JPH0790080A - ポリ−ε−置換−Ｌ−リジンのＤ−ガラクトピラノシル−グルコン酸誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ポリ−Ｌ−リジンの一部又は全部を，Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−グルコンアミジル−Ｌ−リジン残基
で置換した高分子化合物。 【効果】 この高分子化合物は，肝実質細胞を認識でき
る作用があり，ＤＤＳ製剤開発用の担体として応用でき
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は，医用高分子材料，殊に
ミサイル医薬担体として有用なポリ−Ｌ−リジンのＤ−
ガラクトピラノシル−グルコン酸誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術】血清中の糖タンパクは，その末端に普遍
的にシアル酸−ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミ
ンという糖構造が存在している。１９６０年代後半に
Ｇ． ＡｓｈｗｅｌｌとＡ． Ｍｏｒｅｌｌは，この三
糖構造が血清タンパクが血液中に安定に存在できるため
に必要な構造であることをつきとめた。末端に存在する
シアル酸を取り除くと，ガラクトースが新しい糖末端と
なる。シアル酸が除かれてガラクトースが露出した糖タ
ンパクはアシアロ糖タンパクと呼ばれている。アシアロ
糖タンパクは，この状態では血流中に安定に存在できな
くなり，急速に血流中より消失する。消失したアシアロ
糖タンパクのおよそ８０％以上は肝臓に取り込まれるこ
とが判明している。

【０００３】ところで，肝細胞の膜表面上には特異的糖
認識レセプターが存在し，アシアロ糖タンパクはこのア
シアロ糖タンパクレセプターを介して細胞内に取り込ま
れたものである。本発明者等は，肝細胞膜上のアシアロ
糖タンパクレセプターに着目し，ミサイルドラッグ等に
用いるドラッグキャリアー用の高分子材料の開発を目標
として検討を重ね得た結果，ＰＶＬＡ（ポリビニルベン
ジルラクトンアミド；特開平５−１０５６３７），更に
酸性アミノ酸のグルタミン酸（またはアスパラギン酸）
とガラクトサミンからなる高分子材料を開発した（特開
平５−１７８９８８）。今回，本発明者等は更に鋭意研
究した結果，新たに塩基性アミノ酸であるリジンにガラ
クトースを糖末端にもつものを導入した高分子がすぐれ
た性質を有することを見出し本発明を完成した。

【０００４】

【問題点を解決するための手段】すなわち，本発明は，
一般式

【０００５】

【化３】

【０００６】（式中，Ｘは重合度１５〜２５０であるこ
とを，Ｒは水素原子，または保護基を夫々意味する。）
で示されるポリペプチドにおいて，その構成ペプチドの
一部または全部を

【０００７】

【化４】

【０００８】で表わされるε−Ｄ−ガラクトピラノシル
−グルコンアミジル−Ｌ−リジン残基（Ｄ−ガラクトピ
ラノシルとグルコンアミジルの結合はα１→６またはβ
１→４のいずれであってもよい）で置換したポリ−Ｌ−
リジンのＤ−ガラクトピラノシル−グルコン酸誘導体
（ただし，Ｎ末端のα−アミノ基は非置換であるか，上
記Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコン酸で置換されるか
のいずれであってもよい。）に関する。本発明のポリペ
プチドを更に説明すると以下の通りである。 構成単位：ε−保護基−Ｌ−リジン残基

