JP2012228203A - Deodorizing liquid, method for preparing the same, and preparation kit for the same - Google Patents
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Abstract
Description
この発明は、腐敗臭などの消臭に用いられる消臭液、その調製方法およびその調製キットに関する。 The present invention relates to a deodorant liquid used for deodorization such as rot odor, a preparation method thereof, and a preparation kit thereof.
従来、ゴミや屎尿などの臭いを消臭する方法として、オゾンによる酸化などの化学反応により臭い分子を無臭の成分に変える方法や、活性炭を用いて臭い分子を吸着させる方法が、周知である。さらにはまた、悪臭の元となる臭い分子をシクロデキストリン等の分子と複合化させることによって消臭する方法も、周知である。 Conventionally, as a method for deodorizing odors such as dust and manure, a method of changing odor molecules into odorless components by a chemical reaction such as oxidation by ozone, and a method of adsorbing odor molecules using activated carbon are well known. Furthermore, a method of deodorizing by combining a odor molecule that causes bad odor with a molecule such as cyclodextrin is also well known.
オゾンのような酸化剤などを使用する場合、金属製品に対して用いると、さびによる金属製品の劣化を招く恐れがある。また、腐敗臭などの有機性の悪臭を分解する成分は、人体に有害である場合が多い。活性炭は、高価であるにもかかわらず、交換を頻繁にしなければならないという問題がある。シクロデキストリンなどにより臭い分子を取り込む方法もまた、コストの高いものになりがちな上に、効果が持続しにくいという難点がある。
このような観点からすると、人体に対して安全であり、金属等を劣化させず、安価で持続性の高い消臭剤が、必要とされているということができよう。
When an oxidizing agent such as ozone is used, it may cause deterioration of the metal product due to rust when used on a metal product. In addition, components that decompose organic malodors such as spoiled odor are often harmful to the human body. Although activated carbon is expensive, there is a problem that it must be replaced frequently. Incorporating odorous molecules with cyclodextrin and the like also tends to be costly and has a drawback that the effect is difficult to sustain.
From this point of view, it can be said that there is a need for a deodorant that is safe for the human body, does not deteriorate metals, and is inexpensive and highly durable.
前記課題を解決するためのこの発明は、枯草菌を７．６×１０個／ｍｌ〜１．９×１０５個／ｍｌの菌体濃度で含む消臭液に関する。
前記消臭液において、前記枯草菌は、バチルス・アシドカルダリウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・フィルコロニカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｌｉｃｏｌｏｎｉｃｕｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・スパリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびバチルス・サブティリス亜種サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｕｂｓｐ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から成る群より選択される少なくとも１種の枯草菌である。
前記消臭液においてはまた、前記枯草菌は、活性状態にある。
This invention for solving the above-mentioned problems relates to a deodorizing solution containing Bacillus subtilis at a cell concentration of 7.6 × 10 5 cells / ml to 1.9 × 10 5 cells / ml.
In the deodorizing solution, the Bacillus subtilis may be Bacillus acidocaldarius, Bacillus albei, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus bilis, Bacillus bilis, Phyllolonicus (Bacillus ficilonicus), Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus sphaericus, Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) Is at least one B. subtilis selected from the group consisting of acillus subtilis subsp subtilis).
In the deodorant solution, the Bacillus subtilis is in an active state.
さらに、この発明は、前記消臭液の調製方法にも関する。
前記方法において、前記消臭液は、４．０×１０８個／ｍｌ以上であって１．０×１０９個／ｍｌ以下の菌体濃度である非活性状態の前記枯草菌を含む原液を希釈して７．６×１０個／ｍｌ〜１．９×１０５個／ｍｌの菌体濃度に希釈する希釈工程と、希釈した前記原液を４０℃〜６０℃で加熱することにより前記枯草菌を活性化させる活性化工程とを包含する。
Furthermore, this invention relates also to the preparation method of the said deodorizing liquid.
