アレイスポットの確認のための目視検査が必要である。
上記に概説されたプロトコルを用いて、2組の酵母細胞にオゾン又は過酸化水素のどちらかを用いてストレス付与した。1組の酵母細胞を、0.002ミリモル(0.01mg/L)のオゾンに約1時間曝露し、別の1組の酵母細胞を、0.002ミリモル(0.01mg/L)の過酸化水素に約1時間曝露した。その後ストレスにより影響を受けた遺伝子の分析を、非処理対照に対して比較し、どの遺伝子がアップレギュレートされ、ダウンレギュレートされたかを上記に定義された基準を用いて測定した。
オゾンで処理した酵母は、570遺伝子のアップレギュレーション及び342遺伝子のダウンレギュレーションを示した。過酸化水素で処理した酵母は、502遺伝子のアップレギュレーション及び57遺伝子のダウンレギュレーションを示した。
マイクロアレイに存在する全体の酵母ゲノムのうち、570遺伝子がオゾンストレス付与酵母のうちでアップレギュレートされ、そのうち148(26%)が過酸化水素によりアップレギュレートされたものと異なった。同様に、502遺伝子が過酸化水素によりアップレギュレートされ、80(15.0%)がオゾンストレス付与酵母でアップレギュレートされたものと異なった。
インビトロ研究が、オゾンへの曝露でのインジゴトリスルホン酸カリウムの分解により実施された(Wentworth Jr.他、2003年)。オゾンストレス付与(又はオゾン処理)酵母溶解物、非オゾンストレス処理酵母溶解物、及び蒸留水のサンプルを比較した。インジゴ試薬の約36mLを、サンプルの100mLと混合して0.5の吸光度を得た。酵素溶解物サンプルの最終濃度は約2%であった。サンプルを、次いで10mg/Lのオゾンを含有する、1.5L/分のオゾン/空気流で10分間通気した。サンプルの吸光度を、600nmで異なる時間間隔で測定した。オゾンは、インジゴ中の二重結合を開裂して無色のイサチンスルホン酸化合物を生じる特異な能力を有している。下記参照。
本実施例は、実施例1の開示のとおりに調製したオゾンストレス付与酵母溶解物を混合した、高分散相油中水乳化液を示している。
成分 重量%
1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン 0.2
ポリオキシエチレン(2)オレイルエーテル1 5.0
Bentone 38 0.5
MgSO4・7H2O 0.3
保存料2 0.01
オゾンストレス付与酵母溶解物 10.0
水 残量
1例えば、Brij 92はポリオキシエチレン(2)オレイルエーテルである。
2アルデヒド解除剤など、例えばDMDMヒダントイン。
本実施例は、実施例1の開示のとおりに調製したオゾンストレス付与酵母溶解物を混合した水中油クリームを示している。
成分 重量%
鉱油 4
1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン 1
セチルアルコールPOE(10)1 4
セチルアルコール2 4
トリエタノールアミン 0.75
ブタン−1,3−ジオール 3
キサンタンガム 0.3
メチル、プロピル及びブチルパラベン 0.01
オゾンストレス付与酵母溶解物 10.0
水 残量
1例えば、Brij 56はセチルアルコールPOE(10)である。
2例えば、Alfol 16RDはセチルアルコールである。
本実施例は、実施例1の開示のとおりに調製したオゾンストレス付与酵母溶解物を混合したアルコールローションを示している。
成分 重量%
1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン 0.3
エタノール 40
オゾンストレス付与酵母溶解物 10.0
水 残量
本実施例は、実施例3の開示のとおりに調製したオゾンストレス付与酵母溶解物を含有するサブミクロン乳濁濃縮物を示している。
成分 重量%
トリメチロールプロパントリカプリレート/トリカプレート 18.0
グリセリン 8.0
セテアリルアルコール 2.0
Ceteareth 20 2.0
ステアリン酸グリセリル 2.0
BHT 0.01
オゾンストレス付与酵母溶解物 10.0
水 残量
成分 重量%
水 89
オゾンストレス付与酵母溶解物 10
保存料(即ちオキシエタノール) 1
成分 重量%
水 89
オゾンストレス付与酵母溶解物 10
保存料(即ちオキシエタノール) 1
(参照事項)
本発明は以下の態様にも関する。
[1]
(a)オゾンストレス付与酵母を産生するのに十分なオゾン濃度に増殖中の酵母を曝露するステップ、
(b)オゾンストレス付与酵母を溶解して水溶性成分及び不水溶性成分を含むオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップ、及び
(c)水溶性成分を不水溶性成分から分離して水溶性成分を含むオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップを含む方法によって作製されるオゾンストレス付与酵母溶解物。
[2]
