JP2011513312A - 市販の安価な化学薬品からのｐｅｇ−６成分の合成 - Google Patents

Abstract

本発明は、原価効率が良くかつ容易に入手可能な出発原料及び化学薬品或いは修飾ポリエチレングリコールから保護基−アミノオキシＰＥＧ−６リンカーを得るための新規合成法を提供する。さらに詳しくは、前記リンカーをペプチド系フラグメントのようなベクターに結合することができるように、修飾されたＢｏｃ保護アミノオキシＰＥＧ−６リンカーを得るための新規な合成法が達成された。
【選択図】なし

Description

本発明は、原価効率が良くかつ容易に入手可能な出発原料及び化学薬品或いは修飾されたポリエチレングリコールからアミノオキシＰＥＧ化リンカーを得るための新規合成法を提供する。さらに詳しくは、前記リンカーをペプチド系フラグメントのようなベクターに結合することができるように、修飾されたＢｏｃ保護アミノオキシＰＥＧ−６リンカーを得るための新規な合成法が達成された。

固体マトリックス上における生体分子（例えば、ペプチド又はオリゴヌクレオチド）及び他の有機化合物の製造は、リンカーとして知られる二官能性スペーサー分子を用いて一層容易に実施される。リンカーの２つの反応性官能基の一方は適宜に官能化された樹脂に永久的に結合されるのに対し、成長する分子はリンカーの他方の反応位置に一時的に結合される。

大部分のリンカーは支持体からの最終分子の分離のためにアシドリシスに頼っているものの、最終切断のために他の機構（例えば、光分解、フルオリドリシス（ｆｌｕｏｒｉｄｏｌｙｓｉｓ）及び塩基を触媒とするβ離脱）の使用も利用されてきた。

さらに、特定の細胞タイプと選択的に相互作用する生物学的活性分子は標的組織への放射能の送達のために有用である。例えば、放射性標識ペプチドは診断イメージング及び放射線療法のために放射性核種を腫瘍、梗塞巣部及び感染組織に送達するための大きな潜在的可能性を有している。約１１０分の半減期を有する¹⁸Ｆは、多くのレセプターイメージング調査のために最適な陽電子放出核種である。したがって、¹⁸Ｆ標識された生物活性ペプチドは、多種多様の疾患を定量的に検出して特性決定するためにＰＥＴで利用できるので大きな臨床的可能性を有している。

新しい血管は、脈管形成（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）及び血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）という２つの異なる機構によって形成されることがある。血管新生は、既存の血管からの枝分れによる新血管の形成である。このような過程をもたらす主な刺激は、組織中の細胞への栄養素及び酸素の不十分な供給（低酸素症）であり得る。細胞は数多くの血管新生促進因子を分泌することで応答し得るが、しばしば言及されるその一例は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）である。これらの因子は、基底膜のタンパク質を分解するタンパク分解酵素並びにこれらの潜在的に有害な酵素の作用を制限する阻害物質の分泌を開始させる。血管新生促進因子の他の顕著な効果は、内皮細胞の移動及び分裂を引き起こすことである。管腔の反対側で血管の周囲に連続シートを形成している、基底膜に付着した内皮細胞は、有糸分裂を起こさない。付着の喪失及び血管新生促進因子に対するレセプターからの信号の総合効果により、内皮細胞の移動、増殖及び再配列が起こり、最終的に新血管の周囲に基底膜が合成される。

血管新生は、創傷治癒および炎症の過程をはじめとする、組織の増殖及び再構築に際して顕著である。腫瘍がミリメートルサイズに達したとき、その増殖速度を維持するために血管新生を開始しなければならない。血管新生には、内皮細胞及びその環境の特性変化を伴う。これらの細胞の表面は移動の準備のために再構築され、基底膜が分解されたところには、タンパク質分解の実行及び制御に関与する各種のタンパク質に加えて隠れた構造が暴露される。腫瘍の場合、生じた血管ネットワークは通常は組織化されておらず、急激なねじれ及び動静脈シャントを形成している。血管新生の阻止はまた、抗腫瘍療法のための有望な戦略であると考えられている。血管新生を伴う変態はまた、悪性疾患を一例とする疾患の診断にも非常に有望である。この着想はまた、炎症及びアテローム性動脈硬化症（初期アテローム性動脈硬化症病巣のマクロファージは血管新生促進因子の潜在的な源である）を含む種々の炎症関連疾患においても大きな有望性を示す。