In the above method, the deodorizing solution is a stock solution containing the Bacillus subtilis in an inactive state having a cell concentration of 4.0 × 10 8 cells / ml or more and 1.0 × 10 9 cells / ml or less. The Bacillus subtilis is diluted by diluting and diluting to a cell concentration of 7.6 × 10 5 cells / ml to 1.9 × 10 5 cells / ml, and heating the diluted stock solution at 40 ° C. to 60 ° C. And an activation step of activating.
さらに、この発明は、前記調製方法を前記消臭液の使用者に知らせる手段を前記原液と共に含む消臭液調製キットに関する。 Furthermore, the present invention relates to a deodorant preparation kit including means for informing the user of the deodorant liquid together with the stock solution.
この発明の消臭液は、増殖させることが容易な枯草菌を使用するので、安価に大量生産することができる。また、枯草菌は、芽胞を形成する性質があり、耐熱性に優れているので、この消臭液とその希釈用の原液は、保管が容易である。さらに、この発明の消臭液は、７．６×１０個／ｍｌ〜１．９×１０５個／ｍｌの菌体濃度で枯草菌を含むことにより、枯草菌の速やかな増殖を可能にするため、消臭の原因となる菌類の働きを抑制することができ、効率よく悪臭を除去することができる。
この発明の消臭液の一態様において、枯草菌は、バチルス・アシドカルダリウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・フィルコロニカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｌｉｃｏｌｏｎｉｃｕｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・スパリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびバチルス・サブティリス亜種サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｕｂｓｐ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から成る群より選択される少なくとも１種の枯草菌であるため、人体に無害であり、環境に衛生上の悪影響を与えることがない。
また、この発明の消臭液に含まれる枯草菌は、活性状態であるため、散布されるとすぐに増殖して、消臭効果が速やかに現れる。
この発明の消臭液の調製方法では、非活性状態の枯草菌を４．０×１０８個／ｍｌ以上であって１．０×１０９個／ｍｌ以下の菌体濃度で含む原液から、消臭液が調製される。この原液は、菌体を高濃度で含有していることに加えて、菌体が非活性状態であることによって消臭液よりも保存安定性がさらに高いため、消臭液に代えて保存、輸送をする上において有利である。
この発明の消臭液調製用のキットでは、消臭液の調製方法を使用者に知らせる手段と消臭液の原液とを含むから、使用者が容易に消臭液を調製することが可能である。
Since the deodorizing liquid of the present invention uses Bacillus subtilis which is easy to grow, it can be mass-produced at low cost. In addition, Bacillus subtilis has a property of forming spores and is excellent in heat resistance. Therefore, the deodorant solution and the stock solution for dilution thereof are easy to store. Furthermore, the deodorizing solution of the present invention enables rapid growth of Bacillus subtilis by containing Bacillus subtilis at a cell concentration of 7.6 × 10 5 cells / ml to 1.9 × 10 5 cells / ml. Therefore, the function of fungi that cause deodorization can be suppressed, and malodor can be efficiently removed.
In one embodiment of the deodorant solution of the present invention, Bacillus subtilis is Bacillus acidocaldarius, Bacillus albei, Bacillus amyloliquefacis bis (Bacillus amyliquefacilis bres), ), Bacillus phyllonicus, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus sillius, Bacillus subtilis, Bacillus subtilis Species sub Since at least one of B. subtilis selected from the group consisting of Irisu (Bacillus subtilis subsp subtilis), harmless to the human body, it does not adversely affect the hygienic environment.
Moreover, since the Bacillus subtilis contained in the deodorizing liquid of this invention is an active state, it will proliferate as soon as it is sprayed, and a deodorizing effect will appear rapidly.
