JP2013053079A

JP2013053079A - ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型抗体除去システム

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Publication number: JP2013053079A
Application number: JP2011190730A
Authority: JP
Inventors: Yoshihiro Hatanaka; 美博畑中; Misuzu Tsukiji; 美鈴築地
Original assignee: Asahi Kasei Medical Co Ltd
Current assignee: Asahi Kasei Medical Co Ltd
Priority date: 2011-09-01
Filing date: 2011-09-01
Publication date: 2013-03-21
Anticipated expiration: 2031-09-01
Also published as: JP6126327B2

Abstract

【課題】血漿などの血液成分から、フィブリノーゲンの吸着を抑制しつつ、ＩｇＭ型抗体を選択的かつ高率で吸着する、安全性、安定性に優れたＩｇＭ型抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型抗体除去システムを提供すること。
【解決手段】水不溶性担体と、水不溶性担体に固定されたリガンドと、を含み、リガンドが、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子１個を除いた残りの原子団からなる１価の基、及びカルボキシル基を有する、ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材、並びに、血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器と、該容器に充填されたＩｇＭ型抗体吸着用吸着材と、を備える体外循環モジュールからなる、血液又は血漿中ＩｇＭ型抗体除去システム。
【選択図】図１

Description

本発明は、ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型抗体除去システムに関する。

近年、ドナーの適応を拡大するひとつの方法として、ＡＢＯ血液型不適合生体腎移植が数多く実施されている。血液型不適合腎移植においては、移植腎血管内皮細胞に発現されている血液型抗原に対してレシピエント体内に存在する自然抗体であるＩｇＭ型抗体（抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体等）が反応することによって、いわゆる抗体関連型拒絶反応（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｊｅｃｔｉｏｎ，ＡＭＲ）により引き起こされ得る、移植後早期の移植腎機能廃絶をいかにして回避するかが最大の問題であった。

これに対して、術前に血漿交換を行うことで、ＩｇＭ型抗体である抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体を除去し、さらに脾臓摘出を加えることにより、ＡＢＯ血液型不適合生体腎移植を計画的に安全に施行できることを報告されている（非特許文献１）。また、わが国において、１９８９年に二重濾過血漿分離交換法（ｄｏｕｂｌｅｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｐｌａｓｍａｐｈｅｒｅｓｉｓ，ＤＦＰＰ）を行うことでＩｇＭ型抗体である抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体を除去することと脾臓摘出により血液型不適合腎移植を実施し、安定した成績が得られることが報告されている（非特許文献２）。さらに、血液型のＡ抗原やＢ抗原を固定化した樹脂を詰めたカラムに血漿を通過させ、ＩｇＭ型抗体である抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体を除去することと脾臓摘出により血液型不適合腎移植を実施することで良好な成績が得られることが報告されている（非特許文献３）。

一方、免疫複合体やＩｇＧ抗体を除去する製品としては、トリプトファンやフェニルアラニンをリガンドとする旭化成クラレメディカル製のイムソーバ−ＴＲ^ＴＭやイムソーバ−ＰＨ^ＴＭが知られている（非特許文献４）。また、特許文献１には、チエニル基を有するリガンドが、天疱瘡の病因物質である抗デスモグレイン抗体（ＩｇＧ型抗体）を除去できることが記載されている。