細胞接着に関与する多くのリガンドは、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）のトリペプチド配列を含んでいる。ＲＧＤ配列は、この配列を有するリガンドと細胞表面上のレセプターとの間の一次認識部位として作用するように思われる。一般に、リガンドとレセプターとの二次相互作用が相互作用の特異性を高めると考えられる。これらの二次相互作用は、リガンド及びレセプターのうちでＲＧＤ配列にすぐ隣接した部分の間又はＲＧＤ配列から遠く離れた部位で起こり得る。

したがって、インビボで血管新生に関連するインテグリンレセプターの効率的な標的化及びイメージングは、化学的に頑強で安定な、選択的で高親和性のＲＧＤ系ベクターを要求する。その上、バックグラウンドの問題を低減させるため、イメージング剤を設計するときには排出経路が重要な因子となる。

国際公開第０６／０３０２９１号は、血管新生に関連するレセプターに結合する標的化ベクターとしてのペプチド系化合物の使用に関する。さらに、国際公開第２００６／０３０２９１号は、迅速に製造できる、診断イメージングのために有用なペプチド系化合物を記載している。本発明は、修飾されたＢｏｃ（−ＣＯＯＣＨ(ＣＨ₃)₃）保護アミノオキシＰＥＧ−６リンカーを得るための新規な合成法を記載する。次いで、このＰＥＧ−６リンカーをペプチド系フラグメントに結合することでＢｏｃ保護アミノオキシペプチド系化合物を生成できる。その後、Ｂｏｃ保護アミノオキシペプチド系化合物を合成することで、血管新生で使用できる放射性標識ペプチド系化合物が得られる。

本明細書中における参考文献の考察又は引用は、かかる参考文献が本発明に対する先行技術であることを容認するものと解すべきでない。

国際公開第２００６／０３０２９１号パンフレット

本発明は、リンカーの一端に結合した様々な保護基（例えば、修飾されたＢｏｃ（−ＣＯＯＣＨ(ＣＨ₃)₃）保護アミノオキシ基）を有するＰＥＧ−６リンカーの効率的な製造方法における、原価効率が良くかつ容易に入手可能な出発原料及び化学薬品に関する。本発明はまた、修飾されたポリエチレングリコールを合成することでＰＥＧ−６リンカーを得るための新規な合成法にも関する。

本明細書中で使用される「修飾された」という用語は、分子をペプチド系フラグメントに結合することを可能にする官能基で分子が修飾されていることを意味する。

様々な保護基（例えば、修飾されたＢｏｃ保護アミノオキシ基）が結合されたＰＥＧ−６リンカーを得るための特許請求される新規な方法において中間体を同定するためには、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）、質量分光法（ＭＳ）及びＨＰＬＣ−ＭＳ（高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）とＭＳとの併用）が使用された。

本発明の合成段階はすべて、原価効率が良くかつ容易に入手可能な出発原料及び化学薬品を用いて実施された。後述の保護基のいずれか（例えば、修飾されたＢｏｃ保護アミノオキシ基）が結合されたＰＥＧ−６リンカーを得るための本方法を使用することの重要な利点は、反応段階で同定される構造を組み合わせて使用した場合、そのいずれもが不安定でないことである。反応段階で同定される構造のすべてが容易に再現可能である。

構造の詳細な説明
表１は、リンカー及びリンカーを製造するための中間体並びに出発原料の主要な選択された構造及び構造名を示している。
_{れた構造及び構造名を示している。}

リンカー及びリンカーを製造するための中間体並びに出発原料の主要な選択された構造及び構造名を示す表１を示す図表。 リンカー及びリンカーを製造するための中間体並びに出発原料の主要な選択された構造及び構造名を示す表１を示す図表。

血管新生用の放射性標識生成物を製造する際には、放射性標識ペプチド系化合物を得るための合成法における重要な構成単位は、信頼可能で効率的なリンカーを同定することである。本発明では、ＰＥＧ−６リンカー用の商業的に入手可能な試薬は存在しないものの、原価効率が良くかつ商業的に入手可能な試薬からの短くて簡便な合成法が本明細書中に開示される。