【０００９】

【化５】

【００１０】（式中，Ｒ’はアミノ基の保護基であり，
特にベンジルオキシカルボニル基が好ましいが，他にも
以下に記載するものが好適なものとして挙げられる。 ・ｐ−ニトロカルボベンゾキシ基 ・ｐ−メトキシカルボベンゾキシ基 ・ｐ−フェニルアゾベンジルオキシカルボニル基 ・ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）−ベンジルオキ
シカルボニル基 ・ｐ−クロルカルボベンゾキシ基 ・ｐ−ブロムカルボベンゾキシ基 ・ｐ−トリルオキシカルボニル基 ・α−ナフチルメトキシカルボニル基 ・ｐ−ドデシルオキシベンジルオキシカルボニル基 ・ベンズヒドロキシカルボニル基 ・ｔ−ブチルオキシカルボニル基 ・フタリル基 ・ホルミル基 ・トリフルオロアセチル基 ・ｐ−トルエンスルホニル基（トシル基） ・トリフェニルメチル基（トリチル基） ・シクロヘキシルオキシカルボニル基（カルボシクロヘ
キシルオキシ基） ・ｏ−ニトロフェニルスルフェニル基 ・ｔ−アミルオキシカルボニル基 ・エチルオキシカルボニル基 ・イソプロピルオキシカルボニル基 ・ジイソプロピルメトキシカルボニル基 ・ｓ−ブチルオキシカルボニル基 ・シクロペンチルオキシカルボニル基 ・３−メチル−３−ペンチルオキシカルボニル基 ・１−メチル−１−シクロペンチルオキシカルボニル基 ・２−ヨードエチルオキシカルボニル基 ・１−アダマンチルオキシカルボニル基 ・アリルオキシカルボニル基 ・β−（ｐ−トルエンスルホニル）−エチルオキシカル
ボニル基 ・ベンジル基 ・フェニルチオカルボニル基 ・メチルチオカルボニル基 ・ｏ−ニトロフェノキシアセチル基 ・クロルアセチル基 ・ベンゼンスルホニル基 ・ジベンジルホスホリル基類 ・トリアルキルシリル基 ・アリリデン基 ・アセトアセチル基

【００１１】Ｌ−リジン残基

【００１２】

【化６】

【００１３】ε−Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコンア
ミジル−Ｌ−リジン残基

【００１４】

【化７】

【００１５】配列状態：線状 分子量：２，０００〜１１７，０００ 重合度：１５〜２５０ 構成単位の比率： ε−保護基−Ｌ−リジン残基 ０〜９８％ Ｌ−リジン残基 ０〜９８％ ε−Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコンアミジル−Ｌ−
リジン残基２〜１００％ 本発明の化合物は，たとえば次式で示される方法により
合成できる。

【００１６】

【化８】

【００１７】ポリリジンにガラクトースを糖残基とする
Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコン酸を導入する方法
は，ポリリジンのＮ末端のα位またはポリリジンε位の
アミノ基と，Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコン酸のカ
ルボキシル基とのペプチデーションである。このペプチ
デーションには，カルボキシル基またはアミノ基を活性
化する方法および縮合剤の存在下に行う方法等が採用で
きる。

【００１８】なお，本工程の原料化合物として使用する
ポリ−ε−置換−Ｌ−リジン（ＩＩ）は，重合度がおよ
そ１５〜２５０のものが用いられるが，これに限定され
るものではない。後記実施例においては，たとえばポリ
−Ｌ−リジン（ｐＬｙｓと略記する）は，重合度およそ
１５〜２５０（分子量約２，０００〜３０，０００）の
ものを用いた。

【００１９】この中，カルボキシル基を活性化するペプ
チデーションとしては，Ｄ−ガラクトピラノシル−グル
コン酸のカルボキシル基を，たとえばｐ−ニトロフェニ
ルエステルの形態で活性化し，活性化化合物を分離した
後，これにポリ−リジンを反応させる。この反応は，ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ），テトラヒドロフラン
（ＴＨＦ），ジメチルスルホキサイド（ＤＭＳＯ）等の
溶媒中，室温乃至冷却下で行われる。反応時間は数時間
乃至数日間である。ペプチデーションの進行率は，反応
に伴って遊離するｐ−ニトロフェノールを定量すること
により知ることができる。

