JP2012531888A - 非対称二本鎖rnaによる特異的阻害のための、方法および組成物 - Google Patents
非対称二本鎖rnaによる特異的阻害のための、方法および組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012531888A JP2012531888A JP2012503773A JP2012503773A JP2012531888A JP 2012531888 A JP2012531888 A JP 2012531888A JP 2012503773 A JP2012503773 A JP 2012503773A JP 2012503773 A JP2012503773 A JP 2012503773A JP 2012531888 A JP2012531888 A JP 2012531888A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- strand
- seq
- dsrna
- kras
- isolated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/342—Hemimers, i.e. of the type ====----
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/533—Physical structure partially self-complementary or closed having a mismatch or nick in at least one of the strands
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
- C12N2320/52—Methods for regulating/modulating their activity modulating the physical stability, e.g. GC-content
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
【選択図】1
Description
本出願は、2009年4月3日に出願された米国特許仮出願第61/166,559号、2009年4月3日に出願された米国特許仮出願第61/166,578号、2009年4月30日に出願された米国特許仮出願第61/174,279号、2009年4月30日に出願された米国特許仮出願第61/174,306号、2009年11月3日に出願された米国特許仮出願第61/257,810号、および2009年11月3日に出願された米国特許仮出願第61/257,820号の優先権、および米国特許法第119条(e)項の下での利益を主張するものである。また、本出願は、2010年2月11日に出願された米国出願第12/704,256号、2009年12月18日に出願された米国出願第12/642,371号、2009年12月18日に出願された米国出願第12/646,404号、2009年12月18日に出願された米国出願第12/642,264号、および2009年9月17日に出願された国際特許第PCT/US2009/005214号の優先権を主張するものである。本出願は、2009年6月3日に出願された米国特許仮出願第61/183,815号、2009年6月3日に出願された米国特許仮出願第61/183,818号、2009年6月5日に出願された米国特許仮出願第61/184,735号、2009年12月11日に出願された米国特許仮出願第61/285,925号、および2010年3月1日に出願された米国特許仮出願第61/309,266号の優先権、および米国特許法第119条(e)項の下での利益を主張するものである。上記の出願の全ての教示は、参照することにより本明細書に組み込まれる。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味を有する。以下の参考文献は、当業者に、本発明で使用される多くの用語の一般的定義を提供する:Singleton et al.,Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(2nd ed.1994);The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker ed.,1988)、The Glossary of Genetics,5th Ed.,R.Rieger et al.(eds.),Springer Verlag(1991)、およびHale & Marham,The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)。本明細書で使用される場合、以下の用語は、別途特定されない限り、以下のそれらに属するものとみなす意味を有する。
ある実施形態において、本発明の抗KRAS DsiRNA剤は、以下の構造を有し得る。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基であり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインである。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基であり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、「D」=DNAである。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替として、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。1つの関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に、2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4RNAモノマーから成るオーバーハングドメインであり、下線を引いた残基は、2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。別の関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、および「X」=2’−O−メチルRNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。さらに関連する実施形態において、DsiRNAは、
5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’を含み、
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「X」=2’−O−メチルRNA、および「D」=DNAである。上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である
式中、「X」=RNA、「p」=リン酸基、「M」=鎖がアニールされる場合、他の相補的な鎖の対応する「M」残基と塩基対(水素結合)しない核酸残基(RNA、DNA、または非天然もしくは修飾核酸)である。このような薬剤の残基のいずれかも、任意に2’−O−メチルRNAモノマーであり得、下の(第2の)鎖の3’末端残基から開始する2’−O−メチルRNAモノマーの交互位置はまた、上記の非対称な薬剤に示されるように、上記の「平滑/ほつれ」のDsiRNA剤に使用することもできる。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖は、センス鎖であり、上の鎖は、アンチセンス鎖である。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNXX−5’、
式中、「X」=RNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNDD−5’、
式中、「X」=RNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNZZ−5’、
式中、「X」=RNA、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNZZ−5’、
式中、「X」=RNA、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DNZZ−5’、
式中、「X」=RNA、「X」=2’−O−メチルRNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*[X1/D1]NDD−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*[X2/D2]NZZ−5’、
式中、「X」=RNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインであり、少なくとも1つのD1Nは、上の鎖中に存在し、下の鎖中の対応するD2Nを有する塩基対である。任意に、D1NおよびD1N+1は、対応するD2NおよびD2N+1を有する塩基対であり、D1N、D1N+1、およびD1N+2は、対応するD2N、D1N+1、およびD1N+2等を有する塩基対である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXDDXX−3’
3’−YXXXXXXXXXXXXXXXXXDDXXXX−5’、
式中、「X」=RNA、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNAから成るオーバーハングドメインである。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。上の構造は、その主な処理後形態として、ダイサーに最低21merの二重鎖を切断させるようにモデル化される。上の構造の下の鎖がアンチセンス鎖である実施形態において、アンチセンス鎖の5’端の最後および最後から2番目の残基での2つのデオキシリボヌクレオチド残基の位置決めは、オフターゲット効果を低減する可能性がある(先行の研究が、オフターゲット効果を低減するために、アンチセンス鎖の5’末端から少なくとも最後から2番目の位置の2’−O−メチル修飾を示している場合、例えば、米国特許第2007/0223427号を参照)。
5’−DNXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*Y−3’
3’−DNXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*−5’、
式中、「X」=RNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。
5’−DNXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DD−3’
3’−DNXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*XX−5’、
式中、「X」=RNA、任意に2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。
5’−DNXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DD−3’
3’−DN XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*ZZ−5’、
式中、「X」=RNA、任意に2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。「Z」=DNAもしくはRNAである。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−DNXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DD−3’
3’−DN XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*ZZ−5’、
式中、「X」=RNA、任意に2’−O−メチルRNAモノマーであり、「D」=DNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。「Z」=DNAもしくはRNAである。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−DNZZXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DD−3’
3’−DN XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*ZZ−5’、
式中、「X」=RNA、「X」=2’−O−メチルRNA、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−DNZZXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*Y−3’
3’−DN XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*−5’、
式中、「X」=RNA、「X」=2’−O−メチルRNA、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマーから成るオーバーハングドメインである。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−[X1/D1]NXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*DD−3’
3’−[X2/D2]NXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*ZZ−5’、
式中、「X」=RNA、「D」=DNA、「Z」=DNAもしくはRNA、ならびに「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10であり、少なくとも1つのD1Nは、上の鎖中に存在し、下の鎖中の対応するD2Nを有する塩基対である。任意に、D1NおよびD1N+1は、対応するD2NおよびD2N+1を有する塩基対であり、D1N、D1N+1、およびD1N+2は、対応するD2N、D1N+1、およびD1N+2等を有する塩基対である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−[X1/D1]NXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*Y−3’
3’−[X2/D2]NXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*−5’、
式中、「X」=RNA、「D」=DNAであり、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、および「N」=1〜50またはそれ以上であるが、任意に1〜8もしくは1〜10から成るオーバーハングドメインであり、少なくとも1つのD1Nは、上の鎖中に存在し、下の鎖中の対応するD2Nを有する塩基対である。任意に、D1NおよびD1N+1は、対応するD2NおよびD2N+1を有する塩基対であり、D1N、D1N+1、およびD1N+2は、対応するD2N、D1N+1、およびD1N+2等を有する塩基対である。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖であり、2’−O−メチルRNAモノマーが、上の図式で今示した下の鎖ではなく、上の鎖に沿って交互の残基に位置する。