特許請求されるＰＥＧ−６リンカーを得るために特許請求される合成法を使用することには利点がある。１つの利点は、特許請求される合成法がＰＥＧ−６成分を得るための急速なプロセスであることである。もう１つの利点は、試薬が広く商業的に入手可能でありかつ原価効率の良い化学薬品である簡便な合成法が使用されることである。さらに詳しくは、本明細書中に開示されるリンカーＡ又は１を大規模生産のために使用する場合、それぞれ化合物Ｂ又は２のような出発化合物を使用することはコストの観点から見て有利である。例えば、リンカーＡ又は１を製造するための反応を開始する場合、開示される化合物Ｅ又は５から出発することはないであろう。この化合物は非常に高価であると共に、単離するのがはるかに困難だからである。本明細書中に記載されるように化合物Ｂ又は２を出発化合物として使用することは、特に大規模生産でははるかに原価効率が良いであろう。

本発明はまた、修飾されたポリエチレングリコールを合成することでＰＥＧ−６リンカーを得るための新規な合成法にも関する。

特許請求されるＰＥＧ−６リンカーを得るために修飾されたポリエチレングリコールを合成することにはいくつかの利点がある。

１つの利点は、特許請求される合成法がＰＥＧ−６成分を得るための短くて速いプロセスであることである。本発明で使用される簡便な合成法は１日で実施でき、ＰＥＧ−６成分を２週間以下で製造することを可能にする。

本明細書中で定義されるＰＥＧ−６とは、６つの個別エチレングリコールの鎖からなるＰＥＧ（ポリエチレングリコール）である。

前述の通り、本発明で得られる修飾されたＢｏｃ保護アミノオキシＰＥＧ−６リンカー（式（Ｉ））はベクターに結合できる。詳しくは、そのベクターはＢｏｃ保護アミノオキシペプチド系化合物（式（ＩＩＩ））を構成するペプチド系フラグメント（式（ＩＩ））であり得る。その後、Ｂｏｃ保護アミノオキシペプチド系化合物を合成することで、血管新生で使用できる放射性標識ペプチド系化合物（例えば、式（ＩＶ）に示すような¹⁸Ｆ−ペプチド系化合物）が得られる。

本明細書中で使用される「リンカー」という用語は、ベクター及びレポーターのような２以上の他の成分をひとつに結合する成分を意味する。異なる親油性及び／又は電荷を有するリンカー基の使用は、診断上のニーズに合わせてペプチドのインビボ薬物動態学を大幅に変更することができる。生分解性リンカー及び生体高分子をはじめとして、多種多様のリンカーが使用できる。リンカーは、最も簡単にはベクターとアミノオキシ基との間の化学結合である。さらに一般的には、リンカーは単分子又は多分子の骨格（例えば、線状、環状又は枝分れした骨格）を与える。リンカーはさらに、ベクターをレポーターから遠ざけるという役割を有することもできる。本明細書中に記載されるリンカーは、特にデキストラン及び好ましくはポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧという）のような高分子構造を含んでいる。ＰＥＧ部分を含むリンカーは、ある種の状況下で望ましいように、血中クリアランスを遅くすることが判明している。かかるリンカーは、グルタル酸及び／又はコハク酸及び／又はポリエチレングリコール系成分から導くことができる。

アジ化物（即ち、式Ｎ₃ ^-を有する陰イオン）を使用せずに式（１）を製造する場合について記載した合成プロトコルに従えば、様々な長さのＰＥＧ中心部分、一方の側に位置する保護アミノオキシ酢酸、及びＰＥＧ部分の多端にアミドとして連結されたスペーサーを有するすべての分子を合成できる。

さらに、下記に記載される合成プロトコルは、様々な長さ（即ち、直列に結合されたエチレングリコールの数）のＰＥＧ部分の形成を可能にする。

ベクターは、本明細書中では、レセプター分子に対して親和性を有する化合物又は成分のフラグメント、好ましくはペプチド化学種、さらに好ましくはＲＧＤペプチドのような血管新生標的化化学種として定義される。本発明で使用されるベクターの具体例は、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である。本発明で使用されるこのようなベクターの一例は、下記のフラグメントを含んでいる。

本発明の一実施形態は、リンカーの製造方法に関する。さらに詳しくは、Ｂｏｃのような保護基（「ＰＧ」）で保護されたアミノオキシリンカー（式（Ａ））を下記の方法に従って製造できる。

