JP2013035778A - ベンジルアミン誘導体を有効成分とするｔｌｒ９阻害剤 - Google Patents

Abstract

【課題】ＴＬＲ９を阻害し、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び治療用の薬剤の提供。
【解決手段】下記一般式（１）で表される化合物を有効成分とするＴＬＲ９阻害剤。

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルキルオキシ基、Ｃ_６−１０アリールオキシ基又はＣ_{１０−１４}アラルキルオキシ基を示し、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに同一又は異なっていてもよく、Ｃ_１−4アルキル基を示し、ｌ、ｍ、ｎは、互いに同一又は異なっていてもよく、０〜４の整数を示す。］
【選択図】なし

Description

本発明は新規なＴｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）９阻害剤に関し、さらに詳細にはＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防、治療剤に関する。

病原体が生体に進入すると、免疫系はそれらの病原体をすみやかに識別し排除する。哺乳類では免疫系は大きく自然免疫と獲得免疫に分けることが出来る。獲得免疫では、遺伝子再構成という方法で無数の個々に異なる抗原特異性を有する受容体がＴ細胞やＢ細胞表面に発現され、あらゆる未知の外来抗原に対処する（非特許文献１）。

一方で、マクロファージや樹状細胞などによって担われる自然免疫系は非特異的な免疫応答で微生物の排除が行われると考えられていたが、Ｔｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）の発見や樹状細胞を中心とした諸研究の急速な進展により、適応免疫系における抗原認識ほどの親和性や特異性は高くない、特徴的な微生物認識機構が存在していることが明らかになってきた（非特許文献２）。とくにＴＬＲに代表される細胞内にシグナルを伝達する認識受容体は、感染をいち早く前線においてキャッチするという役割のみならず、その後、細胞内にシグナルを伝え、自然免疫系活性化のスイッチをオンにする重要な役割がある。その意味において、これまで知られていた自然免疫系の活性化によって誘導されるＩ型インターフェロン等のサイトカインやケモカイン、そして抗原提示に関与する分子群の遺伝子発現誘導と、その後の適応免疫系の活性化へと連携させて特異的な免疫応答発動へと導くという経路が明らかとなった（非特許文献２）。

ＴＬＲ９は細菌のＣｐＧ ＤＮＡを認識して活性化される。ＣｐＧ ＤＮＡは細菌のゲノムＤＮＡの特徴的な配列で、メチル化されてないＣｐＧ配列がある頻度で繰り返されている。哺乳類のゲノムＤＮＡではＣｐＧ配列の頻度が少なく高頻度にメチル化されているため、免疫賦活作用はない（非特許文献３）。

これまでＤＮＡセンサーの一つとして知られていたＴＬＲ９に関しては多くの研究がなされ、その詳細がかなり明らかになってきている。ＴＬＲ９はエンドソームやライソソームにおいて細胞外に存在するＤＮＡを認識する受容体として機能し、Ｉ型インターフェロンや炎症性サイトカインの遺伝子発現を誘導する。この両者ともＭｙＤ８８依存性のシグナル伝達経路を介するが、前者がＩＲＡＫ１／ＩＫＫα−ＩＲＦ−７が関与するのに対し、後者では、ＮＦ−κＢやＩＲＦ−５やＭＡＰキナーゼの経路が関与する。ＭｙＤ８８にはＩＲＦ−７やＩＲＦ−５の他に、ＩＲＦ−１やＩＲＦ−４が会合することが知られているが（非特許文献４、５、６）、ＴＬＲ９下流で関与するＩＲＦ転写因子の種類や役割は細胞の種類によって異なっている。

上記に示したようにＴＬＲ９はＤＮＡをリガンドとして認識するが、正常な状態では自己ＤＮＡはリガンドとして認識されず、自然免疫を活性化しない。これは細胞死により放出された自己ＤＮＡは血清中のヌクレアーゼによりＴＬＲにより認識される前に分解されるからである。またＴＬＲ９の細胞表面ではなく、エンドソームでの細胞内局在も自己ＤＮＡを認識しない機構として考えられている。しかしながら、自己免疫反応や炎症が起こっている状況下ではこのような防御機構が破綻し、内在性のタンパク質と複合体を形成し、ＴＬＲ９シグナルを活性化することが考えられる（非特許文献７）。

