JP2012179123A - 間葉系幹細胞を含んでなる根管充填材、及びこれを用いた歯組織再生方法 - Google Patents
間葉系幹細胞を含んでなる根管充填材、及びこれを用いた歯組織再生方法 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】抜髄後又は感染根管の根管拡大清掃後、根管の根尖側に挿入される、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞220と、細胞外基質210とを含んでなる根管充填材200、および抜髄後又は感染根管の根管拡大清掃後の非抜歯の根管の根尖側に、根管充填材を注入する工程を含む、抜歯もしくは非抜歯法による歯組織再生方法を提供する。
【選択図】 図1
Description
本発明は、第1実施形態によれば、細胞外基質と、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞とを含んでなる根管充填材である。図1は、本実施形態に係る根管充填材200の説明図である。根管充填材200は、細胞外基質210に、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞220を付着させて形成される。ここで、「付着させて形成される」とは、細胞外基質が液体、流体等の場合には、細胞外基質に、好ましくは均一に、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞が混合されていることを意味する。いっぽう、細胞外基質が、後述するスポンジ状の三次元構造体等、一定の形状を有する形態の場合には、細胞外基質が構成する構造体の表面及び内部に、好ましくは均一に、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞が取り込まれ、保持されていることをいう。歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞220は、根管充填材200の根管の根尖側に付着される。ここで、「根管充填材200の根管の根尖側に付着される」とは、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞が、根管の根尖側に注入され、移植されるように根管充填材が形成されることをいう。
第2実施形態に係る根管充填材は、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞と、遊走因子とを含む。遊走因子は、細胞遊走因子、細胞増殖因子及び神経栄養因子のうち少なくともいずれか一つを含む。
上述の第1実施形態では、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞220が根管充填材200の根管の根尖側に付着されて根管充填材200は構成されていた。しかし、そのような実施形態に限定されることはなく、間葉系幹細胞220は、根管充填材200の全体に均一に混合されていても良い。このような根管充填材200も、抜歯もしくは非抜歯の両方の形態で同様に使用することができ、これを使用することにより、歯根完成歯に対して、内部吸収を発生させず、破歯細胞が見られず、象牙質壁に象牙芽細胞が滑らかに並ぶ歯組織再生を図ることができる。このような根管充填材200は、例えば、間葉系幹細胞220と、細胞外基質の一例であるI型・III型混合コラーゲンとを気泡を発生させないように均一に混合させることにより製造される。
本願発明は、第4実施形態によれば、上記第1〜第3の実施形態において説明した根管充填材を用いた歯組織の異所再生方法である。歯組織の異所再生方法は、第1の個体の歯の抜髄を行う工程と、前記歯の歯根部分を所定の長さに切り出す工程と、前記根管に、前述の根管充填材を注入する工程と、充填材を注入した歯根を第2の個体に移植する工程とを含む。
[細胞分離]
イヌ上歯から抽出したイヌ歯髄組織より、Iohara et al., 2006(STEM CELLS, Volume 24, Issue 11, pages 2493-2503, November 2006)に記載の方法により、イヌ歯髄幹細胞を分取した。初代脂肪細胞及び初代骨髄細胞は、それぞれ、同一のイヌの腹部皮下脂肪及び肋骨の骨髄から分離した。これらの細胞は、Iohara et al., 2006に記載されているように、Hoechst33342(Sigma,St.Louis,MO,http://www.sigmaaldrich.com)でラベルした。そして、この細胞を、マウスBD Fc Block(BD Biosciences,San Jose,CA,http://www.bdbioscience.com)で30分間、4℃でプレインキュベートし、非特異的結合を除去した。