式中、Ｒは下記構造の１つを表し、

ＰＧは下記式のカルバメートであるか、

（式中、Ｒ１はアルキル又はアリールであり、さらに好ましくはＲ１＝９−フルオレニルメチルであって、これはＰＧが９−フルオレニルメトキシカルボニルであることを意味し、最も好ましくはＲ１＝ｔｅｒｔ−ブチルであって、これはＰＧがＢｏｃ、即ちｔ−ブトキシカルボニル（−ＣＯＯＣＨ(ＣＨ₃)）であることを意味する。）
或いはＰＧは下記式の基を表し、

（式中、Ｒ２はアルキル又はアリールであり、さらに好ましくはＲ２＝Ｈであって、これはＰＧがホルミルであることを意味し、最も好ましくはＲ２＝フェニルであって、これはＰＧがベンゾイルであることを意味する。）
或いはさらにＰＧはアルキル又はアリール、さらに好ましくはアリル、最も好ましくはベンジルであってもよく、
ｎは１〜１９を表す。

ここで、主要な中間体が本方法のＤ〜Ｅ及びＨ〜Ｉであることに注意するのが重要である。「主要な」という用語は、本明細書中では前記リンカーを製造するために決定的かつ必要であるとして定義される。

中間体Ｂ及びＧから始めて１キログラムのリンカーＡを製造するためのプロセス時間は、約１〜約５週間の範囲内にあり得る。さらに、中間体Ｆ及びＪを互いに並行して製造すれば、１キログラムのリンカーＡを製造するための総合成時間は３〜４週間になる。最後の段階、即ちＦとＪとのカップリング及びそれに続くＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による精製は、完了するのに１週間以上はかからない。本明細書中に開示される新規な合成法は、他の代替合成段階に比べて時間が短いばかりでなく、ユーザーにとってはるかに商業的実行可能性の高いものでもある。

