JP2012502929A - チアゾリウム塩化合物及びタンパク質老化疾患を治療する用途 - Google Patents

Abstract

式Ｉのチアゾリウム塩化合物及びその水和物、並びに医薬組成物、並びにタンパク質老化に関連する疾患を治療又は緩和する製品の製造における、歯の変色を抑制するか、若しくは回復させる経口製剤の製造における、又は作物中の植物タンパク質若しくは動物タンパク質の老化防止剤の製造におけるその使用：
【化１】

Description

本発明は、チアゾリウム化合物、該化合物を調製するプロセス、活性成分として該化合物を含み、薬学的に及び／又は化粧品的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤を含む組成物、並びにＡＧＥｓ（終末糖化産物、ＡＧＥｓ）に関連する疾患若しくは症状を予防若しくは治療するため、（ｉ）皮膚弾力性を改善するか、若しくは皮膚のしわを減らすため、（ｉｉ）糖尿病を治療するため、（ｉｉｉ）糖尿病の後遺症を治療若しくは緩和するため、（ｉｖ）腎損傷を治療若しくは緩和するため、（ｖ）血管損傷を治療若しくは緩和するため、（ｖｉ）高血圧症を治療若しくは緩和するため、（ｖｉｉ）網膜症を治療若しくは緩和するため、（ｖｉｉｉ）水晶体タンパク質損傷を治療若しくは緩和するため、（ｉｘ）白内障を治療若しくは緩和するため、（ｘ）末梢神経疾患を治療若しくは緩和するため、（ｘｉ）変形性関節症を治療若しくは緩和するため、心血管系の硬化を改善するため、高齢患者及び糖尿病患者における心血管系薬剤に対する感度を増大させるため、慢性心不全を治療するため、歯の着色を予防するか、若しくは回復させる経口製剤を製造するため、又は様々な作物の植物タンパク質及び動物タンパク質に対する老化防止剤を製造するための該化合物の使用に関する。

特許文献１は、下記式ＩＩＩによって表される３−ベンジルオキシカルボニルメチル−４−メチル−チアゾール−３−ブロミド等のチアゾリウム類を開示している：

（式ＩＩＩ）

ラットにおける経口投与による、及びビーグルにおける経口投与による３−ベンジルオキシカルボニルメチル−４−メチル−チアゾール−３−ブロミドの包括的薬物動態研究、並びにマウスにおける該化合物のｉｎ ｖｉｖｏでの組織分布から、該化合物がＡＧＥｓに対して優れた破壊効果を有することが示される。しかしながら、ＡＧＥに対して優れた破壊効果を有する、構造のより単純な化合物を開発及び探求することが依然として望まれている。

中国特許第２００６１０００２３９１．６号

本発明の目的は、既に形成されたＡＧＥｓを破壊してタンパク質の架橋を予防する、架橋タンパク質を破壊してタンパク質代謝を促進する、さらにはｉｎ ｖｉｖｏでのＡＧＥｓレベルの上昇によって生じる様々な病理変化を改善する（例えば、皮膚弾力性を増大させるか、若しくは皮膚のしわを減らす、糖尿病を治療する、又は糖尿病の後遺症、腎損傷、血管損傷、高血圧症、網膜症、水晶体タンパク質損傷、白内障、末梢神経疾患若しくは変形性関節症を治療若しくは緩和する、又は心血管系の硬化を改善する、又は慢性心不全を治療する、又は高齢患者及び糖尿病患者における心血管系薬剤に対する感度を増大させる）、ＡＧＥｓの小分子破壊剤を探求及び開発することである。また、タンパク質中の架橋構造の破壊剤が作用するグリコシル化タンパク質はヒトタンパク質に限定されず、作物の植物タンパク質又は動物タンパク質も含むため、該破壊剤は作物の植物タンパク質及び動物タンパク質の鮮度保持にさらに有用であり得る。

式Ｉの化合物が、タンパク質のグリコシル化によって引き起こされる多くの疾患の治療及び／又は予防、心血管系の硬化の改善、高齢患者及び糖尿病患者における心血管系薬剤に対する感度の増大、又は慢性心不全の治療に有用であり得ることが本発明者らによって見出されている。

式Ｉの化合物又はその溶媒和物の組成物が、特許文献１に開示されている好ましい化合物である３−ベンジルオキシカルボニルメチル−４−メチル−チアゾール−３−ブロミド（式ＩＩＩを参照されたい）と比較して、同程度のＡＧＥに対する破壊活性及びより安定な薬物動態特性を有することも見出されている。

したがって、本発明の第１の態様は、式Ｉ：

（式中、
ＭはＮａ又はＫであり、
ＸはＢｒ、Ｃｌ又はＩである）の化合物又はその溶媒和物に関する。

本発明の別の態様は、式Ｉの化合物を調製するプロセスであって、
ａ）４−メチルチアゾールと、クロロ酢酸又はブロモ酢酸とを反応させること：

（式中、ＸはＢｒ又はＣｌ又はＩである）、及び
ｂ）式ＩＩの化合物と塩基とを反応させて、式Ｉの化合物を得ること：

（式中、
ＭはＮａ又はＫであり、
ＸはＢｒ又はＣｌ又はＩである）を含む、プロセスに関する。

３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロミドナトリウム塩のＸ線回折による構造図である。

上記の方法に使用される塩基としては、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明のさらに別の態様は、少なくとも１つの式Ｉの化合物、又はその溶媒和物、組成物に一般に使用される担体又は賦形剤を含む組成物に関する。該担体又は賦形剤としては、薬剤、化粧品又は食品に一般に使用される担体又は賦形剤が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の一態様は、タンパク質グリコシル化によって引き起こされる様々な疾患の予防及び／又は治療のための薬剤の製造への少なくとも１つの式Ｉの化合物、又はその溶媒和物の使用に関する。

本発明は、タンパク質グリコシル化によって引き起こされる様々な疾患を予防及び／又は治療する方法であって、予防及び／又は治療を必要とする患者に、少なくとも１つの式Ｉの化合物、又はその溶媒和物を予防的及び／又は治療的に有効な量投与することを含む、方法にさらに関する。