これらの細胞を、さらに、マウスIgG1ネガティブコントロール(MCA928)(AbD Serotec Ltd,Oxford,UK,http://www.serotec.com)、マウスIgG1ネガティブコントロール(Phycoerythrin,PE)(MCA928PE)(AbD Serotec)、および、20%ウシ胎児血清を添加した、PBS中の、マウス抗ブタCD31(PE)(LCI−4)(AbD Serotec)(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA,http://www.invitrogen.com)で60分間、4℃でインキュベートした。そして、これらを、2μg/mlのヨウ化プロピジウム(PI)(Sigma)を含有するHEPESバッファー中で再懸濁させた。細胞の分析及びソーティングは、フローサイトメータ(FACS−ARIA II(BD bioscience)を用いて行った。
イヌ歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のCD31−SP細胞の表現型を第3継代において評価した。細胞は、以下のもので免疫標識した。マウスIgG1ネガティブコントロール(AbD Serotec Ltd.)、マウスIgG1ネガティブコントロール(fluorescein isothiocyanate,FITC)(MCA928F)(AbD Serotec)、マウスIgG1ネガティブコントロール(Phycoerythrin−Cy5,PE−Cy5)(MCA928C)(AbD Serotec)、マウスIgG1ネガティブコントロール(Alexa 647)(MRC OX−34)(AbD Serotec)、CD24(Alexa Fluor 647)(ML5)(BioLegend)、CD29(PE−Cy5)(MEM−101A)(eBioscience)、CD31(FITC)(Qbend10)(Dako)、CD33(FITC)(HIM3−4)(BD Bioscience)、CD34(Allophycocyanin,APC)(1H6)(R&DSystems,Inc.,Minneapolis,MN,USA)、CD44(Phycoerythrin−Cy7、PE−Cy7)(IM7)(eBioscience)、CD73(APC)(AD2)(BioLegend)、CD90(FITC)(YKIX337.217)(AbD Serotec)、CD146(FITC)(sc−18837)(Santa Cruz,Biotech,Santa Cruz,CA,USA)、CD150(FITC)(A12)(AbD Serotec)、MHCクラスI(R−PE)(3F10)(Ancell Corporation,Bayport,MN,USA)、MHC classII(APC)(TDR31.1)(Ancell)、CXCR4(FITC)(12G5)(R&D)に対する抗体。
細胞集団のさらなる表現型を評価するために、第3継代において歯髄および脂肪CD105+細胞、及びtotal歯髄細胞から、Trizol(Invitrogen)を用いて、totalRNAを抽出した。細胞数は、各実験とも、5×104にノーマライズした。First−strand cDNA合成は、totalRNAから、ReverTra Ace−α(Toyobo,Tokyo,Japan)を用いて逆転写することによって行った。リアルタイムRT−PCR増殖は、ライトサイクラーFast Start DNA master SYBR GreenI(Roche Diagnostics, Pleasanton,CA)で標識した幹細胞マーカーである、canine CXCR4、Sox2、Stat3、Bmi1、Tert、Oct4を用いて、95℃で10秒,62℃で15秒、72℃で8秒、ライトサイクラー(Roche Diagnostics)を用いて行った。用いたプライマーを以下に示す。
第3継代から第5継代のイヌ骨髄及び脂肪CD31−SP細胞の血管新生細胞及び神経栄養細胞への分化は、Iohara et al., 2006に記載した歯髄CD31−SP細胞の分化と比較した。神経分化については、ニューロフィラメント、ニューロモジュリン、及びsodium channel,voltage−gated,typeIα(Scn1α)の発現を調べた。
間質細胞由来因子1(SDF1)(Acris,Herford,Germany)に応答した細胞増殖を決定するために、第4継代のイヌ骨髄及び脂肪CD31−SP細胞と歯髄CD31−SP細胞を、0.2%のウシ胎児アルブミン(Sigma)及びSDF−1(50ng/ml)を添加したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中、96ウェルあたり、103cellsの条件で比較した。10μlのTetra−color one(登録商標)(Seikagaku Kogyo,Co.,Tokyo,JAPAN)を96ウェルプレートに添加し、培養開始後、2、12、24、36時間において、分光光度計を用いて波長450nmの吸光度を測定し、細胞数を得た。細胞を入れないウェルをネガティブコントロールとして用いた。