特開２００８−１９４３０４号公報

ＡｌｅｘａｎｄｒｅＧＰＪ，ＤｅＢｒｕｙｅｒｅＭｅｔａｌ．：ＳｐｌｅｎｅｃｔｏｍｙａｓａｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｆｏｒｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｈｕｍａｎＡＢＯ−ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｒｅｎａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｃ１７：１３８−１４３，１９８５．ＴａｋａｈａｓｈｉＫ，ＴａｎａｂｅＫ，ＯｏｄａＳｅｔａｌ．：Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃｕｓｅｏｆａｎｅｗｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅａｇｅｎｔ，ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ，ｉｎｏａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｋｉｄｎｅｙｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｆｒｏｍＡＢＯ−ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｏｒｐｒｅｆｏｒｍｅｄａｎｔｉｂｏｄｅｙｐｏｓｉｔｉｖｅｄｏｎｏｒｅｓ．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｃ２６：１０７８−１０８２，１９９１．ＯｔａＫ，ＴａｋａｈａｓｈｉＫ，ＡｇｉｓｈｉＴ，ＳｏｎｄａＴ，ＯｋａＴ，ＵｅｄａＳ，ＡｍｅｍｉｙａＨ，ＳｈｉｒａｍｉｚｕＴ，ＯｋａｚａｋｉＨ，ＡｋｉｙａｍａＮ，ＨａｓｅｇａｗａＡ，ＫａｗａｍｕｒａＴ，ＴａｋａｇｉＨ，ＵｅｎｏＡ．：ＭｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅｔｒｉａｌｏｆＡＢＯ−ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｋｉｄｎｅｙｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＪａｐａｎｅｓｅＢｙｏｓｙｍｓｏｒｂＡＢＯ−ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｋｉｄｎｅｙｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐ．ＴｒａｎｓｐｌＩｎｔ．１９９２；５Ｓｕｐｐｌ１：Ｓ４０−３．ＹｏｓｈｉｄａＭ，ＴａｍｕｒａＹ，ＹａｍａｄａＹ，ＹａｍａｗａｋｉＮ，ＹａｍａｓｈｉｔａＹ．：ＩｍｍｕｓｏｒｂａＴＲａｎｄＩｍｍｕｓｏｒｂａＰＨ：ＢａｓｉｃｓｏｆＤｅｓｉｇｎａｎｄＦｅａｔｕｒｅｓｏｆＦｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｐｈｅｒｅｓｉｓ，ｖｏｌ２，ｐａｇｅ１８５−１９２（１９９８）．

非特許文献１では、血漿交換をすることでＩｇＭ型抗体である抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体を除去する方法が記載されているが、この方法では、患者以外の血漿を補充する必要がある。すなわち、血漿の補充には健康な方から献血された血漿（あるいはアルブミン）を使用するため、輸血と同様の副作用があり、特にウイルス感染に関しては、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エイズ（後天性免疫不全症候群）、成人Ｔ型細胞性白血病などの検査を行い陰性であることを確認しているものの、これらのウイルスが感染する可能性はゼロではなく感染のリスクがあり、さらに医療費コストが高額になるという欠点があった。

非特許文献２には、二重濾過血漿分離交換法（ｄｏｕｂｌｅｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｐｌａｓｍａｐｈｅｒｅｓｉｓ，ＤＦＰＰ）を行うことでＩｇＭ型抗体である抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体を除去する方法が記載されているが、この方法は、１次膜によって血球と血漿成分を分離した後、分離された血漿成分を２次膜によって、さらに抗体成分を除去する方法である。しかしながら、この方法では、抗体成分を除去する際に、血液凝固因子の重要な成分であるフィブリノーゲンも除去されてしまうために、血液凝固能が低下し、出血のリスクがあった。また、出血のリスクを回避するために、場合によっては、施行後にフィブリノーゲン製剤を補充する必要が出てくるため、この場合もフィブリノーゲン製剤中に存在する未知のウイルスによる感染のリスクもあった。

非特許文献３は、血液型のＡ抗原やＢ抗原を固定化した樹脂を詰めたカラムに血漿を通過させ、ＩｇＭ型抗体である抗Ａ抗体や抗Ｂ抗体を除去する方法が記載されている。この方法によると、フィブリノーゲンなどの他の血漿成分の吸着を抑制し、特異的にＩｇＭ型抗体を除去することが可能になると推定されるが、樹脂に固定化されたＡ抗原やＢ抗原は、主に糖鎖でできており、安全性や安定性が悪く、また、この抗原を製造するためには非常にコストがかかるという欠点があった。

非特許文献４は、リガンドとして、トリプトファンやフェニルアラニンが固定化されたポリビニルアルコール樹脂を詰めたカラムを用いることで、ＩｇＧ型抗体やＩｇＭ型抗体が吸着されることが記載されている。しかしながら、これらのカラムでは、ＩｇＭ型抗体を十分には吸着することができず、また、フィブリノーゲンを吸着するという欠点があった。

特許文献１には、ＩｇＧ型抗体の抗デスモグレイン抗体を吸着することが記載されているが、ＩｇＭ型抗体の吸着については、一切、述べられておらず、さらには、フィブリノーゲン吸着の抑制についても、一切述べられておらず、その示唆もない。