本発明の破壊剤が作用するグリコシル化タンパク質はヒトタンパク質に限定されず、作物の植物タンパク質又は動物タンパク質も含むため、本発明の破壊剤又はその組成物は、さらに鮮度保持に使用され得る。

本発明によると、本発明の式Ｉの化合物又はその溶媒和物は、好ましくは以下の化合物である：

本発明の組成物は、例えば医薬組成物若しくは化粧品組成物又は他の形態であり得る。

本発明の医薬組成物は、有効量の本発明の式Ｉの化合物又はその溶媒和物、及び１つ又は複数の好適な薬学的に許容可能な担体を含む。該薬学的に許容可能な担体としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、リン酸塩等の緩衝剤、グリセリン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、グリセリンによって部分的にエステル化された飽和植物性脂肪酸の混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム等の塩又は電解質、ポリビニルピロリドン、セルロース系材料、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、蜜ろう及びラノリンが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の化合物は、架橋タンパク質の強力な破壊剤の類であり、グリコシル化タンパク質を破壊する良好な能力を有し、したがって（ｉ）皮膚弾力性を増大させるか、又は皮膚のしわを減らす際、（ｉｉ）糖尿病を治療するため、（ｉｉｉ）糖尿病の後遺症を治療又は緩和するため、（ｉｖ）腎損傷を治療又は緩和するため、（ｖ）血管損傷を治療又は緩和するため、（ｖｉ）高血圧症を治療又は緩和するため、（ｖｉｉ）網膜症を治療又は緩和するため、（ｖｉｉｉ）水晶体タンパク質損傷を治療又は緩和するため、（ｉｘ）白内障を治療又は緩和するため、（ｘ）末梢神経疾患を治療又は緩和するため、（ｘｉ）変形性関節症を治療又は緩和するために使用することができるが、これに限定されない。

本発明の化合物は、心血管系の硬化を十分に改善することができる。

本発明の化合物は、高齢患者及び糖尿病患者における心血管系薬剤に対する感度を十分に改善することができる。

本発明の化合物は、慢性心不全を治療するために使用することができる。

本発明の化合物は、口腔内での非酵素的グリコシル化によって引き起こされる歯の着色を予防するか、又は回復させるためにさらに使用することができる。本発明の化合物の投与計画は、使用目的に応じて変更することができる。

口腔内で起こる非酵素的反応は、歯の着色をもたらし得る。現在使用されている抗歯垢形成剤は、このグリコシル化反応、さらには歯の着色を加速し得る。最近では、抗歯垢形成特性を有するカチオン性殺菌剤類が従来の口腔清掃において使用されている。これらのカチオン性殺菌剤としては、アレキシジン、塩化セチルピリジニウム等が挙げられる。これらの薬剤はグリコシル化反応、すなわちメイラード反応の重要な段階を加速し、それにより歯の着色を加速し得る（Nordbo， J. Dent. Res.， 58:1429 (1979)）。さらに、クロルヘキシジン及び塩化ベンザルコニウムがグリコシル化反応（褐変反応）を触媒し得ることがｉｎ ｖｉｔｒｏで観察されると報告されている。糖及びアミノ酸を含有する混合物に添加したクロルヘキシジンは、メイラード反応に起因する着色を加速する。

上記の理由から、本発明の化合物及びそれを含む医薬組成物は、口腔内で使用することができる。特に好適な剤型は、上記薬剤を加えた含嗽液及び練り歯磨きである。

本発明の化合物の上述の使用に関して、適切な形態の非毒性かつ薬学的に許容可能な担体を、かかる含嗽液及び練り歯磨きを調合するために使用することができる。

本発明の化合物を含む医薬組成物は、経口投与、噴霧吸入、直腸投与、経鼻薬物送達、口腔投与、局所投与、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、脳室内、胸骨内及び頭蓋内注射若しくは注入等の非経口投与、又は外植リザーバー投与といった方法のいずれかで投与することができるが、経口投与、腹腔内投与又は静脈内投与が好ましい。

経口投与については、本発明の化合物は錠剤、カプセル、水溶液又は水懸濁液を含むが、これらに限定されない、経口投与に好適な任意の投薬形態に成型することができる。錠剤剤型に有用な担体としては概して、ラクトース及びコーンスターチが挙げられ、ステアリン酸マグネシウム等の滑剤も使用することができる。カプセル剤型に有用な希釈剤としては概して、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。水性懸濁液剤型は概して、活性成分を適当な乳化剤及び懸濁剤と混合することによって成型される。必要に応じて、甘味剤、香味剤又は着色剤を上記経口製剤に添加してもよい。

特に患部面又は外用の薬剤が容易に到達することができる器官（眼、皮膚又は腸管下部等）の治療のための局所投与については、本発明の化合物は、患部面又は器官に応じて、局所投与に好適な様々な剤型に成型することができる。詳細な説明は以下の通りである：

眼に局所投与する場合、本発明の化合物は微粒子懸濁液又は溶液の形態へと調合することができ、ここで使用される担体は、塩化ベンジルアルカノール等の保存料を含む／含まない、決まった（certain）ｐＨの無菌等張食塩水である。眼に投与する場合、化合物をワセリン軟膏等の軟膏へと調合することもできる。

皮膚に局所投与する場合、本発明の化合物は、軟膏、ローション又はクリーム等の好適な形態へと調合することができ、ここでは活性成分は１つ又は複数の担体中に懸濁又は溶解させる。軟膏剤型に使用される担体としては、鉱物油、流動ワセリン、白色ワセリン（petrolatum album）、プロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、乳化ろう及び水が挙げられるが、これらに限定されない。ローション剤型又はクリーム剤型に使用される担体としては、鉱物油、モノステアリン酸ソルビタン、Ｔｗｅｅｎ ６０、セチルエステルワックス、オレイル芳香族アルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の化合物は、無菌注射用水又は油懸濁液、及び無菌注射液を含む無菌注射用製剤の形態で投与することもできる。使用することができる担体及び溶剤としては、水、リンガー溶液及び生理食塩液が挙げられる。モノグリセリド又はジグリセリド等の無菌不揮発性油も溶剤又は懸濁媒体として使用することができる。