本発明の別の実施形態は、下記の反応を含んでなる式（１）のリンカーの製造方法に関する。

式中、式（１）のリンカーはＢｏｃ保護アミノオキシリンカーであり、６と１０とを化合させる塩基はリチウムジイソプロピルアミンである。

本発明のさらに別の実施形態は、ペプチドフラグメント（下記の化合物（ＩＩ））のようなベクターが式（Ａ）のリンカーと結合して下記の化合物（ＩＩＩ）を生成し、

その後に化合物（ＩＩＩ）が４−¹⁸Ｆ−フルオロベンゼンと反応して下記の化合物（ＩＶ）を生成する方法を提供する。

本発明のさらに別の実施形態は、ペプチドフラグメント（下記の化合物（ＩＩ））のようなベクターが式（１）のリンカーと結合して下記の化合物（ＩＩＩａ）を生成し、

その後に化合物（ＩＩＩａ）が４−¹⁸Ｆ−フルオロベンゼンと反応して下記の化合物（ＩＶ）を生成する方法を提供する。

本発明のさらに別の実施形態は、下記の反応から式（Ａ）を得るための方法を示す。

ここでは、１，１１−ジヒドロキシ−３，６，８−トリオキサ−ウンデカン（Ｂ）と反応させるためにｐ−トルエンスルホニルクロリドを使用する。これら２種の化合物を約１５〜約２７℃の範囲内の温度で約６〜約１５時間混合して１１−Ｏ−トシル−３，６，９−トリオキサ−１−ヒドロキシ−ウンデカン（Ｃ）を生成する。この場合、好ましい温度は約２２℃であり、好ましい時間は約８時間である。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明の別の実施形態では、１１−Ｏ−トシル−３，６，９−トリオキサ−１−ヒドロキシ−ウンデカン（Ｃ）をジメチルホルムアミドに溶解し、（Ｃ）中にフタルイミドカリウムを入れて約７０〜約１００℃の温度範囲で約６〜約１５時間撹拌してＮ−（３，６，９−トリオキサ−１１−ヒドロキシ−ウンデカン）−フタルイミド（Ｄ）を生成する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明のさらに別の実施形態では、（Ｄ）を約３０〜約７０℃の温度範囲でテトラヒドロフランに溶解して（Ｄ）の精製を達成する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明のさらに別の実施形態では、約８０〜約１２０ミリグラムの化合物（Ｄ）をメタノールに溶解し、ヒドラジン一水和物を化合物（Ｄ）に添加し、次いで化合物（Ｄ）を約３０〜約８０℃に約１〜約５時間加熱し、次いで混合物を室温に冷却して約６〜約１５時間撹拌することで１１−アミノ−３，６，９−トリオキサ−ヒドロキシ−ウンデカン（Ｅ）を生成する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明の別の実施形態では、（Ｅ）を約１．０モルのジクロロメタン、１．０モルのジメチルホルムアミド及び１．５モルの無水ジグリコール酸と混合し、混合物を約３０〜約５０℃の温度範囲に約１〜約３時間加熱する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明のさらに別の実施形態では、化合物（Ｅ）のｐＨを約１モルのＮａＯＨ（水溶液）で約９〜約１５に調整することで１７−ヒドロキシ−３，９，１２，１５−テトラオキサ−６−アザ−５−オキソ−ヘプタデカン酸（Ｆ）を生成する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明のさらに別の実施形態では、（ＰＧ−アミノオキシ）酢酸（Ｇ）を無水酢酸に溶解し、混合物を約４０〜約７０℃の範囲内の温度に約４８〜約７２時間加熱することで（ＰＧ−アミノオキシ）無水酢酸（Ｈ）を生成する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明のさらに別の実施形態では、式（Ｈ）をテトラヒドロフラン及び２−（２−アミノエチル）エタノールに溶解し、混合物を室温で約２〜４日間撹拌する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明の別の実施形態では、式（Ｈ）を水と混合し、ＮａＯＨ（水溶液）でｐＨを約９〜１２に調整し、次いで前記混合物を約６〜約１５時間撹拌することで５−Ｎ−（ＰＧ−アミノオキシ−アセトアミド）−３−オキサ−１−ヒドロキシペンタン（Ｉ）を生成する。

式（Ａ）を得るための上記反応に係る本発明のさらに別の実施形態では、式（Ｆ）及び式（Ｊ）を塩基リチウムジイソプロピルアミンによって化合させる。

以下の実施例で本発明をさらに詳しく説明するが、これらの実施例は決して本発明の技術的範囲を限定するものでない。

本発明は、以下の略語を使用する実施例によって例示される。
ｐ：パラ
ｏ：オルト
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＳ：質量分析法
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー／質量分析法
ＴＥＧ：テトラエチレングリコール
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
¹Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
ｈｒ(ｓ)：時間
ｍｉｎ(ｓ)：分
ｍｇ：ミリグラム
Ｂｏｃ：−ＣＯＯＣＨ(ＣＨ₃)₃
ＲＴ：室温
Ｃ：摂氏温度
Ｍ＋Ｈ⁺：本明細書中では、分子とプロトンとの付加物として質量分析法で検出されるイオンの質量として定義される。
Ｍ＋Ｎａ⁺：本明細書中では、分子とナトリウムイオンとの付加物として質量分析法で検出されるイオンの質量として定義される。
ＵＶ：紫外
Ｂｏｃ保護アミノオキシリンカーの合成のための合成経路
Ｂｏｃ保護アミノオキシリンカーの合成のための合成経路を下記図１に示す。中間体の同定のために使用された主な分析ツールは、ＭＳ及びＬＣ−ＭＳであった。

すべての合成段階は、比較的安価で容易に入手できる出発原料及び化学薬品を用いて実施した。これらの段階は確立された有機合成方法を用いて実施した。いずれの段階も、経費のかかるもの又は非効率なものとは確認できない。

Ｂｏｃ保護アミノオキシリンカーの合成のための各プロセス段階の実験データ
ｉ．１１−Ｏ−トシル−３，６，９−トリオキサ−１−ヒドロキシ−ウンデカン（３）

ｐ−トルエンスルホニルクロリドの予備調製溶液を、トリエチルアミン及び１，１１−ジヒドロキシ−３，６，９−トリオキサ−ウンデカン（ＴＥＧ）（２）のクロロホルム溶液に６０分かけて滴下した。反応混合物を周囲温度（２０〜２３℃）で一晩撹拌した。その後、反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残留物をまずヘキサンと混合して振盪し、次いで酢酸エチル／ヘキサン（１：１）と混合して振盪し、最後に残留物を酢酸エチル中に懸濁することで生成物を残留物から抽出した。懸濁液を濾過し、生成物を濾液中に集めた。濾液を減圧下で蒸発させ、残留物をＭＳで分析した。