歯髄の除去及び細胞集団の移植の実験モデルは、歯根が完全に完成しており根管が閉鎖しているイヌ永久歯(Narc,Chiba,Japan)において確立した。両側の上顎第二門歯及び下顎第三門歯において、静脈内にペントバルビタールナトリウム(Schering−Plough,Germany)を注入して全歯髄を除去した後、#70K−file(MANI.INC,Tochigi,Japan)を用いて、根尖部の根管の太さを0.7mm以上にした。第3継代から第4継代におけるイヌ歯髄、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞の、それぞれ5x105cellsをコラーゲンTE(新田ゼラチン)10μlでDiIラベルした第1の組成物と、コラーゲンTE10μlと最終濃度が15ng/μlのSDF−1を含む第2の組成物とから構成される、根管充填材を調製した。この充填材を、第1の組成物が下部根管に自家移植され、かつ第2の組成物が上部根管にあるように、根管に充填した。充填後、上部の孔はリン酸亜鉛セメント(Elite Cement,GC,Tokyo,Japan)及び複合レジン(Clearfil Mega Bond,Kuraray)で封鎖し、接着剤(Clearfil Mega Bond,Kuraray)で処理した。15匹のイヌからの60の歯を使用した。各10の歯に、歯髄、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞とSDF−1を移植し、14日後及び28日後に採取した。
平均値±標準偏差であらわされたデータは、unpaired Student’s t testを用いて計算した。各実験は3回行い、典型的結果を図表に記した。
[イヌ歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のCD31−SP細胞の単離及び評価]
フローサイトメトリーによる分析の結果、同一個体からのイヌ歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のSP細胞は、それぞれ全細胞の、1.5%、0.3%、0.1%で存在することがわかった(図7(a)、(e)、(i))。また、イヌ歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のCD31−SP細胞は、それぞれ全細胞の、0.9%、0.3%、0.1%で存在することがわかった(図7(b)、(f)、(j))。これら3種類のCD31−SP細胞集団は、同様の細胞表現型、すなわち複数の長い突起を有する星状細胞および紡錘状細胞を含むものであった。星状細胞は顆粒に囲まれた大きな核を含有するものであった。紡錘状細胞は、細長い突起とわずかな細胞質を有するニューロン様の細胞であった。図7(c)、(d)、(g)、(h)、(k)、(l)に示す。35mm皿に播種した、単一のイヌ歯髄および脂肪CD31−SP細胞は、10日間でコロニーを形成し、単一のイヌ骨髄CD31−SP細胞は、14日間でコロニーを形成した。この結果は、これらの細胞に、コロニー形成活性があることを示す。イヌ歯髄、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞の付着および増殖の効率はそれぞれ、8%、6%、7%であると推定された。第3継代における限界希釈法アッセイの結果、歯髄CFUの頻度は、イヌ歯髄CD31−SP細胞においては80%と推定され、イヌ骨髄CD31−SP細胞においては75%と推定され、イヌ脂肪CD31−SP細胞においては80%と推定された。
TAXIScan−FLにより示されるSDF−1を加えた場合の遊走活性は、イヌ歯髄CD31−SP細胞および脂肪CD31−SP細胞において比較的高く、イヌ骨髄CD31−SP細胞においては、これら二つよりも低いものであった(図9(a))。また、SDF−1を加えた場合の増殖活性も、イヌ歯髄CD31−SP細胞と、イヌ骨髄および脂肪CD31−SP細胞において、いずれも同様であった(図9(b))。
次に、イヌ歯髄、骨髄、および脂肪CD31−SP細胞とSDF−1との、歯根が完全に完成しており根管が閉鎖しているイヌ永久歯の抜髄後の根管への、in vivoでの自家移植を評価した(図10)。歯髄及び脂肪CD31−SP細胞の移植の結果、SDF−1とともに移植した場合には、移植後14日目には、歯髄様組織の形成が生じた(図10(a)、(c))。しかし、骨髄CD31−SP細胞とSDF−1とを移植した場合には、再生した歯髄の量は、歯髄及び脂肪CD31−SP細胞とSDF−1を移植した場合よりも少なかった(図10(b))。統計解析の結果、再生された領域は、歯髄CD31−SP細胞及び脂肪CD31−SP細胞をSDF−1とともに移植した場合に、骨髄CD31−SP細胞をSDF−1とともに移植した場合と比較して、それぞれ、2.0倍、及び1.5倍であり、有意に大きいことがわかった(図10(j))。