上記のような現状に鑑み、本発明は、血漿などの血液成分から、フィブリノーゲンの吸着を抑制しつつ、ＩｇＭ型抗体を選択的かつ高率で吸着する、安全性、安定性に優れたＩｇＭ型抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型抗体除去システムを提供することを課題とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドが水不溶性担体に固定化されている吸着材が、フィブリノーゲンの吸着を抑制し、かつ、ＩｇＭ型抗体を選択的に、かつ高率に吸着し、安全性、安定性に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、以下に関する。
［１］
水不溶性担体と、
前記水不溶性担体に固定されたリガンドと、を含み、
前記リガンドが、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子１個を除いた残りの原子団からなる１価の基、及びカルボキシル基を有する、
ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［２］
前記１価の基と前記カルボキシル基とが、５個以下の原子を介して結合している、［１］に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［３］
前記１価の基が、チエニル基である、［１］又は［２］に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［４］
前記リガンドが、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなる、［１］〜［３］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［５］
前記リガンドの炭素原子数が５個〜１３個である、［１］〜［４］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［６］
前記リガンドが、チエニルグリシン、チエニルアラニン及びチエニルセリンからなる群より選択される少なくとも１種である、［１］〜［５］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［７］
血液型の抗Ａ抗体及び抗Ｂ抗体から選ばれるＩｇＭ型抗体の吸着用である、［１］〜［６］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［８］
固定化された前記リガンドの量が、前記水不溶性担体１ｍＬゲルあたり１０μｍｏｌ〜２００μｍｏｌである、［１］〜［７］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［９］
前記水不溶性担体が粒子状の多孔質体であり、前記多孔質体の排除限界分子量が１５万〜１０００万である、［１］〜［８］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［１０］
フィブリノーゲンの吸着率をＰｆ、ＩｇＭ型抗体の吸着率をＰｍとしたときに、Ｐｍ／Ｐｆ≧３である、［１］〜［９］のいずれかに記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
［１１］
血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器と、
該容器に充填された請求項１〜７のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材と、を備える体外循環モジュールからなる、血液又は血漿中ＩｇＭ型抗体除去システム。
［１２］
血液又は血漿中ＩｇＭ型抗体除去システムの製造における、
水不溶性担体と、前記水不溶性担体に固定化された、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドとを含む吸着材の使用。

本発明に係るＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、血漿中のフィブリノーゲンの吸着を抑制し、かつ、ＩｇＭ型抗体を選択的に、かつ高率に吸着し、該吸着材は、安全性、保存安定性に優れている。また該吸着材を封入した体外循環モジュールを用いることにより、ＡＢＯ不適合の腎移植、肝移植、骨髄移植の際のＩｇＭ型自己抗体の除去やＩｇＭ型自己抗体を病因物質とするマクログロブリン血症、及び高ＩｇＭ症候群の患者からＩｇＭ型自己抗体を安全に除去できる。

ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材を使用した体外循環モジュールの一実施形態を示す模式断面図である。

以下、本発明について詳細に述べる。

本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、ＩｇＭ型抗体を選択的かつ高率で吸着することができ、同時にフィブリノーゲン等の吸着を抑制できるため、ＩｇＭ型抗体の吸着材として極めて有効である。ＩｇＭ型抗体は、５個のサブユニットから構成された分子量約９０万、沈降定数１９Ｓの免疫グロブリンの中でも最も巨大なタンパクで、マクログロブリンとも呼ばれる。各サブユニットは、ヒンジ領域を欠いたＨ鎖（２本のμ鎖）とＬ鎖（χ、λ鎖）から構成され、ＣＨ３、ＣＨ４ドメイン間に形成されるＳ−Ｓ結合で互いに結びつき、さらに１本のＪ鎖によって５量体構造が構成されている。μ鎖にはμ１、μ２の２つのサブクラスがある。ＩｇＭ型抗体は、Ｂ細胞の分化に伴って細胞表面に発現し、Ｂ細胞の分化や抗体産生、アポトーシスなどの免疫系に関与する多様な機能をつかさどることが明らかになってきている。また、ＩｇＭ型抗体は、赤血球のＡＢＯ式血液型の由来となるＡ抗原、Ｂ抗原に対する主な抗体である。