ＭＳにより、未反応のモノトシル化（Ｍ＋Ｈ ⁺ ３４９．１４）及びジトシル化（Ｍ＋Ｈ ⁺ ５０３．１５）の混合物が確認された。

ｉｉ．Ｎ−（３，６，９−トリオキサ−１１−ヒドロキシ−ウンデカン）−フタルイミド（４）

第１段階からのトシル化ＴＥＧ（３）をＤＭＦに溶解し、フタルイミドカリウムを添加した。反応混合物を８０℃で一晩撹拌した。翌朝、温度を２時間にわたって９０℃に上昇させた。室温に冷却した後、混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残留物をメタノールと混合し、濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。この手順を、ジエチルエーテルを用いて繰り返した。

ｉｉｉ．Ｎ−（３，６，９−トリオキサ−１１−ヒドロキシ−ウンデカン）−フタルイミド（４）の精製
ビス−Ｎ−フタルイミドを含む粗Ｎ−（３，６，９−トリオキサ−１１−ヒドロキシ−ウンデカン）−フタルイミドを、できるだけ少量のＴＨＦに溶解した。ＴＨＦ溶液を４０〜６０℃の水に滴下した。ビスアミドが水から沈殿し、冷却後にこれを濾過によって除去した。濾液を減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテルを残留物に添加し、生成物を固体残留物からジエチルエーテル中に抽出した。エーテルをデカントし、この手順を１回繰り返した。残留物を水と混合し、１×ジエチルエーテル及び２×酢酸エチルで抽出した。合わせた酢酸エチル相を減圧下で蒸発させた。エーテル相を合わせ、デカントし、蒸発させた。残留物を酢酸エチルに溶解し、溶液をエグジラレート（ｅｘｈｉｌａｒａｔｅ）抽出から単離された生成物に添加した。この第２の酢酸エチル溶液を減圧下で蒸発させた。生成物４の構造を¹Ｈ−ＮＭＲによって確認した。生成物４：ビスイミド：ＴＥＧの比は８６：２：１２であった（ＮＭＲ）。

ｉｖ．１１−アミノ−３，６，９−トリオキサ−ヒドロキシ−ウンデカン

１００ｍｇの化合物４をメタノールに溶解し、ヒドラジン一水和物を添加した。混合物を５０℃に３時間加熱し、室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。

ＭＳにより、所望の生成物（Ｍ＋Ｈ⁺ １９４．１）が確認された。

ｖ．１７−ヒドロキシ−３，９，１２，１５−テトラオキサ−６−アザ−５−オキソ−ヘプタデカン酸（６）

アミン５をジクロロメタン及び助溶媒としての若干のＤＭＦと混合した。１．５モル当量の無水ジグリコール酸を添加し、混合物を４０℃に２時間加熱した。室温に冷却し、週末中撹拌した後、反応混合物を減圧下で蒸発させた。残留物を水と混合し、１Ｎ ＮａＯＨ（水溶液）でｐＨを１１〜１２に調整することでエステルを加水分解した。溶液を一晩撹拌し、その後にＨＣｌでｐＨ１〜２に酸性化し、減圧下で蒸発させた。

残留物のＬＣ−ＭＳは、予想される質量Ｍ＋Ｈ⁺ ３１０．１５及びＭ＋Ｎａ⁺ ３３２．１３を有する主ピークを示した。

ｖｉ．（Ｂｏｃ−アミノオキシ）無水酢酸（８）

（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸（７）を無水酢酸に溶解し、週末中５０〜６０℃に加熱した。反応混合物のＬＣ−ＭＳは、混合無水物７ａ及び対称無水物８を含む数種の生成物を示した。

無水物７ａは元来は標的化合物であったが、反応混合物中に８が発見された。これは次の段階にとって７ａより良好な試薬である（上記参照）。７ａによるＮ−アシル化は、２種の生成物、即ち所望生成物としてのＮ−（Ｂｏｃ−アミノオキシ）アセトアミド及び副生物としてのＮ−アセトアミドを生じることがあるからである。