前記オゾン濃度が約0.0001ミリモル(mM)から約1.0ミリモル(mM)である、[1]に記載の方法により作製されるオゾンストレス付与酵母溶解物。
[3]
前記酵母が少なくとも1つの酵素、高速度攪拌、自己分解又はpH変化によって溶解される、[1]に記載の方法により作製されるオゾンストレス付与酵母溶解物。
[4]
オゾンストレス付与酵母溶解物、及び保存料を含み、
保存料がアルコール類、グリコール類、パラベン類、ヒダントイン類、4級窒素含有化合物、イソチアゾリノン類、アルデヒド解除剤、ハロゲン化合物、及びその組合せからなる群から選択されるパーソナルケア用組成物。
[5]
前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約0.0001%から約100%の濃度で存在する、[4]に記載のパーソナルケア用組成物。
[6]
前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約0.01%から約50%の濃度で存在する、[5]に記載のパーソナルケア用組成物。
[7]
前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約1%から約10%の濃度で存在する、[6]に記載のパーソナルケア用組成物。
[8]
前記保存料が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約0.01%から約10%の濃度で存在する、[4]に記載のパーソナルケア用組成物。
[9]
前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、時限放出性を前記オゾンストレス付与酵母溶解物に提供するために別の成分でカプセル化される、[4]に記載のパーソナルケア用組成物。
[10]
前記別の成分が、リポソーム、ニオソーム、サブミクロン乳化剤、ポリマー性カプセル材料、ゲル、クリーム、ローション、及びその組合せからなる群から選択される、[9]に記載のパーソナルケア用組成物。
[11]
前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、細胞タンパク質物質、細胞核物質、細胞質材料、細胞原形質物質、細胞壁成分、及びその組合せからなる群から選択される少なくとも1種の細胞成分を含む、[4]に記載のパーソナルケア用組成物。
[12]
前記オゾンストレス付与酵母溶解物が本質的に水溶性である、[4]に記載のパーソナルケア用組成物。
[13]
[1]に記載のオゾンストレス付与酵母溶解物及び皮膚への塗布用の化粧品用に許容される賦形剤を含む、皮膚の局所処理用組成物。
[14]
皮膚細胞につけたときにオゾンに誘発された皮膚劣化を減少又は最小化するのに有効なオゾンストレス付与酵母溶解物を含有するパーソナルケア用組成物の調製方法であって、
発酵培養液中で酵母を増殖させるステップ、
発酵培養液の総量に対して約0.0001ミリモル(mM)から1.0ミリモル(mM)のオゾン濃度を有する通気ガスを用いて、約5分から約72時間の期間、酵母を通気することにより酵母をオゾンに曝露してオゾンストレス付与酵母を作製するステップ、
オゾンストレス付与酵母を溶解してオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップ、及び
オゾンストレス付与酵母溶解物をパーソナルケア用組成物中に混合するステップを含む方法。
[15]
前記通気ガスが約15℃から約90℃の温度を有する、[14]に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
[16]
前記酵母が約10分から約60分の期間、約0.01mMから約0.8mMのオゾン濃度を有する通気ガスを用いて通気される、[14]に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
[17]
前記酵母が約15分から約30分の期間、約0.1mMから約0.5mMのオゾン濃度を有する通気ガスを用いて通気される、[16]に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
[18]
パーソナルケア用組成物が、水、界面活性剤、乳化剤、コンディショナー、皮膚軟化剤、ワックス、油、ポリマー、増粘剤、固定剤、着色剤、保湿剤、モイスチャライザー、安定剤、希釈剤、溶剤、香料、植物性薬品、栄養補給食品、薬用化粧品、抗真菌剤、抗菌剤、ステロイド性ホルモン、ふけ予防剤、にきび抑制成分、日焼け止め剤、保存料、及びその組合せからなる群から選択される少なくとも1種の成分を含有する、[14]に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
Claims (18)
- (a)オゾンストレス付与酵母を産生するのに十分なオゾン濃度に増殖中の酵母を曝露するステップ、
(b)オゾンストレス付与酵母を溶解して水溶性成分及び不水溶性成分を含むオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップ、及び
