JP2012503656A5

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Publication number: JP2012503656A5
Application number: JP2011529044A
Authority: JP
Filing date: 2009-07-21
Publication date: 2012-05-24

Claims

変異体グリコシル化パターンを呈するよう修飾された糖タンパク質であって、前記変異体グリコシル化パターンが、式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造：

を有するＮ連結型グリカンを含む、糖タンパク質。
Ｎ連結型グリカンを含む、修飾された宿主細胞によって産生される抗体であって、修飾されていない宿主細胞によって産生される対応する抗体と比較して、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）に対して高い結合親和性を、および／または、Ｆｃγ受容体ＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）に対して低い結合親和性を有し、それによりＦｃγＲＩＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂを発現するエフェクター細胞に対してＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を増大させる、抗体。
Ｎ連結型グリカンを含む、修飾された宿主細胞によって産生される抗体であって、対応する修飾されていない宿主細胞によって産生される対応する抗体と比較して、高いＡＤＣＣ活性を呈し、かつ前記高いＡＤＣＣ活性が、高親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｖ／Ｖを発現するエフェクター細胞、および低親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ／ＦまたはＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対してである、抗体。
Ｎ連結型グリカンが、式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造：

を有する、請求項２または３に記載の抗体。
前記Ｎ連結型グリカンが、前記抗体のＦｃ領域に結合する、請求項２または３に記載の抗体。
前記抗体が、癌抗原に結合する、請求項２または３に記載の抗体。
前記癌抗原が、ＨＥＲ２、免疫グロブリンεＦｃ受容体ＩＩ、Ａｌｋ−１、ＣＤ２０、ＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ＮＧＦ受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＥｐＣａｍ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５１、ＣＤ５５、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＴＬＡ−４、ムチン１、ムチン１６、エンドグリン、メソテリン受容体、ノゴ（Ｎｏｇｏ）受容体、葉酸受容体、ＣＸＣＲ４、インスリン様増殖因子受容体、ガングリオシドＧＤ３、ならびにαおよびβインテグリンからなる群から選択される、請求項６に記載の抗体。
前記抗体が、阻害抗体である、請求項２または３に記載の抗体。
前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項２または３に記載の抗体。
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、低親和性ＦｃＲであるＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ／ＦまたはＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対して高いＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を有する、請求項２または３に記載の抗体。
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、高親和性ＦｃＲであるＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｖ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対して高いＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を有する、請求項２または３に記載
の抗体。
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２または３に記載の抗体。
前記宿主細胞が、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、およびＹＢ２／０細胞からなる群から選択される、請求項２または３に記載の抗体。
前記宿主細胞が、ミエローマ細胞である、請求項２または３に記載の抗体。
前記エフェクター細胞が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項２または３に記載の抗体。
前記抗体が、抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項２または３に記載の抗体。
前記エフェクター細胞が、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ、または多形核ニュートラフィルス（ｎｅｕｔｒａｐｈｉｌｓ）（ＰＭＮ）である、請求項２または３に記載の抗体。
式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造

を有する、Ｎ連結型グリカン。
請求項１８に記載のＮグリカンを含む、単離した糖タンパク質。
前記糖タンパク質が抗体である、請求項１９に記載の糖タンパク質。
前記糖タンパク質が酵素である、請求項１９に記載の糖タンパク質。
前記Ｎ連結型グリカンが、前記抗体のＦｃ領域に結合する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
前記抗体が癌抗原に結合する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
前記癌抗原が、ＨＥＲ２、免疫グロブリンεＦｃ受容体ＩＩ、Ａｌｋ−１、ＣＤ２０、ＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ＮＧＦ受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＥｐＣａｍ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５１、ＣＤ５５、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＴＬＡ−４、ムチン１、ムチン１６、エンドグリン、メソテリン受容体、ノゴ受容体、葉酸受容体、ＣＸＣＲ４、インスリン様増殖因子受容体、ガングリオシドＧＤ３、ならびにαおよびβインテグリンからなる群から選択される、請求項２３に記載の糖タンパク質。
前記抗体が、Ｎ連結型グリカンの実質的に均質な集団を産生する修飾された宿主細胞によって産生される、請求項２０に記載の糖タンパク質。
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、高いＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を有する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する高い結合親和性を有する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
前記抗体が阻害抗体である、請求項２０に記載の糖タンパク質。
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項２０に記載の糖タンパク質。
（ａ）前記修飾された糖タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチド配列を提供すること；および
（ｂ）宿主細胞が、式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造