【００２０】つぎに，縮合剤を用いる方法としては，た
とえばＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｄ
ＣＣ），１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミドハイドロクロライド（ＥＤＣ）等の
存在下，ポリリジンとＤ−ガラクトピラノシル−グルコ
ン酸とをカップリングさせる。この反応条件は，上述の
カルボキシル基の活性化によるペプチデーションと同様
である。生成した目的化合物（Ｉ）または（Ｉ’）は，
たとえばセルロース透析膜を用いる透析により精製する
ことができる。

【００２１】

【発明の効果】本発明の目的化合物は，前述のように標
的生体細胞に対する認識作用が期待されるから，生体認
識高分子として医療分野に応用することができる。本発
明の目的化合物は，天然類似高分子であるポリアミノ酸
誘導体であるから，生体分解性であり，また，水溶性で
ある。したがってこの化合物は，ミサイルドラッグ等に
用いるドラッグキャリアー用高分子材料として好適であ
る。また，ポリリジンは遺伝子と複合体を形成するた
め，本発明の目的化合物は遺伝子治療の担体としても有
用である。本発明化合物の優れた肝細胞親和性は，ラッ
ト由来肝実質細胞を用いた以下の実験により確認され
た。

【００２２】実験例：ＳＤ系雌ラット（４〜５週令）を
用い，細胞間接着タンパク質を酵素を用いて消化する所
謂 Seglen の灌流法に準じてラットの肝実質細胞を分離
した。調製した肝細胞を氷冷したＷＥ培地中（０．１％
のＢＳＡ含有）に６０万cells/ml となるように懸濁さ
せた。競合阻害検討を行う際には，以下の方法にて行っ
た。調製した肝細胞を氷冷したＷＥ培地中（０．１％の
ＢＳＡ含有）に１２０万 cells/ml となるように懸濁さ
せた。ＰＶＬＡもしくはアシアロフェツインを０．２％
の濃度にて溶解させたＷＥ培地（０．１％のＢＳＡ含
有）と肝細胞懸濁液を１：１にて混合させ，肝細胞懸濁
液を再調製した。その後ディスポピペットを用いて，あ
らかじめ調製した各ポリマーコートシャーレ（注１）に
肝細胞懸濁液を１．０ｍｌ番種し，炭酸ガス培養装置に
て３７℃，炭酸ガス濃度５％で所定時間培養した。その
後，非接着細胞数をカウントすることにより，接着率を
算出した。本実験に用いたポリマーは，本願の目的化合
物（後記実施例５により得られた化合物），および対照
として従来肝細胞親和性が知られているＰＶＬＡ，アシ
アロフェツインである。 （注１）ポリマーコートシャーレ調製法 ポリ−Ｌ−リジン−Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコン
酸誘導体（以下，ｐＬｙｓ−ＬＡと略記する）を注射用
蒸留水に０．１％の濃度で溶解させた。ポリマー溶液を
組織培養用シャーレ (Falcon 3001) に１ｍｌ注入し，
その後３回ＰＢＳ（等張リン酸緩衝液）にてリンスする
ことにより，ポリマーコートシャーレを調製した。

【００２３】（結果）競合阻害物質無添加系におけるｐ
Ｌｙｓ−ＬＡコートシャーレに対する肝細胞の接着性
は，コントロールとして用いたＰＶＬＡコートシャーレ
に対する接着性とほぼ同等であった。競合阻害物質添加
系では，ｐＬｙｓ−ＬＡコートシャーレに対する肝細胞
の接着性はＰＶＬＡ添加系で，接着阻害が示され，接着
率は０％であったのに対し，アシアロフェツイン添加系
では接着阻害を示さず，接着率は約７７％であった。ま
た，ＰＶＬＡコートシャーレに対する肝細胞の接着性
は，ＰＶＬＡもしくはアシアロフェツイン添加系ではほ
とんど影響を示さなかった。

