JP2013055917A5 - - Google Patents

Description

本発明の改変型GLDは、上記のアミノ酸置換に加えて、上記のように野生型GLDに対して阻害剤に対する感受性が低下している限り、配列番号１で示されるアミノ酸配列において、更に１個〜数個（例えば、１〜５個、好ましくは１〜３個）のアミノ酸が置換、欠失又は付加されていても良い。

Claims (14)

1. 配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、フラビン結合型グルコース脱水素酵素（GLD）のアミノ酸配列において、
   Ａ２９８I、Ａ２９８Ｖ、Ｓ２７２Ｔ＋Ａ２９８Ｖ＋Ａ３６９Ｔ、Ｖ３３８Ｍ、Ｖ３３８Ｍ＋Ｑ３８２Ｈ、Ｓ３４０Ｇ、Ｓ３４０Ｎ、Ｓ３４０Ｖ、Ｓ３４０Ｗ、Ｌ２５０Ｖ＋Ｓ３４０Ｇ＋Ｄ３９９Ｎ、Ｈ３４１Ａ、Ｈ３４１Ｃ、Ｈ３４１Ｄ、Ｈ３４１Ｅ、Ｈ３４１Ｆ、Ｈ３４１Ｇ、Ｈ３４１Ｉ、Ｈ３４１Ｋ、Ｈ３４１Ｌ、Ｈ３４１Ｍ、Ｈ３４１Ｎ、Ｈ３４１Ｐ、Ｈ３４１Ｑ、Ｈ３４１Ｒ、Ｈ３４１Ｓ、Ｈ３４１Ｖ、Ｈ３４１Ｗ、Ｈ３４１Ｙ、Ｈ３４１Ｒ＋Ｇ４９９Ｓ、Ｄ３４３Ａ、Ｄ３４３Ｅ、Ｄ３４３Ｆ、Ｄ３４３Ｈ、Ｄ３４３Ｉ、Ｄ３４３Ｋ、Ｄ３４３Ｌ、Ｄ３４３Ｍ、Ｄ３４３Ｎ、Ｄ３４３Ｑ、Ｄ３４３Ｒ、Ｄ３４３Ｓ、Ｄ３４３Ｗ、Ｄ３４３Ｙ、Ｄ３４３Ｖ、Ｄ３４３Ｅ＋Ｌ５６２Ｈ、Ｒ２５０Ｌ＋Ｄ３４３Ｅ＋Ｋ４９４Ｅ、Ｄ３４３Ｎ＋Ｓ４９０Ｓ、Ｇ３５２Ａ、Ｇ３５２Ｃ、Ｇ３５２Ｄ、Ｇ３５２Ｅ、Ｇ３５２Ｆ、Ｇ３５２Ｉ、Ｇ３５２Ｋ、Ｇ３５２Ｌ、Ｇ３５２Ｍ、Ｇ３５２Ｎ、Ｇ３５２Ｐ、Ｇ３５２Ｑ、Ｇ３５２Ｒ、Ｇ３５２Ｓ、Ｇ３５２Ｔ、Ｇ３５２Ｖ、Ｇ３５２Ｗ、Ｇ３５２Ｙ、Ｋ３５４Ａ、Ｋ３５４Ｃ、Ｋ３５４Ｄ、Ｋ３５４Ｅ、Ｋ３５４Ｆ、Ｋ３５４Ｇ、Ｋ３５４Ｈ、Ｋ３５４Ｍ、Ｋ３５４Ｎ、Ｋ３５４Ｐ、Ｋ３５４Ｑ、Ｋ３５４Ｙ、Ｋ３５４Ｒ、Ｋ３５４Ｓ、Ｍ３４２Ｌ＋Ｋ３５４Ｎ、Ｙ４２４Ｃ、Ｙ４２４Ｄ、Ｙ４２４Ｅ、Ｙ４２４Ｋ、Ｙ４２４Ｎ、Ｙ４２４Ｑ、Ｙ４２４Ｒ、Ｙ４２４Ｔ、Ｙ４２４Ｖ、Ｇ４２６Ａ、Ｇ４２６Ｃ、Ｇ４２６Ｄ、Ｇ４２６Ｅ、Ｇ４２６Ｆ、Ｇ４２６Ｈ、Ｇ４２６Ｉ、Ｇ４２６Ｋ、Ｇ４２６Ｌ、Ｇ４２６Ｍ、Ｇ４２６Ｎ、Ｇ４２６Ｐ、Ｇ４２６Ｒ、Ｇ４２６Ｓ、Ｇ４２６Ｔ、Ｇ４２６Ｗ、Ｇ４２６Ｙ、Ｇ４２６Ｖ、Ｇ４２６Ｓ＋Ａ５７８Ｖ、Ｖ４３１Ｆ、Ｆ４３２Ｉ、Ｆ４３２Ｋ、Ｆ４３２Ｌ、Ｆ４３２Ｍ、Ｆ４３２Ｑ、Ｆ４３２Ｒ、Ｆ４３２Ｔ、及びＦ４３２Ｖから成る群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基における置換を含み（但し、上記アミノ酸配列が配列番号１でない場合には、Ｆ４３２Ｉ及びＦ４３２Ｖは除く）、且つ、配列番号１で示される野生型GLDと比較して阻害剤に対する感受性が低下した改変型GLD。
2. フラビン結合型グルコース脱水素酵素（GLD）のアミノ酸配列が配列番号１で示される、請求項１記載の改変型GLD。
3. 阻害剤が1,10-フェナントロリンである、請求項１又は２に記載の改変型GLD。
4. 阻害剤が終濃度1mMの条件で共存した測定系において、阻害剤が共存しない場合と比べ85.4%以上の相対活性を示す、請求項３記載の改変型GLD。
5. 阻害剤が終濃度1mMの条件で共存した測定系において、阻害剤が共存しない場合と比べ90%以上の相対活性を示す、請求項４記載の改変型GLD。
6. 請求項１ないし５のいずれか一項に記載の改変型GLDをコードするポリヌクレオチド。
7. 配列番号１で示される野生型のフラビン結合型グルコース脱水素酵素（GLD）アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドが配列番号２に示される塩基配列を有する、請求項６記載のポリヌクレオチド。
8. 請求項６又は７記載のポリヌクレオチドを保有する組換えベクター。
9. 請求項８記載の組換えベクターを用いることによって作製された形質転換細胞。
10. 大腸菌、酵母、又は糸状菌である、請求項９記載の形質転換細胞。
11. 請求項９又は１０の形質転換細胞を培養し、得られた培養物から改変型GLDを採取することを特徴とする、改変型GLDの製造方法。
12. 請求項１ないし５のいずれか一項に記載の改変型GLD又は請求項１１記載の製造方法で得られた改変型GLDを使用することを特徴とする、グルコースの測定方法。
13. 請求項１ないし５のいずれか一項に記載の改変型GLD又は請求項１１記載の製造方法で得られた改変型GLDを含有することを特徴とする、グルコース測定試薬組成物。
14. 請求項１ないし５のいずれか一項に記載の変型GLD又は請求項１１記載の製造方法で得られた改変型GLDを使用することを特徴とする、グルコース測定用のバイオセンサ。