JP2012514184A - 多重分析物の検出及び定量化のための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
a)その表面上にマイクロアレイがプリントされている反応容器を提供するステップであって、前記マイクロアレイが、
i)各検量スポットが所定量の第1の標的分析物を含む、複数の第1の検量スポットを含む第1の検量マトリックスと、
ii)各検量スポットが所定量の第2の標的分析物を含む、複数の第2の検量スポットを含む第2の検量マトリックスと、
iii)各捕捉スポットが、第1の標的分析物に選択的に結合する所定量の作用物質を含む、複数の第1の捕捉スポットを含む第1の捕捉マトリックスと、
iv)各捕捉スポットが、第2の標的分析物に選択的に結合する所定量の作用物質を含む、複数の第2の捕捉スポットを含む第2の捕捉マトリックスと
を含む上記ステップと;
b)所定分量の被験試料をマイクロアレイに適用するステップと;
c)第1の標的分析物に選択的に結合する第1の蛍光標識抗体と、第2の標的分析物に選択的に結合する第2の蛍光標識抗体とをアッセイデバイスに適用するステップであって、前記第1及び第2の蛍光標識抗体の各々が、互いに重複しない発光スペクトル及び励起スペクトルを有する、異なる蛍光色素を含む上記ステップと;
d)マイクロアレイ内の各スポットについてシグナル強度値を測定するステップと;
e)第1の標的分析物及び第2の標的分析物の既知の濃度に対する、検量スポットの各々について測定されたシグナル強度値に曲線を適合させることにより、検量線を作成するステップと;
f)作成された検量線を用いて、第1の標的分析物及び第2の標的分析物の濃度を決定するステップと
を含む上記方法を提供する。
a)その表面上にマイクロアレイがプリントされているアッセイデバイスを提供するステップであって、前記マイクロアレイが、
i)各スポットが所定量のヒトIgA抗体、ヒトIgG抗体、及びヒトIgM抗体のうちの1つを含む、複数のスポットを含む検量マトリックスと、
ii)所定量のリウマチ因子を含む、複数のスポットを含む第1の分析物捕捉マトリックスと、
iii)所定量の環状シトルリン化ペプチドを含む、複数のスポットを含む第2の分析物捕捉マトリックスと
を含む上記ステップと;
b)所定分量の血清試料をアッセイデバイスに適用するステップと;
c)IgA抗体に選択的に結合する第1の蛍光標識抗体と、IgG抗体に選択的に結合する第2の蛍光標識抗体と、IgM抗体に選択的に結合する第3の蛍光標識抗体とをアッセイデバイスに適用するステップであって、前記第1、第2、及び第3の蛍光標識抗体の各々が、互いに重複しない発光スペクトル及び励起スペクトルを有する、異なる蛍光色素を含む上記ステップと;
d)アッセイデバイス内の各スポットについてシグナル強度値を測定するステップと;
e)ヒトIgA抗体、ヒトIgG抗体、及びヒトIgM抗体の既知の濃度に対する、検量スポットの各々について測定されたシグナル強度値に曲線を適合させることにより、検量線を作成するステップと;
f)検量線を用いて、捕捉されたリウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び/又は抗環状シトルリン化ペプチド−IgMの各々について濃度を決定するステップと
を含む上記方法を提供する。
a)本明細書で開示される方法を用いて、生体試料中のリウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、並びに抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び抗環状シトルリン化ペプチド−IgMのうちの少なくとも1つの濃度レベルを測定するステップと;
b)リウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び/又は抗環状シトルリン化ペプチド−IgMの測定された濃度レベルを、リウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、並びに抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び/又は抗環状シトルリン化ペプチド−IgMの指標正常レベルと比較するステップであって、指標正常レベルを超える測定された濃度レベルが関節リウマチであると診断される上記ステップと
を含む上記方法を提供する。
血清試料中の3つの異なる標的抗体の検出及び定量化
エポキシシラン基質表面を創出するように前処理された16ウェルのスライド上の同じ試料ウェル内に、ヒトIgM、ヒトIgG、ヒトIgAの各々4つの濃度をプリントする。タンパク質をプリントしたスライドを、アイシングラスと共に一晩にわたりインキュベートし、ウェル内の反応しなかったエポキシシラン結合部位を保護する。
Claims (11)
- 被験試料中の2つ以上の標的分析物を検出及び定量する方法であって、
a)その表面上にマイクロアレイがプリントされている反応容器を提供するステップであって、前記マイクロアレイが、
i)各検量スポットが所定量の第1の標的分析物を含む、複数の第1の検量スポットを含む第1の検量マトリックスと、
ii)各検量スポットが所定量の第2の標的分析物を含む、複数の第2の検量スポットを含む第2の検量マトリックスと、