【００２４】（考察）ｐＬｙｓ−ＬＡコートシャーレに
対し，肝細胞は高い接着性を示し，さらに肝細胞表面の
アシアロ糖蛋白レセプターと結合することが報告されて
いるＰＶＬＡ添加により，完全な阻害効果が示されたこ
とから，ｐＬｙｓ−ＬＡはＰＶＬＡと同様にアシアロ糖
蛋白レセプターに対して結合していることが確認され
た。また，ｐＬｙｓ−ＬＡコートシャーレに対する肝細
胞接着性はアシアロフェツインでは阻害効果がなかった
こと，およびＰＶＬＡコートシャーレに対する肝細胞の
接着性がＰＶＬＡ，アシアロフェツイン添加系におい
て，影響がなかったことから，ｐＬｙｓ−ＬＡとアシア
ロ糖蛋白レセプターとの結合の親和性は，ＰＶＬＡより
弱く，アシアロフェツインより強いことが予想される。
しかしながら，ｐＬｙｓ−ＬＡは生分解性物質であるポ
リリジンを主鎖骨格としていることから，ＰＶＬＡに比
べより高い安全性が期待される上に，アシアロフェツイ
ンより親和性が高い点から，より確実な肝細胞標的性が
期待される。また，特開平５−１７８９８８記載の化合
物と効果において比較検討した結果，本願実施例５記載
の化合物は，ガラクトサミン置換率６０％以上のポリ−
ω−置換−Ｌ−グルタミン酸のガラクトサミン置換体
（ＰＧＡ−Ｇａｌ）と同等の肝細胞接着能を有すること
が示唆された。アシアロ糖蛋白レセプターを認識させる
糖の導入率を考慮に入れると，ｐＬｙｓ−ＬＡはＰＧＡ
−Ｇａｌと比較して肝細胞標的性能が高いことが考えら
れる。以上の結果，ｐＬｙｓ−ＬＡは薬物の肝標的化担
体として有用である。

【００２５】

【実施例】つぎに実施例を挙げて本発明の目的化合物お
よびその製造方法を更に説明する。また，原料化合物で
あるｐＬｙｓの製造方法を参考例として示す。なお，以
下参考例及び実施例において原料化合物及び目的化合物
の名称に対し，下記の略記を用いる。 Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−ＮＣＡ：ε−Ｎ−カルボベンゾキシ−
Ｌ−リジン−Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物 Ｃｂｚ−Ｌｙｓ ：ε−Ｎ−カルボベンゾキシ−
Ｌ−リジン ｐＣｂｚ−Ｌｙｓ ：ポリ−ε−Ｎ−カルボベンゾ
キシ−Ｌ−リジン ＬＡ１０〜７０％ ：ポリ−Ｌ−リジンの側鎖アミ
ノ基に対するＤ−ガラクトピラノシル−グルコン酸のモ
ル比添加率（１０〜７０％）

【００２６】参考例１［ｐＬｙｓ（分子量２，０００）
の製造例］ （１）Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−ＮＣＡの合成 １０ｇのε−Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（東京化成）を１００ｍｌ
のテトラヒドロフランに溶解し，５０℃に加温する。こ
れにトリフォスゲンの等モル量を加え，５０℃で１時間
反応させた。反応溶液を室温まで冷却した後，３００ｍ
ｌのヘキサンを加えて−２０℃で一昼夜放置した。沈澱
を濾取し，再びテトラヒドロフラン−ヘキサンから再結
晶した（収量８ｇ）。 （２）ｐＣｂｚ−Ｌｙｓの合成［Ｍ／Ｉ＝２０の場合
（Ｍ：モノマー，Ｉ：重合開始剤）］ １８ｇのＣｂｚ−Ｌｙｓ−ＮＣＡ（０．０５８ｍｏｌ）
を１００ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し，２０分の
１モルのベンジルアミン（３１４ｍｇ）を添加して，３
昼夜反応させた。反応液をエーテル６００ｍｌにあけ，
激しく撹拌しながら，３時間放置した。得られた沈澱
は，酢酸エチル／ヘキサンから再結晶した（収量１０
ｇ）。 （３）ｐＬｙｓの合成 １０ｇのｐＣｂｚ−Ｌｙｓをジオキサン／塩化メチレン
の３００ｍｌに溶解し，２５％ ＨＢｒ／ＣＨ_３ ＣＯ
ＯＨの９０ｍｌを添加して，激しく撹拌しつつ１時間反
応させた。反応液をヘキサン１ｌにあけ，沈澱を濾取し
た。沈澱を再びヘキサンに懸濁させ，３時間激しく撹拌
させた。沈澱を濾取し，直ちに乾燥させた（収量５
ｇ）。