これらのことからＴＬＲ９を阻害することにより、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病を改善することが可能であると考えられる。

ＲＡについてはＴＬＲ９阻害作用を有する核酸配列を用いて、ＴＬＲ９を阻害することによりプリスタン誘導性ラット関節炎モデルにおいて発症と病態が抑制されたことが報告されている（非特許文献８）。また抗マラリア薬であるヒドロキシクロロキンはエンドソームの酸性化抑制によりＴＬＲ７，９の阻害作用を有していることが知られ、日本を除くほとんどの国でＲＡ、ＳＬＥの治療薬として承認されている（非特許文献９）。

ＳＬＥについてはＴＬＲ９ノックアウトマウスにおいてＳＬＥ様の病体において見られる抗核抗体の減弱が報告されており（非特許文献１０）、ＴＬＲ９阻害作用を有する核酸を用いた実験においても同様の結果が報告されている（非特許文献１１）。さらに同様の結果を有する低分子化合物についても報告されている（ＣＰＧ５２３６４：特許文献１）

ヒドロキシクロロキンはＴＬＲ９阻害作用としてはそれほど強くなく、さらに強いＴＬＲ９阻害作用を有する薬剤により、より強力な薬効が期待できる。またヒドロキシクロロキンにはクロロキン網膜症などの副作用が知られているが、異なる骨格の化合物により、このような副作用の懸念は払拭できる可能性も考えられる。したがって、強いＴＬＲ９阻害作用を示し、経口投与可能な低分子性の薬剤が、今後の関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の治療において有用であると考えられる。

一方、ベンジルアミン誘導体としては、例えば、抗ウイルス薬(特許文献２，３)、体臭予防効果（特許文献４）、筋委縮性測索硬化症治療薬（特許文献５）、狭心症治療薬（特許文献６）及び鉄鉱石の精製過程で利用されるカチオンスカベンジャーとしての利用（特許文献７，８）等の効果を持つことが知られている。しかし、これらいずれの文献においても、ＴＬＲ阻害作用に関連する記載や示唆はない。また、自己免疫性疾患に関する効果については記載も示唆もない。

ＷＯ２００８／１５２４７１号パンフレット ＷＯ１９９６／０２５１６７号パンフレット ＷＯ２００８／１１２１５６号パンフレット ＷＯ２００１／０６２２６２号パンフレット ＷＯ２００３／０４３６１６号パンフレット ＷＯ２００３／１０５８２７号パンフレット ＳＵ１５９２０４８号公報 ＳＵ１５３０６３４号公報

植松智ら ウイルス，５４：１４５−１５２（２００４） 高岡晃教ら ウイルス，５８：３７−４６（２００８） Ｔａｋｅｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．， Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２１： ３３５−３７６ （２００３） Ｈｏｎｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ， １０１： １５４１６−１５４２１ （２００４） Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０２： １５９８９−１５９９４ （２００５） Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０３： １５１３６−１５１４１ （２００６） Ｋｉｍ， Ｙ．Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４５２： ２３４−２３８ （２００８） Ｈｅｒｍａｎ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ． Ｒｈｅｕｍ． Ｄｉｓ．， ７０ ： Ａ３９ ｄｏｉ：１０．１１３６／ａｒｄ．２０１０．１４８９７３．８ （２０１１） 横川直人、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ， ２８： ８５−９１，２０１０ Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ， Ｓ．Ｒ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， ２０２： ３２１−３３１ （２００５） Ｐａｗａｒｅｔ， Ｒ．Ｄ． ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １８： １７２１−１７３１ （２００７）

本発明の目的は、低分子性のＴＬＲ９阻害作用を有する化合物を提供することにある。さらに詳細には、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。

上記実情に鑑み、本発明者らは、鋭意ＴＬＲ９阻害作用を持つ化合物を探索した結果、下記一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体が、ヒトＴＬＲ９を発現させたヒト胎児腎臓細胞由来のＨＥＫ２９３細胞を用いた試験においてＴＬＲ９阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、次の一般式（１）：

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルキルオキシ基、Ｃ_６−１０アリールオキシ基又はＣ_{１０−１４}アラルキルオキシ基を示し、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに同一又は異なっていてもよく、Ｃ_１−４アルキル基を示し、ｌ、ｍ、ｎは、互いに同一又は異なっていてもよく、０〜４の整数を示す。］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９阻害剤に関する。また、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物に関する。