を有する変異体グリコシル化パターンを有するＮ連結型グリカンを産生する宿主細胞において前記修飾された糖タンパク質を発現させることを含む、修飾された糖タンパク質を産生する方法。
前記宿主細胞が、無血清培地において維持される、請求項３０に記載の方法。
前記宿主細胞が、懸濁培養において維持される、請求項３０に記載の方法。
前記修飾された糖タンパク質が、抗体である、請求項３０に記載の方法。
修飾されていない親宿主細胞と比較して、グルコース、ガラクトース、マンノース、およびグルコサミンからなる群から選択される１つ以上の糖部分のレベルの変化によって特徴づけられる変異体グリコシル化パターンを有するＮ連結型グリカンを産生する、修飾された宿主細胞。
実質的に均質なパターンのＮ連結型グリカンを呈する糖タンパク質を産生する単離された宿主細胞。
前記実質的に均質なパターンのＮ連結型グリカンが、質量分析によって分離される単一ピークによって立証される、請求項３５に記載の宿主細胞。
Ｎ連結型グリカンを有する修飾された抗体を産生する能力によって特徴づけられる修飾された宿主細胞であって、前記抗体が、修飾されていない宿主細胞によって産生される対応する抗体と比較して、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）に対する高い結合親和性、および／またはＦｃγ受容体ＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）に対する低い結合親和性を呈し、それにより、ＦｃγＲＩＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂを発現するエフェクター細胞に対するＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を増大させる、宿主細胞。
前記増大されたＡＤＣＣ活性が、高親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｖ／Ｖを発現するエフェクター細胞、および低親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ／ＦまたはＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｆ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対してである、請求項３７に記載の宿主細胞。
対応する修飾されていない宿主細胞よりも高いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を産生する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
前記Ｎ連結パターンが、式ＩまたはＩＩの構造：

を有する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
前記細胞が、ミエローマ細胞である、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
前記細胞が、少なくともおよそ６０回の継代後に変異体グリコシル化パターンを維持する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む培地。
無血清培地において請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞を含む培養発酵槽。
（ａ）複数の真核細胞を提供すること；
（ｂ）無作為な遺伝子突然変異を前記複数の真核細胞に導入すること；および
（ｃ）式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造

を有するＮ連結パターンによって特徴づけられる変異体グリコシル化パターンを呈する少なくとも１つの細胞を前記複数の細胞から選択することを含む、変異体グリコシル化パターンを用いて真核細胞を選択する方法。
前記遺伝子突然変異が、化学的変異原によって誘導される、請求項４６に記載の方法。
選択された前記真核細胞が、前記無作為な遺伝子突然変異に供されていない対応する細胞のＡＤＣＣ活性と比較して高いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を産生する、請求項４６に記載の方法。
選択された前記真核細胞が、前記無作為の遺伝子突然変異に供されていない対応する細
胞によって産生される対応する抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する高い結合親和性を有する抗体を産生する、請求項４６に記載の方法。
前記真核細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項４６に記載の方法。
前記真核細胞が、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、およびＹＢ２／０細胞からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
前記真核細胞が、ミエローマ細胞である、請求項４６に記載の方法。
選択された前記細胞が、少なくともおよそ６０回の継代後に前記変異体グリコシル化パターンを維持する、請求項４６に記載の方法。
選択された前記細胞が、無血清培地において増殖する、請求項４６に記載の方法。
選択された前記細胞が、懸濁液において増殖する、請求項４６に記載の方法。
選択された前記細胞が、異種性糖タンパク質をコードする異種性配列を含む、請求項４６に記載の方法。
選択された前記細胞が、実質的に均質なパターンのＮ連結型グリカンを発現する、請求項４６に記載の方法。
前記Ｎ連結型グリカンの実質的に均質なパターンが、質量分析によって分離される単一のピークによって立証される、請求項５７に記載の方法。