免疫グロブリンには５つのクラスが存在する。ＩｇＧ及びＩｇＭは、これらのクラスの一つである。異なるクラスの免疫グロブリンは、それぞれが異なる構造を持ち、異なる物理的／化学的性質を有している。例えば、ＩｇＧ型抗体は単量体で存在し、ＩｇＭは５量体で存在するため、分子量が大きく異なっている。また、ＩｇＧ型抗体は、プロテインＡ、プロテインＧとのアフィニティーが高い一方で、ＩｇＭ型抗体は、極めて低いアフィニティーしか示さない。このように異なる構造、異なる物理的／化学的性質を有しているため、ＩｇＧ型抗体の吸着・除去が可能なリガンドであっても、ＩｇＭ型抗体の吸着・除去に適用可能であるとは通常考えられない。特許文献１には、チエニル基を有するリガンドがＩｇＧ型抗体を吸着除去できることが記載されているものの、ＩｇＭ型抗体の吸着除去については記載も示唆もない。すなわち、チエニル基及びカルボキシル基を有するリガンドが有するＩｇＭ型抗体の吸着除去能（更に、同時にフィブリノーゲンの吸着を抑制できる）という性質は、引用文献１の記載からは全く予測できない未知の属性である。本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、この未知の属性を利用して新たな用途を提供するものである。

本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、水不溶性担体と、水不溶性担体に固定化されたリガンドと、を含む。

本発明に係るリガンドは、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子１個を除いた残りの原子団からなる１価の基、及びカルボキシル基を有する。

本明細書において、「チオフェンの誘導体」とは、置換基を有するチオフェン、又は複素環を構成する硫黄原子が、硫黄原子の有する非共有電子対と電子受容性の官能基との間で配位結合を形成しているチオフェンを意味する。

置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリールオキシ基、アミノ基、ハロゲン原子、アシル基、アミド基、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基が挙げられる。置換基が複数個存在する場合、それぞれ同一であってもよく、又は異なっていてもよい。中でも、置換基としては、アルキル基が望ましく、メチル基、エチル基、及びプロピル基が好ましい。

電子受容性の官能基としては、例えば、水素原子、アンモニウムイオン、１価の金属イオンが挙げられる。

リガンドは、１価の基とカルボキシル基とが５個以下の原子を介して結合している化合物であることが好ましい。また、１価の基とカルボキシル基とが、１個又は２個の炭素原子を介して結合している化合物であることがより好ましい。

１価の基としては、チエニル基が好ましい。また、リガンドとしては、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物が好ましい。リガンドに含まれるチエニル基の数には、特に限定はないが、リガンドの化学的安定性や血液適合性を考慮すると１個〜５個が好ましい。また、リガンドがカルボキシル基を有することにより、フィブリノーゲンの吸着を抑制することができる。なお、本明細書において、「チエニル基」とは、チオフェン（化学式：Ｃ_４Ｈ_４Ｓ）から水素原子を１個除いた残基をいう。

リガンドの炭素原子数は、５個以上１３個以下であることが好ましく、５個以上８個以下であることがより好ましい。炭素原子数が５個以上であると、ＩｇＭ型抗体に対する吸着性が十分に発揮される。また、リガンドの炭素原子数が１３個以下であると、リガンドの疎水性が適度なものとなり、血漿中の他のタンパクが吸着してしまう非特異的吸着を十分に抑制することができ、血液適合性がよいものとなる。また、リガンド固定時の溶解性や保存安定性も良好であるため好ましい。さらに、リガンドの炭素原子数が８個以下であると、上述の効果がより一層顕著なものとなるため、より好ましい。

リガンドは、担体への固定化やＩｇＭ型抗体の吸着に有効なアンモニアから水素原子を１個除いた１価の基を一つ以上有していることが好ましい。

具体的には、チエニル基を含むアミノ酸であるチエニルグリシン、チエニルアラニン、チエニルセリンなどが挙げられる。カルボキシル基を有さないと、フィブリノーゲンの吸着が増大し、体外循環中に重要な血液凝固因子が失われるので、出血のリスクなどが生じてしまう。カルボキシル基を有することによるフィブリノーゲン吸着の抑制のメカニズムは、これに限定されるものではないが、本発明者らは、フィブリノーゲンの等電点が比較的、負側にあることに起因していると考えている。