さらに、本発明の化合物の投与量及び投与方法は、被験体の年齢、体重、性別、身体的健康状態、栄養状態、使用される化合物の活性、適用期間、代謝率、疾患の重篤度、及び医師の主観的判断を含む多くの因子によって決まることに注目されたい。好ましい投与量は０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲内であり、最も好ましい投与量は２０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜３０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲内である。

以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を説明するために与えられるが、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

化合物の融点はＳＲＹ−１モデル融点測定器によって測定したものであり、この温度は補正しなかった。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、BrukerのＡＲＸ４００又はUS VarianのＵｎｉｔｙ Ｉｎｏｖａ ６００モデルＮＭＲ分光器によって測定し、ＦＡＢ質量スペクトルはZabspectの高分解能質量分析計によって測定した。

実施例１：３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロミドの調製
１５．６ｇの４−メチルチアゾールを、５０ｍｌの無水アセトン中に溶解させた。混合物に２１ｇのブロモ酢酸を添加し、３日間攪拌し、濾過して固体を得た。次いで、エタノールからの再結晶によって白色の固体を得て、乾燥させて、２６ｇの生成物を７２％の収率で得た。融点＝２４０．６℃〜２４１．６℃。

ＭＳ［Ｍ］⁺＝１５８．２ｍ／ｅ；¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）２．４８（ｄ，３Ｈ）；５．５５（ｓ，２Ｈ）；８．０９（ｄ，１Ｈ）；１０．２５（ｄ，１Ｈ）；１４．０５（ｂｒｓ，１Ｈ）。

実施例２：３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムクロリドの調製
１５．６ｇの４−メチルチアゾールを、５０ｍｌの無水アセトン中に溶解させた。混合物に１５ｇのクロロ酢酸を添加し、５日間攪拌し、濾過して固体を得た。次いで、エタノールからの再結晶によって白色の固体を得て、乾燥させて、２０．４ｇの生成物を６６．９％の収率で得た。融点＝２６２．３℃〜２６３．６℃。

ＭＳ［Ｍ］⁺＝１５８．２ｍ／ｅ；¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）２．４２（ｄ，３Ｈ）；４．８４（ｓ，２Ｈ）；７．９３（ｄ，１Ｈ）；１０．０１（ｄ，１Ｈ）；１３．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）。

実施例３：３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロミドナトリウム（Ａ）の調製
白色の固体である３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロミド２０ｇを、９０ｍｌ〜１００ｍｌの無水メタノール中に懸濁させた。次いで、懸濁液に等モル量の炭酸水素ナトリウムを添加し、室温で８時間攪拌し、濾過した。母液に１５０ｍｌの無水エタノールを添加し、静置して結晶を沈殿させて、１５ｇの生成物を白色の結晶として７５％の収率で得た。

ＭＳ［Ｍ］⁺＝１５８．２ｍ／ｅ；¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）２．５０（ｄ，３Ｈ）；４．８２（ｓ，２Ｈ）；７．９３（ｄ，１Ｈ）；１０．００（ｄ，１Ｈ）。

元素分析：Ｃ₆Ｈ₇ＮＯ₂ＳＢｒ（２６０．０８）、理論値：Ｃ、２７．７１％；Ｈ、２．７１％；Ｎ、５．３９％；Ｂｒ、３０．７２％。

実測値：Ｃ、２７．５０％；Ｈ、２．８３６％；Ｎ、５．３０４％；Ｂｒ、３０．８９１％。

Ｘ線単結晶回折による結晶構造の測定
白色の結晶である３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロミドナトリウム５ｍｇを、１ｍｌの無水エタノール中に加熱しながら溶解させて、無色の溶液を得た。溶液を濾過して、濾液をcalorstatのオーブン内で３０℃で５日間静置し、白色の柱状結晶をゆっくりと沈殿させた。結晶粒がゆっくりと成長して単結晶が形成された後、その結晶構造をＸ線単結晶回折法を用いて測定した。この構造を図１に示す。

結晶学的データ：Ｃ₁₂Ｈ₁₄Ｂｒ₂Ｎ₂Ｎａ₂Ｏ₄Ｓ₂、Ｍｒ＝５２０．２０、三斜晶系、空間群Ｐ−１、結晶学的パラメータ：ａ＝８．９０００（１８）Å、α＝９２．８２（３）°、ｂ＝９．４０９５（１９）Å、β＝１０９．００（３）°、ｃ＝１２．０２８（２）Å、δ＝１０４．１１（３）°。

実施例４：３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムクロリドナトリウムの調製
白色の結晶である３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムクロリド２０ｇを、９０ｍｌ〜１２０ｍｌの無水メタノール中に懸濁させた。次いで、懸濁液に等モル量の炭酸水素ナトリウムを添加し、室温で８時間攪拌し、濾過した。次いで、濾液に１５０ｍｌの無水エタノールを添加し、静置して結晶を沈殿させて、１９ｇの生成物を白色の結晶として７９％の収率で得た。

実施例５：ＡＧＥ−ＢＳＡ−コラーゲン架橋構造の破壊に関するＥＬＩＳＡスクリーニング試験
ＡＧＥ架橋構造を、ＡＧＥ−ＢＳＡを９６ウェルＥＬＩＳＡプレート上にコーティングしたラット尾コラーゲンに対して架橋することによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで作製した。ＥＬＩＳＡ法を用いて、ＡＧＥ架橋に対する化合物の破壊効果を評価した。

尾コラーゲンコーティング９６ウェルＥＬＩＳＡプレートの作製：
正常Ｗｉｓｔｅｒラット（体重２００±２０ｇ）をすばやく屠殺し、尾を切り取って、尾コラーゲンを４℃の温度で以下の通りに調製した。尾腱コラーゲン原線維を採取し、生理食塩水で洗浄して、非コラーゲン原線維組織を剥離した。再蒸留水で３回すすぎ、粉砕して、０．１％氷酢酸中に、頻繁に振とうしながら４℃で１週間浸漬した。最後に、浸液を８０００ｇで３０分間の遠心分離にかけ、上清のコラーゲン溶液を回収した。希釈後、タンパク質含量を測定した。９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Costar）を、コラーゲン溶液を用いて、１ウェル当たり７０μｇのコラーゲン量で、４℃で２４時間十分にウェルをコーティングした後、コーティング溶液を捨てた。プレートを無菌条件下で空気乾燥させて、劣化防止フィルムでコーティングし、最後に使用のために４℃で保管した。