5’−XXDDXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*Y−3’
3’−DDXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXN*−5’、
式中、「X」=RNA、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである0〜10個のRNAモノマーから成る任意のオーバーハングドメインである。ある実施形態において、「Y」は、任意に2’−O−メチルRNAモノマーである1〜4個のRNAモノマー、「D」=DNAから成るオーバーハングドメインである。「N*」=0〜15またはそれ以上であるが、任意に0、1、2、3、4、5、もしくは6である。一実施形態において、上の鎖は、センス鎖であり、下の鎖は、アンチセンス鎖である。代替的に、下の鎖が、センス鎖であり、上の鎖が、アンチセンス鎖である。上の構造は、その主な後処理形態として、ダイサーに最小限の21merの二重鎖を切断させるようにモデル化される。上の構造の下の鎖がアンチセンス鎖である実施形態において、アンチセンス鎖の5’端の最後および最後から2番目の残基での2つのデオキシリボヌクレオチド残基の位置決めは、オフターゲット効果を低減する可能性がある(先行の研究が、オフターゲット効果を低減するために、アンチセンス鎖の5’末端から少なくとも最後から2番目の位置の2’−O−メチル修飾を示している場合、例えば、米国特許第2007/0223427号を参照)。
標的RNA配列:5’−...XXAXXXXXXXXXXXXXXXX...−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXBXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXAXXXXXXXXXXXXXXX...−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXXBXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXAXXXXXXXXXXXXXX...−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXXXBXXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXAXXXXXXXXXXXXX . . .−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXXXXBXXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXXAXXXXXXXXXXXX...−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXXXXXBXXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXXXAXXXXXXXXXXX...−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXXXXXXBXXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXXXXAXXXXXXXXXX...−3’
DsiRNAmmセンス鎖:5’−pXXXXXXXXBXXXXXXXXXXXXXXDD−3’
DsiRNAmmアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXXXEXXXXXXXXXXXXXXXXp−5’
式中、「X」=RNA、「D」=DNA、「p」=リン酸基、「E」=鎖がアニールされる場合、他の相補的な(標的)鎖の対応する「A」RNA残基と塩基対(水素結合)しない核酸残基(RNA、DNA、または非天然もしくは修飾核酸)であり、さらに任意に、対応する「B」残基と塩基対する(「B」残基はまた、RNA、DNA、または非天然もしくは修飾核酸でもある)。このような薬剤の残基のいずれも、任意に、下の(第2の)鎖の3’末端残基から開始する2’−O−メチルRNAモノマーの2’−O−メチルRNAモノマーの交互位置であり得、上記のように、上記のDsiRNA剤に使用することもできる。
標的RNA配列:5’−...XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXHXXX...−3’
DsiRNAセンス鎖:5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXIXDD−3’
DsiRNAアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXJXXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXHXX...−3’
DsiRNAセンス鎖:5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXIDD−3’
DsiRNAアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXJXXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXHX...−3’
DsiRNAセンス鎖:5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXID−3’
DsiRNAアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXJXp−5’
標的RNA配列:5’−...XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXH...−3’
DsiRNAセンス鎖:5’−pXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXDI−3’
DsiRNAアンチセンス鎖:3’−XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXJp−5’、
式中、「X」=RNA、「D」=DNA、「p」=リン酸基、「I」および「J」=互いに塩基対(水素結合)しない核酸残基(RNA、DNA、または非天然もしくは修飾核酸)であり、さらに、任意に、「J」は、標的RNA配列ヌクレオチド「H」に相補的である。このような薬剤の残基のいずれも、任意に、下の(第2の)鎖の3’末端残基から開始する2’−O−メチルRNAモノマーの2’−O−メチルRNAモノマーの交互位置であり得、上記の、または上記のメチル化パターンのいずれかのように、上記のDsiRNA剤に使用することもできる。上記のミスマッチはまた、本発明のDsiRNA内で組み合わせることもできる。
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=(5’末端からの)センス鎖の22
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=センス鎖の23
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=センス鎖の24
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=センス鎖の25
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=アンチセンス鎖の1
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=アンチセンス鎖の2
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=アンチセンス鎖の3
KRAS−42025/27merのDsiRNA、ミスマッチ位置=アンチセンス鎖の4
5’−GUAUUUGCCAUAAAUAAUACUXXX[X]n−3’(配列番号6839)
3’−CACAUAAACGGUAUUUAUUAUXXXXX[X]n−S’(配列番号6840)
式中、n=1〜5、1〜10、1〜20、1〜30、1〜50、または1〜80もしくはそれ以上である。
KRAS−420標的:5’−GTGTATTTGCCATAAATAATAXXXXXX−3’(配列番号6841)
25〜35個のヌクレオチド、特に、25〜30個のヌクレオチドのより長いdsRNA種(DsiRNA)が、19〜23merのsiRNA剤と比較して、効力および作用の持続時間の観点から予想外に有効な結果を得ることが実験的に見出されている。dsRNAプロセシング機構の根本的な理論に束縛されることは望ましくないが、より長いdsRNA種は、細胞の細胞質中のダイサー酵素の基質としての役割を果たすと考えられる。本発明のdsRNAをより短いセグメントに切断することに加えて、ダイサーは、切断されたdsRNA由来の一本鎖切断産物の、標的遺伝子のKRAS(または、KRAS関連疾患または障害と関連する他の遺伝子)由来の細胞質RNA(例えば、KRAS RNA)の分解に関与するRISC複合体への取り込みを促進すると考えられる。従来技術の研究(Rossiらの米国特許出願第2007/0265220号)は、ダイサーによるdsRNA種(特に、DsiRNA剤)の切断能が、dsRNA種の効力および作用の持続時間の増加と対応することを示している。
二本鎖RNA(「dsRNA」)の効果を阻害する1つの主要な因子は、ヌクレアーゼによるdsRNA(例えば、siRNAおよびDsiRNA)の分解である。3’−エキソヌクレアーゼは、血清中に存在する主要なヌクレアーゼ活性であり、アンチセンスDNAオリゴヌクレオチドの3’末端の修飾は、分解を防ぐために重要である(Eder et al.,1991,Antisense Res Dev,1:141−151)。ERI−Iと呼ばれる、siRNAの調節および分解に関与する、3’から5’のエキソヌクレアーゼ活性を有するRNase−Tファミリーヌクレアーゼが、特定されている(Kennedy et al.,2004,Nature 427:645−649、Hong et al.,2005,Biochem J,390:675−679)。この遺伝子は、マウスのThex1(NM_02067)、あるいはヒトのTHEX1(NM_153332)としても公知であり、ヒストンmRNAの分解に関与する;siRNAの3’オーバーハングの分解も媒介するが、二重鎖RNAは分解しない(Yang et al.,2006,J Biol Chem,281:30447−30454)。したがって、本発明のDsiRNAを含む3’端の安定性が、安定性を改善するであろうと推測することが妥当である。
変換は、それにより、細胞成長および分化の正常な制御が、通常、細胞成長および分化を調節する遺伝子の発現に影響を与える変異の蓄積を通して、妨害される。
NIH 3T3細胞への腫瘍形成的に活性化されたRasのマイクロインジェクションは、DNA合成を誘発することが示されている。Rasの発癌性活性化を生じる変異は、分子の活性型のGTPに結合させるRasの累積をもたらす。これらの変異は、Rasを不活性型に変換するGAPの能力を遮断する。RasのGAPとの相互作用を損なう変異はまた、Rasの生物学的機能を遮断する。
野生型KRAS配列(配列番号1、K−Ras4A−転写物バリアントa、GenBank受入番号NM_033360.2):
MTEYKLVVVGAGGVGKSALTIQLIQNHFVDEYDPTIEDSYRKQVVIDGETCLLDILDTAGQEEYSAMRDQYMRTGEGFLCVFAINNTKSFEDIHHYREQIKRVKDSEDVPMVLVGNKCDLPSRTVDTKQAQDLARSYGIPFIETSAKTRQRVEDAFYTLVREIRQYRLKKISKEEKTPGCVKIKKCIIM
MTEYKLVVVGAGGVGKSALTIQLIQNHFVDEYDPTIEDSYRKQVVIDGETCLLDILDTAGQEEYSAMRDQYMRTGEGFLCVFAINNTKSFEDIHHYREQIKRVKDSEDVPMVLVGNKCDLPSRTVDTKQAQDLARSYGIPFIETSAKTRQGVDDAFYTLVREIRKHKEKMSKDGKKKKKKSKTKCVIM
無細胞系のRNAiを反復するインビトロアッセイを用いて、KRAS RNA配列を標的とするDsiRNAコンストラクトを評価し、ひいては、DsiRNAのKRASに特異的な遺伝子阻害活性(本明細書において、KRAS阻害活性とも称する)を評価することができる。このアッセイは、KRAS RNAを対象とするDsiRNA剤と共に使用するために適している、Tuschl et al.,1999,Genes and Development,13,3191−3197およびZamore et al.,2000,Cell,101,25−33によって記載される系を含む。シンシチウム胚盤葉に由来するDrosophila抽出物を用いて、インビトロでRNAi活性を再構築する。標的RNAは、適切なKRAS発現プラスミドからT7 RNAポリメラーゼを用いてインビトロ転写することにより、または化学合成によって作製する。センスおよびアンチセンスDsiRNA鎖(例えば、それぞれ、20uM)は、緩衝液(100mM 酢酸カリウム、30 mM HEPES−KOH、pH7.4、2mM 酢酸マグネシウム等)中で、90℃で1分間、次いで、37℃で1時間インキュベートすることによりアニーリングさせ、次いで、緩衝液(例えば、100mM 酢酸カリウム、30mM HEPES−KOH(pH7.4)、2mM 酢酸マグネシウム)で希釈する。アニーリングは、TBE緩衝液中でアガロースゲル上でゲル電気泳動し、臭化エチジウムで染色することによりモニターすることができる。Drosophila溶解物は、Oregon Rハエからの0〜2時間齢の胚を用いて調製し、酵母糖蜜寒天上に回収し、絨毛膜を除去し、溶解する。溶解物を遠心分離し、上清を単離する。アッセイは、50% 溶解物[vol/vol]、RNA(10〜50pM 最終濃度)、およびDsiRNA(10nM 最終濃度)を不空10%[vol/vol]溶解緩衝液を含有する反応混合物を含む。反応混合物はまた、10mM クレアチンリン酸、10ug/mL クレアチンホスホキナーゼ、100μMのGTP、100μMのUTP、100μMのCTP、500μMのATP、5mMのDTT、0.1U/uLのRNasin(Promega)、100μMのそれぞれのアミノ酸を含む。酢酸カリウムの最終濃度は、100mMに調節する。反応は、氷上で予め組立て、RNAを添加する前に、25℃で10分間インキュベートし、25℃でさらに60分間インキュベートする。4倍容量の1.25×Passive Lysis緩衝液(Promega)で、反応を停止させる。標的RNAの切断は、RT−PCR分析または当技術分野において公知の他の方法によりアッセイし、反応からDsiRNAが省略されている対照反応と比較する。
ある実施形態において、本発明は、KRAS関連の疾患もしくは障害を患っている、またはKRAS関連の疾患もしくは障害を発症する危険性がある対象を治療するための方法に関する。かかる実施形態において、DsiRNAは、KRAS関連疾患もしくは障害を制御するために新規の治療剤として機能し得る。該方法は、KRAS RNAの発現、レベル、および/または活性を減少させるように、本発明の薬学的組成物を、患者(例えば、ヒト)を投与することを含む。KRAS RNAによってコードされるポリペプチドの発現、レベル、および/または活性はまた、該DsiRNAが、KRAS転写物の非コード領域(例えば、標的5’UTRまたは3’UTR配列)を対象とする場合でさえも、本発明のDsiRNAによって減少され得る。それらの高特異性のために、本発明のDsiRNAは、任意に、多型対立遺伝子が、個人および/または集団内に存在する対立遺伝子特異的な様式で、細胞および組織のKRAS配列を特異的に標的とすることができる。