なお、本明細書において記載されるアミノ酸及びアミノ酸誘導体は、特に断りのない限りＬ体である。

本発明でいう水不溶性担体とは、水に溶けない担体を意味する。例えば、血液に接触した場合、血液中に溶け出さないものである。

低分子リガンドを固定化する際に使用する担体としては、親水性の表面を有し、かつ低分子リガンドとの間で共有結合を形成させるために利用し得るアミノ基、カルボキシル基、水酸基などの反応性の官能基を有するものが好ましい。また、上記の水不溶性担体は吸着させ得る有効表面積が広い多孔性であるもの（多孔質体）が望ましい。

担体は粒子状、繊維状、シート状、中空糸状などの任意の形状を用いることができるが、リガンドの保持量や吸着材としての取扱い性を考慮すると、粒子状のものが好ましい。

粒子状担体の平均粒径は、２５μｍ〜２５００μｍのものを利用できるが、その比表面積（吸着材としての吸着能力）と体液の流通性を考慮すると、５０μｍ〜１５００μｍのものが好ましい。

担体としては、セルロース系ゲル、デキストラン系ゲル、アガロース系ゲル、ポリアクリルアミド系ゲル、多孔質ガラス、ビニルポリマーゲル等の有機又は無機の多孔体が使用でき、通常のアフィニティクロマトグラフィーに用いられる担体用の材料は全て用いることができる。

これらの担体を例示すると、旭化成マイクロキャリア（旭化成（株）社製）、ＣＭ−セルロファイン（登録商標）ＣＨ（排除限界タンパク質分子量：約３×１０^６、生化学工業（株）販売）などのセルロース系担体、特公平１−４４７２５号公報記載の全多孔質活性化ゲルや、ＣＭ−トヨパール（登録商標）６５０Ｃ（排除限界タンパク質分子量：５×１０^６、東ソー（株）製）などのポリビニルアルコール系担体、ＣＭ−トリスアクリルＭ（ＣＭ−ＴｒｉｓａｃｒｙｌＭ）〔排除限界タンパク質分子量：１×１０^７、スウェーデン国ファルマシア−ＬＫＢ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ−ＬＫＢ）社製〕などのポリアクリルアミド系担体、セファロースＣＬ−４Ｂ（ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ−４Ｂ）〔排除限界タンパク質分子量：２×１０^７、スウェーデン国ファルマシア−ＬＫＢ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ−ＬＫＢ）社製〕などのアガロース系担体などの有機質担体、及びＣＰＧ−１０−１０００〔排除限界タンパク質分子量：１×１０^８、平均細孔径：１００ｎｍ、米国エレクトロ−ニュークレオニクス（Ｅｌｅｃｔｒｏ−ｎｕｃｌｅｏｎｉｃｓ）社製〕などの多孔性ガラスなどの無機質担体が挙げられる。

水不溶性担体としては、粒子状の多孔質体が好ましく、例えば、多孔性重合体粒子を用いることができる。粒子状の多孔質体は、リガンドを固定化できるものであり、排除限界分子量（タンパク質）としては、１５万〜１０００万が好ましい。本発明の目的に最も好ましい排除限界分子量は１００〜５００万である。

重合体組成は、ポリアミド系、ポリエステル系、ポリウレタン系、ビニル化合物の重合体等、多孔性構造をとりうる公知の重合体を用いることができるが、特に親水性モノマーにより親水化したビニル化合物系多孔性重合体が好ましい結果を与える。

リガンドの水不溶性担体への固定化方法としては、その様式を問わないが、共有結合が好ましい。例えば、担体がカルボキシル基を有する場合には、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドと反応させることによって、スクシンイミドオキシカルボニル基に変換し、これにリガンドをアミノ基の部分で反応させる方法（活性エステル法）が挙げられる。担体がアミノ基又はカルボキシル基を有する場合には、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの縮合試薬の存在下で、リガンドのカルボキシル基又はアミノ基を縮合反応させる方法（縮合法）、担体とリガンドとをグルタルアルデヒドなどの２個以上の官能基を有する化合物を用いて結合する方法などが挙げられる。また、担体が、水酸基を有する場合には、臭化シアンなどのハロゲン化シアンを担体に作用させ、リガンドのアミノ基の部分で反応させる方法やエピクロロヒドリンなどのエポキシドを担体に作用させ、リガンドのアミノ基の部分や水酸基の部分で反応させる方法等が挙げられる。