ＡＧＥ−ＢＳＡの調製：
０．２Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中５０ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンＢＳＡ（Ｖ）（Roch）及び０．５Ｍのグルコースを含有する溶液を、無菌条件下、３７℃で暗所において３ヶ月〜４ヶ月間インキュベートし、それによりグリコシル化ＢＳＡ、すなわちＢＳＡ−ＡＧＥを形成した。同時に、非グリコシル化ＢＳＡをグルコース無添加ＢＳＡを用いて調製した。次いで、ＢＳＡ−ＡＧＥ溶液を０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して透析して、未反応グルコースを除去した。蛍光スキャニング（Ｅｘｉ／Ｅｍ（３９５ｎｍ／４６０ｎｍ））及びＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いてＢＳＡ−ＡＧＥの形成を検査し、ローリー法によってタンパク質濃度を求めた。

アッセイのプロトコル：
尾コラーゲンコーティング９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で１時間十分ウェルを処理して、酸性のコラーゲンを中和した。次いで、プレートをＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（PIERCE）を用いて３７℃で１時間ブロッキングして、各回の洗浄につき１分間振とうしながらＰＢＳＴ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で３回洗浄した。ＡＧＥ−ＢＳＡを、最大の架橋を得るのに必要な濃度までＰＢＳで希釈した。１００μｌのＡＧＥ−ＢＳＡ溶液を９６ウェルプレートのＡ、Ｂ、Ｃ及びＤとラベル表示された列のウェルに添加し、同じ濃度のＢＳＡ溶液をＥ、Ｆ、Ｇ及びＨとラベル表示された列のウェルに添加した。各列の最初の３つのウェルは、試薬ブランクウェルを作る目的で、ＰＢＳで満たした。プレートを３７℃で４時間インキュベートしてコラーゲンを架橋させ、各回の洗浄につき１分間振とうしながらＰＢＳＴで４回洗浄した。試験化合物をｐＨ７．４のＰＢＳで希釈した。試験化合物を、４連のＡＧＥ−ＢＳＡ架橋ウェル及び４連のＢＳＡウェルに１００μｌ／ウェルの量で添加した。非破壊対照として、ＰＢＳを１００μｌ／ウェルの量で同じように添加した。プレートを３７℃で１６時間インキュベートし、各回の洗浄につき１分間振とうしながらＰＢＳＴで４回洗浄した。８０μｌ／ウェルのウサギ抗ＢＳＡ抗体（１：５００）をウェルに添加して、プレートを３７℃で５０分間インキュベートした。プレートを各回の洗浄につき１分間振とうしながらＰＢＳＴで４回洗浄した後、８０μｌ／ウェルのセイヨウワサビペルオキシターゼ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：１０００）をウェルに添加した。プレートを３７℃で５０分間インキュベートした後、各回の洗浄につき１分間振とうしながらＰＢＳＴで３回洗浄した。１００μｌ／ウェルのＴＭＢ基質（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）をウェルに添加した。プレートを暗所、室温で２０分間インキュベートした。２Ｍ Ｈ₂ＳＯ₄を用いて反応を終わらせた。反応後１０分以内に、光学密度（ＯＤ）をBOBRADのＭｏｄｅｌ ５５０プレートリーダーで、プレートのブランクウェルを０に設定して４５０ｎｍで読み取った。

データ分析：
平均光学密度（ＯＤ）値は４連の値から算出した。
補正ＯＤ＝ＡＧＥ−ＢＳＡウェルの平均ＯＤ − ＢＳＡウェルの平均ＯＤ

破壊率はＯＤの減少率（パーセント）によって表した：
［（ＰＢＳウェルの平均ＯＤ − 試験化合物ウェルの平均ＯＤ）／ＰＢＳウェルの平均ＯＤ］×１００％

上記プロトコルに従って求めた０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．３ｍｍｏｌ／Ｌ又は１ｍｍｏｌ／Ｌの濃度、又はより低濃度での試験化合物の破壊率を表１に示す（結果は４つ以上のスクリーニング結果の平均値である）。

実施例６：赤血球表面上へのＩｇＧ架橋のｉｎ ｖｉｔｒｏ破壊に関するアッセイ
血球の処理方法：
麻酔後の１６週齢の糖尿病ラットの頚動脈から血液を採取し、抗凝固のためにヘパリンを添加し、４℃及び１０００ｇで３分間遠心分離して、下層の赤血球（ＲＢＣ）を得た。０．１ｍｏｌ／ＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄した（１回毎に（per time）４℃及び１０００ｇで３分間遠心分離した）。下層のＲＢＣを実験に使用した。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ投与：
０．１ｍｏｌ／Ｌの等浸透圧ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を、陰性対照として用い、また、試験する化合物の薬液を種々の濃度で形成するために溶剤として用いた。薬液又は溶剤対照９００μｌ当たり１００μｌのＲＢＣを添加して、３７℃で１６時間〜１８時間軽く（slightly）振とうした。１０００ｇ及び４℃で３分間遠心分離して、上清を捨てた。０．１ｍｏｌ／ＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いてプレートを４回洗浄し、残留化合物を除去した。１０００ｇ及び４℃で３分間遠心分離して、下層のＲＢＣを得た。これを１：１００に希釈してＥＬＩＳＡアッセイに使用した。