【００２７】参考例２［ｐＬｙｓ（分子量１０，００
０）の製造例］ （１）Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−ＮＣＡの合成 １０ｇのε−Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（東京化成）を１００ｍｌ
のテトラヒドロフランに溶解し，５０℃に加温する。こ
れにトリフォスゲンの等モル量を加え，５０℃で１時間
反応させた。反応溶液を室温まで冷却した後，３００ｍ
ｌのヘキサンを加えて−２０℃で一昼夜放置した。沈澱
を濾取し，再びテトラヒドロフラン−ヘキサンから再結
晶した（収量８ｇ）。 （２）ｐＣｂｚ−Ｌｙｓの合成［Ｍ／Ｉ＝１００の場合
（Ｍ：モノマー，Ｉ：重合開始剤）］ ５ｇのＣｂｚ−Ｌｙｓ−ＮＣＡ（０．０１６ｍｏｌ）を
１００ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し，１００分の
１モルのベンジルアミン（６２．８ｍｇ）を添加して，
３昼夜反応させた。反応液をエーテル６００ｍｌにあ
け，激しく撹拌しながら，３時間放置した。得られた沈
澱は，酢酸エチル／ヘキサンから再結晶した（収量１．
８ｇ）。 （３）ｐＬｙｓの合成 ２．８ｇのｐＣｂｚ−Ｌｙｓをジオキサン／塩化メチレ
ンの３００ｍｌに溶解し，２５％ ＨＢｒ／ＣＨ_３ Ｃ
ＯＯＨの９０ｍｌを添加して，激しく撹拌しつつ１時間
反応させた。反応液をヘキサン１ｌにあけ，沈澱を濾取
した。沈澱を再びヘキサンに懸濁させ，３時間激しく撹
拌させた。沈澱を濾取し，直ちに乾燥させた（収量１．
５ｇ）。

【００２８】実施例１［ｐＬｙｓ−ＬＡ（分子量２，０
００）の製造例。以下実施例２〜４も同様。］ ｐＬｙｓ−ＬＡの合成（ＬＡ１０％の場合） ２ｇのｐＬｙｓ［０．０１７ｍｏｌ；ポリ−Ｌ−リジン
におけるモノマーリジン中のアミノ基に対するモル数
（以下実施例２〜４においても同様）］をＴＥＭＥＤ緩
衝液（５０ｍＭ テトラメチレンエチレンジアミン，ｐ
Ｈ４．７）３０ｍｌに溶解し，４−Ｏ−β−Ｄ−ガラク
トピラノシル−グルコン酸（商品名 ラクトピオン酸，
東京化成）の０．６１ｇとＥＤＣの０．２６ｇを添加し
て３昼夜，室温で反応させた。反応終了後，反応液を透
析チューブ（スペクトラム，分子量カット３５００）に
移し，３０ｌの蒸留水に対して透析を行った。透析終了
後凍結乾燥を行って目的物を得た（収量１．２ｇ）。

【００２９】実施例２ ｐＬｙｓ−ＬＡの合成（ＬＡ２０％の場合） ２ｇのｐＬｙｓ（０．０１７ｍｏｌ）をＴＥＭＥＤ緩衝
液（５０ｍＭテトラメチレンエチレンジアミン，ｐＨ
４．７）３０ｍｌに溶解し，４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−グルコン酸 の１．２２ｇとＥＤＣの０．
５２ｇを添加して３昼夜，室温で反応させた。反応終了
後，反応液を透析チューブ（スペクトラム，分子量カッ
ト３５００）に移し，３０ｌの蒸留水に対して透析を行
った。透析終了後凍結乾燥を行って目的物を得た（収量
１．４ｇ）。