さらに、必要に応じて水不溶性担体とリガンドとの間に任意の長さの分子（スペーサー）を導入して使用することもできる。スペーサー分子としては、ポリメチレン鎖、ポリエチレングリコール鎖等が挙げられる。例えば、アガロースの水酸基とヘキサメチレンジイソシアナートの片側のイソシアナート基を反応、結合させ、残ったイソシアナート基とリガンドのアミノ基、水酸基、カルボキシル基等を反応、結合させることができる。

本発明で担体に結合させるリガンドの量、すなわち、リガンドの保持量（固定化されたリガンドの量）は、担体１ｍＬゲルあたり１０μｍｏｌ〜２００μｍｏｌの範囲であり、より好ましくは１０μｍｏｌ〜１００μｍｏｌの範囲である。保持量が１０μｍｏｌ未満の場合は、ＩｇＭ型抗体の吸着能の低下が起こり易い傾向があり、２００μｍｏｌを超える場合は、血漿有用成分の非特異吸着が起こり易い傾向があり好ましくない。

ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材に対するＩｇＭ型抗体の吸着量を測定する方法としては、ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材に血漿成分を加え、ＩｇＭ型抗体を吸着させ、血漿中のＩｇＭ型抗体の減少量率を測定する方法挙げられる。例えば、リガンドが固定化された担体を、一定時間、血漿に浸漬させ、その後、ＩｇＭ型抗体の減少量率を免疫学的手法によって定量して求めることができる。あるいは、リガンドが固定化された担体が詰められたカラムに対して、一定時間、血漿を流し、その後、カラム通過前とカラム通過後の血漿中のＩｇＭ型抗体の減少量率を免疫学的手法によって定量して求めることもできる。

上記ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、フィブリノーゲンの吸着を抑制し、同時にＩｇＭ型抗体を選択的かつ高率で吸着することができる。ここで、上記ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材における、フィブリノーゲンの吸着率をＰｆ、ＩｇＭ型抗体の吸着率をＰｍとしたときに、Ｐｍ／Ｐｆの値は、通常３以上である。Ｐｍ／Ｐｆの値の上限は、特に制限されるものではないが、通常１００以下である。

本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器内に充填保持して使用することができる。

図１は、ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材を使用した体外循環モジュールの一実施形態を示す模式断面図である。図１に示す体外循環モジュール１は、円筒２の一端開口部に、内側にフィルター３を張ったパッキン４を介して血液又は血漿を流入させる入口ポート５を有するキャップ６をネジ嵌合し、円筒２の他端開口部に内側にフィルター３’を張ったパッキン４’を介して血液又は血漿を流出させる出口ポート７を有するキャップ８をネジ嵌合して容器を形成し、フィルター３及び３’の間隙に本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材を充填保持させて吸着材層９を形成してなるものである。体外循環モジュール１は、例えば、ＡＢＯ血液型不適合生体腎移植の際に増加してくるＩｇＭ型抗体（抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体）の除去用として使用することができる。

吸着材層９には、本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材を単独で充填してもよく、他の吸着材と混合して充填してもよい。また、本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材と他の吸着材とが積層するように充填してもよい。他の吸着材としては、例えばＤＮＡ等の他の悪性物質（抗原）の吸着材や、幅広い吸着能を有する活性炭等を用いることができる。これにより吸着材の相乗効果による広範な臨床効果が期待できる。吸着材層９の容積は、体外循環に用いる場合、５０ｍＬ〜４００ｍＬ程度が適当である。

上記体外循環モジュール１は、血液又は血漿中のＩｇＭ型抗体を除去するためのＩｇＭ型抗体除去システムとして使用することができる。

本発明の血液又は血漿中ＩｇＭ型抗体除去システムを体外循環で用いる場合には、大きく次の二通りの方法がある。一つには、体内から取り出した血液を遠心分離機又は膜型血漿分離器を使用して、血漿成分と血球成分とに分離した後、血漿成分を上記ＩｇＭ型抗体除去システムに通過させ、浄化した後、血球成分と合わせて体内にもどす方法であり、他の一つは、体内から取り出した血液を直接上記ＩｇＭ型抗体除去システムに通過させ、浄化する方法である。

また、血液又は血漿の通過速度については、ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材の吸着率が非常に高いため、該吸着材の粒度を粗くすることができ、また充填度を低くできるので、吸着材層の形状の如何にかかわりなく、高い通過速度を与えることができる、そのため多量の血液又は血漿を処理することができる。血液又は血漿の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるいは設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよいし、また断続的に通液使用してもよい。