本発明のDsiRNA剤は、細胞中へ直接導入する(すなわち、細胞内);または空洞、間質腔へと、有機体の循環へと、細胞外的に導入する、口腔的に導入することができるか、または細胞または有機体を核酸を含有する溶液に浸すことにより導入することができる。血管系またはリンパ系、および能脊髄液等の、脈管または脈管外の循環は、核酸を導入することができる部位である。
ある実施形態において、本発明は、本発明のDsiRNA剤を含む薬学的組成物を提供する。DsiRNA剤試料を適切に配合し、十分な量の試料を細胞内に入れ、遺伝子サイレンシングをもし起こす場合には誘導することができる、いかなる手段によっても細胞の環境に導入することができる。dsRNAの多数の配合法が、当技術分野において公知であり、dsRNAが機能できるように標的細胞に進入させることができる限り、使用することができる。例えば、米国公開特許出願第2004/0203145 A1号および第2005/0054598 A1号を参照されたい。例えば、本発明のDsiRNA剤は、リン酸緩衝生理食塩水等の緩衝液、リポソーム、ミセル構造、および、カプシド中に配合することができる。カチオン性脂質を用いるDsiRNA剤の配合は、DsiRNA剤の細胞へのトランスフェクションを促進するために使用されることができる。例えば、リポフェクチン(米国特許第5,705,188号)、カチオン性グリセロール誘導体等のカチオン性脂質、および、ポリリジン(本公開PCT国際出願題WO97/30731号)等のポリカチオン性分子を使用することができる。好適な脂質には、Oligofectamine、Lipofectamine(Life Technologies)、NC388(Ribozyme Pharmaceuticals,Inc.,Boulder,Colo.)、またはFuGene 6(Roche)が含まれ、これらの全ては、製造業者の指示に従って使用することができる。
本発明は、KRAS(例えば、KRAS転写物および/もしくはKRasタンパク質レベルの誤調節および/もしくは上昇)によって、全体または一部において、引き起こされる疾患または障害の危険性がある(またはそれに対する感受性がある)対象を治療する、またはKRASの選択的標的化によって治療可能な、予防的および治療的方法の両方を提供する。
細胞培養
Kita et al.,1999,Int.J.Cancer,80,553−558は、変異したKRAS遺伝子に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドによってヒト膵臓癌細胞株の成長阻害を記載している。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リポソームを用いて形質変換細胞にトランスフェクトされた。細胞増殖、KRAS mRNA発現、およびKRasタンパク質合成は全て、エンドポイントとして評価された。Sato et al.,2000,Cancer Lett.,155,153−161は、高血管形成活性および転移能を特徴とする別のヒト膵臓癌細胞株、HOR−P1を記載している。この細胞株の遺伝および分子解析は共に、テロメラーゼ活性の増加およびKRAS癌遺伝子の変異を示した。
総RNAを、例えば、大規模な抽出用にAmbion Rnaqueous 4−PCR精製キット、または96ウェルアッセイ用Ambion Rnaqueous−96精製キットを用いて、DsiRNAの送達後、細胞から調製する。Taqman分析については、例えば、5’端で共有結合したレポータ色素FAMまたはVIC、および3’端に共役したクエンチャー色素TAMARAを用いて、二重標識したプローブを合成する。1段階RT−PCR増幅は、例えば、10uL 総RNA、100nM 順方向プライマー、100mM 逆方向プライマー、100nM プローブ、1×TaqMan PCR反応緩衝液(PE−Applied Biosystems)、5.5mM MgCl2、100uM 各dATP、dCTP、dGTP、およびdTTP、0.2U RNaseInhibitor(Promega)、0.025U AmpliTaq Gold(PE−Applied Biosystems)、ならびに0.2U M−MLV Reverse Transcriptase(Promega)から成る50uLの反応物を用いて、ABI PRISM 7700 Sequence検出器上で実施される。サーマルサイクリング条件は、48℃で30分間、95℃で10分間、続いて、95℃で15秒間、60℃で1分間の40サイクルから成り得る。標的KRAS mRNAレベルの定量は、段階希釈された全細胞RNA(300、100、30、10ng/反応)から作製した標準と比較して判定され、例えば、並行あるいは同じ管のTaqMan反応のいずれかで、36B4 mRNAに対して正規化される。
核抽出物は、標準マイクロ調製技術(例えば、Andrews and Faller,1991,Nucleic Acids Research,19,2499)を用いて調製することができる。上清からのタンパク質抽出物を、例えば、TCA沈殿を用いて調製する。等体積の20%TCAを細胞上清に添加し、氷上で1時間インキュベートし、5分間遠心分離してペレット化する。ペレットをアセトン中で洗浄し、乾燥させ、水に再懸濁させる。細胞タンパク質抽出物は、10% Bis−Tris NuPage(核抽出物)または4〜12% Tris−グリシン(上清抽出物)ポリアクリルアミドゲル上で泳動させ、ニトロセルロース膜に移す。非特異的結合は、例えば、5%脱脂乳と一緒に1時間、続いて、一次抗体と一緒に4℃で16時間インキュベートすることによって、遮断することができる。洗浄後、二次抗体を例えば、(1:10,000希釈)室温で1時間適用し、SuperSignal試薬(Pierce)を用いてシグナルを検出する。
動物モデルにおいて、抗KRAS DsiRNA剤の有効性を評価することは、ヒト臨床試験に対する重要な必要条件である。当技術分野において公知の、癌、および/または増殖性疾患、状態、もしくは障害の様々な動物モデルは、治療上の使用のためにKRAS遺伝子発現を調節する際に、本発明のDsiRNA組成物の有効性を予め臨床的な評価するための使用に適し得る。
本発明は、以下の実施例を参照することにより記載され、これは、例示のために提供され、本発明のいかなる様式においても限定することを意図しない。当技術分野において公知の標準的な技術、または以下に具体的に記載される技術を使用した。
好ましい抗KRAS DsiRNA剤は、DsiRNAの予めスクリーニングされた集団から選択された。DsiRNAの設計は、任意に、配列の領域にわたる多くの可能なDsiRNAの予測される活性/有効性のコンピュータ内での評価を行う予測的スコアリングアルゴリズムの使用を含むことができる。
オリゴヌクレオチド合成および精製
DsiRNA分子は、RNAメッセージ中の種々の部位、例えば、本明細書に記載されるRNA配列内の標的配列と相互作用するよう設計することができる。今例示した薬剤において、2つの標的KRAS配列が選択された。DsiRNA分子の一方の鎖の配列は、上述した標的KRAS部位配列に相補的であった。DsiRNA分子は、本明細書に記載される方法を用いて化学的に合成された。概して、DsiRNAコンストラクトは、19〜23merのsiRNAについて記載されるように、固相オリゴヌクレオチド合成方法を用いて合成された(例えば、Usmanらの米国特許第5,804,683号、第5,831,071号、第5,998,203号、第6,117,657号、第6,353,098号、第6,362,323号、第6,437,117号、第6,469,158号、Scaringeらの米国特許第6,111,086号、第6,008,400号、第6,111,086号を参照)。
一本鎖RNA(ssRNA)オリゴマーを、例えば、100mM 酢酸カリウム、30mM HEPES、pH7.5から成る二重鎖緩衝液中、100μMの濃度で再懸濁した。相補的なセンスおよびアンチセンス鎖を、等モル量で混合し、例えば、50μM 二重鎖の最終溶液を得た。試料を、RNA緩衝液(IDT)中で、100℃で5分間加熱し、使用前に室温まで冷却させた。二本鎖RNA(dsRNA)オリゴマーを−20℃で保存した。一本鎖RNAオリゴマーを凍結乾燥して保存するか、またはヌクレアーゼを含まない水中、−80℃で保存した。
一貫性のため、以下の命名法を、本明細書において使用する。二重鎖に与えられる名前は、オリゴマーの長さおよびオーバーハングの存在または不在を示す。「25/27」は、2塩基の3’オーバーハングを持つ、25塩基センス鎖および27塩基アンチセンス鎖を有する非対称二重鎖である。「27/25」は、27塩基センス鎖および25塩基アンチセンス鎖を有する非対称二重鎖である。
HeLa細胞をATCCから得、10% ウシ胎児血清(HyClone)を含むダルベッコ改変イーグル培地(HyClone)中に、37℃、5% CO2下で、維持した。RNAトランスフェクションのために、HeLa細胞を、Lipofectamine(商標)RNAiMAX(Invitrogen)を用い、製造業者の指示に従って、1nMまたは0.1nMの最終濃度で示されるように、DsiRNAとトランスフェクトした。簡潔には、2.5μLの0.2μMまたは0.02μMのそれぞれのDsiRNAのストック溶液を、46.5μLのOpti−MEM I(Invitrogen)および1μLのLipofectamine(商標)RNAiMAXと混合した。結果として生じる50μLの混合物を、12ウェルプレートの個々のウェルに加え、室温で20分間インキュベートし、DsiRNA:Lipofectamine(商標)RNAiMAXの複合体を形成させた。一方で、HeLa細胞をトリプシン化し、367細胞/μLの最終濃度で、培地中に再懸濁した。最後に、450μLの細胞懸濁液を、それぞれのウェル(最終容積500μL)に加え、プレートを、24時間インキュベーターに静置した。
KRAS標的遺伝子ノックダウンを、Lipofectamine(商標)RNAiMAXのみ(ビヒクル対照)または未処理のものを含む、HPRT発現対照の処理に対して値を正規化して、qRT−PCRによって判定した。
細胞を、2mLのPBSで1回洗浄し、総RNAを、RNeasy Mini Kit(商標)(Qiagen)を用いて抽出し、30μLの最終容積で溶出した。1μgの総RNAを、製造業者の指示に従って、Transcriptor 1st Strand cDNA Kit(商標)(Roche)およびランダム六量体を用いて逆転写した。結果として生じるcDNAのうちの1/30(0.66μL)を、3.33μLのH2Oおよび1μLの3μM ヒト遺伝子HPRT−1(受入番号NM_000194)およびKRAS標的配列に対して特異的なプライマーおよびプローブを含む混合物と共に、5μLのIQ Multiplex Powermix(Bio−Rad)と混合した。
C1000 Thermalサイクラー(Bio−Rad)を搭載する、CFX96 Real−time Systemを、増幅反応のために使用した。PCR条件は、95℃で3分間、次いで、95℃で10秒間でのサイクリング、55℃で1分間の40サイクルのあった。それぞれの試料は三重で試験された。相対的なHPRT mRNAレベルは、KRAS mRNAレベルに対して正規化され、トランスフェクション試薬のみで処理された対照試料、または未処理されたもので得たmRNAレベルと比較した。データは、Bio−Rad CFX Managerバージョン1.0ソフトウェアを用いて分析した。
上述のように、KRASを標的とするDsiRNA分子を設計し、合成し、阻害有効性についてHeLa細胞を試験した。KRAS発現を阻害するために、端構造の変化を有するが、一般に、同じKRAS cDNA標的配列(5’−AGCAGGTCAAGAGGAGTACAGTGCAAT−3’(配列番号147))を対象とするDsiRNA剤の能力は、対応するKRAS標的配列を対象とする21merのsiRNAと比較して評価された(試験した抗KRAS剤の構造については、図1を参照)。このような実験を行うために、トランスフェクション時に、細胞が70〜90%コンフルエントとなるように、HeLa細胞を、5,000〜7,500細胞/ウェル、100μL/ウェルで、96ウェルプレート中にトランスフェクションする約24時間前に播種した。トランスフェクションのために、アニーリングしたDsiRNAを、50μL/ウェルの容積のトランスフェクション試薬(Lipofectamine(商標)RNAiMAX,Invitrogen)と混合し、室温で20分間インキュベートした。DsiRNAのトランスフェクション混合物を細胞に添加し、150μLの容積の、1nM(図2)または100pM(図3)の最終DsiRNA濃度を得た。それぞれのDsiRNAトランスフェクション混合物を、3重のDsiRNA処理のために3つのウェルに添加した。細胞を、DsiRNAトランスフェクション混合物の連続的存在下で、37℃で、24時間インキュベートした。24時間において、処理した細胞のそれぞれのウェルからRNAを調製した。まず、トランスフェクション混合物を有する上清を、除去して廃棄し、次いで、細胞を溶解し、それぞれのウェルからRNAを調製した。処理後の標的KRAS RNAレベルを、ビヒクル処理した対照のために得られたものに対して値を正規化して、KRAS標的遺伝子に対してqRT−PCRによって評価した。3重のデータを平均化し、それぞれの処理についての標準偏差を判定した。正規化データをグラフに表し、siRNAおよびビヒクルまたは未処理の対照と比較して、活性なDsiRNAによる標的mRNAの減少倍率を判定した。
上述のように、KRASを標的とするDsiRNA分子を設計し、合成し、実施例3の記載されるように、阻害有効性についてHeLa細胞を試験した。KRAS発現を阻害するために、端構造の変化を有するが、一般に、同じKRAS cDNA標的配列(5’−TATTAGCATTTGTTTTAGCATTACCTA−3’(配列番号179))を対象とするDsiRNA剤の能力は、対応するKRAS標的配列を対象とする21merのsiRNAと比較して評価された(試験した抗KRAS剤の構造については、図4を参照)。図5に示されるように、試験した25/27merのDsiRNA剤(DP1136P/DP1139G)は、1nM 濃度で、試験された図4の全ての他の薬剤と同じKRAS標的配列を対象とし、標的KRAS転写配列内で同じ推定されるAgo2切断部位を共有する、最適化された21merのsiRNA(DP1146P/DP1147G siRNA)よりも、有意にKRAS阻害有効性を高めることを示した(かかるAgo2切断部位のアラインメントは、RISC活性のレベルを変化させるのに起因し得る変動に対して正規化される)。とりわけ、試験した25/27merのDsiRNAのダイサー酵素切断は、試験した「最適化された」21merと全く同じ「最適化された」21merのsiRNAを生成することが推定され、得られた結果は、DsiRNA剤が、対応するsiRNA剤を超える特別な有効性/効力の利点を有することを強調している。同様に、1nM 濃度での劇的な結果が、同様に、KRAS−940配列を対象とする平滑/平滑および平滑/ほつれの端構造を有する21merのsiRNAと比較して、KRAS−940配列を対象とする27merの平滑/平滑と27merの平滑/ほつれのDsiRNA剤の両方で観察された。故に、再現性良く試験された25/27merおよび27merのDsiRNAは、同時に試験した対応する21mer薬剤と比較して、標的KRAS転写物に対して強化された阻害有効性を呈した。実際には、1nM 濃度で試験した全ての25/27merおよび27merのDsiRNAは、予想外に、同じ濃度で試験した全ての21merのsiRNAよりも優れていた。