化合物８の構造は、Ｍ＋Ｈ⁺ ２６５．１及びＭ＋Ｈ⁺ １６５を有するＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ３６５）フラグメントによって確認された。これらのフラグメントは、１つ及び２つのＢｏｃ基が失われたことを表している。

ｖｉｉ．５−Ｎ−（Ｂｏｃ−アミノオキシ−アセトアミド）−３−オキサ−１−ヒドロキシペンタン（９）

化合物８を含む混合物をＴＨＦに溶解し、２−（２−アミノエチル）エタノールを添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。反応混合物を水と混合し、ＮａＯＨ（水溶液）でｐＨを１０超に調整し、一晩撹拌した。反応混合物をＴＨＦ及びブラインに添加して抽出した。蒸発させたＴＨＦ相を次の段階で直接使用した。

生成物はＬＣ−ＭＳを用いて確認された。

ｖｉｉｉ．５−Ｎ−（Ｂｏｃ−アミノオキシ−アセトアミド）−３−オキサ−１−（Ｏ−トシル）ペンタン（９）

考察／結果
標的化合物であるＢｏｃ保護アミノオキシリンカーは、中間体６と中間体１０とのカップリングによって製造されるはずである。これらの実験の結果は、化合物６（４つの合成段階）及び化合物１０（３つの合成段階）が共に簡単な合成方法で製造できることを示している。化合物１０は、いかなる形式の精製も行うことなしに３つの合成段階で製造された。提唱された方法を用いるエーテル生成は、上記の実験ｉｘで確認された。

かかる合成法における重量な段階は、化合物９の生成である。これを達成するためにはいくつかのアプローチが存在する。１つは化合物７の酸ハロゲン化物を製造することであるが、Ｂｏｃ基は例えば酸塩素化時に安定でない。他の１つの方法は、カップリング試薬を使用することである。カップリング試薬の使用に関する問題点は、生成物及び試薬の分子量が小さいことである。

化合物８の生成が一層良好な解決策であろうが、その生成は実験ｖｉ（上記参照）で立証されている。比較的純粋な化合物８が得られるようにこの合成法を調整することは、成功のかぎであると思われる。この段階の追跡は、ギ酸と酢酸との間においてインサイチュで生成される混合無水物を用いて行われる。アセチルに比べてホルミルの反応性が高ければ、７とホルミルとの間で混合無水物が生じるであろう。ホルミル基はアセチルほど安定でなく、もし７が存在すれば８の生成が好都合なはずである。無水物８は、混合無水物に比べて熱力学的に好ましい構造と見なされる。

特定の実施形態及び参考文献の引用
本発明は、本明細書中に記載された特定の実施形態によって技術的範囲が限定されるべきでない。実際、本明細書中に記載されたものに加えて、当業者には本発明の様々な実施形態が上述の記載及び添付の図面から明らかとなろう。かかる変更態様は添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。

様々な刊行物及び特許出願が本明細書中に引用されているが、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。

Claims (19)

1. 下記の反応を含んでなる、下記式（Ａ）のリンカーの製造方法。
   

   

   （式中、Ｒは下記構造の１つを表し、
   

   

   ＰＧは下記式のカルバメートであるか、
   

   

   （式中、Ｒ１はアルキル又はアリールであり、さらに好ましくはＲ１＝９−フルオレニルメチルであって、この場合にＰＧは９−フルオレニルメトキシカルボニルであり、最も好ましくはＲ１＝ｔｅｒｔ−ブチルであって、この場合にＰＧはＢｏｃ、即ちｔ−ブトキシカルボニル（−ＣＯＯＣＨ(ＣＨ₃)）である。）
   或いはＰＧは下記式の基を表し、
   

   

   （式中、Ｒ２はアルキル又はアリールであり、さらに好ましくはＲ２＝Ｈであって、この場合にＰＧはホルミルであり、最も好ましくはＲ２＝フェニルであって、この場合にＰＧはベンゾイルである。）
   或いはさらにＰＧはアルキル又はアリール、さらに好ましくはアリル、最も好ましくはベンジルであってもよく、
   ｎは１〜１９を表す。）
2. 下記の反応を含んでなる、下記式（１）のリンカーの製造方法。
   

   