ＲＢＣ表面上に架橋したＩｇＧ含量に関する免疫吸着アッセイのプロトコル：
Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ−ＨＡ ０．４５μｍ ９６ウェルマイクロタイタープレート（Millipore）を、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（３００μｌ／ウェル）を用いて３７℃で１時間ブロッキングした。次いで、５ｍｍＨｇの減圧下で乾燥させて、プレートをＰＢＳＴで３回、０．１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄した（プレートを１回毎に１分間振とうした）。試験するＲＢＣを添加し（５０μｌ／ウェル）、ＰＢＳバックグラウンド対照ウェルを設定した（ＯＤ０）。減圧下で吸引乾燥して、０．１ｍｏｌ／ＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）１５０μｌで４回洗浄した（プレートを１回毎に１分間振とうした）。減圧下で吸引乾燥した後、１：５００希釈のヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（５０μｌ／ウェル）を添加し、室温で２時間静置して、吸引乾燥した。０．１ｍｏｌ／ＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）１５０μｌ／ウェルで３回洗浄した（プレートを１回毎に１分間振とうした）。吸引乾燥して、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）基質着色溶液（１００μｌ／ウェル）を添加して、遮光下、室温で３０分間静置し、２ｍｏｌ／ＬのＨ₂ＳＯ₄（１００μｌ／ウェル）を用いて反応を終わらせた。反応液を即座に取り出し（１５０μｌ／ウェル）、標準（normal）９６ウェル酵素標識プレートに移し、ＯＤ値を４９０ｎｍで測定した。

試験化合物の破壊率の算出：
補正ＯＤ＝試験するＲＢＣ試料の平均ＯＤ − ＲＢＣを含まないＰＢＳバックグラウンドウェルの平均ＯＤであり、化合物の破壊率は、ＯＤ_490nmの減少率（パーセント）：（ＰＢＳウェルのＯＤ_490nm − 試験する化合物のＯＤ_490nm）／ＰＢＳウェルのＯＤ_490nm×１００％として表される。

実施例７：ラットにおける血管コンプライアンスの改善に関するアッセイ
ラットをペントバルビタールナトリウム注射（０．８％、５０ｍｇ／ｋｇ）によって麻酔して、気管カニューレの挿入、ヘパリン抗凝固、血圧を記録するために圧力トランスデューサを介してBiopacの生理記録計と連絡した右総頸動脈カニューレの挿入を行った。胸骨の中央で開胸を行い、上行大動脈を分離し、これをパルスドップラープローブで覆い、パルスドップラー血流計を、Biopacのソフトウェア（Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅ、バージョン３）による血行動態パラメータ：収縮期血圧（ＳＢＰ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）、心拍（ＨＲ）、心拍出量（ＣＯ）、心係数（ＣＩ）、全末梢抵抗（ＴＰＲ）、全末梢抵抗係数（ＴＰＲ係数）、一回拍出量（ＳＶ）及び全身動脈コンプライアンス（ＳＡＣ）等のリアルタイム記録及び算出のためにBiopacの生理記録計に接続した。１０分間の術後安定化の後、これらのパラメータを継続的に記録し、３０秒間の平均値をこれらのパラメータの測定値として用いた。

幾つかの血行動態パラメータの算出のための式：
ＴＰＲ＝平均動脈圧（ＭＡＰ）／ＣＯ
ＳＡＣ＝ＳＶ／（ＳＢＰ − ＤＢＰ）

正常対照と比較すると、糖尿病モデルラットは、体重及び心拍において有意な減少を示すが（Ｐ＜０．０１）、収縮期圧及び拡張期圧は有意な変化を示さず（表１−１）、各々の器官は器官係数の有意な増大を示す（Ｐ＜０．０１）（表１−２）。モデルラットと比較すると、薬剤投与群のラットは体重、心拍、収縮期圧、拡張期圧及び器官係数において有意な変化を示さない。

ドップラー血流計を使用して、ラットにおけるＳＢＰ、ＤＢＰ、ＨＲを測定し、ラットのＣＯ、ＣＩ及びＳＡＣを算出した。正常ラットと比較して、糖尿病ラットがＣＯ、ＣＩ及びＳＡＣにおいて有意な減少を示し（Ｐ＜０．０１）、ＴＰＲ及びＴＰＲＩにおいて有意な増大を示す（Ｐ＜０．０１）ことが表１−３から分かる。これにより、糖尿病ラットが全末梢抵抗の有意な増大、並びに心拍出量及び全身動脈コンプライアンスの有意な減少を有し、心血管系の硬化、並びに長期糖尿病ラットにおける他の構造障害及び機能障害を示すことが示唆される。糖尿病ラットのモデル群と比較すると、薬剤投与の４週間後、薬剤投与群の全てのラットがＣＯ、ＣＩ及びＳＡＣにおいて有意な増大を示し、ＴＰＲ及びＴＰＲＩにおいて有意な減少を示す。これにより、化合物Ａが長期糖尿病ラットにおいて血管硬化を改善する効果を有することが示唆される。

実施例８：ラットにおける左室機能の改善に関するアッセイ
ラットをペントバルビタールナトリウム注射（０．８％、５０ｍｇ／ｋｇ）によって麻酔して、気管カニューレの挿入、ヘパリン抗凝固、左室圧の経過を記録するために圧力トランスデューサを介してBiopacの生理記録計と連絡した、左室への右総頸動脈カニューレの挿入を行った。Biopacのソフトウェア（Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅ、バージョン３）を、心拍、左室収縮期圧ピーク（ＬＶＳＰ）、左室内圧の最大の変化率（±ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ）、左室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）のリアルタイム記録に使用した。１０分間の術後安定化の後、上記のパラメータを継続的に記録し、３０秒間の平均値をこれらのパラメータの測定値として用いた。結果を表１−４に示す。

正常対照群と比較すると、糖尿病群のラットは心拍、ＬＶＳＰ、＋ｄｐ／ｄｔ及び−ｄｐ／ｄｔにおいて有意な減少を示す（Ｐ＜０．０１）一方で、ＬＶＥＤＰにおいて有意な増大を示し（Ｐ＜０．０１）、糖尿病ラットの左室機能障害が示唆される。糖尿病モデル群と比較すると、薬剤投与の４週間後、薬剤投与群の全てのラットは＋ｄｐ／ｄｔの有意な増大を示し、ＬＶＥＤＰの有意な減少を示し（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）、Ａ ９ｍｇ／ｋｇ群を除いてＬＶＳＰの有意な増大を示し（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）、Ａ ９ｍｇ／ｋｇ群について−ｄｐ／ｄｔの有意な増大を示す（Ｐ＜０．０５）（Ａ １８ｍｇ／ｋｇ群及びＡ ３６ｍｇ／ｋｇ群についてはＰ値はそれぞれ０．０５５及び０．０５７であり、同様に増大傾向を示している）。これらのことから、Ａは糖尿病によって引き起こされる心臓の収縮期機能障害を改善することが可能であり、左室機能の改善において有意な効果を有することが示唆される（表１−４）。