In the method for preparing a deodorant solution of the present invention, from a stock solution containing Bacillus subtilis in an inactive state at a cell concentration of 4.0 × 10 8 cells / ml or more and 1.0 × 10 9 cells / ml or less, A deodorant solution is prepared. In addition to containing the microbial cells at a high concentration, this stock solution has higher storage stability than the deodorant solution due to the inactive state of the microbial cells, so it is stored instead of the deodorant solution, This is advantageous for transportation.
The kit for preparing the deodorant liquid of the present invention includes means for informing the user of the method of preparing the deodorant liquid and a stock solution of the deodorant liquid, so that the user can easily prepare the deodorant liquid. is there.
この発明に係る消臭液は、７．６×１０個／ｍｌ以上であって１．９×１０５個／ｍｌ以下の菌体濃度である枯草菌を含む。菌類が増殖する際、増殖前の菌体数が大きいほど増殖後の菌体数も大きくなるのが一般的であるが、枯草菌は、増殖が始まる際に密集状態にある場合には増殖しないという性質があるため、この発明において、枯草菌の増殖に最適な濃度を決定した。本明細書中で、枯草菌の菌体数を示す数字は全て、有効数字２桁で記されている。ここで、枯草菌は、好ましくは、バチルス・アシドカルダリウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・フィルコロニカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｌｉｃｏｌｏｎｉｃｕｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・スパリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびバチルス・サブティリス亜種サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｕｂｓｐ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から成る群より選択される。枯草菌は、上記の群のうち１種を含むものであっても、２種以上を含むものであってもよい。好ましくは、枯草菌は、上記の群のうち１〜５種を含み、最も好ましくは、５種を含む。 The deodorizing liquid according to the present invention includes Bacillus subtilis having a cell concentration of 7.6 × 10 5 cells / ml or more and 1.9 × 10 5 cells / ml or less. When fungi grow, the larger the number of cells before growth, the larger the number of cells after growth, but Bacillus subtilis does not grow if it is in a dense state at the start of growth. In this invention, the optimum concentration for the growth of Bacillus subtilis was determined. In the present specification, all numbers indicating the number of cells of Bacillus subtilis are written in two significant digits. Here, Bacillus subtilis is preferably Bacillus acidocaldarius, Bacillus albei, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillis biscil, Colonicus (Bacillus ficilonicus), Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus sphaericus, Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) It is selected from the group consisting of illus subtilis subsp subtilis). Bacillus subtilis may contain 1 type in said group, or may contain 2 or more types. Preferably, Bacillus subtilis comprises 1 to 5 of the above group, and most preferably comprises 5.
好ましい消臭液の使用形態において、枯草菌は、活性状態にある。本明細書中において、枯草菌の「活性状態」とは、芽胞から発芽した状態を意味し、「非活性状態」とは、芽胞を形成した休眠状態を意味する。 In a preferred deodorant use form, Bacillus subtilis is in an active state. In the present specification, the “active state” of Bacillus subtilis means a state of germination from spores, and the “inactive state” means a dormant state in which spores are formed.
この発明に係る消臭液の調製方法においては、非活性状態の枯草菌を４．０×１０８個／ｍｌ以上であって１．０×１０９個／ｍｌ以下の菌体濃度で含む原液を、７．６×１０個／ｍｌ〜１．９×１０５個／ｍｌの菌体濃度にまで希釈し、加熱して活性化させることによって消臭液を得る。この原液は、保管の際に安定的である。この原液は、酢酸緩衝液や水などによって希釈することができる。水道水での希釈が、一般的には簡便である。
非活性状態にある枯草菌の活性化条件は、４０℃〜６０℃で２０分間〜６０分間の加熱であり、好ましくは、４５℃〜５０℃での加熱である。
上記条件で非活性状態の枯草菌を加熱することにより、枯草菌が芽胞から発芽し、栄養条件下で増殖可能な活性状態となる。ここで、栄養条件下とは、ソイビーンカゼインダイジェスト培地等の培養培地、あるいは生ゴミまたは屎尿等の、枯草菌が栄養を吸収し得る物質の存在下にあることを意味する。
In the method for preparing a deodorant solution according to the present invention, a stock solution containing Bacillus subtilis in an inactive state at a cell concentration of 4.0 × 10 8 cells / ml or more and 1.0 × 10 9 cells / ml or less. Is diluted to a cell concentration of 7.6 × 10 5 cells / ml to 1.9 × 10 5 cells / ml and activated by heating to obtain a deodorant solution. This stock solution is stable during storage. This stock solution can be diluted with acetate buffer or water. Dilution with tap water is generally convenient.