アンチセンス鎖配列番号11〜50を有し、KRAS野生型配列を標的とする表3に示される40個のDsiRNA分子(代替/多型配列を標的とする表3のDsiRNAは、試験されなかった)を、上述のように設計し、合成し、上の実施例3に記載されるように、阻害有効性についてHeLa細胞において試験した。KRAS発現を阻害するこれらのDsiRNA剤の能力は、対応するKRAS標的配列を対象とする21merのsiRNAと比較して評価した(試験した対応する抗KRAS21mer剤のアンチセンス鎖については、表2を参照し、実験の略図については、図7を参照)。全てのDsiRNA剤は、KRAS阻害剤として有効性を示し、40個の試験したDsiRNA剤のうちの35個が、KRAS標的の50%減少を超えることを示した。図8に示されるように、試験した5個のうち4個のDsiRNA同族siRNA対については、DsiRNA剤が、同族siRNA剤よりもKRAS標的のレベルの減少において有意に優れた有効性を呈した。このような阻害有効性の持続はまた、1nMおよび5nMの濃度で試験して、投与してから24時間および48時間後の両方で検査された。40個のDsiRNA同族siRNA対のうちの26個については、DsiRNA剤は、試験した全ての濃度および期間で、対応する同族siRNA剤よりも統計的に有意なKRAS標的阻害の強化レベルを示した(図9)。この結果は、同族siRNA剤が、DsiRNA剤よりも優れており、40例のうちわずか6例と好対照であった(図9)。故に、統計的に有意な差異が、KRAS標的RNAにわたって、DsiRNAと、一致した同族siRNA(整列した推定されるAgo2切断部位を有する)の間で観察された。このDsiRNAは、大差で、同族siRNAよりも劇的かつ予想外に優れていた。重要なことに、これらの結果は、DsiRNA活性がsiRNA活性と直接相関せず、その逆もなかったことを示した。したがって、上の結果は、DsiRNAおよびsiRNAが、RNA干渉機構に異なって関与し、DsiRNAおよびsiRNAがともに二本鎖RNAを含むにもかかわらず、異なる薬物であることを示した。
本実施例において、243個の非対称DsiRNA(ここで、上記のように、試験したDsiRNAは、25/27mer構造を有した)を構成し、1nMの濃度で、このようなDsiRNAの存在下でインキュベートしたヒトHeLaおよびマウスHepa 1−6細胞におけるKRAS阻害有効性について試験した。試験した243個の非対称DsiRNAは、上の表2〜5から選択されるDsiRNAのサブセットを含み、ヒトKRAS、マウスKRAS、または両方の特異的な配列を標的とするように設計される非対称DsiRNAの追加のセットも含んだ。これらの追加の243個の非対称DsiRNAの配列および構造を表8に示す。
示されるように、センスおよびアンチセンス鎖配列を有し、KRAS野生型配列(および、適用可能な場合、バリアント配列)を標的とする、表4〜5に示される、残りのDsiRNA分子は、上述のように設計および合成され、上記の実施例3および6に記載されるように、阻害有効性に対してHeLa細胞において(および、任意に、マウスHepa1−6細胞において)試験される。これらのDsiRNA剤のKRAS発現を阻害する能力は、任意に、対応するKRAS標的配列を対象とする21merのsiRNAと比較して評価される(表2のsiRNA配列を密集させるために使用される方法と同一の21merのsiRNAの特定方法は、表4〜6のDsiRNAに適用することができる)。表4〜6の残りの選択されたDsiRNA剤は、KRAS阻害剤としての有効性を示すことが期待され、有意な数の試験したDsiRNA剤は、1nMおよび100pMでKRAS標的の50%を超える減少を呈することが予想された。表2〜3のDsiRNA剤で見られるように、DsiRNAの相当の大部分は、同族siRNA剤に対するKRAS標的レベルを減少する有効性の測定によって決定して、同族siRNA対よりも優れていることが期待される。かかる阻害有効性の持続時間はまた、試験した0.1nM、1nM、および5nMの濃度で、投与してから24時間後、および48時間後に検査される。上述のように、有意なDsiRNAの大部分は、効力および効果の持続時間の測定によって判定されるように、そのsiRNA対よりも優れていることが期待される。
KRAS研究における本知識体系は、研究的、診断的、および治療的使用のために、KRAS活性をアッセイするための方法、およびKRAS発現を調節することができる化合物に対する必要性を示す。本明細書に説明されるように、本発明の核酸分子をアッセイに用いて、KRASレベルに関連する疾患状態を診断することができる。加えて、核酸分子を用いて、KRASの誤調節、およびレベル等に関連する疾患状態を治療することができる。
DsiRNA剤の血清安定性は、37℃で、種々の期間(最大24時間)の間、50%のウシ胎仔血清中のDsiRNA剤の培養を介して評価される。血清は、抽出され、核酸は、20%の非変性PAGE上で分離され、Gelstar染色で可視化される。ヌクレアーゼ分解からの相対的保護レベルは、DsiRNAに対して評価される(任意に、調節を有する、または有さない)。
種々のエンドポイントは、抗Ras剤による治療後のRas媒介効果を確認するために、細胞培養モデルにおいて使用されている。表現型エンドポイントは、細胞増殖の阻害、RNA発現、およびRasタンパク質発現の減少を含む。KRAS癌遺伝子変異が、ある腫瘍細胞の増殖の増加と直接関連するため、細胞培養アッセイの増殖エンドポイントは、好ましくは、一次スクリーンとして用いられる。このエンドポイントを測定することができる種々の方法が存在する。DsiRNAによる細胞の処理後、細胞は、細胞生存、細胞DNAへの[3H]チミジンの組み込み、および/または細胞密度を測定した後に、成長させられる(典型的には、5日間)。細胞密度のアッセイは、市販の蛍光核酸染色(Syto(登録商標)またはCyQuant(登録商標)等)を使用して、96ウェルフォーマットで行うことができる。二次確証的エンドポイントとして、DsiRNAの媒介による、KRasタンパク質発現の減少は、KRas特異的ELISAを用いて評価することができる。
インビトロアッセイから選択した抗KRAS DsiRNAはさらに、例えば、異種移植片を含むマウスモデル、および上記に列挙する他の動物モデルにおいて試験することができる。一例において、誤調節された(例えば、上昇した)KRASレベルを有するマウスは、流体力学的尾静脈注射を介して本発明のDsiRNA剤が投与される。群当たり3〜4匹のマウス(試験した特異的DsiRNA剤に基づき分割)は、50μgまたは200μgのDsiRNAが注入される。KRAS RNAのレベルは、RT−qPCRを用いて評価される。さらに、または代替的に、KRasのレベル(例えば、KRasタンパク質レベルおよび/または癌細胞/腫瘍形成、成長または広がり)は、当技術分野において認識される方法を用いて評価することができるか、またはKRASの誤調節と関連する表現型(例えば、腫瘍形成、成長、転移等)は、(任意に、KRAS転写またはKRasタンパク質レベルの測定のための代用として)モニターされる。かかる動物モデルにおける活性DsiRNAはまた、その後、標準的化学療法と組み合わせて試験することもできる。
本発明のDsiRNA分子は、種々の用途において、例えば、臨床的な、産業、環境、農業、および/または研究設定での、分子標的(例えば、RNA)の特定等の種々の診断的用途におけて使用することができる。DsiRNA分子のかかる診断的使用は、再構成されたRNAi系を使用すること、例えば、細胞溶解物、または部分的に精製された細胞溶解物を用いることを伴う。本発明のDsiRNA分子は、罹患した細胞内の遺伝子浮動および変異を検査するための診断ツールとして用いることができる。DsiRNA活性と標的KRAS RNAの構造との間の緊密な関係は、標的KRAS RNAの塩基対および三次元構造を変化させるKRAS分子の領域内の変異の検出を可能にする。本発明に記載の複数のDsiRNA分子を用いることにより、インビトロ、ならびに細胞および組織内のRNA構造および機能にとって重要である、ヌクレオチド変化をマッピングすることができる。DsiRNA分子を有する標的KRAS RNAの切断を用いて、遺伝子発現を阻害し、KRAS関連疾患または障害の進行における特定の遺伝子産物の役割を定義することができる。このようにして、他の遺伝子標的を疾患の重要な媒介物質として定義することができる。これらの実験は、組み合わせ療法(例えば、異なる遺伝子を標的とした複数のDsiRNA分子、公知の小分子阻害剤に連結したDsiRNA分子、またはDsiRNA分子および/または他の化学的もしくは生物学的分子の組み合わせを用いる断続的治療)の可能性を与えることにより、疾患進行のより優れた治療につながる。本発明のDsiRNA分子の他のインビトロでの使用は、当技術分野において周知であり、疾患または関連状態と関連するRNAの存在の検出を含む。かかるRNAは、標準的な方法論、例えば、蛍光共鳴発光移動(FRET)を用いて、DsiRNAでの処理後の切断産物の存在を判定することにより検出される。
Claims (102)
- 第1および第2の核酸鎖ならびに少なくとも25個の塩基対の二重鎖領域を含む単離された二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAの前記第2の鎖は、その3’末端に1〜5個の一本鎖ヌクレオチドを含み、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖は、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖長の少なくとも19個のヌクレオチドかつ多くとも35個のヌクレオチドに沿って、配列番号141〜186から成る群から選択される標的KRAS cDNA配列と十分に相補的であり、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞に導入される場合、KRAS標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の3’末端の最初のヌクレオチド(1位)から始めて、1、2、および/または3位が、修飾ヌクレオチドで置換される、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖の前記3’末端および前記第2の鎖の前記5’末端は、平滑末端を形成する、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖は、25ヌクレオチド長であり、かつ前記第2の鎖は、27ヌクレオチド長である、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第2の鎖は、配列番号11〜50および135〜140から成る群から選択される配列を含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖は、配列番号5、8、および91〜134から成る群から選択される配列を含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 配列番号5/配列番号14、配列番号8/配列番号43、配列番号132/配列番号138、配列番号91/配列番号11、配列番号129/配列番号135、配列番号92/配列番号12、配列番号130/配列番号136、配列番号93/配列番号13、配列番号131/配列番号137、配列番号94/配列番号15、配列番号133/配列番号139、配列番号95/配列番号16、配列番号96/配列番号17、配列番号97/配列番号18、配列番号98/配列番号19、配列番号99/配列番号20、配列番号100/配列番号21、配列番号101/配列番号22、配列番号102/配列番号23、配列番号103/配列番号24、配列番号104/配列番号25、配列番号105/配列番号26、配列番号106/配列番号27、配列番号107/配列番号28、配列番号108/配列番号29、配列番号109/配列番号30、配列番号110/配列番号31、配列番号111/配列番号32、配列番号112/配列番号33、配列番号113/配列番号34、配列番号114/配列番号35、配列番号115/配列番号36、配列番号116/配列番号37、配列番号117/配列番号38、配列番号118/配列番号39、配列番号119/配列番号40、配列番号134/配列番号140、配列番号120/配列番号41、配列番号121/配列番号42、配列番号122/配列番号44、配列番号123/配列番号45、配列番号124/配列番号46、配列番号125/配列番号47、配列番号126/配列番号48、配列番号127/配列番号49、および配列番号128/配列番号50から成る群から選択される1対の第1の鎖/第2の鎖の配列を含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖および前記第2の鎖のそれぞれは、少なくとも26ヌクレオチドの長さを有する、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖の前記3’末端の前記修飾ヌクレオチド残基は、デオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド、および蛍光分子から成る群から選択される、請求項2に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の前記3’末端の1位は、デオキシリボヌクレオチドである、請求項2に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングの前記ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドを含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドは、2’−O−メチルリボヌクレオチドである、請求項11に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングの全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖および第2のオリゴヌクレオチド鎖のうちの一方または両方が、5’リン酸塩を含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記修飾ヌクレオチド残基は、2’−O−メチル、2’−メトキシエトキシ、2’−フルオロ、2’−アリル、2’−O−[2−(メチルアミノ)−2−オキソエチル]、4’−チオ、4’−CH2−O−2’−架橋、4’−(CH2)2−O−2’−架橋、2’−LNA、2−アミノ、および2’−O−(N−メチルカルバメート)から成る群から選択される、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングは、1〜3ヌクレオチド長である、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングは、1〜2ヌクレオチド長である、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングは、2ヌクレオチド長であり、前記3’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドは、2’−O−メチル修飾リボヌクレオチドである、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第2のオリゴヌクレオチド鎖は、前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の前記5’末端ヌクレオチド残基と相補的な前記第2の鎖の前記ヌクレオチド残基から始めて、交互の修飾および非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第2のオリゴヌクレオチド鎖は、前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の5’末端ヌクレオチド残基と相補的な前記第2の鎖のヌクレオチド残基から始めて、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖の18位から5’末端までの全ての位置において、非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖および前記第2の鎖のそれぞれは、少なくとも26かつ多くとも30ヌクレオチド長を有する、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記dsRNAは、前記細胞においてダイサーによって内因的に切断される、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記標的遺伝子の発現を減少させるのに十分である前記単離された二本鎖核酸の量は、前記細胞の環境において、1ナノモル以下、200ピコモル以下、100ピコモル以下、50ピコモル以下、20ピコモル以下、10ピコモル以下、5ピコモル以下、2ピコモル以下、および1ピコモル以下から成る群から選択される、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離されたdsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS遺伝子発現の減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離されたdsRNAは、前記細胞の環境において、200ピコモル以下、100ピコモル以下、50ピコモル以下、20ピコモル以下、10ピコモル以下、5ピコモル以下、2ピコモル以下、および1ピコモル以下から成る群から選択される細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS遺伝子発現の減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離されたdsRNAは、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞に導入される場合、少なくとも10%、少なくとも50%、少なくとも80〜90%、少なくとも95%、少なくとも98%、および少なくとも99%から成る群から選択される(%によって表現される)量、KRAS標的遺伝子発現を減少させるように、前記標的KRAS