実施例９：ラット尾コラーゲンの溶解性に関する実験
尾腱コラーゲン原線維を氷浴下で採取し、生理食塩水で洗浄して、非コラーゲン原線維組織を剥離した。これを凍結乾燥し、使用に備えて−７０℃で保管した。

凍結乾燥した尾コラーゲンを粉砕し、２ｍｇの尾コラーゲンを正確に秤量して、１０μｇ／ｍｌのペプシン（溶媒：０．５ｍｏｌ／Ｌの酢酸）を尾コラーゲン１ｍｇ当たり５μｇのペプシンという最終濃度に到達するまで添加し、４℃で２時間振とうした（shanken）。４００００ｇで６０分間遠心分離して、上清の体積を正確に測定した後、５００μｌの上清及び全沈殿物を別々に５ｍｌ容アンプルに移した。６ｍｏｌ／ＬのＨＣｌを添加し、密閉して、calorstatのオーブン内に入れ、１１０℃で２４時間加水分解した。

加水分解溶液中のヒドロキシプロリン濃度の測定：
（１）１００μｌの加水分解溶液を各々のアンプルから取り出し、１０ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ約５０μｌをｐＨ６．０となるまで添加し、クエン酸緩衝液（５０ｇのクエン酸・Ｈ₂Ｏ、７２．３６ｇの無水酢酸ナトリウム、３４ｇのＮａＯＨ、１１．５２ｍｌの氷酢酸を混合し、水を１２００ｍｌとなるまで添加し、３００ｍｌのｎ−プロパノールを添加した）８５０μｌを添加した。（２）クロラミンＴ（１．４１ｇのクロラミンＴを１０ｍｌの蒸留水に溶解させた後、１０ｍｌのｎ−プロパノール及び８０ｍｌのクエン酸緩衝液を別々に添加した）５００μｌを添加して、均一に混合し、室温で１０分間反応を行った。（３）３．１５ｍｏｌ／Ｌの過塩素酸５００μｌを添加して、即座に室温で５分間混合した。（４）１０％Ｐ−ＤＭＡＢ（３．１５ｍｏｌ／Ｌの過塩素酸２．６ｍｌを添加して溶解させた後、ｎ−プロパノールで１０ｍｌとなるまで希釈した、１ｇのｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド、即時使用可５００μｌを添加して、即座に７５℃の水浴で１０分間混合した。（５）反応溶液を即座に氷水中で冷却して、ＥＬＩＡＳＡによって吸光度値を５７０ｎｍで測定した。（６）加水分解溶液中のヒドロキシプロリン濃度を、それに応じて共時的に測定したヒドロキシプロリンの検量線（０μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ及び６μｇ／ｍｌ）を用いて算出した。尾コラーゲンの溶解性は、以下の式を用いて得られる：
尾コラーゲンの溶解性（％）＝上清の全ヒドロキシプロリン含量／（上清のヒドロキシプロリン含量 ＋ 沈殿物の全ヒドロキシプロリン含量）×１００％

正常対照群と比較すると、糖尿病モデル群のラットは、尾コラーゲン溶解性の有意な減少を示す（１９．７±７．２％対７９．８±１２．０％、Ｐ＜０．０１）。Ａ １８ｍｇ／ｋｇ群及びＡ ３６ｍｇ／ｋｇ群は、糖尿病モデル群と比較すると、糖尿病ラットにおいて尾コラーゲン溶解性の有意な増大を示す（３３．７±１７．８％、３７．５±１１．１％対１９．７±７．２％、Ｐ＜０．０１）。

実施例１０：ラットにおける心筋コラーゲン溶解性の増大に関する実験
血管コンプライアンス実験の終了後、各々のラットの心臓を取り出して、心耳及び右室を取り除き、左室のみを残すようにトリミングした。トリミングした組織ブロックを乳鉢に入れ、少量の液体窒素を添加して、すばやくすり潰した。少量の液体窒素を再度添加して組織を軟らかくし、続けてすりつぶして細かい粉末状にし、使用に備えて−７０℃で保管した。約１００ｍｇの心筋を秤量し、２００μｇ／ｍｌのペプシン（溶媒：０．５ｍｏｌ／Ｌ酢酸）１ｍｌを添加して、３７℃でそれぞれ２時間及び２４時間振とうし、４００００ｇで６０分間遠心分離した。２時間及び２４時間のペプシン消化溶液の上清を別々に取り、加水分解し、ヒドロキシプロリン含量を求めるために測定した（加水分解及び測定の方法は上述したものと同じである）。心筋コラーゲンの溶解性は、以下の式によって算出される：
心筋コラーゲンの溶解性（％）＝２時間のペプシン消化溶液の上清のヒドロキシプロリン含量／２４時間のペプシン消化溶液の上清のヒドロキシプロリン含量×１００％

正常群と比較すると、糖尿病モデル群のラットは、左室心筋コラーゲン溶解性の有意な減少を示す（４２．８±４．３％対６８．９±１４．１％、Ｐ＜０．０１）。Ａ １８ｍｇ／ｋｇ群は、糖尿病モデル群と比較すると、糖尿病ラットにおいて心筋コラーゲン溶解性の有意な増大を示す（５４．７±１１．０％、５３．７±１１．９％、５７．７±７．３％対４２．８±４．３％、Ｐ＜０．０１）。

実施例５〜実施例１０の結果から、化合物ＡがＡＧＥｓの架橋構造をｉｎ ｖｉｔｒｏで破壊し、長期糖尿病ラットにおける大動脈、左室心筋及び腎臓中のＡＧＥｓ蛍光含量を有意に減少させ、一方で心筋コラーゲン及び尾コラーゲンの溶解性を改善し、ラットにおける大動脈コンプライアンスを改善し、全末梢抵抗を低減し、心拍出量を増大させ、左室機能を有意に改善する効果を有することが示唆される。したがって、化合物Ａは既に形成されたＡＧＥ架橋を破壊し、血管構造を再構築し、糖尿病によって誘発される心血管系の硬化及び機能障害を回復させることができ、新規のＡＧＥｓ破壊剤である。