The activation condition of Bacillus subtilis in an inactive state is heating at 40 ° C. to 60 ° C. for 20 minutes to 60 minutes, and preferably heating at 45 ° C. to 50 ° C.
By heating an inactive Bacillus subtilis under the above conditions, Bacillus subtilis germinates from the spore and becomes an active state that can be grown under nutrient conditions. Here, the nutrient condition means that a culture medium such as a soy bean casein digest medium, or a substance such as raw garbage or manure that can be absorbed by Bacillus subtilis is present.
この発明に係るキットにおいては、消臭液を調製するための原液が、調製方法を使用者に知らせる手段と共に提供される。
使用者に知らせる手段としては、例えば、文字または絵によって調製方法が分かりやすく書いてある取り扱い説明書、原液の収容容器、原液を希釈する際に用いるための容器、それら容器に貼付するためのラベルなどが挙げられる。上記手段は、使用方法を説明した音声もしくは画像またはその両方を記録した、記録媒体であってもよい。
In the kit according to the present invention, a stock solution for preparing a deodorant solution is provided together with means for informing the user of the preparation method.
As means for notifying the user, for example, an instruction manual in which the preparation method is clearly written by letters or pictures, a container for storing the stock solution, a container for use when diluting the stock solution, and a label for sticking to these containers Etc. The above means may be a recording medium on which a sound and / or an image explaining how to use are recorded.
（枯草菌液Ａに含まれる枯草菌の菌体濃度測定）
枯草菌液Ａにおける枯草菌の菌体濃度を測定した。この枯草菌液Ａは、枯草菌以外の細菌および真菌を含んでいない。
（測定方法）
枯草菌液Ａに含まれる枯草菌の菌体濃度を、以下のように測定した。
（１）無菌条件下において、枯草菌液Ａを、滅菌水で４，０００倍に希釈し、さらに、高圧蒸気滅菌した０．１％Ｔｗｅｅｎ８０溶液による１０倍希釈を３回繰り返し、枯草菌液Ａの４×１０４倍、４×１０５倍および４×１０６倍の段階希釈系列を調製した。
（２）各段階希釈液０．５ｍｌを滅菌済みシャーレ３枚に移し、高圧蒸気滅菌し５０℃で保温してあったソイビーンカゼインダイジェスト寒天培地（和光純薬）２０ｍｌをシャーレの中に分注して軽く撹拌後、培地を固化させた。
（３）３０〜３５℃で２４時間培養し、コロニー数を計数した。
（結果）
菌数測定結果は、４×１０６倍の希釈液について、シャーレ１枚あたり９４個、８４個および１０４個であった。すなわち、平均するとシャーレ１枚あたり９４個であった。
従って、４，０００倍に希釈した枯草菌液Ａに含まれていた枯草菌の菌体濃度は、１．９×１０５個／ｍｌであり、原液の枯草菌液Ａの菌体濃度は、７．６×１０８個／ｍｌであった。
(Measurement of bacterial cell concentration of Bacillus subtilis contained in Bacillus subtilis solution A)
The cell concentration of Bacillus subtilis in Bacillus subtilis solution A was measured. This Bacillus subtilis solution A does not contain bacteria and fungi other than Bacillus subtilis.