【００３０】実施例３ ｐＬｙｓ−ＬＡの合成（ＬＡ３０％の場合） ２ｇのｐＬｙｓ（０．０１７ｍｏｌ）をＴＥＭＥＤ緩衝
液（５０ｍＭテトラメチレンエチレンジアミン，ｐＨ
４．７）３０ｍｌに溶解し，４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−グルコン酸の１．８３ｇとＥＤＣの０．７
８ｇを添加して３昼夜，室温で反応させた。反応終了
後，反応液を透析チューブ（スペクトラム，分子量カッ
ト３５００）に移し，３０ｌの蒸留水に対して透析を行
った。透析終了後凍結乾燥を行って目的物を得た（収量
１．７ｇ）。

【００３１】実施例４ ｐＬｙｓ−ＬＡの合成（ＬＡ７０％の場合） ２ｇのｐＬｙｓ（０．０１７ｍｏｌ）をＴＥＭＥＤ緩衝
液（５０ｍＭ テトラメチレンエチレンジアミン，ｐＨ
４．７）３０ｍｌに溶解し，４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−グルコン酸の４．２６ｇとＥＤＣの１．８
２ｇを添加して３昼夜，室温で反応させた。反応終了
後，反応液を透析チューブ（スペクトラム，分子量カッ
ト３５００）に移し，３０ｌの蒸留水に対して透析を行
った。透析終了後凍結乾燥を行って目的物を得た（収量
１．３ｇ）。

【００３２】実施例５［ｐＬｙｓ−ＬＡ（分子量１０，
０００）の製造例］ ｐＬｙｓ−ＬＡの合成（ＬＡ２５％の場合） １．８ｇのｐＬｙｓ［０．０１５ｍｏｌ；ポリ−Ｌ−リ
ジンにおけるモノマーリジン中のアミノ基に対するモル
数］をＴＥＭＥＤ緩衝液（５０ｍＭ テトラメチレンエ
チレンジアミン，ｐＨ４．７）３０ｍｌに溶解し，４−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコン酸（商品名
ラクトピオン酸，東京化成）の１．３ｇとＥＤＣの
０．９３ｇを添加して３昼夜，室温で反応させた。反応
終了後，反応液を透析チューブ（スペクトラム，分子量
カット３５００）に移し，３０ｌの蒸留水に対して透析
を行った。透析終了後凍結乾燥を行って目的物を得た
（収量２．０ｇ）。

【００３３】上記，実施例において説明した合成物（ｐ
Ｌｙｓ−ＬＡ）の糖導入の確認および糖導入率の決定は
下記のとおり行った。 （Ａ）実施例１〜４［ｐＬｙｓ−ＬＡ（分子量２，００
０）］ （試料の調製）ＴＥＭＥＤ緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ４，
７）にポリリジン２ｇ（リジンモノマーとして０．０１
７ｍｏｌ）を溶かし，側鎖アミノ基の０．１倍，０．２
倍，０．３倍，０．７倍ｍｏｌのＤ−ガラクトピラノシ
ル−グルコン酸，用いた糖類の０．８倍ｍｏｌのＥＤＣ
を続けて溶解させた。引き続いて，室温で３昼夜，反応
させた後，水で透析し，凍結乾燥によって試料を調製し
た。