cDNA配列と十分に相補的である、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖および第2の鎖は、化学的リンカーによって結合される、請求項1に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖の前記3’末端および前記第2の鎖の前記5’末端は、化学的リンカーによって結合される、請求項1に記載の単離された二本鎖核酸。
- 前記第2の鎖または第1の鎖のヌクレオチドは、ダイサー切断の配向を導く修飾ヌクレオチドで置換される、請求項1に記載の単離された二本鎖核酸。
- デオキシリボヌクレオチド、ジデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド、3’−デオキシアデノシン(コルジセピン)、3’−アジド−3’−デオキシミジン(AZT)、2’,3’−ジデオキシイノシン(ddI)、2’,3’−ジデオキシ−3’−チアシチジン(3TC)、2’,3’−ジデヒドロ−2’,3’−ジデオキシミジン(d4T)、3’−アジド−3’−デオキシミジン(AZT)および2’,3’−ジデオキシ−3’−チアシチジン(3TC)の一リン酸ヌクレオチド、2’,3’−ジデヒドロ−2’,3’−ジデオキシミジン(d4T)の一リン酸ヌクレオチド、4−チオウラシル、5−ブロモウラシル、5−ヨードウラシル、5−(3−アミノアリル)−ウラシル、2’−O−アルキルリボヌクレオチド、2’−O−メチルリボヌクレオチド、2’−アミノリボヌクレオチド、2’−フルオロリボヌクレオチド、ならびにロックされた核酸から成る群から選択される修飾ヌクレオチドを含む、請求項1に記載の単離された二本鎖核酸。
- ホスホネート、ホスホロチオアート、およびホスホトリエステルから成る群から選択されるリン酸骨格修飾を含む、請求項1に記載の単離された二本鎖核酸。
- 哺乳動物細胞において、標的KRAS遺伝子の発現を減少させるための方法であって、哺乳動物細胞を、前記細胞内の標的KRAS遺伝子の発現を減少させるのに十分な量の請求項1に記載の単離されたdsRNAと、インビトロで接触させることを含む、方法。
- 標的KRAS遺伝子発現は、少なくとも10%、少なくとも50%、および少なくとも80〜90%から成る群から選択される(%によって表現される)量減少する、請求項32に記載の方法。
- KRAS mRNAレベルは、前記細胞を前記dsRNAと接触させてから少なくとも8日後、少なくとも90%(%によって表現される)の量減少する、請求項32に記載の方法。
- KRAS mRNAレベルは、前記細胞を前記dsRNAと接触させてから少なくとも10日後、少なくとも70%(%によって表現される)の量減少する、請求項32に記載の方法。
- 哺乳動物において、標的KRAS遺伝子の発現を減少させるための方法であって、前記哺乳動物内の標的KRAS遺伝子の発現を減少させるのに十分な量で、請求項1に記載の単離されたdsRNAを哺乳動物に投与することを含む、方法。
- 前記単離されたdsRNAは、1日当たり前記哺乳動物のキログラム当たり1マイクログラム〜5ミリグラム、キログラム当たり100マイクログラム〜0.5ミリグラム、キログラム当たり0.001〜0.25ミリグラム、キログラム当たり0.01〜20マイクログラム、キログラム当たり0.01〜10マイクログラム、キログラム当たり0.10〜5マイクログラム、およびキログラム当たり0.1〜2.5マイクログラム、から成る群から選択される用量で投与される、請求項36に記載の方法。
- 前記単離されたdsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS遺伝子発現の減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項36に記載の方法。
- 前記投与ステップは、静脈注射、筋肉注射、腹腔内注射、点滴、皮下注射、経皮、エアロゾル、直腸、膣内、局所、経口、および吸入送達から成る群から選択される様式を含む、請求項36に記載の方法。
- 細胞の増殖を選択的に阻害するための方法であって、前記細胞の増殖を阻害するのに十分な量の請求項1に記載の単離されたdsRNAと、細胞を接触させることを含む、方法。
- 前記細胞は、対象の腫瘍細胞である、請求項40に記載の方法。
- 前記細胞は、インビトロの腫瘍細胞である、請求項40に記載の方法。
- 前記細胞は、ヒト細胞である、請求項40に記載の方法。
- 前記dsRNAは、前記dsRNAが哺乳動物細胞にインビトロで導入される場合、少なくとも10%、少なくとも50%、および少なくとも80〜90%から成る群から選択される(%によって表現される)量、標的KRAS RNAレベルを減少させるのに有効な量で存在し、前記dsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS RNAレベルの減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項1に記載の単離されたdsRNAを含む製剤。
- 前記有効量は、前記細胞の環境において、1ナノモル以下、200ピコモル以下、100ピコモル以下、50ピコモル以下、20ピコモル以下、10ピコモル以下、5ピコモル以下、2ピコモル以下、および1ピコモル以下から成る群から選択される、請求項44に記載の製剤。
- 前記dsRNAは、前記dsRNAが哺乳動物対象の細胞に導入される場合、少なくとも10%、少なくとも50%、および少なくとも80〜90%から成る群から選択される(%によって表現される)量、標的RNAレベルを減少させるのに有効な量で存在し、前記dsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS RNAレベルの減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項1に記載の単離されたdsRNAを含む製剤。
- 前記有効量は、1日当たり前記対象のキログラム当たり1マイクログラム〜5ミリグラム、キログラム当たり100マイクログラム〜0.5ミリグラム、キログラム当たり0.001〜0.25ミリグラム、キログラム当たり0.01〜20マイクログラム、キログラム当たり0.01〜10マイクログラム、キログラム当たり0.10〜5マイクログラム、およびキログラム当たり0.1〜2.5マイクログラム、から成る群から選択される用量である、請求項46に記載の製剤。
- 請求項1に記載の単離されたdsRNAを含む、哺乳動物細胞。
- 請求項1に記載の単離されたdsRNAおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
- 請求項1に記載の単離されたdsRNAおよびその使用のための取扱説明書を含む、キット。
- 第1のおよび第2の核酸鎖ならびに少なくとも25個の塩基対の二重鎖領域を含む単離された二本鎖リボ核酸(dsRNA)から本質的に成るKRAS阻害活性を有する組成物であって、前記dsRNAの前記第2の鎖は、その3’末端に1〜5個の一本鎖ヌクレオチドを含み、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖は、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖長の少なくとも19個のヌクレオチドかつ多くとも35個のヌクレオチドに沿って、配列番号141〜186から成る群から選択される標的KRAS cDNA配列と十分に相補的であり、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞に導入される場合、KRAS標的遺伝子発現を減少させる、組成物。
- 第1のおよび第2の核酸鎖ならびに少なくとも25個の塩基対の二重鎖領域を含む単離された二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、前記dsRNAの前記第2の鎖は、その3’末端に1〜5個の一本鎖ヌクレオチドを含み、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖は、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖長の少なくとも19個のヌクレオチドかつ多くとも35個のヌクレオチドに沿って、配列番号1595〜2297および3704〜4406から成る群から選択される標的KRAS cDNA配列と十分に相補的であり、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞に導入される場合、KRAS標的遺伝子発現を減少させる、単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の3’末端の最初のヌクレオチド(1位)から始めて、1、2、および/または3位が、修飾ヌクレオチドで置換される、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖の前記3’末端および前記第2の鎖の前記5’末端は、平滑末端を形成する、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖は、25ヌクレオチド長であり、かつ前記第2の鎖は、27ヌクレオチド長である、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第2の鎖は、配列番号189〜891および2298〜3000から成る群から選択される配列を含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖は、配列番号892〜1594および3001〜3703から成る群から選択される配列を含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 表4〜5に示されるDsiRNA剤から成る群から選択される1対の第1の鎖/第2の鎖の配列を含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖および前記第2の鎖のそれぞれは、少なくとも26ヌクレオチドの長さを有する、請求項52に記載の単離dsRNA。
- 前記第1の鎖の前記3’末端の前記修飾ヌクレオチド残基は、デオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド、および蛍光分子から成る群から選択される、請求項53に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の前記3’末端の1位は、デオキシリボヌクレオチドである、請求項53に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングの前記ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドを含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドは、2’−O−メチルリボヌクレオチドである、請求項62に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングの全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖および第2のオリゴヌクレオチド鎖のうちの一方または両方が、5’リン酸塩を含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記修飾ヌクレオチド残基は、2’−O−メチル、2’−メトキシエトキシ、2’−フルオロ、2’−アリル、2’−O−[2−(メチルアミノ)−2−オキソエチル]、4’−チオ、4’−CH2−O−2’−架橋、4’−(CH2)2−O−2’−架橋、2’−LNA、2−アミノ、および2’−O−(N−メチルカルバメート)から成る群から選択される、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングは、1〜3ヌクレオチド長である、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングは、1〜2ヌクレオチド長である、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記3’オーバーハングは、2ヌクレオチド長であり、前記3’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドは、2’−O−メチル修飾リボヌクレオチドである、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の前記5’末端ヌクレオチド残基と相補的な前記第2の鎖の前記ヌクレオチド残基から始めて、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖が、交互の修飾および非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第2のオリゴヌクレオチド鎖が、前記第1のオリゴヌクレオチド鎖の5’末端ヌクレオチド残基と相補的な前記第2の鎖のヌクレオチド残基から始めて、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖の18位から5’末端までの全ての位置において、非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖および前記第2の鎖のそれぞれは、少なくとも26かつ多くとも30ヌクレオチド長を有する、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記dsRNAは、前記細胞においてダイサーによって内因的に切断される、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離された二本鎖核酸の量は、前記細胞の環境において、1ナノモル以下、200ピコモル以下、100ピコモル以下、50ピコモル以下、20ピコモル以下、10ピコモル以下、5ピコモル以下、2ピコモル以下、および1ピコモル以下から成る群から選択される、前記標的遺伝子の発現を減少させるのに十分である、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離されたdsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS遺伝子発現の減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離されたdsRNAは、前記細胞の環境において、200ピコモル以下、100ピコモル以下、50ピコモル以下、20ピコモル以下、10ピコモル以下、5ピコモル以下、2ピコモル以下、および1ピコモル以下から成る群から選択される細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS遺伝子発現の減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記単離されたdsRNAは、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞に導入される場合、少なくとも10%、少なくとも50%、少なくとも80〜90%、少なくとも95%、少なくとも98%、および少なくとも99%から成る群から選択される(%によって表現される)量、KRAS標的遺伝子発現を減少させるように、前記標的KRAS cDNA配列と十分に相補的である、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖および第2の鎖は、化学的リンカーによって結合される、請求項52に記載の単離されたdsRNA。