iii)各捕捉スポットが、第1の標的分析物に選択的に結合する所定量の作用物質を含む、複数の第1の捕捉スポットを含む第1の捕捉マトリックスと、
iv)各捕捉スポットが、第2の標的分析物に選択的に結合する所定量の作用物質を含む、複数の第2の捕捉スポットを含む第2の捕捉マトリックスと
を含む上記ステップと;
b)所定分量の被験試料をマイクロアレイに適用するステップと;
c)第1の標的分析物に選択的に結合する第1の蛍光標識抗体と、第2の標的分析物に選択的に結合する第2の蛍光標識抗体とをアッセイデバイスに適用するステップであって、前記第1及び第2の蛍光標識抗体の各々が、互いに重複しない発光スペクトル及び励起スペクトルを有する、異なる蛍光色素を含む上記ステップと;
d)マイクロアレイ内の各スポットについてシグナル強度値を測定するステップと;
e)第1の標的分析物及び第2の標的分析物の既知の濃度に対する、検量スポットの各々について測定されたシグナル強度値に曲線を適合させることにより、検量線を作成するステップと;
f)作成された検量線を用いて、第1の標的分析物及び第2の標的分析物の濃度を決定するステップと
を含む上記方法。 - 標的分析物がタンパク質である、請求項1に記載の方法。
- 前記タンパク質が抗体である、請求項2に記載の方法。
- 反応容器がマルチウェルプレートのウェルであり、各ウェルの内部にマイクロアレイがプリントされている、請求項3に記載の方法。
- 被験試料が生体試料である、請求項1から4までのいずれか一項に記載の方法。
- 関節リウマチを診断するためのバイオマーカーを検出及び定量する方法であって、
a)その表面上にマイクロアレイがプリントされているアッセイデバイスを提供するステップであって、前記マイクロアレイが、
i)各スポットが所定量のヒトIgA抗体、ヒトIgG抗体、及びヒトIgM抗体のうちの1つを含む、複数のスポットを含む検量マトリックスと、
ii)所定量のリウマチ因子を含む、複数のスポットを含む第1の分析物捕捉マトリックスと、
iii)所定量の環状シトルリン化ペプチドを含む、複数のスポットを含む第2の分析物捕捉マトリックスと
を含む上記ステップと;
b)所定分量の血清試料をアッセイデバイスに適用するステップと;
c)IgA抗体に選択的に結合する第1の蛍光標識抗体と、IgG抗体に選択的に結合する第2の蛍光標識抗体と、IgM抗体に選択的に結合する第3の蛍光標識抗体とをアッセイデバイスに適用するステップであって、前記第1、第2、及び第3の蛍光標識抗体の各々が、互いに重複しない発光スペクトル及び励起スペクトルを有する、異なる蛍光色素を含む上記ステップと;
d)アッセイデバイス内の各スポットについてシグナル強度値を測定するステップと;
e)ヒトIgA抗体、ヒトIgG抗体、及びヒトIgM抗体の既知の濃度に対する、検量スポットの各々について測定されたシグナル強度値に曲線を適合させることにより、検量線を作成するステップと;
f)検量線を用いて、捕捉されたリウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び/又は抗環状シトルリン化ペプチド−IgMの各々について濃度を決定するステップと
を含む上記方法。 - 対象における関節リウマチを診断する方法であって、
a)請求項6に記載の方法を用いて、生体試料中のリウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、並びに抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び抗環状シトルリン化ペプチド−IgMのうちの少なくとも1つの濃度レベルを測定するステップと;
b)リウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び/又は抗環状シトルリン化ペプチド−IgMの測定された濃度レベルを、リウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、並びに抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び/又は抗環状シトルリン化ペプチド−IgMの指標正常レベルと比較するステップであって、指標正常レベルを超える測定された濃度レベルが関節リウマチであると診断される上記ステップと
を含む上記方法。 - 優勢なリウマチ因子−IgM及び抗環状シトルリン化ペプチド−IgM抗体の検出及び定量化が、関節リウマチの初期段階であると診断される、請求項7に記載の方法。
- リウマチ因子−IgA及び抗環状シトルリン化ペプチド−IgA抗体の検出及び定量化が、関節リウマチの移行段階であると診断される、請求項7に記載の方法。
- リウマチ因子−IgG及び抗環状シトルリン化ペプチド−IgG抗体の検出及び定量化が、関節リウマチの後期段階であると診断される、請求項7に記載の方法。
- 関節リウマチを患う対象における関節リウマチ治療をモニタリングする方法であって、治療期間中複数回にわたり、請求項6に記載の方法を用いて、リウマチ因子−IgA、リウマチ因子−IgG、リウマチ因子−IgM、並びに抗環状シトルリン化ペプチド−IgG、抗環状シトルリン化ペプチド−IgA、及び抗環状シトルリン化ペプチド−IgMのうちの少なくとも1つの濃度レベルを測定するステップを含む上記方法。
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