(Measuring method)
The concentration of Bacillus subtilis contained in Bacillus subtilis solution A was measured as follows.
(1) Under aseptic conditions, Bacillus subtilis solution A is diluted 4,000 times with sterilized water, and further 10-fold dilution with 0.1% Tween 80 solution sterilized under high pressure steam is repeated three times. 4 × 10 4 fold, 4 × 10 5 fold and 4 × 10 6 fold serial dilution series were prepared.
(2) Transfer 0.5 ml of each serial dilution solution to 3 sterilized petri dishes, and dispense 20 ml of soy bean casein digest agar medium (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) that had been autoclaved and kept at 50 ° C into the petri dish. After stirring gently, the medium was solidified.
(3) The cells were cultured at 30 to 35 ° C. for 24 hours, and the number of colonies was counted.
(result)
The number-of-bacteria count results were 94, 84, and 104 per dish for a 4 × 10 6- fold dilution. In other words, the average number was 94 per petri dish.
Therefore, the concentration of Bacillus subtilis contained in Bacillus subtilis A diluted 4,000 times is 1.9 × 10 5 cells / ml, and the concentration of Bacillus subtilis A in the original solution is It was 7.6 × 10 8 pieces / ml.
（枯草菌液Ａの各希釈倍率における増殖実験）
（方法）
（１）実施例１で用いた枯草菌液Ａに対し、無菌条件下において、高圧蒸気滅菌したソイビーンカゼインダイジェスト培地（和光純薬）による１０倍希釈を繰り返し行い、１０〜１０７倍の段階希釈系列を調製した（実験１）。同様にして、１０倍、１０２倍、１０３倍、２×１０３倍、４×１０３倍、６×１０３倍、８×１０３倍及び１０４倍の段階希釈系列を調製した（実験２）。
（２）各希釈系列を４０℃で１時間加熱した後、３５℃で３６時間培養した。培養後、菌の増殖による培地の濁りを目視により判定した。
（結果）
実験１の結果を図１に示す。図１において、菌の増殖の項目を「＋」と記載したものは増殖による濁りが見られたもの、「−」と記載したものは増殖による濁りが見られなかったものを示す。図１から明らかなように、１０４倍以上希釈したサンプルには全て培地の濁りが見られた。
また、実験２の結果を図２に示す。図２において、菌の増殖の項目を「＋」と記載したものは増殖による濁りが見られたもの、「−」と記載したものは増殖による濁りが見られなかったものを示す。図２から明らかなように、２×１０３倍の希釈では培地の濁りが見られなかったが、４×１０３倍以上の希釈では培地の濁りが見られた。
従って、枯草菌液Ａを、４×１０３倍〜１０７倍に希釈することにより、枯草菌の増殖に適した濃度になることが分かった。すなわち、枯草菌の増殖に適した濃度とは、１．９×１０５個／ｍｌ以下、７．６×１０個／ｍｌ以上の濃度である。
(Proliferation experiment at each dilution ratio of Bacillus subtilis solution A)
(Method)
(1) with respect to Bacillus subtilis solution A used in Example 1, in sterile conditions, repeated 10 times diluted by high-pressure steam sterilized Soybean Casein Digest medium (Wako Pure Chemical), 10 to 10 7-fold serial dilutions A series was prepared (Experiment 1). Similarly, serial dilution series of 10 times, 10 2 times, 10 3 times, 2 × 10 3 times, 4 × 10 3 times, 6 × 10 3 times, 8 × 10 3 times and 10 4 times were prepared ( Experiment 2).
(2) Each dilution series was heated at 40 ° C. for 1 hour and then cultured at 35 ° C. for 36 hours. After culturing, the turbidity of the medium due to bacterial growth was visually determined.
(result)
The result of Experiment 1 is shown in FIG. In FIG. 1, “+” as the item of bacterial growth indicates that turbidity due to growth was observed, and “−” indicates that no turbidity due to growth was observed. As apparent from FIG. 1, turbidity of all diluted samples medium was observed 10 4 times or more.