   （式中、式（１）のリンカーはＢｏｃ保護アミノオキシリンカーである。）
3. 主要な中間体がＤ〜Ｅ及びＨ〜Ｉである、請求項１記載の方法。
4. 式（Ａ）の
   リンカーが下記の化合物（ＩＩ）と反応する、請求項１記載の方法。
   

   
5. 式（Ａ）のリンカーが化合物（ＩＩ）と結合して下記の化合物（ＩＩＩ）を生成し、
   

   

   次いで化合物（ＩＩＩ）が４−¹⁸Ｆ−フルオロベンゼンと反応して下記の化合物（ＩＶ）を生成する、請求項４記載の方法。
   

   
6. 式（１）のリンカーが下記の化合物（ＩＩ）と反応する、請求項２記載の方法。
   

   
7. 式（１）のリンカーが化合物（ＩＩ）と結合して下記の化合物（ＩＩＩａ）を生成し、
   

   

   次いで化合物（ＩＩＩａ）が４−¹⁸Ｆ−フルオロベンゼンと反応して下記の化合物（ＩＶ）を生成する、請求項６記載の方法。
   

   
8. １，１１−ジヒドロキシ−３，６，８−トリオキサ−ウンデカン（Ｂ）と反応させるためにｐ−トルエンスルホニルクロリドを使用し、これらを約１５〜約２７℃の範囲内の温度で約６〜約１５時間混合して１１−Ｏ−トシル−３，６，９−トリオキサ−１−ヒドロキシ−ウンデカン（Ｃ）を生成する、請求項１記載の方法。
9. 好ましい温度が約２２℃であり、好ましい時間が約８時間である、請求項８記載の方法。
10. １１−Ｏ−トシル−３，６，９−トリオキサ−１−ヒドロキシ−ウンデカン（Ｃ）をジメチルホルムアミドに溶解し、（Ｃ）中にフタルイミドカリウムを入れて約７０〜約１００℃の温度範囲で約６〜約１５時間撹拌してＮ−（３，６，９−トリオキサ−１１−ヒドロキシ−ウンデカン）−フタルイミド（Ｄ）を生成する、請求項１記載の方法。
11. （Ｄ）を約３０〜約７０℃の温度範囲でテトラヒドロフランに溶解して（Ｄ）の精製を達成する、請求項１記載の方法。
12. 約８０〜約１２０ミリグラムの化合物（Ｄ）をメタノールに溶解し、ヒドラジン一水和物を化合物（Ｄ）に添加し、次いで化合物（Ｄ）を約３０〜約８０℃に約１〜約５時間加熱し、次いで室温に冷却して約６〜約１５時間撹拌することで１１−アミノ−３，６，９−トリオキサ−ヒドロキシ−ウンデカン（Ｅ）を生成する、請求項１記載の方法。
13. （Ｅ）を約１．０モルのジクロロメタン、１．０モルのジメチルホルムアミド及び１．５モルの無水ジグリコール酸と混合し、約３０〜約５０℃の温度範囲に約１〜約３時間加熱する、請求項１記載の方法。
14. 化合物（Ｅ）を約１モルのＮａＯＨ（水溶液）で約９〜約１５のｐＨに調整することで１７−ヒドロキシ−３，９，１２，１５−テトラオキサ−６−アザ−５−オキソ−ヘプタデカン酸（Ｆ）を生成する、請求項１３記載の方法。
15. （ＰＧ−アミノオキシ）酢酸（Ｇ）を無水酢酸に溶解し、約４０〜約７０℃の範囲内の温度に約４８〜約７２時間加熱することで（ＰＧ−アミノオキシ）無水酢酸（Ｈ）を生成する、請求項１記載の方法。
16. 式（Ｈ）をテトラヒドロフラン及び２−（２−アミノエチル）エタノールに溶解し、室温で約２〜４日間撹拌する、請求項１記載の方法。
17. 次に、式（Ｈ）を水と混合し、ＮａＯＨ（水溶液）でｐＨを約９〜１２に調整し、約６〜約１５時間撹拌することで５−Ｎ−（ＰＧ−アミノオキシ−アセトアミド）−３−オキサ−１−ヒドロキシペンタン（Ｉ）を生成する、請求項１６記載の方法。
18. 式（Ｆ）及び式（Ｊ）を塩基リチウムジイソプロピルアミンによって化合させる、請求項１記載の方法。
19. 請求項１に記載された式（Ａ）のリンカーの製造方法。

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