上記ＩｇＭ型抗体除去システムは、血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器に、吸着材を充填することにより製造することができる。上記吸着材は、水不溶性担体と、該水不溶性担体に固定化された、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドとを含む吸着材である。また、吸着材として、本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材を用いることが好ましい。

なお、本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型抗体除去システムは、ＩｇＭ型自己抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型自己抗体除去システムとして用いてもよい。本明細書において、「自己抗体」とは、自己の細胞又は組織（移植されたものも含む）に対して産生される抗体を意味する。すなわち、例えば、血液型のＡＢＯ不適合移植の際に、増加してくるＩｇＭ型抗体は、ＩｇＭ型自己抗体である。本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型抗体除去システムは、このようなＩｇＭ型自己抗体の吸着、除去にも適している。したがって、本発明のＩｇＭ型（自己）抗体吸着用吸着材及びＩｇＭ型（自己）抗体除去システムを用いて、血液型のＡＢＯ不適合移植の際に、増加してくるＩｇＭ型自己抗体（抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体）を吸着除去することは、効果的な治療法となる。

以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

［実施例１〜４］
１．吸着材の作製方法
ポリ酢酸ビニル製の球状の多孔質体（旭硝子（株）、平均粒径１００μｍ、排除限界分子量約１００万以上、樹脂１ｍＬに充填できる分子量４万のプルランの量が０．２０ｍＬ／ｍＬ以上）１００ｇを、ジメチルスルフォキシド（和光純薬株式会社製）１Ｌに投入し、水酸化ナトリウム（和光純薬株式会社製）１２０ｇ、エピクロルヒドリン（和光純薬株式会社製）７８０ｍＬ、水素化ホウ素ナトリウム（和光純薬株式会社製）７５０ｍｇを用いて３０℃で５時間反応させてエポキシ基を導入した。反応後、メタノール（和光純薬株式会社製）で洗浄し、その後、純水で洗浄して活性化多孔質体（以下「活性化担体」ともいう。）を得た。得られた活性化多孔質体に導入されたエポキシ基の量を滴定法により確認した。具体的には、１．３ｍｍｏｌ／Ｌチオ硫酸ナトリウム水溶液（和光純薬株式会社製）４ｍＬと活性化担体２ｍＬに１％フェノールフタレインエタノール溶液（和光純薬株式会社製）２滴を滴下した後、７０℃で、赤色の呈色が確認されなくなるまで０．１Ｎ塩酸を加え、「活性化量（エポキシ基の量）＝塩酸滴定量／樹脂量×１００」の式により、エポキシ基の量を求めた。その結果、導入されたエポキシ基の量は、１１０μｅｑ／ｍＬゲル以上であった。

２．リガンドの固定化反応
次にｐＨ９．３の炭酸緩衝液（和光純薬株式会社、炭酸ナトリウム／炭酸水素ナトリウム）を溶媒とし、実施例１〜３については、５０μｅｑ／ｍＬゲルの固定化量が得られるようにリガンドを溶解した。このリガンド溶液と上述の活性化担体とを、５０℃で１６時間反応させて、アミノ基と活性化担体のエポキシ基とを共有結合させて吸着材を得た。リガンドとして、実施例１では、チエニルグリシン（Ｌ−α−（３−ＴＨＩＥＮＹＬ）ＧＬＹＣＩＮＥ）を、実施例２では、チエニルセリン（β−（２−ＴＨＩＥＮＹＬ−ＤＬ−ＳＥＲＩＮＥ））を、実施例３では、チエニルアラニン（β−（２−ＴＨＩＥＮＹＬ）−Ｄ−ＡＬＡＮＩＮＥ））を用いた（実施例１〜３のリガンドはいずれもＳＩＧＭＡ社製）。リガンドの固定量は、リガンド溶液の波長２００ｎｍ〜２８０ｎｍの吸光度スペクトルを測定し、最も高い吸光度を示す波長を用いて、固定化反応前後の差から１ｍＬゲルあたりの固定化量（ｅｑ／ｍＬゲル）として算出した。