The results of Experiment 2 are shown in FIG. In FIG. 2, “+” as the item of bacterial growth indicates that turbidity due to growth was observed, and “−” indicates that no turbidity due to growth was observed. As is clear from FIG. 2, the turbidity of the medium was not observed at the dilution of 2 × 10 3, but the turbidity of the medium was observed at the dilution of 4 × 10 3 or more.
Therefore, it was found that by diluting Bacillus subtilis solution A to 4 × 10 3 times to 10 7 times, a concentration suitable for growth of Bacillus subtilis was obtained. That is, the concentration suitable for the growth of Bacillus subtilis is a concentration of 1.9 × 10 5 cells / ml or less and 7.6 × 10 cells / ml or more.
（消臭液の消臭効果の官能試験）
（方法）
（嫌気性細菌の培養）
（１）滅菌済みシャーレにて固化させた標準寒天培地（日水製薬）に、天然由来の凍結乾燥させた偏性嫌気性細菌クロストリジウム・スパロゼネス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）を塗沫し、３０℃の恒温器中で４８〜７２時間培養後、コロニーの形成を確認した。
（２）２５０ｍｌの滅菌済みバイアル瓶にソイビーンカゼインダイジェスト培地（和光純薬）を入れ、ここに手順（１）で形成を確認したコロニーの１つを接種し、ゴム栓にて密栓した。３０℃の恒温器中で３日間培養した。
（３）培養後、培地のｐＨを確認したところ、ｐＨ５．９５であった。これを、滅菌済みのソレンセン（Ｓｏｒｅｎｓｅｎ）リン酸塩緩衝液（ｐＨ７）を用いて、ｐＨ６．１０に調整した。これを５００ｍｌの滅菌済み振盪培養用三角フラスコ２本（Ａ，Ｂ）に１００ｍｌずつ分注し、シリコンセン（登録商標）をした。
（枯草菌液Ａの添加）
（５）滅菌水で４．０×１０３倍希釈した枯草菌液Ａを４５℃で３０分間加熱したもの１０ｍｌを消臭液のサンプルとし、三角フラスコＡに添加した。対照サンプルとして、三角フラスコＢに滅菌水１０ｍｌを添加した。
（６）三角フラスコＡ，Ｂを、振盪培養機（Ｂ．ＢＲＡＵＮ製ＣＥＲＴＯＭＡＴ（登録商標）Ｕ）にて３０℃にて振盪培養した。
（７）三角フラスコＡ，Ｂの振盪培養開始２４時間後、シリコンセン（登録商標）を外し、さらにサンプルおよび対照サンプルそれぞれ１０ｍｌを、それぞれ三角フラスコＡ，Ｂに添加した。再びシリコンセン（登録商標）にて密栓し、さらに振盪培養を行った。
（８）三角フラスコＡ，Ｂの振盪培養開始４８時間後、シリコンセン（登録商標）を外し、さらにサンプルおよび対照サンプルそれぞれ１０ｍｌを、それぞれ三角フラスコＡ，Ｂに添加した。ここで、臭気判定士により、フラスコ中の臭気の判定を行った。再びシリコンセン（登録商標）にて密栓し、さらに振盪培養を行った。
（９）三角フラスコＡ，Ｂの振盪培養開始７２時間後、シリコンセン（登録商標）を外し、さらにサンプルおよび対照サンプルそれぞれ１０ｍｌを、それぞれ三角フラスコＡ，Ｂに添加した。再びシリコンセン（登録商標）にて密栓し、さらに振盪培養を行った。
（１０）三角フラスコＡ，Ｂの振盪培養開始９６時間後、シリコンセン（登録商標）を外し、さらにサンプルおよび対照サンプルそれぞれ１０ｍｌを、それぞれ三角フラスコＡ，Ｂに添加した。ここで、１人の臭気判定士により、フラスコ中の臭気の判定を行った。
（結果）
臭気の判定を、１０段階評価で示す。最も弱い臭気を１とし、最も強い臭気を１０とした。
結果は、以下の表１の通りであった。
(Sensory test of deodorizing effect of deodorant liquid)
(Method)
(Culture of anaerobic bacteria)
(1) A standard agar medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) solidified in a sterilized petri dish is smeared with naturally-derived lyophilized obligate anaerobic bacterium Clostridium sporogenes, and a thermostat at 30 ° C. After culturing for 48 to 72 hours, colony formation was confirmed.