三種類のすべての移植において、再生された組織中の細胞は星状、あるいは紡錘状であった(図10(d)、(e)、(f))。しかし、線維性の基質形成が、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞移植の一部においてみられた(図10(e)、(f))。さらに、脂肪CD31−SP細胞とSDF−1移植の90日目には、歯髄内に強い石灰化が見られた(図10(i))が、歯髄CD31−SP細胞とSDF−1移植ではほとんど石灰化がみられず、骨髄CD31−SP細胞とSDF−1移植ではやや石灰化がみられた。凍結切片をBS−1 lectinで染色した後に共焦点レーザー顕微鏡分析を行ったところ、再生組織において血管新生が生じていることがわかった(図10(k)(l)(m))。抗体で染色された神経突起は、根尖孔から新たに再生された歯髄内に延びていた(図10(n)(o)(p)。マッソン染色の結果、脂肪CD31−SP細胞とSDF−1移植の90日目では強い基質形成がみられた。
[細胞分離]
初代歯髄細胞は、ブタ歯胚から分離した。ブタ初代脂肪細胞及び初代骨髄細胞は、それぞれ、同一のブタの下顎から分離した。これらの細胞は、Iohara et al., 2006に記載されている方法にしたがい、Hoechst33342(Sigma,St.Louis,MO,http://www.sigmaaldrich.com)でラベルした。そして、この細胞を、マウスBD Fc Block(BD Biosciences,San Jose,CA,http://www.bdbioscience.com)で30分間、4℃でプレインキュベートし、非特異的結合を除去した。これらの細胞を、さらに、マウスIgG1ネガティブコントロール(MCA928)(AbD Serotec Ltd,Oxford,UK,http://www.serotec.com)、マウスIgG1ネガティブコントロール(Phycoerythrin,PE)(MCA928PE)(AbD Serotec)、および、20%ウシ胎児血清を添加した、PBS中の、マウス抗ブタCD31(PE)(LCI−4)(AbD Serotec)(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA,http://www.invitrogen.com)で60分間、4℃でインキュベートした。そして、これらを、2μg/mlのヨウ化プロピジウム(PI)(Sigma)を含有するHEPESバッファー中で再懸濁させた。細胞の分析及びソーティングは、フローサイトメータ(FACS−ARIAII(BD bioscience))を用いて行った。
ブタ歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のCD31−SP細胞の表現型を第3継代において評価した。細胞は、下記の抗体で免疫標識し、フローサイトメトリーで分析した。マウスIgG1ネガティブコントロール(AbD Serotec Ltd.)、マウスIgG1ネガティブコントロール(fluorescein isothiocyanate,FITC)(MCA928F)(AbD Serotec)、マウスIgG1ネガティブコントロール(Phycoerythrin−Cy5,PE−Cy5)(MCA928C)(AbD Serotec)、マウスIgG1ネガティブコントロール(Alexa 647)(MRC OX−34)(AbD Serotec)、及び、CD14(Alexa Flour 647)(TuK4)(AbD Serotec)、CD29(PE−Cy5)(MEM−101A)(eBioscience)、CD31(PE)(LCI−4)(AbD Serotec)、CD34(PE)(581)(Beckman coulter)、CD44(PE−Cy5)(IM7)(eBioscience)、CD73(Alexa Flour 647)(AD2)(eBioscience)、CD90(Alexa Flour 647)(F15−42−1)(AbD Serotec)、CD105(FITC)(MEM−229)(abcam)、CD117/c−kit(Allophycocyanin,APC)(A3C6E2)(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany,http://www.miltenyibiotec.com)、CD133(Alexa Flour 647)(293C3)(Miltenyi Biotec)、CD146(FITC)(OJ79c)(AbD Serotec),CD150(FITC)(A12)(AbD Serotec),CD271(APC)(ME20.4−1H4)(Miltenyi Biotec.)、CXCR4(FITC)(12G5)(R&D)に対する抗体。
ブタ歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のCD31−SP細胞集団の幹細胞特性、血管新生能、神経原生能を調べるために、各CD31−SP細胞から、Trizol(Invitrogen)を用いて、totalRNAを抽出した。細胞数は、各実験とも、5×104にノーマライズした。First−strand cDNA合成は、total RNAから、ReverTra Ace−α(Toyobo,Tokyo,Japan)を用いて逆転写することによって行った。リアルタイムRT−PCR増殖は、ライトサイクラーFast Start DNA master SYBR Green I(Roche Diagnostics,Pleasanton,CA)で標識した幹細胞マーカー、ブタC Sox2、Tert,Bmi1,CXCR4、Stat3、及び血管新生因子及び神経栄養因子、顆粒球単球コロニー刺激因子(GM−CSF)、マトリックスメタロプロテアーゼ−3(MMP−3)、血管内皮細胞増殖因子A(VEGF−A)、脳由来神経栄養因子(BDNF)、グリア細胞由来神経栄養因子(GDNF)、神経成長因子(NGF)、neuropeptide Y(Iohara et al., 2008(STEM CELLS, Volume 26, Issue 9, pages 2408-2418, September 2008); Sugiyama et al., 2011(Tissue Engineering Part A. Jan 2011))を用いて、95℃で10秒、62℃で15秒、72℃で8秒、ライトサイクラー(Roche Diagnostics)を用いて行った.骨髄及び脂肪CD31−SP細胞の発現は、ベータアクチンで正規化した後、歯髄CD31−SP細胞の発現と比較した。用いたプライマーを以下に示す。
異所性の歯髄再生のために、ブタ歯根モデルの皮下移植を行った。ブタ第三切歯を抜歯し、その歯根を6mmの長さにスライスした。根管を1mm幅にまで拡大した後、MTAセメントで一端を封鎖した。ブタ歯髄、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞集団の第3から第4継代、それぞれ、1x106cellsと、コラーゲンTE(新田ゼラチン、Osaka,Japan)10μlから構成される根管充填材を調製した。この充填材を一端を封鎖した歯根に注入した。この歯根を、5週齢のSCIDマウス(CB17,CLEA,Tokyo,JAPAN,http://www.clea-japan.com)に皮下移植した。異なる4個体のブタ由来の歯髄、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞が、各2つの歯根に移植された。14日後、組織学的研究のために、計24本の歯根を採取した。
フローサイトメトリーによる分析の結果、同一個体からの歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のSP細胞は、それぞれ全細胞の、1.6%、0.3%、0.1%で存在することがわかった(図11A(a)、11B(e)、11C(i))。また、歯髄、骨髄及び脂肪組織由来のCD31−SP細胞は、それぞれ全細胞の、0.9%、0.3%、0.1%で存在することがわかった(図11A(b)、11B(f)、11C(j))。これら3種類のCD31−SP細胞集団は、同様の細胞表現型、すなわち複数の長い突起を有する星状細胞および紡錘状細胞を含むものであった。星状細胞は顆粒に囲まれた大きな核を含有するものであった。紡錘状細胞は、細長い突起とわずかな細胞質を有するニューロン様の細胞であった。図11A(c)、A(d)、B(g)、B(h)、C(k)、C(l)に示す。IGF1、EGF、及び10%のウシ胎児血清を添加したEBM2は、CD31−SP細胞の表現型を保持していた。これは、第12継代において、CD31−及びABCG2/BCRP1+が99.8%より多いことを示す。コラーゲンタイプIでコートされた35mm皿に播種した、単一の歯髄および脂肪CD31−SP細胞は、10日でコロニーを形成し、単一の骨髄CD31−SP細胞は、14日でコロニーを形成した。この結果は、これらの細胞にコロニー形成活性があることを示す。ブタ歯髄、骨髄及び脂肪CD31−SP細胞の付着および増殖の効率はそれぞれ、8%,6%,7%であると推定された。第3継代における限界希釈法圧制の結果、歯髄CFUの頻度は、ブタ歯髄CD31−SP細胞においては80%と推定され、ブタ骨髄CD31−SP細胞においては75%と推定され、ブタ脂肪CD31−SP細胞においては80%と推定された。
次に、歯根に充填したCD31−SP細胞の、重症複合型免疫不全(SCID)マウスへのin vivo皮下移植を評価した。ブタ歯髄CD31−SP細胞移植後14日には、十分に組織化された血管系を有する歯髄様組織が、根管に充填されていた(図14(a)、(b)、(c))。ブタ骨髄CD31−SP細胞移植によってもまた、毛細血管を有する歯髄様組織が誘導されていた(図14(d)、(e)、(f))。ブタ脂肪CD31−SP細胞移植の結果、石灰化が見られた(図14(g)、(h)、(i))。
イヌ血液は、採血後直ちにベノジェクト真空採血管(TERUMO)に移し同量の生理食塩水(大塚製薬)を加え転倒混和後、Lymphoprep Tube(Axis−Shield)を用いて比重遠心法(比重1.007)にて末梢血単核球(PBMC)を分離した。一方のPBMCを、抗原性を保持したまま増殖を抑制するため、マイトマイシンC (nacalai tesque)10mg/mlにて3時間37℃にて処理しstimulatorとして使用した。
イヌ歯髄・骨髄・脂肪CD31−SP細胞の免疫調節能をmixed lymphocyte reactions(MLR)法にて、自己のイヌの末梢血単球の、他家の末梢血単球添加(これ自身増殖能なし)による増加を、3種の培養上清がそれぞれ抑制することにより検討した。その結果、歯髄・骨髄・脂肪ともにCD31−SP細胞は、自己の末梢血単球の増加を有意に抑制し、3種の間に有意差は認められなかった(図15)。よって、3種とも同様の免疫調整能を有することが示唆された。
110 根尖性歯周炎
120 歯根部分
200 根管充填材
210 細胞外基質
220 間葉系幹細胞
230 遊走因子
400 血管
500 象牙質
610 ゼラチン
620 レジン
630 形態形成因子
640 セメント
700 根管充填材が充填された歯根部分
Claims (13)
- 抜髄後又は感染根管の根管拡大清掃後、根管の根尖側に挿入される、歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞と、細胞外基質とを含んでなる根管充填材。
- 前記間葉系幹細胞が、骨髄幹細胞、脂肪幹細胞、羊膜幹細胞もしくは臍帯血細胞のいずれかである、請求項1に記載の根管充填材。
- 前記骨髄幹細胞、脂肪幹細胞、羊膜幹細胞もしくは臍帯血細胞が、SP細胞、CD31陰性SP細胞、CD24陽性細胞、CD29陽性細胞、CD44陽性細胞、CD73陽性細胞、CD90陽性細胞、CD105陽性細胞、CD31陰性細胞、CD45陰性細胞、MHC class II陰性細胞、CD150陽性細胞、CXCR4陽性細胞、CD271陽性細胞、CD133陽性細胞、FLK−1陽性細胞,CD166陽性細胞あるいはVEGFR2陽性細胞のうち少なくともいずれか一つを含む、請求項1記載の根管充填材。
- 前記根管充填材が、細胞遊走因子、細胞増殖因子及び神経栄養因子のうち少なくともいずれか一つを含む遊走因子をさらに含む、請求項1〜3のいずれかに記載の歯根管充填材。
- 前記歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞が根管の根尖側に位置し、前記遊走因子が根管の歯冠側に位置する、請求項4に記載の歯根管充填材。
- 前記細胞遊走因子が、SDF1、VEGF、GCSF、SCF、MMP3、Slit、GM−CSF及び血清のうち少なくともいずれか一つである、請求項4または5に記載の根管充填材。
- 前記細胞増殖因子が、IGF、bFGF、PDGF及び血清のうち少なくともいずれか一つである、請求項4または5に記載の根管充填材。
- 前記神経栄養因子が、GDNF、BDNF、NGF、Neuropeptide Y、Neurotrophin3及び血清のうち少なくともいずれか一つである、請求項4または5に記載の根管充填材。
- 前記細胞外基質が、コラーゲン、人工プロテオグリカン、ゼラチン、ハイドロゲル、フィブリン、フォスフォホリン、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ラミニン、フィブロネクチン、アルギン酸、ヒアルロン酸、キチン、PLA、PLGA、PEG、PGA、PDLLA、PCL、ハイドロキシアパタイト、β−TCP、炭酸カルシウム、チタン及び金のうち少なくともいずれか一つを含む生体親和性材料から構成されている、請求項1〜8のいずれか1項に記載の根管充填材。
- 前記細胞外基質における前記歯髄幹細胞を除く間葉系幹細胞の含有率は、1×103セル/μl以上1×106セル/μl以下である、請求項1〜9のいずれか1項に記載の根管充填材。
- 抜髄後又は感染根管の根管拡大清掃後の根管の根尖側に、請求項1〜10のいずれかに記載の根管充填材を注入する工程を含む、歯組織再生方法。
- 前記根管充填材を前記根管の根尖側に注入する工程の前に、前記根管を拡大することで根尖部の根管の太さを所定の大きさにする工程をさらに含む、請求項11に記載の歯組織再生方法。
- 第1の個体の歯の抜髄を行う工程と、
前記歯の歯根部分を所定の長さに切り出す工程と、
抜髄後の根管の一端を封鎖する工程と、
前記根管に、間葉系幹細胞と、細胞外基質とを含んでなる根管充填材を注入する工程と、
充填材を注入した歯根を第2の個体に移植する工程と
を含む歯組織の異所再生方法。
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