実施例１１：高齢患者及び糖尿病患者における心血管系薬剤に対する感度の向上に関する実験
ニフェジピンの血圧降下効果に対するＡＧＥ破壊剤の影響についての実験を、糖尿病−高血圧症ラットモデルに対して行った。試験動物及び糖尿病−高血圧症モデルは、対照群と比較することにより、モデルが確立されたことを確認して選択したラットであった。実験の間、動物は自由に食物を摂取し、いかなる血糖降下薬又は血圧降下薬の介入も受けなかった。

動物のグループ分け及び投与方法：
化合物Ａを蒸留水中に溶解させ、使用可能な状態にする。ラットを無作為に糖尿病−高血圧症対照（ＤＭ−ＨＴＮ）群と、Ａ（１８ｍｇ／ｋｇ）群とにグループ分けした。薬物は４週間続けて１日に１回胃内投与し、糖尿病−高血圧症対照群には同量の蒸留水を投与した。実験の終了後、血液試料を採取し、胸部大動脈、肝臓、腎臓を使用に備えて−７０℃で保管し、組織生化学的指標、及び遺伝子発現に関するアッセイに使用した。腎臓の別の部分を４％パラホルムアルデヒドで固定し、病理染色に使用した。

ニフェジピン溶液の調製：
ニフェジピン粉末をＤＭＳＯに配合し、５ｍｇ／ｍｌの溶液を形成した後、１５％エタノール−１０％ＤＭＳＯ−２５％ＰＥＧ４００で希釈して、５００μｇ／ｍｌの溶液を調製し、再度希釈して、１２５μｇ／ｍｌ、６２．５μｇ／ｍｌ、３１．２５μｇ／ｍｌ、１５．６２μｇ／ｍｌ、７．８μｇ／ｍｌの溶液を調製した。

ニフェジピンの血圧降下効果に対するＡＧＥｓ破壊剤の影響を研究する方法
ラットをウレタン−クロラロース混合物によって腹腔内麻酔して、ヘパリン抗凝固、圧力トランスデューサを介してBiopacの生理記録計と連絡した右総頸動脈カニューレの挿入を行った。右大腿静脈に定置した針によって、ニフェジピン溶液を５回に分けて濃度の低いものから高いものへという順番でゆっくりと注射した。動脈収縮期圧、拡張期圧、脈圧及び心拍の変化を継続的に記録した。

糖尿病−高血圧症ラットにおける血圧に対するＡＧＥｓ破壊剤の影響
ラットにおいてｉｎ ｖｉｖｏで測定した血圧の結果から、化合物Ａを４週間投与した糖尿病−高血圧症ラットが心拍及び血圧において有意な変化を与えないことが示される。このことから、ＡＧＥｓ破壊剤は糖尿病−高血圧症ラットの血圧に対して直接的な影響を有しないことが示唆される（表２−２）。

ニフェジピンの血圧降下効果に対するＡＧＥ破壊剤の影響
糖尿病−高血圧症ラットにおける血圧降下薬の血圧降下効果を、薬物を濃度の低いものから高いものへという勾配で投与することによって観察した。２回目の投与量のニフェジピン（１５．６２μｇ／ｍｌ）の投与から、化合物Ａ群は糖尿病−高血圧症モデル群と比較して増大した血圧降下効果を示し始めた。３回目の投与量（３１．２５μｇ／ｍｌ）を用いた時点で、化合物Ａ群のラットにおけるニフェジピンの血圧降下度は、モデル群より有意に高かった（１９．４９±１３．２９ｍｍＨｇ対９．３５±６．４６ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０５）。４回目の投与量（６２．５μｇ／ｍｌ）を用いた時点で、化合物Ａ群はモデル群と比較して向上した効果を示す（２９．９９±９．０６ｍｍＨｇ対１８．９２±１０．５４ｍｍＨｇ、Ｐ＜０．０５）。このことから、ＡＧＥｓを破壊する化合物Ａでの処理によって、糖尿病−高血圧症ラットのニフェジピンに対する感受性を向上させることができることが示唆される。

本実験では、糖尿病−高血圧症ラットにおける化合物Ａでの４週間の前処理の後、血圧降下薬を評価する古典的な方法を使用した。血管平滑筋細胞に作用する血圧降下ニフェジピンを、濃度の低いものから高いものへという勾配で投与したが、濃度の増大とともに、化合物Ａ群のラットに対するニフェジピンの血圧降下効果は高血圧症モデル群よりも良好となった。ニフェジピンの濃度を３１．２５μｇ／ｍｌまで増大させた時点で、ＡＧＥを破壊する化合物Ａの群における血圧降下度は、高血圧症モデル群との有意な統計学的差異を有していた。このことから、ＡＧＥを破壊する化合物Ａが確かにニフェジピンの血圧降下効果を向上させる効果を有し、高齢患者及び糖尿病患者における心血管系薬剤に対する感度を向上し得ることが示唆される。

実施例１２：慢性心不全の治療に関する薬力学的実験
動物のグループ分け及び投与方法：
第１のバッチ：２０週間ＮａＣｌ処理した心不全をモデル化した糖尿病ラットを、４つの群に分けた：モデル対照群（モデル対照）、薬物を１６週間続けて１日に１回投与した、バルサルタン群（ＶＡＬ、胃内、１０ｍｇ／ｋｇ）、化合物Ａ群（胃内、１８ｍｇ／ｋｇ）。薬力学的評価を非侵襲的心エコー図法を用いて行った。

第２のバッチ：２０週間ＮａＣｌ処理した心不全をモデル化した糖尿病ラット、及び共時的かつ慣習的に飲料水を与えた正常対照ラットを、５つの群に分けた：共時的かつ慣習的に飲料水を与えた正常対照ラット群（正常対照）、モデル対照群（モデル対照）、薬物を１０週間続けて１日に１回投与した、化合物Ａ群（胃内、９ｍｇ／ｋｇ）、化合物Ａ群（胃内、３６ｍｇ／ｋｇ）。左室機能についての薬力学的評価を、心室カテーテル法を用いて行った。

