JP2012136533A - 抗微生物組成物とその使用方法 - Google Patents
抗微生物組成物とその使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012136533A JP2012136533A JP2012032313A JP2012032313A JP2012136533A JP 2012136533 A JP2012136533 A JP 2012136533A JP 2012032313 A JP2012032313 A JP 2012032313A JP 2012032313 A JP2012032313 A JP 2012032313A JP 2012136533 A JP2012136533 A JP 2012136533A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oil
- composition
- component
- volume
- emulsion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/02—Local antiseptics
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
- Colloid Chemistry (AREA)
Abstract
【解決手段】水相に分布した不連続な油相、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、水中油型乳剤を含む組成物。病原性生物の感染、罹患率、および死亡率の減少は、病原性生物を、水相に分散させた油、有機溶媒、および界面活性剤を含む水中油型ナノ乳剤に接触させることによって得られる。
【選択図】なし
Description
本発明は、多様な病原体に関連した感染、罹患率、および死亡率を減少させるための組成物および方法に関する。本発明はまた、病原体および微生物がコロニーを形成したまたはそうでなければ感染した領域、試料、溶液、および食品の汚染を除去するための方法および組成物にも関する。
細菌、真菌、ウイルス、および細菌胞子のような病原体は、ヒトおよび動物の病気の多血症と共に、食品ならびに生物および環境試料の汚染の原因である。動物の微生物感染症の第一段階は一般的に、皮膚または粘膜の接着またはコロニー形成であり、この後感染性微生物の浸潤および播種が起こる。病原性細菌の流入口は、主として皮膚および粘膜である。
本発明の理解を容易にするために、多くの用語および句を下記に定義する:
本発明は、多様な微生物および病原性生物に関連した感染、罹患率、および死亡率を減少させるための組成物および方法を含む。本発明はまた、病原性生物がコロニーを形成したまたはそうでなければ感染した領域の汚染を除去する方法および組成物にも関する。その上、本発明は食品における病原性生物の感染を減少させる方法および組成物に関する。好ましい態様において、病原性生物の感染、罹患率、および死亡率の減少は、水相、油相、少なくとも一つの他の化合物を含む水中油型組成物に病原性生物を接触させることによって得られる。本発明の特定の説明となる態様を下記に記載する。本発明は、これらの特定の態様に限定されない。説明は以下の章に分けて提供する:I)例示的な組成物;II)例示的な製剤技術;III)特性と活性;IV)用途;およびV)特異的な例。
好ましい態様において、本発明の乳剤は、(i)水相;(ii)油相;および少なくとも一つのさらなる化合物を含む。本発明のいくつかの態様において、これらのさらなる化合物は、組成物の水相または油相のいずれかに混合される。他の態様において、これらのさらなる化合物は、予め乳化した油と水相との組成物に混合される。これらの態様の特定のものにおいて、一つまたはそれ以上のさらなる化合物を、使用直前に既存の乳剤組成物と混合する。他の態様において、一つまたはそれ以上のさらなる化合物を組成物の使用直前に既存の乳剤組成物に混合する。
特定の好ましい態様において、乳剤は、乳剤の総容量に基づいて水相約5〜60%、好ましくは10〜40%、より好ましくは15〜30容量%を含む。好ましい態様において、水相は、pHが約4〜10、好ましくは約6〜8の水を含む。本発明の乳剤が発芽増強物質を含む場合、pHは好ましくは6〜8である。水は、好ましくは脱イオンされる(以降、「DiH2O」と呼ぶ)。いくつかの態様において、水相はリン酸緩衝生理食塩液(PBS)を含む。宿主による摂取または宿主との接触を意図した本発明のそれらの態様において、水相および水相において提供されるさらなる化合物は、さらに滅菌して発熱物質不含であってもよい。
特定の好ましい態様において、本発明の乳剤の油相(例えば担体油)は、乳剤の総容量に基づいて油を30〜90、好ましくは60〜80、およびより好ましくは60〜70容量%含む。適した油には、大豆油、アボガド油、亜麻仁油、ココナツ油、綿実油、スクアレン油、オリーブ油、キャノーラ油、トウモロコシ油、菜種油、サフラワー油、およびヒマワリ油、魚油、香味油、水不溶性ビタミン、およびその混合物が含まれるがこれらに限定されない。特に好ましい態様において、大豆油を用いる。さらに考慮される油には、モーター油、鉱油およびバターが含まれる。本発明の好ましい態様において、油相は好ましくは平均粒子径の範囲が約1〜2μm、より好ましくは0.2〜0.8μm、および最も好ましくは約0.8μmである小滴として水相全体に分布している。他の態様において、水相は油相に分布しうる。
いくつかの態様において、本発明の組成物はさらに、一つまたはそれ以上の界面活性剤または洗剤を含む(例えば、約3〜15%、好ましくは約10%)。本発明は、如何なる特定の作用機序にも限定されないが、組成物に存在する界面活性剤は、組成物を安定化するために役立つと予想される。非イオン性(非陰イオン性)およびイオン性界面活性剤の双方が考慮される。さらに、BRIJファミリーの界面活性剤が、本発明の組成物において用いられる。界面活性剤は水相または油相のいずれかにおいて提供されうる。乳剤と共に用いることが適している界面活性剤には、水中油型乳剤の形成を促進することができる他の乳化化合物と共に、様々な陰イオンおよび非イオン性界面活性剤が含まれる。一般的に、乳化化合物は比較的親水性であり、乳化化合物の混和を用いて必要な品質を得ることができる。いくつかの製剤において、非イオン性界面活性剤は、それらが広いpH範囲に対して実質的により適合性であり、イオン性(例えば、石鹸型)乳化剤より安定な乳剤をしばしば形成するという点において、イオン性乳化剤より長所を有する。このように、特定の好ましい態様において、本発明の組成物は、ポリソルベート系界面活性剤(例えば、ポリオキシエチレンエーテル)、ポリソルベート系洗剤、フェオキシポリエトキシエタノール等のような一つまたはそれ以上の非イオン性界面活性剤を含む。本発明において有用なポリソルベート系洗剤の例には、ツイーン20、ツイーン40、ツイーン60、ツイーン80等が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの態様において、本発明の組成物は陽イオンハロゲン含有化合物をさらに含む(例えば、乳剤の総重量に基づいて重量で約0.5〜1.0重量%)。好ましい態様において、陽イオンハロゲン含有化合物は好ましくは、油相と予め混合する;しかし、陽イオンハロゲン含有化合物は異なる製剤において乳剤組成物と組み合わせて提供してもよい。適したハロゲン含有化合物は、例えば塩素、フッ素、臭素およびヨウ素イオンを含む化合物から選択してもよい。好ましい態様において、適した陽イオンハロゲン含有化合物には、ハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスホニウム、ハロゲン化ドデシルトリメチルアンモニウム、またはハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウムが含まれるがこれらに限定されない。いくつかの特定の態様において、適した陽イオンハロゲン含有化合物は、塩化セチルピリジニウム(CPC)、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム(CPB)、臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB)、臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、臭化セチルトリブチルホスホニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、または臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムを含むがこれらに限定されない。特に好ましい態様において、陽イオンハロゲン含有化合物はCPCであるが、本発明の組成物は特定の陽イオン含有化合物との製剤に限定されない。
本発明の他の態様において、組成物はさらに、一つまたはそれ以上の発芽増強化合物を含む(例えば、約1mM〜15 mM、およびより好ましくは約5mM〜10 mM)。好ましい態様において、発芽増強化合物は乳剤の形成前に水相に提供される。本発明は、発芽増強剤を開示の組成物に加えると、組成物の殺胞子特性画像供されると予想する。本発明はさらに、そのような発芽増強剤が、中性pH付近(6〜8のあいだ、好ましくは7)で殺胞子活性を開始することをさらに予想する。そのような中性pH乳剤は、例えば、リン酸緩衝生理食塩液(PBS)によって希釈することによって、または中性乳剤を調製することによって得ることができる。組成物の殺胞子活性は、胞子が発芽を開始する際に選択的に起こる。
なお他の態様において、本発明の組成物は、標的病原体(例えば、ビブリオ菌(Vibrio)、サルモネラ菌(Salmonella)、赤痢菌(Shigella)、およびシュードモナス(Pseudomonas)のようなグラム陰性菌の細胞壁)と組成物(すなわち「相互作用増強剤」)との相互作用を増加させることができる一つまたはそれ以上の化合物を含む。好ましい態様において、相互作用増強剤は好ましくは油相と予め混合する;しかし、他の態様において、相互作用増強剤は、乳化後の組成物との組み合わせて提供される。特定の好ましい態様において、相互作用増強剤はキレート化剤(例えば、エチレンジアミン四酢酸[EDTA]、またはエチレンビス(オキシエチレンニトリロ)四酢酸[EGTA]の緩衝液[例えば、トリス緩衝液]溶液)である。キレート化剤は、単なる一例としての相互作用増強化合物であると理解される。実際に、本発明の組成物と微生物および/または病原体との相互作用を増加させる他の物質も考慮される。特に好ましい態様において、相互作用増強剤の濃度は約50〜約250 μMである。当業者は、そのような物質を本発明の組成物と組み合わせて標的に適用することによって、かつ混合物と接触させた際の標的の不活化を、物質を加えない場合の本発明の組成物による同様の標的の不活化と比較することによって、特定の物質が相互作用増強剤として作用する所望の機能を有するか否かを決定することができると考えられる。相互作用を増加させ、それによってその非存在下でのそのパラメータと比較して細菌の増殖を減少または阻害する任意の物質が、相互作用増強剤であると見なされる。
以下のA)章において、開示の組成物の一般的製剤を作製するための例示的な技術を説明する。さらに、本発明は、下記のB)において一例ではあるが、多くの特定の製剤レシピを引用する。
本発明の水中油型乳剤を不活化する病原体は、古典的な乳剤生成法を用いて形成することができる。簡単に説明すると、油相を比較的高い剪断力の下で(例えば、高い水圧および機械力を用いて)水相と混合し、約0.5μm、好ましくは直径が1〜2μmである油滴を含む水中油型乳剤を得る。乳剤は、油相対水相が約1:9〜5:1の容積比、好ましくは約5:1〜3:1、最も好ましくは4:1で油相を水相と混和することによって形成される。油相と水相は、フレンチプレスまたは高剪断ミキサー(例えば、FDAが承認した高剪断ミキサーは、例えばアドミックスインク、マンチェスター、ニューハンプシャー州から入手できる)のような、乳剤を形成するために十分な剪断力を産生することができる任意の装置を用いて混和することができる。。そのような乳剤を作製する方法は、その全文が参照として本明細書に組み入れられる、米国特許第5,103,497号および第4,895,452号に開示されている。
以下の説明は、組成物BCTPおよびX8W60PCの製剤を含む例示的な多くの乳剤を提供する。BCTPは、その中で油相が大豆油、トリ-n-ブチルホスフェート、およびトライトンX-100の80%水溶液から調製された油中水型ナノ乳剤を含む。X8W60PCは、BCTPとW808Pとの等量の混合物を含む。W808Pは、モノステアリン酸グリセロール、精製大豆ステロール(例えば、ジェネロールステロール)、ツイーン60、大豆油、陽イオンハロゲン含有CPCおよびペパーミント油で構成されるリポソーム様化合物である。ジェネロールファミリーはポリエトキシ化大豆ステロール(ヘンケルコーポレーション、アンブラー、ペンシルバニア州)のグループである。本発明の特定の態様に関する乳剤製剤を表1に示す。これらの特定の製剤は、その全文が参照として本明細書に組み入れられる、米国特許第5,700,679号(NN);第5,618,840号;第5,549,901号(W808P);および第5,547,677号に認められる。他の特定の乳剤製剤を図29に示す。その上、図30は、一般製剤と本発明の特定の態様の用途とを系統的に表す。
上記の特定の製剤は、本発明において用いられる多様な組成物を説明するための単なる例である。本発明は、上記の製剤の多くの変法がさらなるナノ乳剤と共に、本発明の方法において用いられることを考慮する。候補となる乳剤が本発明において用いるために適しているか否かを決定するために、3つの基準を分析する。本明細書に記載の方法および標準物質を用いて、候補となる乳剤は、それらが適しているか否かを容易に試験することができる。第一に、乳剤を形成できるかか否かを決定するために、本明細書に記載の方法を用いて所望の成分を調製する。乳剤を形成できなければ、候補物質は拒絶される。例えば、4.5%チオ硫酸ナトリウム、0.5%クエン酸ナトリウム、10%n-ブタノール、64%大豆油、および21%脱イオン水で構成される候補組成物は乳剤を形成しなかった。
本発明の特定の組成物は、有用な活性および特性の範囲を有する。例示的な多くの有用な特性および活性を下記に示す:A)殺微生物活性および微生物抑制活性;B)殺胞子および胞子抑制活性;C)殺ウイルスおよびウイルス抑制活性;D)殺真菌および真菌抑制活性;ならびにE)インビボ作用。さらに、図31A〜Cは、本発明の特定の例示的な製剤の特性を提供する。
本発明の方法を用いて細菌を急速に不活化することができる。特定の態様において、組成物は、グラム陽性菌を不活化するために特に有効である。好ましい態様において、細菌の不活化は約5〜10分後に起こる。このように、細菌は、本発明に従って乳剤に接触させてもよく、迅速かつ有効に不活化されると考えられる。接触と不活化のあいだの期間は、細菌を乳剤に直接曝露する場合、5〜10分またはそれ未満であると予想される。しかし、本発明の乳剤を治療目的で用いて、全身投与する場合、不活化は、適用後5分、10分、15分、20分、25分、30分、60分を含むがこれらに限定されない長期間にわたって起こる可能性がある。さらに、さらなる態様において、不活化が起こるには2時間、3時間、4時間、5時間または6時間を要する可能性がある。
特定の特異的態様において、本発明は、本発明の乳剤が殺胞子活性を有することを証明した。如何なる理論にも拘束されないが(作用機序の理解は、本発明を実践するために必要ではなく、本発明は、如何なる特定の作用機序にも制限されない)、これらの乳剤の殺胞子能は、胞子を乳剤による破壊に対して感受性にする栄養型に完全に変換させずに、発芽の開始を通して起こる。発芽の開始は、乳剤またはその成分の作用によって媒介できる。
さらなる態様において、本発明のナノ乳液組成物は抗ウイルス特性を有することが証明された。これらの乳剤がウイルス物質に及ぼす作用は、プラーク減少アッセイ法(PRA)、細胞酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)、P-ガラクトシダーゼアッセイ法、および電子顕微鏡(EM)を用いてモニターし、脂質調製物の細胞毒性は、(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウム(MTT)染色アッセイ法(モスマン(Mosmann)、1983)を用いて評価した。
本発明のナノ乳剤のさらにもう一つの特性は、それらが抗真菌活性を有する点である。真菌感染症の一般的な起因菌には、カンジダ(Candida)属およびアスペルギルス(Aspergillus)属の様々な種と共に他の種が含まれる。外部真菌感染症は比較的に軽度であるが、全身性真菌感染症は重度の医学的結末を生じうる。ヒトにおける真菌感染症の発生率は増加しているが、これは免疫系の障害を有する患者の数が増加していることに一部帰することができる。真菌疾患、特に全身性の疾患は、免疫系の障害を有する患者に対して生命を脅かしうる。
動物試験は、本発明の組成物および方法の保護および治療作用を証明した。実験動物におけるセレウス菌(Bacillus cereus)感染症は、これまでに炭疽病を研究するためのモデル系として用いられている(例えば、バードンおよびウェンデ(Burdon and Wende)、J. Infect. Diseas. 170(2):272[1960];ラマナおよびジョーンズ(Lamanna and Jones)、J. Bact. 85:532[1963];およびバードン(Burdon)ら、J. Infect. Diseas. 117:307[1967]を参照のこと)。セレウス菌(B. cereus)に実験的に感染させた動物において誘導された疾患症候群は炭疽病と類似である(ドロブニュースキ(Drobniewski)、Clin. microbio. Rev. 6:324[1993];およびフリッツ(Fritz)ら、Lab. Invest. 73:691[1995])。本発明の開発時に行われた実験は、マウスに注入する前にBCTPをセレウス菌(Bacillus cereus)胞子と混合すると、セレウス菌(B. cereus)の病的な作用を防止することを証明した。さらに、セレウス菌(B. cereus)胞子に汚染された刺激された創傷のBCTP処置は、マウスにおける感染および死亡のリスクを著しく減少させた。10倍希釈したBCTPのみを注入した対照動物は、如何なる炎症作用も示さず、このことは、BCTPがマウスにおいて皮膚毒性を有しないことを証明している。これらの結果は、曝露の直前または直後に胞子を処置すると、実験的皮膚感染症の組織損傷の重症度を有効に減少させうることを示唆している。
本明細書に開示の組成物の多くの例示的な用途を下記に示す:A)薬剤および治療物質;B)汚染除去および滅菌;C)食品製造;ならびにD)キットと共にE)本発明の組成物の改変、調製、および輸送のための方法および系の説明書。
本発明は、微生物感染症と闘うおよび/または治療するために適した薬学的および治療組成物および適用において用いてもよい製剤を考慮する。そのような組成物は、感染症を減少させ、微生物を殺し、微生物の増殖を阻害し、またはそうでなければ微生物感染症の有害な作用を消失させるために用いてもよい。
一般的に、本発明は、環境の汚染除去物質として、ならびに軍およびテロリストの攻撃の双方における災害を治療するために用いられる組成物および方法を考慮する。栄養型細菌およびエンベロープ型ウイルス(例えば、チャトリン(Chatlyyne)ら、「HIV-1およびその他の一般的ウイルスに対して有効な殺ウイルス活性を有する脂質乳剤(A Lipid emulsion with effective virucidal activity against HIV-1 and other common viruses)」、レトロウイルスとヒト健康財団、第3回レトロウイルスと日和見感染症会議、ワシントンDC、アメリカ[1996]を参照のこと)、ならびに細菌胞子を含む広範囲の病原体を不活化することと、実験動物における毒性が低いことから、本発明の乳剤は、特定の病原体が同定される前に一般的な汚染除去物質として用いるために適している。本発明の好ましい組成物は、迅速に大量に産生することができ、広範囲の温度で何ヶ月も安定である。これらの特性は、広範囲の汚染除去適用にとって有用である柔軟性を提供する。
本発明はまた、食品媒介細菌、真菌、および毒素に汚染された食品を予防および処置するために食品加工および調製産業において用いてもよい。このように、そのような組成物は、微生物の増殖を減少もしくは阻害、またはそうでなければ食品の微生物汚染の有害な作用を排除するために用いてもよい。これらの応用の場合、乳剤は、添加剤、保存剤または調味料のような食品産業に許容される形で提供される。
本発明の他の態様において、方法および組成物、または方法および組成物の成分は、単一の製剤に処方してもよく、または特定の応用に関して望ましいように、使用時に後に混合するために異なる製剤に分離してもよい。そのような成分は微生物感染症に対して用いるためのキット、汚染除去装置等に含めると都合がよいかも知れない。いくつかの態様において、そのようなキットは、本発明の製剤をその意図する作用部位に輸送するために必要な本質的な材料および試薬を全て含む。
本発明はさらに、本発明のナノ乳剤の改変、ナノ乳剤の他の製品への組み入れ、本発明の組成物の包装および輸送のための多様な方法および系、ならびに微生物に汚染される可能性がある材料または試料の使用または取り扱いに関連した費用の削減方法を提供する。以下の説明は、本発明の組成物の改変、調製、および輸送のいくつかの例を単に提供することを意図している。当業者はそのような方法の改変を認識すると考えられる。
以下の実施例は、本発明の特定の好ましい態様および局面を説明するために示されるのであって、その範囲を制限すると解釈してはならない。
乳剤の製剤化方法
乳剤は以下のように生成する:油相は、有機溶媒、油、および界面活性剤を混和することによって生成し、次に、得られた混合物を37〜90℃で1時間まで加熱する。乳剤は、シリンジ往復装置またはシルバーソン高剪断ミキサーのいずれかによって作製する。水相を油相に加えて、1〜30分間、好ましくは5分間混合する。揮発性の成分を含む乳剤に関しては、揮発性成分を水相と共に加える。
油滴において形成された乳化したリポソームとしての本発明の一例としての細菌不活化乳剤の特徴付け
X8W60PCと呼ばれる本発明の細菌不活化乳剤は、脂質を含む水中油型乳剤をBCTPと混合することによって作製した。特に、主な脂質としてモノオレイン酸グリセロール(GMO)と、陽性荷電産生剤として塩化セチルピリジニウム(CPC)とを有する脂質含有水中油型乳剤(本明細書において、GMO/CPC脂質乳剤または「W808P」と呼ぶ)と、BCTPとを1:1の比(容積:容積)で混合した。米国特許第5,547,677号(その全文が参照として本明細書に組み入れられる)は、本発明の細菌不活化水中油型乳剤を提供するために、BCTPと組み合わせてもよいGMO/CPC脂質乳剤およびその他の関連する脂質乳剤を記載している。
インビトロ殺菌有効性試験I−グラム陽性菌
本発明の乳剤の殺菌有効性を調べるために、乳剤を様々な細菌と10分間混合した後、様々な希釈度で標準的な微生物培地に播種した。次に、コロニー数を無処置培養と比較して、処置によって殺された細菌の割合を決定した。表3は、実験結果を要約する。
インビトロ殺菌有効性試験II−グラム陰性菌
グラム陰性菌の細胞壁による細菌不活化乳剤の取り込みを増加させ、それによって耐性のグラム陰性菌に及ぼす乳剤の殺微生物作用を増強するために、EDTA(エチレンジアミン四酢酸)を乳剤と予め混合した。EDTAを低濃度(50〜25 μM)で用いて、混合物を様々なグラム陰性菌と共に15分間インキュベートした。次に、混合物の殺菌作用をトリプチカーゼ大豆ブロスにおいて測定した。結果を下記の表5に示す。BCTPの100倍希釈を用いると細菌数が99%超減少した。この数の減少は、250 μM EDTA単独では15分間で細菌数を減少できなかった対照群から示されるように、EDTA単独の殺菌作用によるものではなかった。
インビトロ殺菌有効性試験III−栄養型と胞子型
セレウス菌(B. cereus、ATCC#14579)を炭疽菌(Bacillus anthracis)のモデル系として利用した。セレウス菌(B. cereus)の栄養型(活発に増殖する)に及ぼす本発明の化合物の殺菌作用を調べるために、BCTP希釈調製物による実験を行った。培地における37℃で10分間の処置を評価した。表6に要約するように、BCTP乳剤は、セレウス菌(B. cereus)の栄養型に対して有効である。この調製物との10分間の曝露は、100倍もの高い希釈度を含む調べた全ての濃度においてセレウス菌(B. cereus)の栄養型を実質的に完全に殺すために十分である。
インビボ殺菌有効性試験
本発明の乳剤のインビボでの保護および治療効果を証明するために動物試験を行った。実験動物におけるセレウス菌(Bacillus cereus)感染症は炭疽病研究のモデル系としてこれまで用いられている(バードンおよびウェンデ(Burdon and Wende)、1960;バードン(Burdon)ら、1967;ラマナおよびジョーンズ(Lamanna and Jones)、1963)。セレウス菌(B. cereus)を実験的に感染させた動物において誘導された疾患症候群は、いくつかの点で炭疽病に類似していた(ドロブニュースキ(Drobniewski)、1993;フリッツ(Fritz)ら、1995)。本発明の乳剤は、マウスに注入する前にセレウス菌(B. cereus)胞子と混合した。
1cm皮膚創傷にセレウス菌(B. cereus)胞子2.5×107個を感染させた後、さらなる処置を行わずに閉じた。他の群には同数の胞子を感染させた。1時間後、創傷に本発明の乳剤または生理食塩液のいずれかを潅注して、曝露後の汚染除去を刺激した。48時間までに、創傷周囲に平均面積4.86 cm2の大きい壊死領域を認めた。さらに、この群の動物の60%が感染のために死亡した。これらの病変の組織学検から、真皮と真皮下の全体的な壊死と多数の栄養型バシラス(Bacillus)菌が存在することが示された。実験的に感染させた創傷を生理食塩液で潅注しても、如何なる明白な利益も生じなかった。
CD-1マウスに、対照として生理食塩液で10倍希釈した本発明の乳剤を注入したが、肉眼または組織学的分析のいずれにおいても苦痛または炎症反応の兆候を示さなかった。インビボでのセレウス菌(B. cereus)胞子の病原性作用および本発明の乳剤の殺胞子作用を調べるために、セレウス菌(B. cereus)胞子4×107個の懸濁液を生理食塩液または最終希釈10倍の本発明の乳剤と共に混合した後、直ちにCD-1マウスの背部皮下に注射した。
ウサギの角膜に様々な濃度の本発明の乳剤を還流して、24時間および48時間モニターした。組成物を治療的な量で用いても、刺激または異常を認めなかった。
鼻孔あたり4%ナノ乳剤25 μlを注入することによって、鼻腔内毒性をマウスにおいて行った。臨床または組織病理学的変化をこれらのマウスにおいて認めなかった。
インビボ毒性試験I
CD-1マウスに本発明の化合物0.1 ccを皮下注射して、炎症および/または壊死の兆候を4日間観察した。化合物の希釈は滅菌生理食塩液において行った。マウスからの組織試料を、組織病理検査のために10%中性緩衝ホルマリン中で保存した。組織学診査のために送付した皮膚および筋肉試料(未希釈の化合物を注射したマウスから)は、組織壊死の兆候を示すことが報告された。希釈した化合物を注射したマウスからの組織試料は組織学検査を行わなかった。表14および15は2回の個々の実験結果を示す。
インビボ毒性試験II
それぞれ雄性動物5匹および雌性動物5匹からなるスプレージ-ドーリー系ラット1群を個別ケージに入れて、投与前5日間馴化させた。ラットには14日間毎日投与した。0〜13日に、14日間連続してI群の各ラットにBCTPの100倍希釈液3mlをそれぞれ経口投与した。ラットの最大許容可能な経口容量として容量3mlを決定した。0日目および7日目に、投与前に、各ラットの体重を測定した。その後、ラットの体重を試験期間中毎週測定した。動物を疾患または死亡に関して毎日観察した。動物は14日間安静にした。28日目にラットの体重を測定して安楽死させた。経口毒性試験の平均体重の結果を表17に示す。経口毒性試験の平均体重の結果を表17に示す。0日、7日、および14日、21日および28日目での雄性および雌性動物の平均体重および0日〜28日までの体重増加の平均値も同様に表17に示す。ラット1匹は、14日に投与の際に経口投与の操作による機械的外傷のために死亡した。生存しているラットは全て、試験の28日のあいだに体重が増加し、疾患は報告されなかった。このように、トリブチルホスフェート単独は、粘膜に対して毒性で刺激性であることが知られているが、本発明の乳剤に組み入れるとこれらの特徴は示されない。BCTP乳剤の100倍希釈液も同様に、16 CFR §1500.3に提供されるプロトコールに従ってウサギにおける皮膚毒性に関して調べた。乳剤は調べた動物の皮膚に対して刺激性ではなかった。
炭疽菌(Bacillus anthracis)を用いたインビトロ試験
本発明の化合物の炭疽菌(B. anthracis)の胞子型に及ぼす殺菌作用を調べるために、X8W60PC調製物による実験を行った。炭疽菌(B. anthracis)の異なる6つの株に対するX8W60PCの異なる希釈液(水溶液)の殺胞子活性を図3に示す。図4および5に示すように、X8W60PCは炭疽病の異なる7種類の株の98%超を4時間以内に殺し(図3の株およびエームス、USAMRID)、これは1〜10%漂白剤と同程度に有効である。X8W60PCの異なる培地希釈液についても類似の殺胞子活性を認める(図6)。図7は、室温で0時間と比較した炭疽菌(B. anthracis)のデルリオ、テキサス株に対するX8W60PCの殺胞子活性の経時的変化を示す。示されるように、X8W60PCは、30分もの短いあいだに炭疽胞子を殺すことができる。
作用機序
以下の実施例は、本発明の乳剤について提唱される作用機序に洞察を与え、その殺細胞活性を示すために提供する。この作用機序は本発明の範囲を制限すると解釈してはならず、作用機序を理解することは本発明を実践するために必要ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されない。GMO/CPC脂質乳剤(「W808P」)およびBCTPの大腸菌に及ぼす作用を調べた。W808Pは、大腸菌を殺すが(脱イオン水において)、BCTPはこの生物に対して無効であった。図8は、対照を、図9はBCTPを処置した大腸菌を示す。図9に示すように、BCTP処置大腸菌は正常であるように思われ、明確な構造と無傷の脂質膜を示す。図10は、P10処置大腸菌を示し、この場合細菌は内部に空胞を有し、内容物は腫脹して生物の明確な構造は失われていた。特定の理論に拘束されることなく(作用機序の理解は本発明を実践するために必要ではなく、本発明は如何なる特定の作用機序にも限定されない)、この知見は、W808Pが細菌を溶解することなく殺し、その代わりに空胞形成および腫脹によって示されるように内部構造の変化を引き起こすことを示唆している。第二の研究はビブリオコレラ菌(Vibrio cholerae)について実施した。ビブリオコレラ菌(Vibrio cholerae)は大腸菌の近縁であるにもかかわらず、BCTP、W808PおよびX8W60PCはこの生物を殺した。対照の電子顕微鏡写真(図11)と比較すると、W808P処置ビブリオコレラ菌(Vibrio cholerae)(図12)は再度、生物内部構造の腫脹および変化を示すが、細胞は無傷のままである。対照的に、BCTP処置ビブリオコレラ(Vibrio cholerae)(図13)は、細胞の屑が残っているのみで完全に溶解する。X8W60PC(図14)は作用の組み合わせを示し、この場合生物のいくつかは腫脹するが無傷でありいくつかは溶解される。このことは、BCTP、W808PおよびX8W60PCが異なる作用機序によって作用することを示唆している。
バシラス(Bacillus)に対するナノ乳剤の殺胞子活性のさらなる証拠
本実施例は、本発明の乳剤の特定の態様が異なるバシラス(Bacillus)種胞子を不活化できるか否かをさらに調べた結果を提供する。これらの試験の方法および結果を下記に概要する。
油中水型ナノ乳剤、これは油相が大豆油、トリ-n-ブチルホスフェート、およびトライトンX-100の80%水溶液で構成される。X8W60PCは、モノステアリン酸グリセロール、精製大豆ステロール、ツイーン60、大豆油、陽イオンハロゲン含有CPCおよびペパーミント油で構成されるリポソーム様の化合物であるW808PとBCTPとの等量を混合することによって調製した。
セレウス菌(Bacillus cereus)(ATCC 14579)、B.サーキュランス(B. circulans)(ATC 4513)、巨大菌(B. megaterium)(ATCC 14581)、および枯草菌(B. subtilis)(ATCC 11774)をNAYEMn寒天(0.1%酵母抽出物および5mg/ml MnSO4を含む栄養寒天)上で37℃で1週間増殖させた。プレートから菌を擦り取って細菌/胞子を滅菌50%エタノールに懸濁して、残っている栄養型細菌を溶解するために室温(27℃)で攪拌しながら2時間インキュベートした。懸濁液を2,500×gで20分間遠心して、ペレットを冷脱イオン水によって2回洗浄した。胞子ペレットをトリプチカーゼ大豆ブロス(TSB)に再懸濁させて、実験に直ちに用いた。炭疽菌(B. anthracis)胞子、エームスおよびボルム1B株は、ブルース・アイビンス博士(Dr. Bruce Ivins)(USAMRIID、フォートデトリック、フレデリック、メリーランド州)の好意により提供され、これまでに記述されているように調製した(アイビンス(Ivins)ら、1995)。他の炭疽菌株は、マーチン・ヒュージジョーンズ博士(Dr. Martin Huge-Jones)(LSU、バトンルージュ、ルイジアナ州)の好意により提供された。これらの株は、南アフリカ;モザンビーク;カナダのバイソン;およびテキサス州のデルリオからの高対立遺伝子不同性を有する単離菌を表す。
固体培地の殺胞子活性を評価するために、トリプチカーゼ大豆寒天(TSA)をオートクレーヴして、55℃に冷却した。BCTPをTSAに最終希釈が100倍となるように加え、プレートに注ぐ際に絶えず攪拌した。胞子調製物を連続希釈して(10倍)、アリコット10 μlを1試料あたり2枚ずつ播種した(最高接種量は胞子105個/プレートであった)。プレートを37℃で好気的に48時間インキュベートして、増殖を評価した。
セレウス菌(B. cereus)胞子を、37℃の振盪インキュベータ内で、エルレンマイヤーフラスコを用いて、BCTPのTSBによる最終希釈100倍液によって処置した。試料50 mlを一定間隔で採取して、2,500×gで20分間遠心して、上清を捨てた。ペレットを4%グルタルアルデヒドの0.1 Mカコジレート溶液(pH 7.3)で固定した。胞子ペレットを透過性電子顕微鏡のために処理して、酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛によって染色後に薄切片を調べた。
セレウス菌(B. cereus)胞子(最終濃度は胞子106個/ml)を発芽阻害剤D-アラニン(最終濃度1μM)または発芽刺激剤L-アラニン+イノシン(最終濃度各50 μM)のいずれかと共にTSBに懸濁し(ティトバル(Titball)およびマンキー(Manchee)、1987;フォスター(Foster)およびジョンストン(Johnston)、1990;シバタ(Shibata)ら、1976)、その後BCTP(最終希釈100倍)と直ちに混合して、多様な間隔でインキュベートした。次に、混合物を連続希釈して播種し、一晩インキュベートした。翌日、プレートを計数して殺胞子活性の百分率を計算した。
2つの動物モデルを作製した;最初のモデルでは、セレウス菌(B. cereus)胞子(滅菌生理食塩液に懸濁させる)を最終希釈10倍のBCTPの等量と混合した。対照として、同じセレウス菌(B. cereus)胞子懸濁液を等量の滅菌生理食塩液と混合した。次に、胞子4×107個を含む懸濁液100 μlをCD-1マウスに直ちに皮下注射した。
BCTPの殺胞子活性を評価するために、バシラス(Bacillus)属の4種、セレウス菌(B. cereus)、B.サーキュランス(B. circulans)、巨大菌(B. megaterium)、および枯草菌(B. subtilis)の胞子を調べた。100倍希釈したBCTPは、セレウス菌(B. cereus)と巨大菌(B. megaterium)に対して4時間で91%以上の殺胞子活性を示した(図16)。B.サーキュランス(B. circulans)はBCTPに対する感受性がより低く、胞子数の80%の減少を示したが、枯草菌(B. subtilis)はBCTPに対して4時間では抵抗性であるように思われた。BCTPのセレウス菌(B. cereus)に対する殺胞子作用(10倍希釈および100倍希釈)を、漂白剤の100倍希釈液(すなわち、0.0525%次亜塩素酸ナトリウム)に対して比較したところ、殺胞子作用の速度または程度のいずれにも有意差を認めなかった。他のナノ乳剤、X8W60PCは、細菌胞子を殺すためにより有効であった。1000倍希釈では、これは、4時間でセレウス菌(B. cereus)胞子の98%殺菌を示した(BCTPの1000倍希釈液での47%と比較して)。1000倍希釈したX8W60PCはBCTPに対するその抵抗性とは対照的に4時間で枯草菌(B. subtilis)胞子の97.6%殺菌を示した。
100倍希釈したBCTPと1000倍希釈したX8W60PCのセレウス菌(B. cereus)に対する殺胞子活性を分析するために8時間での経時的変化を調べた。100倍希釈したBCTPをセレウス菌(B. cereus)胞子と共にインキュベートすると、生存胞子数が1時間で77%減少し、4時間後には95%減少した。この場合も、1000倍希釈したX8W60PCは、100倍希釈したBCTPより有効であり、30分後に胞子数の約95%減少を認めた(図17)。
最初のインビトロ実験の後、BCTP殺胞子活性を、炭疽菌(B. anthracis)の2つの毒性の強い株(エームスとボルム1B)に対して調べた。増殖培地に100倍希釈で組み入れたBCTPは炭疽菌(B. anthracis)胞子1×105個の増殖を完全に阻害することが判明した。同様に、1000倍希釈したBCTPをエームスまたはボルム1B胞子のいずれかと共に4時間インキュベートすると、混合物を室温でインキュベートした場合には91%以上の殺胞子活性が得られ、混合物を37℃でインキュベートした場合には96%以上の殺胞子活性が得られた(表19)。
コロニー減少アッセイ法によって決定した炭疽菌(Bacillus anthracis)胞子の異なる2つの株に対するBCTP殺胞子活性(%殺菌)。BCTPの1000倍希釈液は27℃または37℃のいずれにおいても4時間で双方の胞子を>91%有効に殺した;これらの温度は胞子発芽の程度が著しく異なる条件である。殺胞子活性は1×106個/mlまでの胞子濃度で一貫していた。
X8W60PCはより高い希釈においても、BCTPよりバシラス(Bacillus)胞子の多くの種に対して有効であるため、発芽を防止するために室温で、炭疽菌(B. anthracis)の異なる4つの株に対して10,000倍までの希釈液で調べた。X8W60PCは、1000倍希釈で86%〜99.9%の最大殺菌を示した(表20)。
異なる臨床単離体を表す炭疽菌(B. anthracis)の異なる4つの株に対するX8W60PCの殺胞子活性。胞子を、発芽を防止するために室温でX8W60PCの異なる希釈液によって処理した。低い希釈では有意な殺菌を認めなかった。最大殺胞子作用は1000倍希釈で認めた。
セレウス菌(B. cereus)は炭疽菌(B. anthracis)に最も近縁であることから、セレウス菌(B. cereus)を用いて試験を行った。BCTPのTSBによる100倍希釈液によって4時間処理したセレウス菌(B. cereus)胞子の透過性電子顕微鏡試験によって、胞子の外皮の広範囲の破壊と、歪んだ皮質、そして中心部の密度喪失を含むセレウス菌(B. cereus)胞子に対する物理的損傷が認められた(図18)。
バシラス(Bacillus)胞子に対するBCTPの殺胞子作用に及ぼす発芽の開始の影響を調べるために、発芽阻害剤であるD-アラニン(ティトバル(Titball)およびマンキー(Manchee)、1987;フォスター(Foster )およびジョンストン(Johnston)、1990)、および発芽刺激剤であるL-アラニンとイノシン(シバタ(Shibata)ら、1976)を胞子およびBCTPと共に1時間インキュベートした。BCTPの殺胞子作用は、10 mM D-アラニンの存在下で遅延し、50 μM L-アラニンおよび50 μMイノシンの存在下では加速した(図19)。
実験動物におけるセレウス菌(Bacillus cereus)感染症は、これまでに、炭疽病を調べるためのモデル系として用いられており、実験的炭疽病感染症と類似の疾患を引き起こす(ウェルコス(Welkos)ら、1986;ドロブニュースキ(Drobniewski)、1993;バードン(Burdon)およびウェンデ(Wende)、1960;バードン(Burdon)ら、1967;フリッツ(Frits)ら、1995;ウェルコス(Welkos)およびフリードランダー(Friedlander)、1988)。BCTPのインビボ有効性を評価するために、皮膚セレウス菌(B. cereus)疾患に関する2つの動物モデルを作製した。これらのモデルはナノ乳剤の皮下投与を含むため、これを適用する前にBCTPのインビボ毒性試験を行った。対照としてBCTPの生理食塩液による10倍希釈液を注入したCD-1マウスは、肉眼的または組織学的分析のいずれにおいても苦痛または炎症反応の兆候を示さなかった(図20A、図20B)。インビボでのセレウス菌(B. cereus)胞子の病原性作用およびBCTPの殺胞子作用を調べるために、セレウス菌(B. cereus)胞子4×107個の懸濁液を生理食塩液またはBCTPの最終10倍希釈液と共に混合した後、CD-1マウスの背部に直ちに皮下注射した。BCTPを含まないセレウス菌(B. cereus)胞子を皮下に感染させたマウスは、6〜8時間で重度の浮腫を発症した。これに続いて18〜24時間で灰色の壊死領域が注射部位周囲に現れ、48時間までに重度のかさぶたが皮膚に形成され、乾燥した赤色の病変が残された(図20C、図20D)。胞子とBCTPとの同時注入によって、胞子をBCTPと予め混合すると、壊死病変の1.68 cm2から0.02 cm2という98%以上の減少を認めた。これは、最小の浮腫または炎症に関連した(図20E、図20F)。
インビトロでインフルエンザA型ウイルス感染症に及ぼす界面活性剤脂質調製物(SLP)の効果
エンベロープ型ウイルスは病原体として非常に懸念されている。それらは迅速に伝幡し、宿主がなくとも長期間にわたって生存することができる。インフルエンザA型ウイルスは、抗ウイルス剤を調べるための良好な容認されたモデルであることからこのウイルスを選択した(カライバノバ(Karaivanova)およびスパイロ(Spiro)、1998;マメン(Mammen)ら、1995;ヒュアン(Huang)ら、1991)。インフルエンザは、非常に接触感染性であり、重度の汎流行性疾患の原因となる臨床的に重要な呼吸器病原体である(マルダー(Mulder)およびハース(Hers)、1972)。
SLPは2段階方法で合成した。大豆油を表1に記載の試薬と混和して、86℃で1時間加熱することによって油相を調製した(フローレンス(Florence)、1993)。次に、水または1%ビスマス水溶液(SS)を油相に容量/容量比で反復シリンジポンプを用いて注入することによってSLPを形成した。
インフルエンザウイルスA/AA/6/60型(ヘドチャー(Hedocher)ら、1996)は、ヒュネインF. マーサブ博士(Dr. Hunein F. Maassab)(ミシガン大学公衆衛生学)から提供された。インフルエンザA型ウイルスは、標準的な方法(バレット(Barrett)およびイングリス(Inglis)、1985)を用いて、受精した病原体不含鶏卵の尿膜腔(SPAFAS、ノルウィッチ、コネチカット州)において増殖させた。ウイルス保存液は−80℃で感染性の尿膜液の少量(108 cfu/ml)において維持した。アデノウイルスベクター(AD.RSV ntlacZ)は、ベクターコア施設(ミシガン大学医療センター、アナーバー、ミシガン州)によって提供され、一定量ずつ(−80℃で1012 pfu/ml)保存した。ベクターは、E1A〜E1Bに及ぶヌクレオチド配列とE3領域の一部とを欠失するヒトアデノウイルス(血清型5)ゲノム骨格に基づいた。これによって、ウイルスの複製能または非許容細胞の形質転換能が障害される。これは、ラウス肉腫ウイルス長末端反復(RSV-LTR)からのプロモーターの制御下で、β-ガラクトシダーゼをコードする大腸菌のLacZ遺伝子を有する。これは、蛋白質発現の検出を容易にするためにLacZ遺伝子の5'末端に結合した核ターゲティング(ntと呼ばれる)エピトープを含む(バラギ(Baragi)ら、1995)。
メイディンダービーイヌ腎(MDCK)細胞は米国微生物系統保存機関(ATCC;ロックビル、メリーランド州)から購入し、293細胞(CRL 1573;形質転換した初代培養胎児ヒト腎臓)は、ベクターコア施設(ミシガン大学メディカルセンター、アナーバー、ミシガン州)から得た。293細胞は、アデノウイルス5型の形質転換遺伝子を発現し、したって、宿主細胞においてAd.RSV ntlacZベクターの複製能を回復する(グラハム(Graham)ら、1977)。
MDCK細胞は、アール塩、2mM L-グルタミン、および1.5 g/L重炭酸ナトリウム(メディアテック社、ハーンドン、バージニア州)を添加し、10%ウシ胎児血清(FBS;ハイクローンラボラトリーズ、ローガン、ユタ州)を含むイーグル最小基本培地において維持した。培地には、0.1 mM非必須アミノ酸、1.0 mMピルビン酸ナトリウム、100 Uペニシリン/mlおよび100 μg/mlストレプトマイシン(ライフテクノロジーズ、ガイサースバーグ、メリーランド州)を添加した。293細胞は、2mM L-グルタミン、0.1 mM非必須アミノ酸、および1.0 mMピルビン酸ナトリウムを含むダルベッコ改変イーグル培地(メディアテック社、ハーンドン、バージニア州)において維持した。この培地はまた、100 U/mlペニシリンおよび100 μg/mlストレプトマイシン(ライフテクノロジーズ、ガイサースバーグ、メリーランド州)を含み、10%FBS(ハイクローンラボラトリーズ、ローガン、ユタ州)を添加した。
インフルエンザA型感染培地は、3.0 μg/mlトリルスルホニルフェニルアラニルクロロメチルケトン(TPCK)処置トリプシン(ワーシントンバイオケミカル社、レークウッド、ニュージャージー州)を添加したMDCK細胞維持培地(FBS不含)であった。アデノウイルス感染培地は、低濃度の血清(2%FBS)を含む293細胞維持培地であった。
重層培地は等量の2×感染培地および1.6%シーケムMEアガロース(FMCバイオプロダクツ社、ロックランド、メリーランド州)で構成された。染色アガロース重層培地は、アガロース重層培地+TPCK処置トリプシンを含まない0.01%ニュートラルレッド溶液(ライフテクノロジーズ、ガイサースバーグ、メリーランド州)で構成された。
プラーク減少アッセイ法は、どこにでも記載されている方法を改変して行った(ヘイデン(Hayden)ら、1980)。MDCK細胞を12ウェルファルコンプレートにおいて細胞1×105個/ウェルで播種し、37℃/5%CO2で3日間インキュベートした。インフルエンザA型ウイルス約1×108 pfuを、下記のように界面活性剤脂質調製物と共にインキュベートした。インフルエンザA型ウイルス-SLP処置および対照は、30〜100 pfu/250 μlを含むように感染培地において希釈した。コンフルエント細胞単層をプレート3枚に1試料あたり3ウェルずつ播種し、37℃/5%CO2で1時間インキュベートした。接種物/培地を吸引し、アガロース重層培地1ml/ウェルを加えて、プレートを37℃/5%CO2でプラークが現れるまでインキュベートした。単層をアガロース重層培地によって染色して、インキュベーションを37℃/5%CO2で継続した。プラークは染色の6〜12時間後に計数した。脂質調製物濃度を含むウェル9個の平均プラーク数を、無処置ウイルスウェルの平均プラーク数と比較した。
インフルエンザA型ウイルスに感染したMDCK細胞におけるウイルス蛋白質を検出および定量するために、インサイチュー細胞ELISAを最適にした。簡単に説明すると、完全培地100 μl中にMDCK細胞2×104個を平底96ウェルマイクロタイタープレートに加えて、一晩インキュベートした。翌日、培養培地を除去して、細胞を血清不含維持培地によって洗浄した。ウイルス接種物100 μlをウェルに加えて、1時間インキュベートした。ウイルス接種物を除去して、MDCK細胞維持培地+2%FBS 100 μlと交換した。感染したMDCK細胞をさらに24時間インキュベートした。次に、細胞をPBSによって1回洗浄し、氷冷エタノール:アセトン混合液(1:1)によって固定して、−20℃で保存した。アッセイ当日、固定した細胞のウェルをPBSによって洗浄して、1%粉乳のPBS溶液によって37℃で30分間ブロッキングした。1000倍希釈したフェレット抗インフルエンザA型ウイルスポリクローナル抗体100 μl(ミシガン大学公衆衛生学部のヒュネインF. マーサブ博士(Dr. Hunein F. Maassab)の好意により提供された)を37℃で1時間ウェルに加えた。細胞を洗浄緩衝液(PBSおよび0.05%ツイーン20)によって4回洗浄し、ヤギ抗フェレットペルオキシダーゼ結合抗体(カークガード&ペリーラボラトリーズ、ガイサースバーグ、メリーランド州)の1000倍希釈液100 μlと共に37℃で30分間インキュベートした。細胞を4回洗浄して、発色するまで1-段階ターボTMB-ELISA基質(ピアス社、ロックフォード、イリノイ州)100 μlと共にインキュベートした。反応は1N硫酸によって停止させ、ELISAマイクロタイターリーダーにおいて波長450 nmでプレートを読みとった。
β-ガラクトシダーゼアッセイ法は、既に記述されているように、細胞抽出物について行った(リム(Lim)1989)。簡単に説明すると、293細胞を96ウェル「U」底組織培養プレートに細胞約4×104個/ウェルで播種して、37℃/5%CO2で維持培地において一晩インキュベートした。翌日、培地を除去して、細胞をダルベッコリン酸緩衝生理食塩液(DPBS)100 μlによって洗浄した。アデノウイルス保存液を5×107 pfu/mlとなるように感染培地で希釈して、下記のようにBCTPの異なる濃度と混合した。BCTPによる処置後、ウイルスを感染培地によって濃度1×104 pfu/mlとなるように希釈して、293細胞に上層した。細胞を37℃/5%CO2で5日間インキュベートした後、プレートを遠心して、培地を除去し、Ca++およびMg++を含まないPBSによって細胞を3回洗浄した。3回目の洗浄後、PBSを吸引して、1×レポーター溶解緩衝液(プロメガ社、マディソン、ウィスコンシン州)100 μlを各ウェルに加えた。細胞溶解を増強するために、プレートを3回凍結融解し、β-ガラクトシダーゼの販売元(プロメガ社、マディソン、ウィスコンシン州)によって提供された説明書に多少の改変を加えてβ-ガラクトシダーゼアッセイ法を行った。細胞抽出物5μlを96ウェル平底プレートに移して、1×レポーター溶解緩衝液(1:10)45 μlと混合した。その後、2×アッセイ緩衝液50 μl(120 mM Na2HPO4、80 mM NaH2PO4、2mM MgCl2、100 mM β-メルカプトエタノール、1.33 mg/ml ONPG(シグマ社、セントルイス、ミズーリ州))を加えて細胞抽出物と混合した。かすかな黄色を認めるまでプレートを室温でインキュベートした。黄色を認めれば、1M重炭酸ナトリウム100 μlを加えて反応を停止させた。プレートをELISAマイクロプレートリーダーにおいて波長420 nmで読みとった。全てのアッセイ法について、μu/μlβ-ガラクトシダーゼ(シグマ社、セントルイス、ミズーリ州)を加えた50 mMビシン緩衝液(シグマ社、セントルイス、ミズーリ州)、pH 7.5および1×レポーター溶解緩衝液によって希釈した100 μg/ml BSAからなる標準物質を流した。各細胞抽出物におけるβ-ガラクトシダーゼ単位は、標準物質におけるレベルを参照することによって回帰分析によって計算し、細胞抽出物試料中の蛋白質のミリグラムで除した。
ウイルス感受性試験の前に、MDCKおよび293細胞に及ぼすSLPの細胞障害性を顕微鏡試験およびMTTアッセイ法によって評価した。ウイルスとSLPの混合物の希釈液を、評価したSLPの安全な濃度より少なくとも1次数高くなるように作製した。インフルエンザA型またはアデノウイルスのいずれか約1×108 pfuを最終濃度10倍、100倍、および1000倍希釈の脂質調製物と共に振盪機上で結果に示す異なる期間インキュベートした。インキュベーション後、SLP/ウイルス混合物の連続希釈液を適切な感染培地において作製し、MDCK(インフルエンザA型ウイルス)、または293(アデノウイルス)細胞に上層して、上記のようにPRA、細胞ELISA、またはβ-ガラクトシダーゼアッセイ法を行った。
インフルエンザA型ウイルスは、超遠心を用いて(ベックマンローター、SW 28Ti、20,000 rpmで16時間)、GTNE(グリシン200 mM、トリス塩酸10 mM(pH 8.8)、NaCl 100 mM、およびEDTA1mM)によって調製した30%蔗糖クッションを通過させることによって尿膜液から半精製した。沈降したウイルスをGTNEによって再構築した。各試料(アデノウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス+BCTP、インフルエンザウイルス+BCTP)10 μlを15分間および60分間インキュベートした後、パーロディアン(parlodian)コーティングした200メッシュ銅グリッドに載せた。次に、2%カコジル酸緩衝グルタルアルデヒド5μlを加えた。3分後に液体を濾紙によって除去した。7%酢酸ウラニル10 μlをグリッドに加えて30秒後に濾紙によって除去した。グリッドを10分間乾燥させ、フィリップスEM400T透過型電子顕微鏡上で調べた。顕微鏡写真は、倍率200,000倍でフジFGフィルムに記録した。
4つの界面活性剤脂質調製物(BCTP、NN、W808P、およびSS)のMDCL細胞のインフルエンザA型感染症に及ぼす影響を調べた。試験した調製物は全て、図22に示すように様々な程度にインフルエンザA型ウイルス感染症を阻害した。BCTPおよびSSは、10倍希釈でインフルエンザA型感染症を95%以上阻害した。NNおよびW80SPはインフルエンザA型ウイルスに対してごく中間的な作用を示したに過ぎず、感染症を約40%減少させた。BCTPの殺ウイルス作用は、100倍希釈液でも減弱しなかった。SSは、100倍希釈液ではより弱い作用を示し、インフルエンザA型感染症の阻害は55%であった。1000倍希釈でのこれらの2つの脂質調製物は、22〜29%の範囲でウイルス感染性に及ぼすごく弱い阻害作用を示したに過ぎなかった(図23B)。
BCTPがインフルエンザA感染性に対して作用を及ぼすために必要な時間を調べるために、ウイルスをBCTPの2つの希釈液(10倍、100倍)と共に4つの異なる時間間隔(5、10、15、30分)でインキュベートした。その後、プラーク減少アッセイ法を行った。表22に示すように、いずれかの希釈のBCTPと共に5分間インキュベートした後、MDCK細胞のインフルエンザA型ウイルス感染性は完全に消失した。濃度または時間に関係なくインフルエンザA型ウイルスとBCTPとの相互作用には有意差を認めなかった。
トライトンX-100洗剤は抗ウイルス活性を有するため(マハ(Maha)およびイガラシ(Igarashi)、1997;ポートカラ(Portcala)ら、1976)、トライトンX-100は、単独または個々のBCTP成分と組み合わせると、BCTPと同程度にインフルエンザA型感染症を阻害するか否かを調べた。インフルエンザA型ウイルスを、1)BCTP、2)トリ(n-ブチル)ホスフェート、トライトンX-100、および大豆油の組み合わせ(TTO)、3)トライトンX-100および大豆油(TO)、または4)トライトンX-100単独(T)によって処置した。BCTPは、トライトンX-100単独または調べた他の成分と混合した場合より10倍および100倍希釈液(トライトンX-100の500倍希釈、5000倍希釈)でインフルエンザA型ウイルスに対して有意に有効であった(図23)。1000倍希釈では、BCTP(トライトンX-100の50,000倍希釈)は、MDCK細胞のインフルエンザA型感染症を約50%減少させたのに対し、同じ濃度でトライトンX-100単独は完全に無効であった。
BCTPが、非エンベロープ型ウイルスの感染に影響を及ぼすか否かを調べるために、β-ガラクトシダーゼをコードするLacZ遺伝子を含む遺伝子操作したアデノウイルスを用いた。このアデノウイルス構築物は、形質転換遺伝子を欠損し、したがって複製可能で、アデノウイルス5型の形質転換遺伝子を含む許容細胞のみを形質転換することができる。形質転換遺伝子を構成的に発現する293細胞は、アデノウイルス複製およびβ-ガラクトシダーゼ酵素の産生を促進するために用いた。図24に示すように、BCTP処置は、293細胞におけるアデノウイルスの複製能およびβ-ガラクトシダーゼ活性の発現能に影響を及ぼさなかった。BCTP処置および無処置アデノウイルスはいずれも、β-ガラクトシダーゼ酵素約0.11単位を産生した。
BCTPのみがエンベロープ型ウイルスの感染を変化させたため、エンベロープ型ウイルスの完全性に及ぼすこのナノ乳剤の作用を、電子顕微鏡を用いてさらに調べた。図25Dに示すように、BCTPの100倍希釈液と60分間インキュベートした後、アデノウイルスの構造は不変である。いくつかの認識可能なインフルエンザA型ビリオンが、BCTPと共に15分インキュベートした後に存在したが(図25B)、認識可能なインフルエンザA型ビリオンは1時間のインキュベーション後には認めなかった。インフルエンザA型ウイルスに対するBCTPの有効性と粘膜に対するその最小の毒性は、エンベロープ型ウイルスによる感染が原因で起こる疾患を予防するための有効な消毒剤および物質としての可能性を示す。
ネズミチフス菌(S. typhimurium)菌のW205EC処置に及ぼす温度とEDTAの影響
図31および32は、0.1%EDTAを加えた場合の本発明の異なる乳剤によるサルモネラ(Salmonella)菌の処置を示す。EDTAは、40℃(図32)および50℃(図33)の双方において乳剤の殺菌活性を改善した。乳剤は10.0%、1.0%、および0.1%希釈で調べた。
X8PCおよびW205ECの抗菌剤特性
上記のように、乳剤X8PCは、トライトンX-100約8容量%、TBP約8容量%、CPC約1%、大豆油約64容量%、および脱イオン水約19容量%からなり、乳剤W205ECは、ツイーン20約5容量%、エタノール約8容量%、CPC約1容量%、油約64容量%(例えば、大豆油)、および脱イオン水約22容量%からなる。X8PCおよびW205ECは、様々な条件で多くの微生物の増殖を減少させるか否かを調べた。図35は、室温および37℃でX8PCの10%、1%、および0.1%によるマイコバクテリア・フォーツイタム(Mycobacteria fortuitum)の対数的減少を示す。
Claims (70)
- 水中油型乳剤が、水相に分布した不連続な油相、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、水中油型乳剤を含む組成物。
- 第一の成分がアルコールを含む、請求項1記載の組成物。
- 第一の成分がグリセロールを含む、請求項1記載の組成物。
- 第二の成分が界面活性剤を含む、請求項1記載の組成物。
- 第二の成分がハロゲン含有化合物を含む、請求項1記載の組成物。
- 水相が水を含む、請求項1記載の組成物。
- 水相がリン酸緩衝生理食塩液を含む、請求項1記載の組成物。
- 油相が植物油を含む、請求項1記載の組成物。
- 植物油が大豆油、アボガド油、亜麻仁油、ココナツ油、綿実油、スクアレン油、オリーブ油、キャノーラ油、トウモロコシ油、菜種油、サフラワー油、およびヒマワリ油からなる群より選択される、請求項8記載の組成物。
- 油相が魚油、香味油、水不溶性ビタミン、および鉱油からなる群より選択される油を含む、請求項1記載の組成物。
- 油相がモーター油を含む、請求項1記載の組成物。
- 油相が水中油型乳剤30〜90容量%を含む、請求項1記載の組成物。
- 油相が水中油型乳剤50〜80容量%を含む、請求項1記載の組成物。
- アルコールがエタノールを含む、請求項1記載の組成物。
- 界面活性剤がポリソルベート界面活性剤を含む、請求項1記載の組成物。
- ポリソルベート界面活性剤がツイーン20、ツイーン40、ツイーン60、およびツイーン80からなる群より選択される、請求項15記載の組成物。
- 界面活性剤がフェオキシポリエトキシエタノールを含む、請求項1記載の組成物。
- フェオキシポリエトキシエタノールがトライトンX-100、X-301、X-165、X-102、およびX-200からなる群より選択される、請求項17記載の組成物。
- フェオキシポリエトキシエタノールがチロキサポールを含む、請求項17記載の組成物。
- 界面活性剤がドデシル硫酸ナトリウムを含む、請求項1記載の組成物。
- ハロゲン含有化合物が塩化セチルピリジニウムを含む、請求項1記載の組成物。
- ハロゲン含有化合物が、ハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスホニウム、ハロゲン化ドデシルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、臭化セチルトリブチルホスホニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、および臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムからなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
- 乳剤が第三の成分をさらに含み、第三の成分が界面活性剤を含む、請求項1記載の組成物。
- 乳剤が第三の成分をさらに含み、第三の成分が発芽増強剤を含む、請求項1記載の組成物。
- 乳剤が第三の成分をさらに含み、第三の成分がリン酸塩に基づく溶媒を含む、請求項1記載の組成物。
- リン酸塩に基づく溶媒がトリブチルホスフェートを含む、請求項25記載の組成物。
- 乳剤が第三の成分をさらに含み、第三の成分がニュートラミンゲン、L-アラニン、塩化アンモニウム、トリプチカーゼ大豆ブロス、酵母抽出物、L-アスコルビン酸、レシチン、p-ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、チオ硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、イノシン、水酸化ナトリウム、デキストロース、およびポリエチレングリコールからなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
- 第一の成分がエタノールを含み、第二の成分がトライトンX-100を含む、請求項1記載の組成物。
- 第一の成分がエタノールを含み、第二の成分が塩化セチルピリジニウムを含み、第三の成分がツイーン20を含む、請求項23記載の組成物。
- 混合物が、油、水溶液、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、混合物を乳化する段階を含む水中油型乳剤を作製する方法。
- 第一の成分がアルコールを含む、請求項30記載の方法。
- 第一の成分がグリセロールを含む、請求項30記載の方法。
- 第二の成分が界面活性剤を含む、請求項30記載の方法。
- 第二の成分がハロゲン含有化合物を含む、請求項30記載の方法。
- 油が、大豆油、アボガド油、亜麻仁油、ココナツ油、綿実油、スクアレン油、オリーブ油、キャノーラ油、トウモロコシ油、菜種油、サフラワー油、およびヒマワリ油からなる群より選択される、請求項30記載の方法。
- 油が魚油、香味油、水不溶性ビタミン、および鉱油からなる群より選択される、請求項30記載の方法。
- 油相がモーター油を含む、請求項30記載の方法。
- アルコールがエタノールを含む、請求項30記載の方法。
- ハロゲン含有化合物が、ハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスホニウム、ハロゲン化ドデシルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、臭化セチルトリブチルホスホニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、または臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムからなる群より選択される、請求項30記載の方法。
- 混合物が第三の成分をさらに含み、第三の成分が界面活性剤を含む、請求項30記載の方法。
- 混合物が第三の成分をさらに含み、第三の成分が発芽増強剤を含む、請求項30記載の方法。
- 混合物が第三の成分をさらに含み、第三の成分がリン酸塩に基づく溶媒を含む、請求項30記載の方法。
- 混合物が第三の成分をさらに含み、第三の成分がニュートラミンゲン、L-アラニン、塩化アンモニウム、トリプチカーゼ大豆ブロス、酵母抽出物、L-アスコルビン酸、レシチン、p-ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、チオ硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、イノシン、水酸化ナトリウム、デキストロース、およびポリエチレングリコールからなる群より選択される、請求項30記載の方法。
- 第一の成分がエタノールを含み、第二の成分がトライトンX-100を含む、請求項30記載の方法。
- 第一の成分がエタノールを含み、第二の成分が塩化セチルピリジニウムを含み、第三の成分がツイーン20を含む、請求項42記載の方法。
- 水中油型乳剤が、水相に分布した不連続な油相、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、水中油型乳剤を含む組成物を領域に曝露する段階を含む、前記領域を保護または汚染を除去する方法。
- 領域が固体表面を含む、請求項46記載の方法。
- 固体表面が医療用装置を含む、請求項46記載の方法。
- 領域が溶液を含む、請求項46記載の方法。
- 領域が生物の表面を含む、請求項46記載の方法。
- 生物がヒトを含む、請求項50記載の方法。
- 生物の表面が生物の外表面を含む、請求項50記載の方法。
- 生物の表面が生物の内側部分を含む、請求項50記載の方法。
- 領域が食品を含む、請求項46記載の方法。
- 以下を含む、乳剤を改変する方法:
a) 水中油型乳剤が、水相に分布した不連続な油相、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、水中油型乳剤を提供する段階;ならびに
b) 改変された乳剤を作成するために、前記乳剤に成分を加えるまたは乳剤から成分を除去する段階。 - 生物定量法において改変された乳剤を試験する段階をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 生物定量法が抗菌剤定量法を含む、請求項55記載の方法。
- 改変された乳剤の販売を宣伝する段階をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 改変された乳剤を販売する段階をさらに含む、請求項54記載の方法。
- 水中油型乳剤が、水相に分布した不連続な油相、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、水中油型乳剤を含む輸送系を含む系。
- 水中油型乳剤が、水相に分布した不連続な油相、アルコールまたはグリセロールを含む第一の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第二の成分を含む、水中油型乳剤に接触する材料を含む系。
- 材料が医療用装置を含む、請求項61記載の系。
- 材料が溶液を含む、請求項61記載の系。
- 溶液が食品を含む、請求項63記載の系。
- 溶液が洗剤を含む、請求項63記載の系。
- 溶液がモーター油を含む、請求項63記載の系。
- 材料が生物材料を含む、請求項61記載の方法。
- 生物材料がヒト組織を含む、請求項61記載の方法。
- 材料が食品を含む、請求項61記載の方法。
- 材料がクリームを含む、請求項61記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US47486699A | 1999-12-30 | 1999-12-30 | |
US09/474,866 | 1999-12-30 | ||
US09/561,111 US6506803B1 (en) | 1999-04-28 | 2000-04-28 | Methods of preventing and treating microbial infections |
US09/561,111 | 2000-04-28 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001549664A Division JP5013495B2 (ja) | 1999-12-30 | 2000-12-29 | 抗微生物組成物とその使用方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012136533A true JP2012136533A (ja) | 2012-07-19 |
JP2012136533A5 JP2012136533A5 (ja) | 2013-05-02 |
Family
ID=27044598
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001549664A Expired - Lifetime JP5013495B2 (ja) | 1999-12-30 | 2000-12-29 | 抗微生物組成物とその使用方法 |
JP2012032313A Pending JP2012136533A (ja) | 1999-12-30 | 2012-02-17 | 抗微生物組成物とその使用方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001549664A Expired - Lifetime JP5013495B2 (ja) | 1999-12-30 | 2000-12-29 | 抗微生物組成物とその使用方法 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6506803B1 (ja) |
EP (2) | EP1242095B1 (ja) |
JP (2) | JP5013495B2 (ja) |
CN (1) | CN1433314B (ja) |
AU (1) | AU2609901A (ja) |
BR (1) | BR0016796A (ja) |
CA (1) | CA2395678C (ja) |
DK (1) | DK1242095T3 (ja) |
ES (1) | ES2425971T3 (ja) |
HK (1) | HK1055897A1 (ja) |
MX (1) | MXPA02006564A (ja) |
WO (1) | WO2001049296A1 (ja) |
Families Citing this family (130)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6635676B2 (en) * | 1999-04-28 | 2003-10-21 | Regents Of The University Of Michigan | Non-toxic antimicrobial compositions and methods of use |
US6506803B1 (en) * | 1999-04-28 | 2003-01-14 | Regents Of The University Of Michigan | Methods of preventing and treating microbial infections |
US7767216B2 (en) * | 1999-04-28 | 2010-08-03 | The Regents Of The University Of Michigan | Antimicrobial compositions and methods of use |
US7655252B2 (en) * | 1999-04-28 | 2010-02-02 | The Regents Of The University Of Michigan | Antimicrobial nanoemulsion compositions and methods |
US8236335B2 (en) * | 1999-04-28 | 2012-08-07 | The Regents Of The University Of Michigan | Antimicrobial nanoemulsion compositions and methods |
CA2383105C (en) * | 1999-09-24 | 2010-01-26 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Intranasal influenza virus vaccine |
US6794352B2 (en) | 2000-06-12 | 2004-09-21 | Jeffrey S. Svendsen | Cleaning towel having a color identifying label and sanitizer release polymer composition |
AU2002367976B2 (en) * | 2001-06-05 | 2007-06-21 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
JP2010209109A (ja) * | 2001-06-25 | 2010-09-24 | Regents Of The Univ Of Michigan | 抗微生物ナノエマルジョンの組成物および方法 |
US20040248764A1 (en) * | 2001-08-28 | 2004-12-09 | Franklin Lanny U | Treatment and prevention of infections in plants |
US7745686B2 (en) | 2001-11-02 | 2010-06-29 | Playtex Products, Inc. | Catamenial device |
US7799968B2 (en) * | 2001-12-21 | 2010-09-21 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Sponge-like pad comprising paper layers and method of manufacture |
US20030175318A1 (en) * | 2002-03-06 | 2003-09-18 | Schilling Amanda S. | Application of germination solution improved efficacy of biological decontamination |
EP1494528B1 (en) * | 2002-04-17 | 2006-10-18 | Agribiotec s.r.l. | Use of vegetable oil as an adjuvant for substances having a fungicide, bactericide, insecticide and herbicide activity |
GB0213097D0 (en) | 2002-06-07 | 2002-07-17 | Autoglym | Improvements in or relating to organic matter |
US20040111817A1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-06-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Disposable scrubbing product |
US7994079B2 (en) * | 2002-12-17 | 2011-08-09 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Meltblown scrubbing product |
AU2004218353C1 (en) | 2003-03-05 | 2011-02-24 | Byocoat Enterprises, Inc. | Antimicrobial solution and process |
WO2005002337A1 (en) * | 2003-04-02 | 2005-01-13 | Virtual Drug Development, Inc. | Disinfectant compositions and methods |
US20040204496A1 (en) * | 2003-04-11 | 2004-10-14 | Ammon Daniel M. | Disinfecting solutions effective against bacterial endospores |
US20100075914A1 (en) * | 2008-04-18 | 2010-03-25 | Nanobio Corporation | Methods for treating herpes virus infections |
US20050208083A1 (en) * | 2003-06-04 | 2005-09-22 | Nanobio Corporation | Compositions for inactivating pathogenic microorganisms, methods of making the compositons, and methods of use thereof |
CA2528095C (en) * | 2003-06-04 | 2014-10-14 | Nanobio Corporation | Compositions for inactivating pathogenic microorganisms, methods of making the compositions, and methods of use thereof |
US7348097B2 (en) * | 2003-06-17 | 2008-03-25 | Medtronic, Inc. | Insulative feed through assembly for electrochemical devices |
US8211448B2 (en) * | 2003-07-07 | 2012-07-03 | Nares Ab | Microemulsions and its use for preventing airway diseases |
PL1648412T3 (pl) * | 2003-07-07 | 2008-04-30 | Nares Ab | Mikroemulsje i ich zastosowanie do zapobiegania chorobom dróg oddechowych |
US20090232748A1 (en) * | 2003-11-07 | 2009-09-17 | Viratox, L.L.C. | Virucidal activities of cetylpyridinium chloride |
EP1686993B1 (en) * | 2003-11-07 | 2011-01-12 | Viratox, L.L.C. | Virucidal activities of a composition comprising cetylpyridinium chloride and citric acid |
US20050100601A1 (en) * | 2003-11-07 | 2005-05-12 | Viratox, L.L.C. | Virucidal activities of cetylpyridinium chloride |
US20050130536A1 (en) * | 2003-12-11 | 2005-06-16 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Disposable scrubbing product |
US20050129897A1 (en) * | 2003-12-11 | 2005-06-16 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Disposable scrubbing product |
US20050136772A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-06-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Composite structures containing tissue webs and other nonwovens |
PL1711058T3 (pl) * | 2004-01-23 | 2022-02-07 | Eden Research Plc | Sposoby zabijania nicieni obejmujące aplikację składnika terpenowego |
US7707931B2 (en) | 2004-04-06 | 2010-05-04 | West Liberty Foods, L.L.C. | Clean room food processing systems, methods and structures |
PT2338332E (pt) * | 2004-05-20 | 2014-05-15 | Eden Research Plc | Partícula oca de glucano ou partícula de parede celular que encapsula um componente de terpeno |
US20050260138A1 (en) * | 2004-05-21 | 2005-11-24 | Virgil Flanigan | Producton and use of a gaseous vapor disinfectant |
NZ534007A (en) * | 2004-07-09 | 2007-06-29 | Horticulture & Food Res Inst | Fungicidal composition comprising anhydrous milk fat (AMF) and soybean oil for the treatment of Powdery Mildew |
US20060135026A1 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-22 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Composite cleaning products having shape resilient layer |
CA2600054A1 (en) * | 2005-03-09 | 2006-09-21 | Combe Incorporated | Stable mixed emulsions |
US20070054834A1 (en) * | 2005-04-11 | 2007-03-08 | Nanobio Corporation | Quaternary ammonium halides for treatment of infectious conditions |
US20060292248A1 (en) * | 2005-06-20 | 2006-12-28 | Bio-Germ Protection, Llc | Biological attack protection kit and method |
US20070015738A1 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-18 | Walker Stephen G | Use of non-antibacterial tetracycline formulations for inhibiting bacterial spores from becoming infectious vegetative cells |
CA2618974C (en) * | 2005-08-09 | 2014-01-28 | Nanobio Corporation | Nanoemulsion compositions having anti-inflammatory activity |
BRPI0520510A2 (pt) * | 2005-09-03 | 2009-05-12 | Byocoat Entpr Inc | composições antimicrobiais e seus processos associados |
WO2007040598A2 (en) * | 2005-09-19 | 2007-04-12 | Combe Incorporated | Stable emulsion systems with high salt tolerance |
JP2009517446A (ja) | 2005-11-30 | 2009-04-30 | エーデン リサーチ ピーエルシー | テルペン含有組成物とその作製方法及び使用方法 |
EP1954130B1 (en) | 2005-11-30 | 2018-06-13 | Eden Research Plc | Methods comprising terpene mixtures comprising thymol and citral |
AR060043A1 (es) * | 2006-03-23 | 2008-05-21 | Smithkline Beecham Corp | Formulacion de limpieza de dispositivos dentales, metodo de limpieza de un dispositivo dental fuera de la cavidad bucal, estuche o conjunto (kit) para suministrar dicha formulacion, metodo para prevenir el aliento de dentadura y metodo para mantener el aliento fresco en la boca de un usuario de disp |
US9839685B2 (en) * | 2006-04-13 | 2017-12-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods of inducing human immunodeficiency virus-specific immune responses in a host comprising nasally administering compositions comprising a naonemulsion and recombinant GP120 immunogen |
US20080038295A1 (en) * | 2006-04-13 | 2008-02-14 | Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for orthopox virus vaccination |
US10138279B2 (en) | 2006-04-13 | 2018-11-27 | Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for Bacillus anthracis vaccination |
WO2008103416A1 (en) * | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Capps Charles L | Synergistic enhancement of calcium propionate |
CN101032507B (zh) * | 2007-04-06 | 2010-09-29 | 西北农林科技大学 | 一种红霉素纳米乳抗菌药物及其制备方法 |
WO2008137747A1 (en) | 2007-05-02 | 2008-11-13 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same |
EP3023107A1 (en) | 2008-04-21 | 2016-05-25 | Nanobio Corporation | Nanoemulsion influenza vaccine |
WO2009132342A1 (en) * | 2008-04-25 | 2009-10-29 | Nanobio Corporation | Nanoemulsions for treating fungal, yeast and mold infections |
WO2009132343A1 (en) * | 2008-04-25 | 2009-10-29 | Nanobio Corporation | Nanoemulsions for treating onchomycosis |
CA2725381A1 (en) * | 2008-05-23 | 2010-03-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion adjuvants |
WO2009143524A2 (en) * | 2008-05-23 | 2009-11-26 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
FR2933104B1 (fr) * | 2008-06-26 | 2015-10-09 | Biomerieux Sa | Milieu de culture comportant un compose inhibiteur ou retardateur de germination de spores |
CA2738245A1 (en) | 2008-09-26 | 2010-04-01 | Nanobio Corporation | Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same |
EP2349285B1 (en) | 2008-10-10 | 2016-03-23 | Dara Biosciences, Inc. | Nanoemulsions comprising Spicamycin derivatives for use in the treatment of pain |
CA2743904A1 (en) | 2008-11-17 | 2010-05-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Cancer vaccine compositions and methods of using the same |
EP2369923B1 (en) * | 2008-11-26 | 2016-06-22 | Viroblock SA | Methods for inhibiting gram-positive bacteria using non-phospholipid lipid vesicules |
EP2391342A2 (en) | 2009-01-28 | 2011-12-07 | Nanobio Corporation | Compositions for treatment and prevention of acne, methods of making the compositions, and methods of use thereof |
US8668911B2 (en) | 2009-05-14 | 2014-03-11 | The Regents Of The University Of Michigan | Streptococcus vaccine compositions and methods of using the same |
NZ597182A (en) | 2009-05-22 | 2014-07-25 | Genocea Biosciences Inc | Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response |
ES2566646T3 (es) * | 2009-06-16 | 2016-04-14 | The Regents Of The University Of Michigan | Vacunas en nanoemulsión |
US20110135702A1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-09 | Hoffman Douglas R | Sporicidal composition for clostridium difficile spores |
US20110200683A1 (en) * | 2010-02-16 | 2011-08-18 | Piper Medical, Inc | Hydrogen peroxide solution producing first aid substance, packaging, and treatment |
US20110229516A1 (en) * | 2010-03-18 | 2011-09-22 | The Clorox Company | Adjuvant phase inversion concentrated nanoemulsion compositions |
WO2011116262A2 (en) * | 2010-03-19 | 2011-09-22 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for diagnosing and treating urinary tract infections |
JP5894146B2 (ja) | 2010-05-20 | 2016-03-23 | エコラボ ユーエスエー インコーポレイティド | レオロジー改変された低発泡性液体抗菌組成物及びその使用方法 |
WO2013006797A1 (en) | 2011-07-06 | 2013-01-10 | Nanobio Corporation | Human respiratory syncytial virus vaccine |
CA2845872C (en) | 2011-08-22 | 2023-03-28 | Nanobio Corporation | Herpes simplex virus nanoemulsion vaccine |
BR112014005406A2 (pt) | 2011-09-09 | 2017-03-28 | Nanobio Corp | composição de vacina e respectivo uso |
AU2012340712B2 (en) | 2011-11-23 | 2017-09-14 | Genocea Biosciences, Inc. | Nucleic acid vaccines against Herpes Simplex Virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response |
CN102526139A (zh) * | 2012-02-23 | 2012-07-04 | 华子昂 | 一种人工阴道液及其制备方法 |
FR2997304B1 (fr) * | 2012-10-26 | 2017-07-07 | Isp Investments Inc | Utilisation d’un extrait de lin, en tant qu’agent actif activateur de la synthese de peptides antimicrobiens |
GB201220940D0 (en) | 2012-11-21 | 2013-01-02 | Eden Research Plc | Method P |
CN103830726A (zh) * | 2012-11-23 | 2014-06-04 | 魏维 | 抗微生物有机纳米组合物及其制备方法 |
KR20140141857A (ko) * | 2013-05-31 | 2014-12-11 | 한국생명공학연구원 | 패실로마이세스 속 균주를 이용한 생물 농약 제조방법 |
ES2924988T3 (es) | 2014-10-10 | 2022-10-13 | Univ Michigan Regents | Composiciones con nanoemulsiones para prevenir, inhibir o eliminar una enfermedad alérgica e inflamatoria |
US20180344817A1 (en) | 2015-05-01 | 2018-12-06 | Precision Biosciences, Inc. | Precise deletion of chromosomal sequences in vivo and treatment of nucleotide repeat expansion disorders using engineered nucleases |
GB2556002B (en) | 2015-07-07 | 2020-12-16 | Bluewillow Biologics Inc | Methods and compositions for nanoemulsion vaccine formulations |
AU2016321244B2 (en) | 2015-09-08 | 2020-09-24 | Precision Biosciences, Inc. | Treatment of retinitis pigmentosa using engineered meganucleases |
CA3001008A1 (en) | 2015-10-05 | 2017-04-13 | Precision Biosciences, Inc. | Engineered meganucleases with recognition sequences found in the human t cell receptor alpha constant region gene |
IL296340A (en) | 2015-10-05 | 2022-11-01 | Prec Biosciences Inc | Genetically modified cells containing a modified human t cell receptor alpha constant region gene |
WO2017112859A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Precision Biosciences, Inc. | Engineered meganucleases with recognition sequences found in the human beta-2 microglobulin gene |
WO2017189893A1 (en) | 2016-04-27 | 2017-11-02 | University Of Puerto Rico | 1,5-disubstituted 1,2,3-triazoles are inhibitors of rac/cdc42 gtpases |
DK3452583T3 (da) | 2016-05-03 | 2022-01-10 | Prec Biosciences Inc | Konstruerede nukleaser, der er nyttige til behandling af hæmofili a |
WO2017201390A1 (en) | 2016-05-19 | 2017-11-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Novel adjuvant compositions |
JP6897031B2 (ja) * | 2016-09-01 | 2021-06-30 | 住友ベークライト株式会社 | 防カビ剤、防カビ樹脂フィルム、防カビ積層フィルム及び防カビ包装体 |
WO2018064232A1 (en) | 2016-09-28 | 2018-04-05 | Genocea Biosciences, Inc. | Methods and compositions for treating herpes |
CA3039014A1 (en) | 2016-10-04 | 2018-04-12 | Precision Biosciences, Inc. | Co-stimulatory domains for use in genetically-modified cells |
BR112019007450A2 (pt) | 2016-10-14 | 2020-07-07 | Precision Biosciences, Inc. | meganucleases modificadas específicas para sequências de reconhecimento no genoma do vírus da hepatite b |
WO2018073393A2 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Cellectis | Tal-effector nuclease (talen) -modified allogenic cells suitable for therapy |
KR102620399B1 (ko) | 2017-04-21 | 2024-01-04 | 프리시젼 바이오사이언시스 인코포레이티드 | Pcsk9 유전자 내의 인식 서열에 대해 특이적인 조작된 메가뉴클레아제 |
WO2018201144A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for reducing dna-induced cytotoxicity and enhancing gene editing in primary cells |
EP3634493A1 (en) | 2017-05-08 | 2020-04-15 | Precision BioSciences, Inc. | Nucleic acid molecules encoding an engineered antigen receptor and an inhibitory nucleic acid molecule and methods of use thereof |
WO2019005957A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Precision Biosciences, Inc. | GENETICALLY MODIFIED T CELLS COMPRISING A MODIFIED INTRON IN THE ALPHA T CELL RECEPTOR GENE |
JP7138702B2 (ja) | 2017-09-22 | 2022-09-16 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー | カテーテルロック溶液としての使用のための4%クエン酸三ナトリウム溶液 |
EP3692057B9 (en) | 2017-10-03 | 2023-10-04 | Precision BioSciences, Inc. | Modified epidermal growth factor receptor peptides for use in genetically-modified cells |
WO2019089913A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | Precision Biosciences, Inc. | Engineered nucleases that target human and canine factor viii genes as a treatment for hemophilia a |
EP4275697A3 (en) | 2018-04-12 | 2024-01-17 | Precision BioSciences, Inc. | Optimized engineered nucleases having specificity for the human t cell receptor alpha constant region gene |
US11142750B2 (en) | 2018-04-12 | 2021-10-12 | Precision Biosciences, Inc. | Optimized engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the Hepatitis B virus genome |
US11369578B2 (en) | 2018-11-15 | 2022-06-28 | Bluewillow Biologics, Inc. | Persistent topical antimicrobial compositions and methods of using the same |
WO2020102494A1 (en) | 2018-11-15 | 2020-05-22 | Bluewillow Biologics, Inc. | Nanoemulsion compositions having enhanced permeability |
EP3898661A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | Precision BioSciences, Inc. | Genetic modification of the hydroxyacid oxidase 1 gene for treatment of primary hyperoxaluria |
CN109845757A (zh) * | 2019-03-15 | 2019-06-07 | 威海市农业科学院 | 果园用病虫害铲除剂及其制备方法、使用方法 |
CN113993999B (zh) | 2019-04-03 | 2022-11-22 | 精密生物科学公司 | 包含microRNA适应的shRNA(shRNAmiR)的遗传修饰的免疫细胞 |
WO2021016608A1 (en) | 2019-07-25 | 2021-01-28 | Precision Biosciences, Inc. | Compositions and methods for sequential stacking of nucleic acid sequences into a genomic locus |
CA3148179A1 (en) | 2019-08-20 | 2021-02-25 | Bruce J. Mccreedy Jr. | Lymphodepletion dosing regimens for cellular immunotherapies |
WO2021075391A1 (ja) * | 2019-10-17 | 2021-04-22 | タマ化学工業株式会社 | 除菌組成物及びそれを用いる細菌芽胞の除菌方法 |
US20220411479A1 (en) | 2019-10-30 | 2022-12-29 | Precision Biosciences, Inc. | Cd20 chimeric antigen receptors and methods of use for immunotherapy |
WO2021113765A1 (en) | 2019-12-06 | 2021-06-10 | Precision Biosciences, Inc. | Optimized engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the hepatitis b virus genome |
US20230036065A1 (en) | 2019-12-06 | 2023-02-02 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for cancer immunotherapy |
CN111110631A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-05-08 | 苏国霞 | 一种高效广谱的抗菌纳米乳及其制备方法 |
WO2021231259A1 (en) | 2020-05-11 | 2021-11-18 | Precision Biosciences, Inc. | Self-limiting viral vectors encoding nucleases |
EP4150068A1 (en) | 2020-05-12 | 2023-03-22 | Precision BioSciences, Inc. | Treatment of retinitis pigmentosa using improved engineered meganucleases |
EP4192875A1 (en) | 2020-08-10 | 2023-06-14 | Precision BioSciences, Inc. | Antibodies and fragments specific for b-cell maturation antigen and uses thereof |
WO2022040582A1 (en) | 2020-08-21 | 2022-02-24 | Precision Biosciences, Inc. | Engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the transthyretin gene |
IL302733A (en) | 2020-11-12 | 2023-07-01 | Prec Biosciences Inc | Transgenic magnonucleases with specificity for recognition sequences in the dystrophin gene |
CA3172161A1 (en) | 2021-01-08 | 2022-07-14 | James Jefferson Smith | Engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the hydroxyacid oxidase 1 gene |
EP4284823A1 (en) | 2021-01-28 | 2023-12-06 | Precision BioSciences, Inc. | Modulation of tgf beta signaling in genetically-modified eukaryotic cells |
JP2024514939A (ja) | 2021-04-22 | 2024-04-03 | プレシジョン バイオサイエンシズ,インク. | ヒトミトコンドリアゲノムを標的化する遺伝子操作メガヌクレアーゼ |
EP4326862A1 (en) | 2021-04-22 | 2024-02-28 | Precision Biosciences, Inc. | Engineered meganucleases that target human mitochondrial genomes |
AU2022371430A1 (en) | 2021-10-19 | 2024-05-30 | Precision Biosciences, Inc. | Gene editing methods for treating alpha-1 antitrypsin (aat) deficiency |
AU2022368911A1 (en) | 2021-10-19 | 2024-05-30 | Precision Biosciences, Inc. | Gene editing methods for treating alpha-1 antitrypsin (aat) deficiency |
WO2023081767A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for immunotherapy |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63221835A (ja) * | 1987-03-09 | 1988-09-14 | Lion Corp | 安定な水中油型エマルジヨンの製造方法 |
JPH05124910A (ja) * | 1991-10-31 | 1993-05-21 | Takeshi Uchibori | 殺菌消毒液及びこれを用いる殺菌消毒材 |
JPH06279268A (ja) * | 1993-01-27 | 1994-10-04 | Takeda Chem Ind Ltd | 消毒殺菌剤およびこれを含有するエアゾール組成物 |
JPH07102294A (ja) * | 1993-09-30 | 1995-04-18 | Shiseido Co Ltd | 殺菌洗浄用組成物 |
JPH10500686A (ja) * | 1994-05-20 | 1998-01-20 | ノババックス インコーポレイテッド | 抗菌性水中油エマルジョン |
JP5013495B2 (ja) * | 1999-12-30 | 2012-08-29 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 抗微生物組成物とその使用方法 |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT986794B (it) * | 1971-04-02 | 1975-01-30 | Lepetit Spa | Schiuma detergente ad azione tonificante |
US4451267A (en) * | 1982-09-29 | 1984-05-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Microemulsions from vegetable oil and aqueous alcohol with trialkylamine surfactant as alternative fuel for diesel engines |
US4599088A (en) * | 1984-08-30 | 1986-07-08 | Texaco Inc. | Clear stable gasoline-alcohol-water motor fuel composition |
JP2506125B2 (ja) * | 1987-10-06 | 1996-06-12 | 雄二 加藤 | 殺菌及び柔軟剤組成物 |
US4895452A (en) | 1988-03-03 | 1990-01-23 | Micro-Pak, Inc. | Method and apparatus for producing lipid vesicles |
US5103497A (en) | 1989-11-14 | 1992-04-07 | Hicks John W | Flying spot endoscope |
US5108660A (en) | 1990-01-29 | 1992-04-28 | The Procter & Gamble Company | Hard surface liquid detergent compositions containing hydrocarbyl amidoalkylenesulfobetaine |
US5709879A (en) | 1990-06-29 | 1998-01-20 | Chiron Corporation | Vaccine compositions containing liposomes |
US5389369A (en) | 1991-02-21 | 1995-02-14 | Exoxemis, Inc. | Halo peroxidase containing compositions for killing yeast and sporular microorganisms |
US5961970A (en) | 1993-10-29 | 1999-10-05 | Pharmos Corporation | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
US5368837A (en) | 1994-04-14 | 1994-11-29 | Sterling Winthrop Inc. | X-ray contrast compositions containing an organic crystalline X-ray contrast agent and a cellulose derivative |
US5549901A (en) | 1994-05-20 | 1996-08-27 | Novavax, Inc. | Antimicrobial oil-in-water emulsions |
US5547677A (en) | 1994-05-20 | 1996-08-20 | Novavax, Inc. | Antimicrobial oil-in-water emulsions |
AU1533697A (en) | 1996-01-24 | 1997-08-20 | Warner-Lambert Company | Peroxide/essential oils containing mouthwash compositions and two-part mouthwash systems |
US5662957A (en) | 1996-05-03 | 1997-09-02 | Novavax, Inc. | Oil containing lipid vesicles with marine applications |
US5985309A (en) * | 1996-05-24 | 1999-11-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparation of particles for inhalation |
US5700679A (en) | 1996-06-07 | 1997-12-23 | Novavax, Inc. | Lipid vesicles having a bilayer containing a surfactant with anti-viral and spermicidal activity |
FR2750329B1 (fr) * | 1996-06-28 | 1998-08-14 | Oreal | Emulsion huile-dans-eau ultrafine gelifiee et stabilisee par un poly(acide 2 -acrylamido 2 -methylpropane sulfonique) reticule et neutralise a au moins 90 %, procede de preparation et applications |
US6015832A (en) * | 1997-12-31 | 2000-01-18 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods of inactivating bacteria including bacterial spores |
US6361787B1 (en) | 1998-05-27 | 2002-03-26 | The Clorox Company | Enhanced antimicrobial composition |
-
2000
- 2000-04-28 US US09/561,111 patent/US6506803B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 JP JP2001549664A patent/JP5013495B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 EP EP00989613.5A patent/EP1242095B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 CA CA2395678A patent/CA2395678C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 WO PCT/US2000/035651 patent/WO2001049296A1/en active Application Filing
- 2000-12-29 DK DK00989613.5T patent/DK1242095T3/da active
- 2000-12-29 CN CN008187452A patent/CN1433314B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 BR BR0016796-7A patent/BR0016796A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-12-29 MX MXPA02006564A patent/MXPA02006564A/es active IP Right Grant
- 2000-12-29 EP EP10012563A patent/EP2364709B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 ES ES00989613T patent/ES2425971T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-29 AU AU26099/01A patent/AU2609901A/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-11-12 HK HK03108181.9A patent/HK1055897A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-02-17 JP JP2012032313A patent/JP2012136533A/ja active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63221835A (ja) * | 1987-03-09 | 1988-09-14 | Lion Corp | 安定な水中油型エマルジヨンの製造方法 |
JPH05124910A (ja) * | 1991-10-31 | 1993-05-21 | Takeshi Uchibori | 殺菌消毒液及びこれを用いる殺菌消毒材 |
JPH06279268A (ja) * | 1993-01-27 | 1994-10-04 | Takeda Chem Ind Ltd | 消毒殺菌剤およびこれを含有するエアゾール組成物 |
JPH07102294A (ja) * | 1993-09-30 | 1995-04-18 | Shiseido Co Ltd | 殺菌洗浄用組成物 |
JPH10500686A (ja) * | 1994-05-20 | 1998-01-20 | ノババックス インコーポレイテッド | 抗菌性水中油エマルジョン |
JPH10500687A (ja) * | 1994-05-20 | 1998-01-20 | ノババックス インコーポレイテッド | 抗菌性水中油エマルジョン |
JP5013495B2 (ja) * | 1999-12-30 | 2012-08-29 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 抗微生物組成物とその使用方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2395678A1 (en) | 2001-07-12 |
ES2425971T3 (es) | 2013-10-18 |
MXPA02006564A (es) | 2004-07-30 |
CA2395678C (en) | 2012-06-26 |
EP2364709B1 (en) | 2012-11-28 |
WO2001049296A1 (en) | 2001-07-12 |
JP2003519184A (ja) | 2003-06-17 |
EP1242095A4 (en) | 2005-03-16 |
CN1433314A (zh) | 2003-07-30 |
HK1055897A1 (en) | 2004-01-30 |
EP2364709A1 (en) | 2011-09-14 |
JP5013495B2 (ja) | 2012-08-29 |
US6506803B1 (en) | 2003-01-14 |
EP1242095B1 (en) | 2013-05-29 |
CN1433314B (zh) | 2011-08-31 |
BR0016796A (pt) | 2003-06-10 |
AU2609901A (en) | 2001-07-16 |
DK1242095T3 (da) | 2013-08-12 |
EP1242095A1 (en) | 2002-09-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5013495B2 (ja) | 抗微生物組成物とその使用方法 | |
US7767216B2 (en) | Antimicrobial compositions and methods of use | |
US6635676B2 (en) | Non-toxic antimicrobial compositions and methods of use | |
US6559189B2 (en) | Non-toxic antimicrobial compositions and methods of use | |
US8771731B2 (en) | Antimicrobial nanoemulsion compositions and methods | |
US8232320B2 (en) | Antimicrobial nanoemulsion compositions and methods | |
JP5755840B2 (ja) | ナノエマルジョンワクチン | |
AU2002350587A1 (en) | Antimicrobial nanoemulsion compositions and methods | |
AU2004273779B2 (en) | Compositions for inactivating pathogenic microorganisms, methods of making the compositions, and methods of use thereof | |
US20140212463A1 (en) | Compositions for inactivating pathogenic microorganisms, methods of making the compositions, and methods of use thereof | |
WO2005030172A1 (en) | Antimicrobial nanoemulsion compositions and methods | |
JP2010209109A (ja) | 抗微生物ナノエマルジョンの組成物および方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130315 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20130917 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131009 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140108 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140114 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140408 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20141022 |