【００３４】上記縮合法により，側鎖アミノ基の０．１
倍，０．２倍，０．３倍および０．７倍のＤ−ガラクト
ピラノシル−グルコン酸を加えてカップリングさせて得
られた誘導体（ｐＬｙｓ−ＬＡ）の^１ Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを後記図１，図２，図３および図４に示す。各図
から明らかな様に各試料ともに４ｐｐｍ付近に糖のピー
クが観察され，糖がポリマー側鎖中に導入されたことが
確認された。また，図から明らかなように，Ｄ−ガラク
トピラノシル−グルコン酸の使用量に対応して，各々糖
類の置換割合６．３％［ｐＬｙｓ−ＬＡ（１０）：実施
例１］，８．９％［ｐＬｙｓ−ＬＡ（２０）：実施例
２］，１４．０％［ｐＬｙｓ−ＬＡ（３０）：実施例
３］および１８．０％［ｐＬｙｓ−ＬＡ（７０）：実施
例４］の化合物が得られた。 （糖導入率の決定）ＬＡ導入率は，ＮＭＲの解析によっ
て行った。別紙のＮＭＲチャートにおいて２．９２ＰＰ
Ｍ付近の強いシグナルは，εＣＨ_２ によるもので積分
比は２となる。次に４．２２ＰＰＭ付近は骨格ＣＨによ
るもので積分比は１となる。また，３．４５から４．６
９ＰＰＭのシグナルは，ＬＡ糖鎖によるものであり，積
分比２１Ｘ分となる。各シグナルの積分曲線（後記図１
〜４中に，波線で示した。）よりプロトン積分比（後記
図１〜４中に，数値で示した。）を求めた。実際に得ら
れた積分比とこれらシグナルの比２：２１Ｘ＋１の関係
からＬＡ導入量が計算できる。

【００３５】（Ｂ）実施例５［ｐＬｙｓ−ＬＡ（分子量
１０，０００）｝ 試料の調製は，前記（Ａ）と同様にして行った。得られ
た誘導体（ｐＬｙｓ−ＬＡ）の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を後記図５に示す。各図から明らかな様に４ｐｐｍ付近
に糖のピークが観察され，糖がポリマー側鎖中に導入さ
れたことが確認された。また，糖類の置換割合１９％
［ｐＬｙｓ−ＬＡ（２５）：実施例５］の化合物が得ら
れた。糖導入率の決定も前記（Ａ）に示した方法と同様
にして行った。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１により得られた化合物の^１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。

【図２】実施例２により得られた化合物の^１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。

【図３】実施例３により得られた化合物の^１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。

【図４】実施例４により得られた化合物の^１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。

【図５】実施例５により得られた化合物の^１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 篠田 達輝 静岡県焼津市大住180−１ ルーミーやい づ 307

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中，Ｘは重合度１５〜２５０であることを，Ｒは水
   素原子，または保護基を夫々意味する。）で示されるポ
   リペプチドにおいて，その構成ペプチドの一部または全
   部を 【化２】 で表わされるε−Ｄ−ガラクトピラノシル−グルコンア
   ミジル−Ｌ−リジン残基（Ｄ−ガラクトピラノシルとグ
   ルコンアミジルの結合はα１→６またはβ１→４のいず
   れであってもよい）で置換したポリ−Ｌ−リジンのＤ−
   ガラクトピラノシル−グルコン酸誘導体（ただし，Ｎ末
   端のα−アミノ基は非置換であるか，上記Ｄ−ガラクト
   ピラノシル−グルコン酸で置換されるかのいずれであっ
   てもよい。）。
2. 【請求項２】 各構成単位の比率が， Ｌ−リジン残基 ０〜９８％ ε−Ｄ−ガクトピラノシル−グルコンアミジル−Ｌ−リ
   ジン残基２〜１００％ ε−保護基−Ｌ−リジン残基 ０〜９８％ であり，分子量２，０００〜１１７，０００であること
   を特徴とする請求項１記載の誘導体。
3. 【請求項３】 保護基がベンジルオキシカルボニル基で
   ある請求項１記載の誘導体。
4. 【請求項４】 ポリ−Ｌ−リジンのアミノ基とＤ−ガラ
   クトピラノシル−グルコン酸のカルボキシル基を反応さ
   せることを特徴とする，請求項１記載の誘導体の製造方
   法。