- 前記第1の鎖の前記3’末端および前記第2の鎖の前記5’末端は、化学的リンカーによって結合される、請求項52に記載の単離された二本鎖核酸。
- 前記第2の鎖または第1の鎖のヌクレオチドは、ダイサー切断の配向を導く修飾ヌクレオチドで置換される、請求項52に記載の単離された二本鎖核酸。
- デオキシリボヌクレオチド、ジデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド、3’−デオキシアデノシン(コルジセピン)、3’−アジド−3’−デオキシミジン(AZT)、2’,3’−ジデオキシイノシン(ddI)、2’,3’−ジデオキシ−3’−チアシチジン(3TC)、2’,3’−ジデヒドロ−2’,3’−ジデオキシミジン(d4T)、3’−アジド−3’−デオキシミジン(AZT)および2’,3’−ジデオキシ−3’−チアシチジン(3TC)の一リン酸ヌクレオチド、2’,3’−ジデヒドロ−2’,3’−ジデオキシミジン(d4T)の一リン酸ヌクレオチド、4−チオウラシル、5−ブロモウラシル、5−ヨードウラシル、5−(3−アミノアリル)−ウラシル、2’−O−アルキルリボヌクレオチド、2’−O−メチルリボヌクレオチド、2’−アミノリボヌクレオチド、2’−フルオロリボヌクレオチド、ならびにロックされた核酸から成る群から選択される修飾ヌクレオチドを含む、請求項52に記載の単離された二本鎖核酸。
- ホスホネート、ホスホロチオアート、およびホスホトリエステルから成る群から選択されるリン酸骨格修飾を含む、請求項52に記載の単離された二本鎖核酸。
- 哺乳動物細胞において、標的KRAS遺伝子の発現を減少させるための方法であって、哺乳動物細胞を、前記細胞内の標的KRAS遺伝子の発現を減少させるのに十分な量の請求項1に記載の単離されたdsRNAと、インビトロで接触させることを含む、方法。
- 標的KRAS遺伝子発現は、少なくとも10%、少なくとも50%、および少なくとも80〜90%から成る群から選択される(%によって表現される)量減少する、請求項83に記載の方法。
- KRAS mRNAレベルは、前記細胞を前記dsRNAと接触させてから少なくとも8日後、少なくとも90%の(%によって表現される)量減少する、請求項83に記載の方法。
- KRAS mRNAレベルは、前記細胞を前記dsRNAと接触させてから少なくとも10日後、少なくとも70%の(%によって表現される)量減少する、請求項83に記載の方法。
- 哺乳動物において、標的KRAS遺伝子の発現を減少させるための方法であって、前記哺乳動物内の標的KRAS遺伝子の発現を減少させるのに十分な量で、請求項52に記載の単離されたdsRNAを哺乳動物に投与することを含む、方法。
- 前記単離されたdsRNAは、1日当たり前記哺乳動物のキログラム当たり1マイクログラム〜5ミリグラム、キログラム当たり100マイクログラム〜0.5ミリグラム、キログラム当たり0.001〜0.25ミリグラム、キログラム当たり0.01〜20マイクログラム、キログラム当たり0.01〜10マイクログラム、キログラム当たり0.10〜5マイクログラム、およびキログラム当たり0.1〜2.5マイクログラム、から成る群から選択される用量で投与される、請求項87に記載の方法。
- 前記単離されたdsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS遺伝子発現の減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項87に記載の方法。
- 前記投与ステップは、静脈注射、筋肉注射、腹腔内注射、点滴、皮下注射、経皮、エアロゾル、直腸、膣内、局所、経口、および吸入送達から成る群から選択される様式を含む、請求項87に記載の方法。
- 細胞の増殖を選択的に阻害するための方法であって、前記細胞の増殖を阻害するのに十分な量の請求項52に記載の単離されたdsRNAと、細胞を接触させることを含む、方法。
- 前記細胞は、対象の腫瘍細胞である、請求項91に記載の方法。
- 前記細胞は、インビトロの腫瘍細胞である、請求項91に記載の方法。
- 前記細胞は、ヒト細胞である、請求項91に記載の方法。
- 前記dsRNAは、前記dsRNAが哺乳動物細胞にインビトロで導入される場合、少なくとも10%、少なくとも50%、および少なくとも80〜90%から成る群から選択される(%によって表現される)量、標的KRAS RNAレベルを減少させるのに有効な量で存在し、前記dsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS RNAレベルの減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項52に記載の単離されたdsRNAを含む製剤。
- 前記有効量は、前記細胞の環境において、1ナノモル以下、200ピコモル以下、100ピコモル以下、50ピコモル以下、20ピコモル以下、10ピコモル以下、5ピコモル以下、2ピコモル以下、および1ピコモル以下から成る群から選択される、請求項95に記載の製剤。
- 前記dsRNAは、前記dsRNAが哺乳動物対象の細胞に導入される場合、少なくとも10%、少なくとも50%、および少なくとも80〜90%から成る群から選択される(%によって表現される)量、標的RNAレベルを減少させるのに有効な量で存在し、前記dsRNAは、1ナノモル以下の細胞環境内有効濃度で、哺乳動物細胞においてインビトロでアッセイされる場合、標的KRAS RNAレベルの減少において、前記標的KRAS cDNAの同一の少なくとも19個のヌクレオチドを対象とする単離された21merのsiRNAよりも高い効力を有する、請求項52に記載の単離されたdsRNAを含む製剤。
- 前記有効量は、1日当たり前記対象のキログラム当たり1マイクログラム〜5ミリグラム、キログラム当たり100マイクログラム〜0.5ミリグラム、キログラム当たり0.001〜0.25ミリグラム、キログラム当たり0.01〜20マイクログラム、キログラム当たり0.01〜10マイクログラム、キログラム当たり0.10〜5マイクログラム、およびキログラム当たり0.1〜2.5マイクログラム、から成る群から選択される用量である、請求項97に記載の製剤。
- 請求項52に記載の単離されたdsRNAを含む、哺乳動物細胞。
- 請求項52に記載の単離されたdsRNAおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
- 請求項52に記載の単離されたdsRNAおよびその使用のための取扱説明書を含む、キット。
- 第1のおよび第2の核酸鎖ならびに少なくとも25個の塩基対の二重鎖領域を含む単離された二本鎖リボ核酸(dsRNA)から本質的に成るKRAS阻害活性を有する組成物であって、前記dsRNAの前記第2の鎖は、その3’末端に1〜5の一本鎖ヌクレオチドを含み、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖は、前記第2のオリゴヌクレオチド鎖長の少なくとも19個のヌクレオチドかつ多くとも35個のヌクレオチドに沿って、配列番号1595〜2297および3704〜4406から成る群から選択される標的KRAS cDNA配列と十分に相補的であり、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞に導入される場合、KRAS標的遺伝子発現を減少させる、組成物。
Applications Claiming Priority (33)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US16655909P | 2009-04-03 | 2009-04-03 | |
US16657809P | 2009-04-03 | 2009-04-03 | |
US61/166,559 | 2009-04-03 | ||
US61/166,578 | 2009-04-03 | ||
US17430609P | 2009-04-30 | 2009-04-30 | |
US17427909P | 2009-04-30 | 2009-04-30 | |
US61/174,279 | 2009-04-30 | ||
US61/174,306 | 2009-04-30 | ||
US18381509P | 2009-06-03 | 2009-06-03 | |
US18381809P | 2009-06-03 | 2009-06-03 | |
US61/183,818 | 2009-06-03 | ||
US61/183,815 | 2009-06-03 | ||
US18473509P | 2009-06-05 | 2009-06-05 | |
US61/184,735 | 2009-06-05 | ||
PCT/US2009/005214 WO2010033225A2 (en) | 2008-09-22 | 2009-09-17 | Compositions and methods for the specific inhibition of gene expression by dsrna possessing modifications |
USPCT/US2009/005214 | 2009-09-17 | ||
US25782009P | 2009-11-03 | 2009-11-03 | |
US25781009P | 2009-11-03 | 2009-11-03 | |
US61/257,810 | 2009-11-03 | ||
US61/257,820 | 2009-11-03 | ||
US28592509P | 2009-12-11 | 2009-12-11 | |
US61/285,925 | 2009-12-11 | ||
US12/642,404 US20100184841A1 (en) | 2008-12-18 | 2009-12-18 | Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression |
US12/642,264 US20100173973A1 (en) | 2008-12-18 | 2009-12-18 | Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression |
US12/642,264 | 2009-12-18 | ||
US12/642,371 | 2009-12-18 | ||
US12/642,371 US8513207B2 (en) | 2008-12-18 | 2009-12-18 | Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression |
US12/642,404 | 2009-12-18 | ||
US12/704,256 | 2010-02-11 | ||
US12/704,256 US20100249214A1 (en) | 2009-02-11 | 2010-02-11 | Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences |
US30926610P | 2010-03-01 | 2010-03-01 | |
US61/309,266 | 2010-03-01 | ||
PCT/US2010/029992 WO2010115206A2 (en) | 2009-04-03 | 2010-04-05 | Methods and compositions for the specific inhibition of kras by asymmetric double-stranded rna |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012531888A true JP2012531888A (ja) | 2012-12-13 |
JP6010458B2 JP6010458B2 (ja) | 2016-10-19 |
Family
ID=42828984
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012503773A Active JP6010458B2 (ja) | 2009-04-03 | 2010-04-05 | 非対称二本鎖rnaによる特異的阻害のための、方法および組成物 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8372816B2 (ja) |
EP (3) | EP4124657A3 (ja) |
JP (1) | JP6010458B2 (ja) |
KR (1) | KR101791702B1 (ja) |
CN (3) | CN102575254B (ja) |
AU (1) | AU2010232410B2 (ja) |
CA (1) | CA2757613C (ja) |
DK (2) | DK3199165T3 (ja) |
ES (2) | ES2628144T3 (ja) |
HU (1) | HUE059432T2 (ja) |
PL (1) | PL3199165T3 (ja) |
PT (1) | PT3199165T (ja) |
WO (1) | WO2010115206A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016528887A (ja) * | 2013-07-03 | 2016-09-23 | ダイセルナ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドDicerna Pharmaceuticals, Inc. | 二本鎖RNAによるα−1アンチトリプシンの特異的阻害のための方法及び組成物 |
JP2019526260A (ja) * | 2016-09-01 | 2019-09-19 | プロキューアール セラピューティクス ツー ベスローテン フェンノートシャップ | 化学修飾された一本鎖rna編集オリゴヌクレオチド |