さらに詳細には、本発明は、
N¹-(5-ブロモ-2,4-ジメトキシベンジル)-N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン、
N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N³,N³-ジメチル-N¹-(3-フェノキシベンジル)プロパン-1,3-ジアミン、
N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N¹-(4-メトキシ-3-フェノキシベンジル)-N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン、
N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N¹-(4-メトキシ-2,5-ジメチルベンジル)-N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン、及び
N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N¹-(4-メトキシ-2,3-ジメチルベンジル)-N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含有してなる医薬組成物又はＴＬＲ９阻害剤に関する。

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤に関する。

また、本発明は、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤の製造のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用に関する。

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を患者に投与することを特徴とする、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療方法に関する。

本発明のＴＬＲ９阻害剤の有効成分である、一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病等の予防及び／又は治療剤として有用である。

以下、本発明について詳細に説明する。本発明における用語の定義は以下のとおりである。

本明細書中で使用するとき、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_１−４アルキル基」とは、炭素数１〜４の直鎖又は分岐鎖状の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ_１−４アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基等が挙げられる。

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_１−４アルキルオキシ基」とは、炭素数１〜４の直鎖又は分岐鎖状のアルキルオキシ基を意味する。「Ｃ_１−４アルキルオキシ基」としては、例えば、メチルオキシ基、エチルオキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓ−ブチルオキシ基、ｔ−ブチルオキシ基等が挙げられる。

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_６−１０アリールオキシ基」とは、炭素数６〜１０の単環式又は縮合環式の芳香族炭化水素基を意味する。アリールオキシ基としては、例えば、フェニルオキシ基、ナフチルオキシ基、アズレニルオキシ基等が挙げられる。

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_{１０−１４}アラルキルオキシ基」とは、アリール基で置換されたアルキルオキシ基を意味し、例えば、ベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基等が挙げられる。

一般式（１）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３におけるＣ_１−４アルキル基としては、メチル基が好ましい。一般式（１）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３におけるハロゲン原子としては、臭素原子が好ましい。一般式（１）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３におけるＣ_１−４アルキルオキシ基としては、メチルオキシ基が好ましい。

一般式（１）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３におけるアリールオキシ基としては、フェニルオキシ基が好ましい。一般式（１）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３におけるアラルキルオキシ基としては、ベンジルオキシ基が好ましい。一般式（１）中、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７におけるＣ_１−４アルキル基としては、メチル基が好ましい。一般式（１）中、ｌ、ｍは、３が好ましい。一般式（１）中、ｎは、１が好ましい。

本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体の具体例として、下記化合物を挙げることができる。

本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のベンジルアミン誘導体のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。

本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体として許容される塩としては、具体的には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との酸付加塩等が挙げられる。

本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノール等のアルコールとの溶媒和物等）が挙げられる。

本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体は、公知の方法を組み合わせ製造することができる。ベンジルアミン誘導体の製造方法を下記反応工程図に示すが、製造法はこれに限定されるものではない。

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、ｌ、ｍ、ｎは、前記定義と同じものを示し、Ｐ^１及びＰ^２は保護基を示し、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３は脱離基を示す。］

［工程１］保護化されたアミン（ＩＩ）にさらに保護基を導入し、アミン誘導体（ＩＩＩ）を製造することがきできる。保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。

［工程２］異なる保護基を有するアミン（ＩＩＩ）を塩基存在下、アミン誘導体（ＶＩＩＩ）と反応させ、ジアミン誘導体（ＩＶ）を製造することができる。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、１時間〜３日間、好ましくは３時間〜２４時間である。

［工程３］ジアミン誘導体（ＩＶ）の保護基を脱保護し、２級アミン（Ｖ）を製造することがきできる。脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。

［工程４］２級アミン（Ｖ）を塩基存在下、アミン（ＶＩＩＩ’）と反応させ、トリアミン誘導体（VI）を製造することができる。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、１時間〜３日間、好ましくは３時間〜２４時間である。

［工程５］トリアミン誘導体（ＶＩ）の保護基を脱保護し、２級アミン（ＶＩＩ）を製造することがきできる。脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。

［工程６］２級アミン（ＶＩＩ）に対し、塩基存在下、化合物（ＩＸ）と反応させ、ベンジルアミン誘導体（Ｉ）を製造することができる。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、１時間〜３日間、好ましくは３時間〜２４時間である。

前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。

さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。

本発明のＴＬＲ９阻害剤、又は自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤は、一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。

投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。

経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。

経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が、安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。

注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ（エデト酸ナトリウム）、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。

坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。

上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。

本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜５００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。

以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

［試験例１］ ＴＬＲ９発現レポーター細胞を用いたＴＬＲ９活性化阻害試験
１）ＴＬＲ９発現レポーター細胞の樹立
ヒト胎児腎臓細胞株であるＨＥＫ２９３にヒトＴＬＲ９を発現させた細胞をＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社より購入した（ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬ）。ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬを、１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ（ｓｉｇｍａ））を用いて継代培養した。ＮＦκＢ認識配列の４回繰り返しにホタルルシフェラーゼ遺伝子を連結したｐＧＬ４．２８（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を、Ｆｕｇｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ社）を用いてリポフェクションにより遺伝子導入した。ハイグロマイシン、ブラストサイジン耐性細胞クローンを選択し、ＴＬＲ９発現レポーター細胞とした（ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬ）。

２）ＴＬＲ９活性化阻害試験
ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬを９６ウェルホワイトマイクロタイタープレートに１．０×１０^４／８０μＬで播き、ＣＯ_２インキュベータ中で３７℃、１晩培養した。ＤＭＥＭにより希釈した上記表１に示す化合物１〜５をそれぞれ被検化合物（１０μＬ）として添加し、終濃度０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭとした。１時間後にＴＬＲ９リガンドであるＣｐＧ−Ｂ ＤＮＡ（ＯＤＮ２００６）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社）を終濃度１μＭとなるように添加した（１０μＬ）。合計１００μＬとして４時間ＣＯ_２インキュベータ中でインキュベート後にルシフェラーゼ活性をＴＬＲ９活性として測定した。ルシフェラーゼ活性を、Ｂｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を６０μＬ添加し、マルチマイクロプレートリーダーＡＲＶＯ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）により発光量を測定した。被検化合物を添加していない場合のルシフェラーゼ活性を１００％として、各被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ_５０値）を計算した。また、被験化合物をＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ社より入手し、本試験において使用した。

３）結果
化合物１は０．１５μＭ、化合物２は０．２０μＭ、化合物３は０．２１μＭ、化合物４は０．２４μＭ、化合物５は０．２６μＭのＩＣ_５０値を示した。以上より、本発明の化合物は強いＴＬＲ９阻害作用を有していることが確認された。したがって、本発明の一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体は、ＴＬＲ９阻害剤として、ＴＬＲ９シグナルの活性化に関連する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防剤や治療剤の有効成分として有用であることがわかった。

本発明は、一般式（１）で表されるベンジルアミン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＴＬＲ９阻害作用を有していることを初めて見出し、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。

Claims (4)

1. 次の一般式（１）：
   

   

   ［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、互いに同一又は異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルキルオキシ基、Ｃ_６−１０アリールオキシ基又はＣ_{１０−１４}アラルキルオキシ基を示し、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７は、互いに同一又は異なっていてもよく、Ｃ_１-４アルキル基を示し、ｌ、ｍ、ｎは、互いに同一又は異なっていてもよく、０〜４の整数を示す。］
   で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９阻害剤。
2. 一般式（１）で表される化合物が、
   N¹-(5-ブロモ-2,4-ジメトキシベンジル)-N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン、
   N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-N³,N³-ジメチル-N¹-(3-フェノキシベンジル)プロパン-1,3-ジアミン、
   N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)- N¹-(4-メトキシ-3-フェノキシベンジル)- N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン、
   N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)- N¹-(4-メトキシ-2,5-ジメチルベンジル)- N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン、及び、
   N¹-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)- N¹-(4-メトキシ-2,3-ジメチルベンジル)- N³,N³-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン
   からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載の阻害剤。
3. 請求項１又は２に記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤。
4. 自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、多発性硬化症、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群又は血管炎である、請求項３に記載の予防及び／又は治療剤。