JP2011516067A5 - - Google Patents

Claims (4)

1. （ａ）配列番号２および配列番号４からなる群から選択されるΔ４デサチュラーゼ酵素をコードする単離されたヌクレオチド配列；
   （ｂ）０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで６５℃、および２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで洗浄後、０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳというハイブリダイゼーション条件下で（ａ）とハイブリダイズする単離されたヌクレオチド配列；
   （ｃ）Δ４デサチュラーゼ酵素をコードする配列番号１および配列番号３からなる群から選択される単離された核酸分子；
   （ｄ）（ａ）または（ｂ）と完全に相補的な単離されたヌクレオチド配列；および
   （ｅ）配列番号２に記載の配列を有するポリペプチドとの比較でアラインメントのクラスタルＷ法に基づいて少なくとも６８％の同一性を有する少なくとも５１４個のアミノ酸のΔ４デサチュラーゼ酵素をコードする第１のヌクレオチド配列、または第１のヌクレオチド配列の相補体を含む第２のヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子
   からなる群から選択される単離された核酸分子。
2. 配列番号２および配列番号４からなる群から選択される、Δ４デサチュラーゼ酵素をコードするポリペプチド。
3. （ａ）配列番号２および配列番号４からなる群から選択されるΔ４デサチュラーゼ酵素をコードする単離されたヌクレオチド配列；
   （ｂ）０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで６５℃、および２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで洗浄後、０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳというハイブリダイゼーション条件下で（ａ）とハイブリダイズする単離されたヌクレオチド配列；
   （ｃ）Δ４デサチュラーゼ酵素をコードする配列番号１および配列番号３からなる群から選択される単離された核酸分子；および
   （ｄ）配列番号２に記載の配列を有するポリペプチドとの比較でアラインメントのクラスタルＷ法に基づいて少なくとも６８％の同一性を有する少なくとも５１４個のアミノ酸のΔ４デサチュラーゼ酵素をコードする第１のヌクレオチド配列、または第１のヌクレオチド配列の相補体を含む第２のヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子
   からなる群から選択される単離された核酸分子
   を含む宿主細胞であって、酵母、藻類、細菌、ユーグレナ属、ストラメノパイル、真菌および植物からなる群から選択される、上記宿主細胞。
4. ａ）（ｉ）アラインメントのクラスタルＷ法に基づいて、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドと比較したとき、少なくとも６８％の同一性を有するΔ４デサチュラーゼポリペプチドをコードする単離されたヌクレオチド分子；および
   （ii）ａｌｌ−ｃｉｓ−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（２２：５、ω−３）およびドコサテトラエン酸からなる群から選択される原料脂肪酸
   を含む宿主細胞を備えるステップと、
   ｂ）Δ４デサチュラーゼポリペプチドをコードする核酸断片が発現して、ａｌｌ−ｃｉｓ−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（２２：５、ω−３）が原料脂肪酸である場合ドコサヘキサエン酸が生産される多価不飽和脂肪酸であり；ドコサテトラエン酸が原料脂肪酸である場合ａｌｌ−ｃｉｓ−４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸（２２：５、ω−６）が生産される多価不飽和脂肪酸であるように、原料脂肪酸をａｌｌ−ｃｉｓ−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（２２：５、ω−３）およびドコサテトラエン酸からなる群から選択される多価不飽和脂肪酸に変換する条件下でステップ（ａ）の宿主細胞を成長させるステップと；
   ｃ）任意に、ステップ（ｂ）で生産された多価不飽和脂肪酸を回収するステップと
   を含む、ドコサヘキサエン酸およびａｌｌ−ｃｉｓ−４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸（２２：５、ω−６）からなる群から選択される多価不飽和脂肪酸を製造する方法。