JP2011501967A - ショートタンデムリピート遺伝子座のマルチプレックス増幅のための方法およびキット - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、米国特許法§119(e)の下、2008年10月30日に出願された米国特許出願第60/983,737号(これは、参考として本明細書に援用される)の優先権の利益を主張する。
本教示は全般的には、ゲノム系における遺伝子マーカーの検出を対象とする。種々の実施形態では、各遺伝子座の対立遺伝子を決定するため1回のマルチプレックス反応で複数の異なる多型遺伝子座(genetic locus)を同時に増幅する。分析される多型遺伝子座(genetic locus)はショートタンデムリピート(STR:short tandem repeat)遺伝子座であってもよく、ショートタンデムリピートは約200塩基対またはそれ未満のアンプリコンを与えるミニSTRを含む場合がある。
Tm=(4℃×GおよびC塩基の数)+(2℃×AおよびT塩基の数)。
Claims (25)
- (a)マルチプレックス(multplex)増幅反応で分析される少なくとも1個のDNAサンプルの一組の遺伝子座を共増幅する工程であって、該反応の産物は該組内の該共増幅した(co−amplifiedd)遺伝子座から増幅された対立遺伝子の混合物であり、該遺伝子座の組は10個のSTR遺伝子座D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、D2S1338、D3S1358、D8S1179、FGA、TH01、VWA;およびSTR遺伝子座D10S1248、D12S391、D1S1656、D22S1045およびD2S441からなる群から選択される1つまたは複数を含む、工程;
(b)該混合物中の該増幅された対立遺伝子を評価して該少なくとも1個のDNAサンプル内の該遺伝子座の組で分析された各該遺伝子座に存在する該対立遺伝子を決定する工程
を含む、方法。 - 工程(a)の前記遺伝子座の組は前記少なくとも1個のDNAサンプルの供給源(単数または複数)の性別を特定するのに使用され得る遺伝子座をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記DNAサンプル(単数または複数)の前記供給源はヒトであり、該ヒトの性別の特定に使用する前記遺伝子座はアメロゲニン遺伝子座である、請求項2に記載の方法。
- 前記評価する工程の前に前記増幅された対立遺伝子を分離する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅された対立遺伝子はキャピラリーゲル電気泳動により分離される、請求項4に記載の方法。
- 前記共増幅する工程は前記遺伝子座の組内の該遺伝子座それぞれに対して1対のオリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該対のプライマーはそれぞれ前記マルチプレックス反応における該遺伝子座の組の遺伝子座に隣接する、請求項1に記載の方法。
- オリゴヌクレオチドプライマーの各対の少なくとも1個のプライマーは標識プライマーである、請求項6に記載の方法。
- 前記標識プライマーの標識は蛍光標識である、請求項7に記載の方法。
- 前記共増幅する工程は少なくとも5個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも5個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも5種類の異なる蛍光標識を有する、請求項8に記載の方法。
- 前記共増幅する工程は少なくとも6個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも6個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも6種類の異なる蛍光標識を有する、請求項8に記載の方法。
- 前記少なくとも6種類の異なる蛍光標識が、520nmでその最大の蛍光を放つ第1の蛍光標識、550nmでその最大の蛍光を放つ第2の蛍光標識、575nmでその最大の蛍光を放つ第3の蛍光標識、590nmでその最大の蛍光を放つ第4の蛍光標識、650nmでその最大の蛍光を放つ第5の蛍光標識および620nmでその最大の蛍光を放つ第6の蛍光標識を含む、請求項10に記載の方法。
- 選択された前記遺伝子座の組の各遺伝子座はポリメラーゼ連鎖反応を使用して共増幅される、請求項1に記載の方法。
- 分析される前記少なくとも1個のDNAサンプルはヒト組織から調製される、請求項1に記載の方法。
- 前記ヒト組織は血液、精液、膣細胞、毛髪、唾液、尿、骨、口腔サンプル、胎盤細胞を含む羊水および胎児細胞を含む羊水からなる群の1つまたは複数から選択される、請求項13に記載の方法。
- 分析される少なくとも1個のDNAサンプルの一組の遺伝子座を共増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを含む、キットであって、該遺伝子座の組は共増幅され得;該プライマーは1つまたは複数の容器内にあり;該遺伝子座の組はアメロゲニン遺伝子座と、10個のSTR遺伝子座D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、D2S1338、D3S1358、D8S1179、FGA、TH01、VWAと、STR遺伝子座D10S1248、D12S391、D1S1656、D22S1045およびD2S441からなる群の1つまたは複数とを含む、キット。
- 前記キット内の前記オリゴヌクレオチドプライマーはすべて1つの容器内にある、請求項15に記載のキット。
- 少なくとも1回のマルチプレックス増幅反応のための試薬をさらに含む、請求項15に記載のキット。
- 少なくとも1つのサイズ標準の入った容器をさらに含む、請求項15に記載のキット。
- 前記サイズ標準はDNAマーカーである、請求項18に記載のキット。
- 前記サイズ標準は遺伝子座特異的対立遺伝子ラダーである、請求項18に記載のキット。
- 前記遺伝子座特異的対立遺伝子ラダーのおのおのの格(rung)、および前記遺伝子座の組の各遺伝子座に対する少なくとも1個のオリゴヌクレオチドプライマーは、それらに共有結合した蛍光標識を有し、該オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも2個は、該プライマーに共有結合した、前記容器内の他のプライマーと異なる蛍光標識を有する、請求項20に記載のキット。
- 前記標識プライマーの少なくとも5個が、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも5種類の異なる蛍光標識を有する、請求項21に記載のキット。
- 前記少なくとも5種類の異なる蛍光標識が、520nmでその最大の蛍光を放つ第1の蛍光標識、550nmでその最大の蛍光を放つ第2の蛍光標識、575nmでその最大の蛍光を放つ第3の蛍光標識、590nmでその最大の蛍光を放つ第4の蛍光標識および650nmでその最大の蛍光を放つ第5の蛍光標識を含む、請求項22に記載のキット。
- 前記標識プライマーの少なくとも6個が、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも6種類の異なる蛍光標識を有する、請求項21に記載のキット。
- 前記少なくとも6種類の異なる蛍光標識が、520nmでその最大の蛍光を放つ第1の蛍光標識、550nmでその最大の蛍光を放つ第2の蛍光標識、575nmでその最大の蛍光を放つ第3の蛍光標識、590nmでその最大の蛍光を放つ第4の蛍光標識、650nmでその最大の蛍光を放つ第5の蛍光標識および620nmでその最大の蛍光を放つ第6の蛍光標識を含む、請求項24に記載のキット。
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