(c)水溶性成分を不水溶性成分から分離して水溶性成分を含むオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップを含む方法によって作製されるオゾンストレス付与酵母溶解物。 - 前記オゾン濃度が約0.0001ミリモル(mM)から約1.0ミリモル(mM)である、請求項1に記載の方法により作製されるオゾンストレス付与酵母溶解物。
- 前記酵母が少なくとも1つの酵素、高速度攪拌、自己分解又はpH変化によって溶解される、請求項1に記載の方法により作製されるオゾンストレス付与酵母溶解物。
- オゾンストレス付与酵母溶解物、及び保存料を含み、
保存料がアルコール類、グリコール類、パラベン類、ヒダントイン類、4級窒素含有化合物、イソチアゾリノン類、アルデヒド解除剤、ハロゲン化合物、及びその組合せからなる群から選択されるパーソナルケア用組成物。 - 前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約0.0001%から約100%の濃度で存在する、請求項4に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約0.01%から約50%の濃度で存在する、請求項5に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約1%から約10%の濃度で存在する、請求項6に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記保存料が、パーソナルケア用組成物の総重量に対して約0.01%から約10%の濃度で存在する、請求項4に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、時限放出性を前記オゾンストレス付与酵母溶解物に提供するために別の成分でカプセル化される、請求項4に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記別の成分が、リポソーム、ニオソーム、サブミクロン乳化剤、ポリマー性カプセル材料、ゲル、クリーム、ローション、及びその組合せからなる群から選択される、請求項9に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記オゾンストレス付与酵母溶解物が、細胞タンパク質物質、細胞核物質、細胞質材料、細胞原形質物質、細胞壁成分、及びその組合せからなる群から選択される少なくとも1種の細胞成分を含む、請求項4に記載のパーソナルケア用組成物。
- 前記オゾンストレス付与酵母溶解物が本質的に水溶性である、請求項4に記載のパーソナルケア用組成物。
- 請求項1に記載のオゾンストレス付与酵母溶解物及び皮膚への塗布用の化粧品用に許容される賦形剤を含む、皮膚の局所処理用組成物。
- 皮膚細胞につけたときにオゾンに誘発された皮膚劣化を減少又は最小化するのに有効なオゾンストレス付与酵母溶解物を含有するパーソナルケア用組成物の調製方法であって、
発酵培養液中で酵母を増殖させるステップ、
発酵培養液の総量に対して約0.0001ミリモル(mM)から1.0ミリモル(mM)のオゾン濃度を有する通気ガスを用いて、約5分から約72時間の期間、酵母を通気することにより酵母をオゾンに曝露してオゾンストレス付与酵母を作製するステップ、
オゾンストレス付与酵母を溶解してオゾンストレス付与酵母溶解物を作製するステップ、及び
オゾンストレス付与酵母溶解物をパーソナルケア用組成物中に混合するステップを含む方法。 - 前記通気ガスが約15℃から約90℃の温度を有する、請求項14に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
- 前記酵母が約10分から約60分の期間、約0.01mMから約0.8mMのオゾン濃度を有する通気ガスを用いて通気される、請求項14に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
- 前記酵母が約15分から約30分の期間、約0.1mMから約0.5mMのオゾン濃度を有する通気ガスを用いて通気される、請求項16に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
- パーソナルケア用組成物が、水、界面活性剤、乳化剤、コンディショナー、皮膚軟化剤、ワックス、油、ポリマー、増粘剤、固定剤、着色剤、保湿剤、モイスチャライザー、安定剤、希釈剤、溶剤、香料、植物性薬品、栄養補給食品、薬用化粧品、抗真菌剤、抗菌剤、ステロイド性ホルモン、ふけ予防剤、にきび抑制成分、日焼け止め剤、保存料、及びその組合せからなる群から選択される少なくとも1種の成分を含有する、請求項14に記載のパーソナルケア用組成物の調製方法。
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