JP2012513200A5

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Publication number: JP2012513200A5
Application number: JP2011542426A
Authority: JP
Filing date: 2009-12-17
Publication date: 2013-01-31

Claims

インターフェロン（ＩＦＮ）アルファ２の酸化型単量体アイソフォームを、該ＩＦＮの組換え製造アイソフォームの混合物において、そのＩＦＮのピルビン酸付加アイソフォームから分離する方法であって、
（ａ）第１バッファー溶液中にＩＦＮアイソフォームの混合物を準備し、
（ｂ）第１または第２バッファー溶液で平衡化されたアニオン交換樹脂が充填された１５ｃｍより長いクロマトグラフィーカラムを準備し、
（ｃ）該緩衝化ＩＦＮ溶液を該アニオン交換カラム上にローディングし、
（ｄ）該ロード化カラムを洗浄溶液で洗浄し、
（ｅ）１〜１０カラム体積の量の強溶出溶液（該強溶出溶液は１０〜３０ｍＭの濃度の第１ホスファート濃度を含み、５．４〜６．６のｐＨを有する）を該洗浄カラムに適用し、
（ｆ）２〜２０カラム体積の量の弱溶出溶液（該弱溶出溶液は、２．５ｍＭから７．５ｍＭまでのホスファート濃度を有する第２ホスファート濃度を含み、５．４〜６．６のｐＨを有する）を工程（ｅ）からのカラムに適用し、
（ｇ）該酸化型ＩＦＮ単量体アイソフォームを含有する複数の溶出画分を集めることを含む方法。
該アニオン交換樹脂がジエチルアミノエチルアニオン交換樹脂である、請求項１記載の方法。
該アニオン交換樹脂がＤＥＡＥセファロース・ファーストフロー（ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ）である、請求項２記載の方法。
第１および第２バッファー溶液のそれぞれが１０ｍＭＴｒｉｓ、０〜４０ｍＭＮａＣｌから実質的になり、７．０〜８．５のｐＨを有する、請求項１、２又は３記載の方法。
第１バッファー溶液が１０ｍＭＴｒｉｓ、４０ｍＭＮａＣｌから実質的になり、８．０のｐＨを有し、第２バッファー溶液が１０ｍＭＴｒｉｓから実質的になり、８．０のｐＨを有し、該洗浄溶液が１０ｍＭＴｒｉｓおよび１４ｍＭＮａＣｌから実質的になり、８．０のｐＨを有する、請求項４記載の方法。
第１ホスファート濃度が約１７．５ｍＭであり、第２ホスファート濃度が約５ｍＭ〜約７ｍＭであり、該強および弱溶出溶液のそれぞれが５．８５のｐＨを有する、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
該ＩＦＮアルファ２がＩＦＮ−α２ｂであり、該強溶出溶液が１７．５ｍＭリン酸ナトリウムから実質的になり、該弱溶出溶液が５ｍＭリン酸ナトリウムから実質的になる、請求項６記載の方法。
工程（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のそれぞれを０．５〜２．５ｃｍ／分の流量で行う、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
工程（ｃ）および（ｄ）のそれぞれを２ｃｍ／分の流量で行い、工程（ｅ）および（ｆ）のそれぞれを１ｃｍ／分の流量で行う、請求項８載の方法。
該ＩＦＮアルファ２がＩＦＮ−α２ｂであり、該ＩＦＮ溶液中の該酸化型単量体アイソフォームの濃度が約１．７５ｍｇ／ｍｌ〜約５．２５ｍｇ／ｍｌである、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
該ＩＦＮ溶液中の酸化型単量体アイソフォームの濃度が約３．５ｍｇ／ｍｌである、請求項１０記載の方法。
工程（ｅ）において適用する強溶出溶液の量が６カラム体積であり、工程（ｆ）において適用する弱溶出溶液の量が１５カラム体積である、請求項１０記載の方法。
工程（ｇ）において集める溶出画分のそれぞれの体積が該カラム体積の約２０％である、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
該ＩＦＮアルファ２がＩＦＮ−α２ｂであり、該ＩＦＮ溶液中のアイソフォームの約３％〜約２０％がＩＦＮ−α２ｂアイソフォーム４を含む、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
該ＩＦＮ溶液中のアイソフォームの６％〜１０％がＩＦＮ−α２ｂアイソフォーム４を含む、請求項１４記載の方法。
インターフェロンアルファ−２ｂ（ＩＦＮ−α２ｂ）のアイソフォーム１を、ＩＦＮ−α２ｂの組換え製造アイソフォームの混合物において、ＩＦＮ−α２ｂのアイソフォーム４から分離する方法であって、
（ａ）１０ｍＭＴｒｉｓおよび８．０のｐＨから実質的になるバッファー溶液で平衡化された少なくとも約２０ｃｍの長さのジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）アニオン交換クロマトグラフィーカラムを準備し、
（ｂ）１０ｍＭＴｒiｓ、４０ｍＭＮａＣｌから実質的になり７．５〜８．０のｐＨを有するローディングバッファー中で該ＩＦＮ−α２ｂ混合物を該ＤＥＡＥカラム上にローディングし（ここで、該ＩＦＮ−α２ｂ混合物を２ｃｍ／分の流量でローディングする）、
（ｃ）該ロード化カラムを３カラム体積の洗浄溶液（該洗浄溶液は１０ｍＭＴｒｉｓＨＣｌおよび１３ｍＭＮａＣｌから実質的になり、８．０のｐＨを有する）で２ｃｍ／分の流量で洗浄し、
（ｄ）６カラム体積の強溶出溶液（該強溶出溶液は１７．５ｍＭリン酸ナトリウムから実質的になり、５．８５のｐＨを有する）を１ｃｍ／分の流量で該洗浄カラムに適用し、
（ｅ）１５カラム体積の弱溶出溶液（該弱溶出溶液は５ｍＭリン酸ナトリウムから実質的になり、５．８５のｐＨを有する）を１ｃｍ／分の流量で工程（ｄ）からのカラムに適用し、
（ｆ）アイソフォーム１を含有する複数の溶出画分を集めることを含む方法。
アイソフォーム４の量が所望の純度基準未満である集めた溶出画分を合わせることを更に含む、請求項１６記載の方法。
工程（ｆ）において集めた画分のそれぞれの体積が該カラム体積の約２０％である、請求項１６または１７記載の方法。