Families Citing this family (39)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9657294B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-05-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US9181551B2 (en) | 2002-02-20 | 2015-11-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060134787A1 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-22 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended siRNA |
EP2756845B1 (en) * | 2009-04-03 | 2017-03-15 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of KRAS by asymmetric double-stranded RNA |
AU2010232410B2 (en) | 2009-04-03 | 2016-11-17 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of KRAS by asymmetric double-stranded RNA |
WO2011005363A2 (en) * | 2009-05-18 | 2011-01-13 | Ensysce Biosciences, Inc. | Carbon nanotubes complexed with multiple bioactive agents and methods related thereto |
US20150025122A1 (en) * | 2009-10-12 | 2015-01-22 | Larry J. Smith | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro |
KR101372876B1 (ko) * | 2009-12-07 | 2014-03-10 | 아크레이 가부시키가이샤 | 질환 관련 유전자의 다형 검출용 프로브 및 그 용도 |
CA2818662C (en) | 2010-10-22 | 2021-07-06 | Sungkyunkwan University Foundation For Corporate Collaboration | Nucleic acid molecule inducing rna interference, and uses thereof |
ES2663009T3 (es) | 2010-10-29 | 2018-04-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | Inhibición de la expresión génica mediada por interferencia por ARN utilizando ácidos nucleicos de interferencia cortos (ANic) |
EP3960726A1 (en) | 2011-10-18 | 2022-03-02 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Amine cationic lipids and uses thereof |
EP3736333A1 (en) * | 2012-05-02 | 2020-11-11 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Organic compositions to treat kras-related diseases |
JP6139671B2 (ja) | 2012-05-22 | 2017-05-31 | オリックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドOlix Pharmaceuticals Inc. | 細胞内貫通能を持ってrna干渉を誘導する核酸分子およびその用途 |
CA2878314A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-01-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Rnai pharmaceutical composition for suppressing expression of kras gene |
KR102205278B1 (ko) | 2013-03-14 | 2021-01-22 | 다이서나 파마수이티컬, 인크. | 음이온성 약제를 제형화하는 방법 |
KR101670254B1 (ko) * | 2014-07-09 | 2016-10-28 | 서울대학교산학협력단 | 목적 유전자의 발현 억제 특이성이 증가된 siRNA 분자 |
US9950194B2 (en) | 2014-09-09 | 2018-04-24 | Mevion Medical Systems, Inc. | Patient positioning system |
WO2016097212A1 (en) | 2014-12-17 | 2016-06-23 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Targeted rna editing |
JP7027311B2 (ja) | 2015-11-16 | 2022-03-01 | オリックス ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | MyD88又はTLR3を標的とするRNA複合体を使用した加齢黄斑変性の治療 |
EP3405576A4 (en) * | 2016-01-19 | 2019-09-18 | The University of North Carolina at Chapel Hill | METHODS AND COMPOSITIONS USING RNA INTERFERENCE FOR KRAS INHIBITION |
US11180759B2 (en) | 2016-01-19 | 2021-11-23 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions using RNA interference and antisense oligonucleotides for inhibition of KRAS |
JP7003044B2 (ja) | 2016-02-02 | 2022-01-20 | オリックス ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | Angpt2およびpdgfbを標的化するrna複合体を用いる血管新生関連疾患の処置 |
EP3411480A4 (en) | 2016-02-02 | 2020-01-22 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | TREATMENT OF ATOPIC DERMATITIS AND ASTHMA USING RNA COMPLEXES THAT TARGETE IL4R, TRPA1, OR F2RL1 |
MA45470A (fr) * | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques kras et leurs utilisations |
CN105858567A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-08-17 | 北京华绿生物科技有限公司 | 食用菌菌瓶的扣盖稳定器、食用菌菌瓶压盖设备 |
US10988763B2 (en) | 2016-06-22 | 2021-04-27 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Single-stranded RNA-editing oligonucleotides |
KR101916652B1 (ko) | 2016-06-29 | 2018-11-08 | 올릭스 주식회사 | 작은 간섭 rna의 rna 간섭효과 증진용 화합물 및 이의 용도 |
CN107164381B (zh) * | 2016-08-18 | 2020-04-14 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 用于抑制KRAS靶基因mRNA表达的寡核酸分子及其成套组合物 |
US20180193270A1 (en) | 2016-11-29 | 2018-07-12 | PureTech Health LLC | Exosomes for delivery of therapeutic agents |
US11274300B2 (en) | 2017-01-19 | 2022-03-15 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonucleotide complexes for use in RNA editing |
US11591600B2 (en) | 2017-02-10 | 2023-02-28 | OliX Pharmaceuticals. Inc. | Long double-stranded RNA for RNA interference |
WO2019191232A2 (en) | 2018-03-27 | 2019-10-03 | University Of Rochester | Nucleic acid molecules for pseudouridylation |
CN111971051A (zh) * | 2018-04-13 | 2020-11-20 | 迪克纳制药公司 | 用增加tm的核苷酸修饰的双链核酸抑制剂分子 |
BR112021018739A2 (pt) | 2019-03-29 | 2022-05-03 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Composições e métodos para o tratamento de doenças ou distúrbios associados a kras |
WO2021076574A2 (en) * | 2019-10-14 | 2021-04-22 | Aro Biotherapeutics Company | Fn3 domain-sirna conjugates and uses thereof |
CN110981943B (zh) * | 2019-12-02 | 2021-08-03 | 清华大学 | 多肽及其在制备药物中的用途和药物 |
WO2021207339A1 (en) * | 2020-04-07 | 2021-10-14 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions using rna interference and antisense oligonucleotides for inhibition of kras |
CN111534520A (zh) * | 2020-05-27 | 2020-08-14 | 深圳市疾病预防控制中心(深圳市卫生检验中心、深圳市预防医学研究所) | 特异抑制K-ras基因表达的慢病毒和重组载体构建及其应用 |
KR102379204B1 (ko) * | 2020-12-18 | 2022-03-24 | 이화여자대학교 산학협력단 | 유전자 침묵 활성이 증가된 핵산 분자 및 이의 이용 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007529224A (ja) * | 2004-03-15 | 2007-10-25 | シティ・オブ・ホープ | 二本鎖rnaによる遺伝子発現の特異的阻害のための方法及び組成物 |
WO2008109516A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting ras gene expression and uses thereof |
WO2008136902A1 (en) * | 2007-05-01 | 2008-11-13 | City Of Hope | Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5432272A (en) | 1990-10-09 | 1995-07-11 | Benner; Steven A. | Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases |
ES2061416T3 (es) | 1990-10-12 | 1997-03-01 | Max Planck Gesellschaft | Ribozimas modificadas. |
US5652094A (en) | 1992-01-31 | 1997-07-29 | University Of Montreal | Nucleozymes |
JPH08502950A (ja) * | 1992-05-14 | 1996-04-02 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 癌増殖を抑制する方法及び試薬 |
US6218108B1 (en) | 1997-05-16 | 2001-04-17 | Research Corporation Technologies, Inc. | Nucleoside analogs with polycyclic aromatic groups attached, methods of synthesis and uses therefor |
EP0843019A3 (en) * | 1996-11-08 | 2002-10-09 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for determination of specific nucleic acid sequence, and a reagent therefor |
US6248878B1 (en) | 1996-12-24 | 2001-06-19 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside analogs |
US6506559B1 (en) * | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US7829693B2 (en) * | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
US20050288242A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040121348A1 (en) * | 2001-10-26 | 2004-06-24 | Ribopharma Ag | Compositions and methods for treating pancreatic cancer |
CN1608131A (zh) * | 2001-10-26 | 2005-04-20 | 里伯药品公司 | 治疗胰腺癌的药物 |