３．カラム法による吸着実験
２．５ｍＬのＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｏｌｕｍｎ（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＴＥＣＨＯＮＯＬＯＧＹ社製）に１．０ｍＬの吸着材を充填した。そこに、ＣＰＤを血液に１：８（容積比）で添加した健常人血液から遠心分離して得られた血漿３．０ｍＬをシリンジポンプにてカラムの入り口部から流速０．３ｍＬ／分で１０分流通させ、カラム出口より流出した全ての血漿を回収した。

４．分析
カラムに流す前の健常人血漿（元血漿）とカラムより流出させ回収した血漿について、それぞれ、ＩｇＭ濃度及びフィブリノーゲン濃度を測定した。ＩｇＭの濃度は免疫比濁法によって測定し、フィブリノーゲン濃度は、トロンビン凝固時間法によって測定した。吸着量は、元血漿中のＩｇＭ及びフィブリノーゲンの濃度（元血漿中濃度）と、カラムより流出させ回収した血漿中のＩｇＭ及びフィブリノーゲンの濃度（吸着反応後血漿中濃度）との差として算出した。吸着性能は、吸着率（％）＝（１−吸着反応後血漿中濃度／元血漿中濃度）×１００で算出した。

［比較例１〜６及び参考例］
比較例１〜６は、チエニル基とカルボキシル基を同時に含まない化合物をリガンドとして用いたこと以外は、実施例１〜３と同様の方法で行った。また、参考例は、リガンドを固定しない活性化担体を用いたこと以外は、実施例１〜３と同様の方法で行った。リガンドとして、比較例１では、グリシン（ＳＩＧＭＡ社製）を、比較例２では、アラニン（ＳＩＧＭＡ社製）を、比較例３では、セリン（ＳＩＧＭＡ社製）を、比較例４では、２−チオフェンエチルアミン（２−ＴＨＩＯＰＨＥＮＥＥＴＨＹＬＡＭＩＮＥ）（和光純薬株式会社製）を、比較例５では、フェニルアラニン（ＳＩＧＭＡ社製）を、比較例６では、トリプトファン（ＳＩＧＭＡ社製）を用いた。

［結果］
実施例１〜４、比較例１〜６及び参考例（リガンドなし）の結果を合わせて表１に示した。実施例１〜３のチエニル基及びカルボキシル基の双方を有するリガンドを含む吸着材はいずれも比較例１〜６と比較して、フィブリノーゲンの吸着率が低く、かつ、ＩｇＭ抗体の吸着率が高かった。すなわち、血漿の中から選択的にＩｇＭ抗体を吸着していることが判る。

本発明のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材は、フィブリノーゲン吸着を抑え、ＩｇＭ型抗体を選択的かつ高率に吸着できるため、体外循環吸着療法用の治療器具用として有用である。

１…体外循環モジュール、２…円筒、３，３’…フィルター、４，４’…パッキン、５…入口ポート、６…キャップ、７…出口ポート、８…キャップ、９…ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。

Claims

水不溶性担体と、
前記水不溶性担体に固定されたリガンドと、を含み、
前記リガンドが、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子１個を除いた残りの原子団からなる１価の基、及びカルボキシル基を有する、
ＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
前記１価の基と前記カルボキシル基とが、５個以下の原子を介して結合している、請求項１に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
前記１価の基が、チエニル基である、請求項１又は２に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
前記リガンドが、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
前記リガンドの炭素原子数が５個〜１３個である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
前記リガンドが、チエニルグリシン、チエニルアラニン及びチエニルセリンからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
血液型の抗Ａ抗体及び抗Ｂ抗体から選ばれるＩｇＭ型抗体の吸着用である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
固定化された前記リガンドの量が、前記水不溶性担体１ｍＬゲルあたり１０μｍｏｌ〜２００μｍｏｌである、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
前記水不溶性担体が粒子状の多孔質体であり、前記多孔質体の排除限界分子量が１５万〜１０００万である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
フィブリノーゲンの吸着率をＰｆ、ＩｇＭ型抗体の吸着率をＰｍとしたときに、Ｐｍ／Ｐｆ≧３である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材。
血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器と、
該容器に充填された請求項１〜７のいずれか一項に記載のＩｇＭ型抗体吸着用吸着材と、を備える体外循環モジュールからなる、血液又は血漿中ＩｇＭ型抗体除去システム。
血液又は血漿中ＩｇＭ型抗体除去システムの製造における、
水不溶性担体と、前記水不溶性担体に固定化された、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドとを含む吸着材の使用。