(2) Soybean casein digest medium (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was placed in a 250 ml sterilized vial, and one of the colonies whose formation was confirmed in step (1) was inoculated therein and sealed with a rubber stopper. The cells were cultured for 3 days in a 30 ° C. incubator.
(3) After culturing, the pH of the medium was confirmed to be pH 5.95. This was adjusted to pH 6.10 using sterile Sorensen phosphate buffer (pH 7). 100 ml each of this was dispensed into two 500 ml sterilized Erlenmeyer flasks for shaking culture (A, B) to give silicon sen (registered trademark).
(Addition of Bacillus subtilis solution A)
(5) Bacillus subtilis solution A diluted 4.0 × 10 3 times with sterilized water was heated at 45 ° C. for 30 minutes, and 10 ml was added to Erlenmeyer flask A as a sample of deodorant solution. As a control sample, 10 ml of sterilized water was added to Erlenmeyer flask B.
(6) Erlenmeyer flasks A and B were subjected to shaking culture at 30 ° C. in a shaking incubator (CERTOMAT (registered trademark) U manufactured by B. BRAUN).
(7) 24 hours after the start of shaking culture of the Erlenmeyer flasks A and B, Siliconsen (registered trademark) was removed, and 10 ml each of the sample and the control sample were added to the Erlenmeyer flasks A and B, respectively. Sealed again with Siliconsen (registered trademark), and further cultured with shaking.
(8) 48 hours after the start of the shaking culture of the Erlenmeyer flasks A and B, Siliconsen (registered trademark) was removed, and 10 ml each of the sample and the control sample were added to the Erlenmeyer flasks A and B, respectively. Here, the odor in the flask was determined by the odor determiner. Sealed again with Siliconsen (registered trademark), and further cultured with shaking.
(9) 72 hours after the start of shaking culture of Erlenmeyer flasks A and B, Siliconsen (registered trademark) was removed, and 10 ml of each of the sample and the control sample was added to Erlenmeyer flasks A and B, respectively. Sealed again with Siliconsen (registered trademark), and further cultured with shaking.
(10) 96 hours after the start of shaking culture of the Erlenmeyer flasks A and B, Siliconsen (registered trademark) was removed, and 10 ml each of the sample and the control sample were added to the Erlenmeyer flasks A and B, respectively. Here, the odor in the flask was determined by one odor determiner.
(result)
Odor determination is shown by a 10-step evaluation. The weakest odor was set to 1, and the strongest odor was set to 10.
The results were as shown in Table 1 below.
４８時間後に対照サンプルを加えたフラスコＢから発せられた主な臭気は、スカトールであり、９６時間後に対照サンプルを加えたフラスコＢから発せられた主な臭気は、アンモニアであった。
以上より、枯草菌液Ａの４．０×１０３倍希釈液（１．９×１０５個／ｍｌの菌体濃度で枯草菌を含む）には、消臭効果があることが分かった。
The main odor emanating from Flask B with the control sample added after 48 hours was skatole, and the main odor emanating from Flask B with the control sample added after 96 hours was ammonia.
From the above, it was found that a 4.0 × 10 3 dilution of Bacillus subtilis solution A (containing Bacillus subtilis at a cell concentration of 1.9 × 10 5 cells / ml) has a deodorizing effect.
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