JP2006507841A (ja) * | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
WO2005044981A2 (en) * | 2003-10-23 | 2005-05-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US20050176045A1 (en) * | 2004-02-06 | 2005-08-11 | Dharmacon, Inc. | SNP discriminatory siRNA |
US20080213891A1 (en) | 2004-07-21 | 2008-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi Agents Comprising Universal Nucleobases |
US20090018097A1 (en) | 2005-09-02 | 2009-01-15 | Mdrna, Inc | Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules |
WO2007031091A2 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-22 | Santaris Pharma A/S | Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression |
JP4644619B2 (ja) | 2006-03-27 | 2011-03-02 | 富士通株式会社 | 基地局装置、端末および帯域制御方法 |
CN101448848B (zh) * | 2006-03-27 | 2013-12-04 | 全球免疫股份有限公司 | Ras突变及其相关组合物和方法 |
US20100105134A1 (en) * | 2007-03-02 | 2010-04-29 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting gene expression and uses thereof |
US20110030074A1 (en) * | 2007-05-21 | 2011-02-03 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for cancer gene discovery |
JP2010537640A (ja) * | 2007-08-27 | 2010-12-09 | ボストン バイオメディカル, インコーポレイテッド | マイクロrna模倣剤または阻害剤としての非対称性rna二重鎖の組成物 |
WO2009108217A2 (en) * | 2007-09-18 | 2009-09-03 | Intradigm Corporation | Compositions comprising k-ras sirna and methods of use |
WO2010020618A1 (en) * | 2008-08-18 | 2010-02-25 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Susceptibility to hsp90-inhibitors |
CN101381779B (zh) * | 2008-10-21 | 2011-06-08 | 广州益善生物技术有限公司 | kRas基因突变的检测探针、液相芯片及其检测方法 |
AU2010232410B2 (en) * | 2009-04-03 | 2016-11-17 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of KRAS by asymmetric double-stranded RNA |
CA2878314A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-01-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Rnai pharmaceutical composition for suppressing expression of kras gene |
-
2010
- 2010-04-05 AU AU2010232410A patent/AU2010232410B2/en active Active
- 2010-04-05 CA CA2757613A patent/CA2757613C/en active Active
- 2010-04-05 PL PL17160821.9T patent/PL3199165T3/pl unknown
- 2010-04-05 KR KR1020117026284A patent/KR101791702B1/ko active IP Right Grant
- 2010-04-05 WO PCT/US2010/029992 patent/WO2010115206A2/en active Application Filing
- 2010-04-05 JP JP2012503773A patent/JP6010458B2/ja active Active
- 2010-04-05 CN CN201080024105.0A patent/CN102575254B/zh active Active
- 2010-04-05 DK DK17160821.9T patent/DK3199165T3/da active
- 2010-04-05 HU HUE17160821A patent/HUE059432T2/hu unknown
- 2010-04-05 EP EP22164952.8A patent/EP4124657A3/en not_active Withdrawn
- 2010-04-05 CN CN201310485274.XA patent/CN103555722B/zh active Active
- 2010-04-05 DK DK14157847.6T patent/DK2756845T3/en active
- 2010-04-05 ES ES14157847.6T patent/ES2628144T3/es active Active
- 2010-04-05 EP EP10759549.8A patent/EP2414374A4/en not_active Withdrawn
- 2010-04-05 PT PT171608219T patent/PT3199165T/pt unknown
- 2010-04-05 EP EP17160821.9A patent/EP3199165B1/en active Active
- 2010-04-05 ES ES17160821T patent/ES2921573T3/es active Active
- 2010-04-05 CN CN201510043324.8A patent/CN104651362A/zh active Pending
- 2010-04-05 US US12/754,427 patent/US8372816B2/en active Active
-
2013
- 2013-01-10 US US13/738,024 patent/US9200284B2/en active Active
-
2014
- 2014-11-03 US US14/531,913 patent/US9809819B2/en active Active
-
2017
- 2017-11-01 US US15/800,440 patent/US10752899B2/en active Active
-
2020
- 2020-06-22 US US16/908,313 patent/US11447777B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007529224A (ja) * | 2004-03-15 | 2007-10-25 | シティ・オブ・ホープ | 二本鎖rnaによる遺伝子発現の特異的阻害のための方法及び組成物 |
WO2008109516A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting ras gene expression and uses thereof |
WO2008136902A1 (en) * | 2007-05-01 | 2008-11-13 | City Of Hope | Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6015012919; Wei Wang, et al.: World Journal of Gastroenterology Vol. 11, No. 13, 20050407, PP. 2026-2031 * |
JPN6015012921; Soukaina Rejiba, et al.: Cancer Science Vol. 98, No. 7, 20070508, PP. 1128-1136 * |
Cited By (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11312961B1 (en) | 2013-07-03 | 2022-04-26 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
JP2016528887A (ja) * | 2013-07-03 | 2016-09-23 | ダイセルナ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドDicerna Pharmaceuticals, Inc. | 二本鎖RNAによるα−1アンチトリプシンの特異的阻害のための方法及び組成物 |
US11912996B2 (en) | 2013-07-03 | 2024-02-27 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
US10844381B2 (en) | 2013-07-03 | 2020-11-24 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
JP2020188771A (ja) * | 2013-07-03 | 2020-11-26 | ダイセルナ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドDicerna Pharmaceuticals, Inc. | 二本鎖RNAによるα−1アンチトリプシンの特異的阻害のための方法及び組成物 |
US11208658B2 (en) | 2013-07-03 | 2021-12-28 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
US10370655B2 (en) | 2013-07-03 | 2019-08-06 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
US11312960B1 (en) | 2013-07-03 | 2022-04-26 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
US11459566B1 (en) | 2013-07-03 | 2022-10-04 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
US11408002B1 (en) | 2013-07-03 | 2022-08-09 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
JP2022078069A (ja) * | 2013-07-03 | 2022-05-24 | ダイセルナ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 二本鎖RNAによるα-1アンチトリプシンの特異的阻害のための方法及び組成物 |
US11851658B2 (en) | 2013-07-03 | 2023-12-26 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded RNA |
JP7244922B2 (ja) | 2016-09-01 | 2023-03-23 | プロキューアール セラピューティクス ツー ベスローテン フェンノートシャップ | 化学修飾された一本鎖rna編集オリゴヌクレオチド |
JP2019526260A (ja) * | 2016-09-01 | 2019-09-19 | プロキューアール セラピューティクス ツー ベスローテン フェンノートシャップ | 化学修飾された一本鎖rna編集オリゴヌクレオチド |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6010458B2 (ja) | 非対称二本鎖rnaによる特異的阻害のための、方法および組成物 | |
EP2756845B1 (en) | Methods and compositions for the specific inhibition of KRAS by asymmetric double-stranded RNA | |
US10612023B2 (en) | Methods and compositions for the specific inhibition of β-catenin by double-stranded RNA | |
AU2014369850B2 (en) | Methods and compositions for the specific inhibition of Glycolate Oxidase (HAO1) by double-stranded RNA | |
JP2015529467A (ja) | 二本鎖rnaによるmycの特異的阻害に関する方法および組成物 | |
JP2016528887A (ja) | 二本鎖RNAによるα−1アンチトリプシンの特異的阻害のための方法及び組成物 | |
WO2010115202A2 (en) | Methods and compositions for the specific inhibition of kras by blunt ended double-stranded rna | |
US20230111150A1 (en) | Methods and compositions for the specific inhibition of kras by asymmetric double-stranded rna |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130308 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140728 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141027 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20141104 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150113 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150406 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160916 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6010458 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |