JP2011526788A5 - - Google Patents
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Description
他の実施態様は、直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であり、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そしてここでその直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む。いくつかの実施態様において、上記で述べたようなキットは、細胞溶解のために、ＮａＯＨまたは他の強アルカリ性化合物、または他の薬剤を必要に応じて含み得る。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行う工程を含み、該直接緩衝剤は、少なくとも０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ
を含む、方法。
（項目２）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目１に記載の方法。
（項目４）
ヒトのアイデンティティーを決定する方法であって、該方法は：
ヒト由来のデオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程であって、ここで該直接緩衝剤は、複数のプライマーペアを含み、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、工程；
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行って、複数のＰＣＲアンプリコンを形成する工程であって、ここで各ＰＣＲアンプリコンは、確認可能なサイズを有する、工程；および
該ＰＣＲアンプリコンのサイズを参照することによって該ヒトを同定する工程を含み、ここで該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡをさらに含む、方法。
（項目５）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目３に記載の方法。
（項目７）
核酸を調製する方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；
該溶液に対して下流の酵素的操作を行う工程を含み、該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、方法。
（項目８）
前記下流の酵素的操作はＰＣＲである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１１）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目７に記載の方法。
（項目１２）
以下：
複数のプライマーペアであって、各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、プライマーペア；および
０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、直接緩衝剤、
を含む、キット。
（項目１３）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目１２に記載のキット。
（項目１４）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目１３に記載のキット。
（項目１５）
直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であって、
各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そして
該直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート２０、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、反応混合物。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行う工程を含み、該直接緩衝剤は、少なくとも０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ
を含む、方法。
（項目２）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目１に記載の方法。
（項目４）
ヒトのアイデンティティーを決定する方法であって、該方法は：
ヒト由来のデオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程であって、ここで該直接緩衝剤は、複数のプライマーペアを含み、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、工程；
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行って、複数のＰＣＲアンプリコンを形成する工程であって、ここで各ＰＣＲアンプリコンは、確認可能なサイズを有する、工程；および
該ＰＣＲアンプリコンのサイズを参照することによって該ヒトを同定する工程を含み、ここで該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡをさらに含む、方法。
（項目５）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目３に記載の方法。
（項目７）
核酸を調製する方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；
該溶液に対して下流の酵素的操作を行う工程を含み、該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、方法。
（項目８）
前記下流の酵素的操作はＰＣＲである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１１）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目７に記載の方法。
（項目１２）
以下：
複数のプライマーペアであって、各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、プライマーペア；および
０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、直接緩衝剤、
を含む、キット。
（項目１３）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目１２に記載のキット。
（項目１４）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目１３に記載のキット。
（項目１５）
直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であって、
各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そして
該直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ ２ 、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート２０、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、反応混合物。
Claims (15)
- ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行う工程を含み、該直接緩衝剤は、少なくとも０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ
を含む、方法。 - 前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項１に記載の方法。
- ヒトのアイデンティティーを決定する方法であって、該方法は：
ヒト由来のデオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程であって、ここで該直接緩衝剤は、複数のプライマーペアを含み、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、工程；
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行って、複数のＰＣＲアンプリコンを形成する工程であって、ここで各ＰＣＲアンプリコンは、確認可能なサイズを有する、工程；および
該ＰＣＲアンプリコンのサイズを参照することによって該ヒトを同定する工程を含み、ここで該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡをさらに含む、方法。 - 前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項４に記載の方法。
- 前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項４に記載の方法。
- 核酸を調製する方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該溶液に対して下流の酵素的操作を行う工程を含み、該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、方法。 - 前記下流の酵素的操作はＰＣＲである、請求項７に記載の方法。
- 前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、請求項７に記載の方法。
- 前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項７に記載の方法。
- 前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項７に記載の方法。
- 以下：
複数のプライマーペアであって、各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、プライマーペア；および
０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、直接緩衝剤、
を含む、キット。 - 前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項１２に記載のキット。
- 前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項１２に記載のキット。
- 直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であって、
各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そして
該直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート２０、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、反応混合物。
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