評価指標：
（１）形態的指標：左室後壁厚（ＬＶＰＷｄ）、左室拡張末期径（ＬＶＤｄ）、収縮末期径（ＬＶＤｓ）；（２）機能的指標：駆出率（ＥＦ）、短縮率（ＦＳ）、心室早期血流充満速度（Ｅ）、心房充満速度（Ａ）及びＥ／Ａ比；ドップラー組織画像；心尖部四腔断層像では、僧帽弁前尖弁輪部を試料採取点として用い、最大拡張早期血流速度（Ｅａピーク）、最大拡張後期血流速度（Ａａピーク）及びＥａ／Ａａ比は、左室全体の収縮運動及び拡張運動を反映していた。

ＳＰＳＳ統計ソフトウェアを使用してデータを分析及び処理し、全てのデータを平均±標準偏差（平均±ＳＤ）で表した。実験の結果では、群間差の有意性検定を一元配置分散分析（one-way ANOVA analysis）方法を用いて統計学的に扱い、Ｐ＜０．０５の場合の有意差を求めた。

第１のバッチのモデルの薬力学的評価の結果
心エコー図評価の結果：
形態的指標：モデル化の３０週目（投与の１０週目）に、心エコー図から、バルサルタン群（１０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物Ａ群（１８ｍｇ／ｋｇ）のラットが、飲料水によってＮａＣｌ処理した糖尿病モデルラットと比較して、１０週間の胃内投与の後、ＰＷｄのわずかな増大、並びにＬＶＤｄ及びＬＶＤｓのわずかな減少を示したことが示される。

モデル化の３６週目（投与の１６週目）に、心エコー図から、全ての投与群のラットが、飲料水によってＮａＣｌ処理した糖尿病モデルラットと比較して、１６週間の胃内投与の後、左室形態的指標の変化傾向において、モデル化の３０週目（投与の１０週目）に測定されたものと同様の結果を示したことが示される。

左室拡張期機能的指標：
モデル化の３０週目（投与の１０週目）に、心エコー図から、バルサルタン群（１０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物Ａ群（１８ｍｇ／ｋｇ）のラットが、飲料水によってＮａＣｌ処理した糖尿病モデルラットと比較して、１０週間の胃内投与の後、Ｅ／Ａ比の有意な減少を示し（モデル対照２．５±０．３１；バルサルタン群１．２４±０．３２；化合物Ａ群１．３２±０．３１、Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）、一方で、Ｅａ／Ａａ比が有意に増大した（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）ことが示される。これにより、モデル化の３０週目に、１０週間のバルサルタン及び化合物Ａの投与は、飲料水によってＮａＣｌ処理した糖尿病ラットにおいて左室拡張期機能を有意に改善し得ることが示唆される。

モデル化の３６週目（投与の１６週目）に、心エコー図から、バルサルタン群（１０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物Ａ群（１８ｍｇ／ｋｇ）のラットが、飲料水によってＮａＣｌ処理した糖尿病モデルラットと比較して、１６週間の胃内投与の後、Ｅ／Ａ比の有意な減少（モデル対照２．５±０．５２；バルサルタン群１．３２±０．２５；化合物Ａ群１．４５±０．１８、Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）を示したこと、及びバルサルタン（１０ｍｇ／ｋｇ）がラットにおいてＥａ／Ａａ比を有意に増大し得る（Ｐ＜０．０１）ことが示される。これにより、モデル化の３６週目に、１６週間のバルサルタン及び化合物Ａの投与は、飲料水によってＮａＣｌ処理した糖尿病ラットにおいて左室拡張期機能を有意に改善し得ることが示唆される。

第２のバッチのモデルの評価結果
化合物Ａ群のラットにおける左室機能及び血漿ＢＮＰレベルに対する影響
表３−１に示されるように、正常対照群と比較して、飲料水中のＮａＣｌで処理した糖尿病ラットは、＋ｄｐ／ｄｔ及び−ｄｐ／ｄｔの有意な減少を示し、一方で、ＬＶＥＤＰ及び血漿ＢＮＰレベルの有意な増大を示した。これにより、心室の収縮機能及び拡張機能の両方における有意な減少が示唆される。化合物Ａ群（９ｍｇ／ｋｇ及び３６ｍｇ／ｋｇ）のラットは全て、＋ｄｐ／ｄｔ及び−ｄｐ／ｄｔの有意な増大（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）並びにＬＶＥＤＰの有意な減少（Ｐ＜０．０１）を示した。このことから、化合物Ａが飲料水中のＮａＣｌで処理した糖尿病ラットにおいて、心室の拡張期機能を改善し得ることが示唆される。

Claims (6)

1. 式Ｉ：
   

   

   （式中、
   ＭはＮａ又はＫであり、
   ＸはＢｒ、Ｃｌ又はＩである）の化合物、
   又はその溶媒和物。
2. ３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムブロミドナトリウム塩、又は
   ３−カルボキシメチル−４−メチル−チアゾリウムクロリドナトリウム塩である、請求項１に記載の化合物。
3. 請求項１又は２に記載の化合物及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む組成物。
4. （ｉ）皮膚弾力性を改善するか、又は皮膚のしわを減らす製品、（ｉｉ）糖尿病を治療する製品、（ｉｉｉ）糖尿病の後遺症を治療又は緩和する製品、（ｉｖ）腎損傷を治療又は緩和する製品、（ｖ）血管損傷を治療又は緩和する製品、（ｖｉ）高血圧症を治療又は緩和する製品、（ｖｉｉ）網膜症を治療又は緩和する製品、（ｖｉｉｉ）水晶体タンパク質損傷を治療又は緩和する製品、（ｉｘ）白内障を治療又は緩和する製品、（ｘ）末梢神経疾患を治療又は緩和する製品、（ｘｉ）変形性関節症を治療又は緩和する製品を含むが、これらに限定されない、タンパク質老化に関連する疾患を治療又は緩和する製品の製造への請求項１又は２に記載の化合物の使用。
5. 動物においてｉｎ ｖｉｖｏでの歯の着色を回復させる経口製剤、又は歯の着色を予防するか、若しくは回復させる他の経口製剤の製造への請求項１又は２に記載の化合物の使用。
6. 作物の植物タンパク質又は動物タンパク質に対する老化防止剤の製造への請求項１又は２に記載の化合物の使用。

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