JP2011500058A - 発酵用酵素ブレンド - Google Patents
発酵用酵素ブレンド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011500058A JP2011500058A JP2010530065A JP2010530065A JP2011500058A JP 2011500058 A JP2011500058 A JP 2011500058A JP 2010530065 A JP2010530065 A JP 2010530065A JP 2010530065 A JP2010530065 A JP 2010530065A JP 2011500058 A JP2011500058 A JP 2011500058A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glucoamylase
- alpha amylase
- acid
- seq
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
- C12N9/242—Fungal source
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/02—Monosaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
- C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
- C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Abstract
【選択図】図1
Description
(a)デンプン含有粉砕穀物を含むスラリーをアルファアミラーゼと接触させ液状化物を生産する段階、
(b)前記液状化物をグルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼと接触させ発酵性糖類を生産する段階、及び
(c)発酵生物の存在下発酵性糖類を発酵させ最終産物を生産する段階
を含む。
この方法において、段階(b)である糖化及び段階(c)である発酵を連続して行って又は同時に行ってよい。グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼを液状化物に別々に添加してよい。あるいは、グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼを含む酵素ブレンド組成物を液状化物へ添加してよい。処理の間に任意に、アルファアミラーゼ、グルコアミラーゼ、フィターゼ、セルラーゼ、プルラナーゼ、プロテアーゼ、又はラッカーゼのような少なくとも一つの他の酵素を用いてよい。また、方法は最終産物を回収する段階を含んでよい。
1.TrGA、0.25GAU/gds トウモロコシ、
2.番号1 + 0.05SAPU AFP/gds トウモロコシ
3.番号1 + 2.0SSUアルファアミラーゼ/gds トウモロコシ、
4.番号1 + 0.05SAPU、AFP + 2.0SSUアルファアミラーゼ/gds トウモロコシ
本明細書にて他に定義されていない限り、本明細書で用いるすべての技術的及び特別な用語はこの発明に属する当業者によって普通に理解されるものと同様の意味を持つ。Singleton、他、 DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 2D ED.、John Wiley and Sons, New York (1994)及びHale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)が、当業者には本発明で用いられる用語の多くの一般的辞書となる。さらに、特定の用語は明瞭性のため及び参照の場合のために下記に定義する。
g(DANSTAR)ソフトウエア又はWU-BLAST-2(Altschul他、Meth. Enzym., 266:460-480(1996))、又はGAP、BESTFIT、BLAST(Altschul他)上記、FASTA及びGenetics Computing Group (GCG)パッケージ、バージョン8、マジソン、ウィスコン州米国にて入手可能なTFASTA及びIntelligences, Mountain View、カリフォルニア州による CLUSTAL in the PC/Gene programである。当業者であれば比較される配列の長さに渡って最大の配列比較を達成するために必要であるアルゴリズムを含め、整列を測定する適切なパラメーターを決定できる。好ましくは、配列相同性はプログラムによって決定されたデフォルトパラメーターを使用することにより決定される。特に、配列相同性はSmith-Waterman homology search algorithm (Meth. Mol. Biol. 70: 173-1 87 (1997)) によって決定される。このアルゴリズムは次のサーチパラメーターで、すなわち12のギャップ開始ペナルティ及び1のギャップ伸長ペナルティで、アファインギャップサーチを使用しているMSPRCH program (Oxford Molecular) で実行される。好ましくは対のアミノ酸の比較はGenetics Computer Group, Inc., Madison, Wis.の12のギャップウエイトと2のレングスウエイトをもつBLOSUM62アミノ酸置換行列を使用しているGCG配列分析ソフトウエアパッケージの使用により実行される。二つのアミノ酸配列の最適整列に関して、種々のアミノ酸配列の連続セグメントは参照アミノ酸配列に対して追加アミノ酸残基又は欠損アミノ酸残基をもってもよい。参照アミノ酸配列と比較するために使用した連続セグメントは少なくとも20アミノ酸残基を含んでもよく、30、40、50又はそれ以上のアミノ酸残基を含んでもよい。誘導体のアミノ酸配列中ギャップを含む関係で増加した配列相同性の補正はギャップペナルティを割り当てることにより実行できる。
発明者はアルファアミラーゼ、グルコアミラーゼ、及び酸性菌プロテアーゼを含む酵素ブレンドを発見した。そのような組成物は糖化及び/又は糖化/発酵の間デンプン転換プロセスにおいて有用である。そのような組成物を使用することはデンプン転換プロセスにおいてグルコアミラーゼを単独にて用いるより有用な効果を提供する。
グルコアミラーゼ(E.C.3.2.1.3.)はデンプン類及びデキストリン類をグルコースへ分解する酵素である。グルコアミラーゼはエキソ作用酵素である。それはデンプンにおけるアルファ1−4及びアルファ1−6グルコシド結合を加水分解し、グルコースを放出する。
本発明による有用なアルファアミラーゼは野生型アルファアミラーゼ、その変異体又はフラグメント又は例えば、ある微生物源からの触媒部位及び別の微生物源からのデンプン結合部位由来のハイブリッドアルファアミラーゼでよい。あるいは、アルファアミラーゼは酸安定性であるように組み換えらた変異体でよい。また、アルファアミラーゼは粒状デンプン加水分解活性(GSHE)を有するアルファアミラーゼでよい。なぜならその酵素は液状化物における多くのデンプンを分解するように働くからである。
本発明の幾つかの実施態様は、少なくとも一つの酸安定性アルファアミラーゼ、少なくとも一つのグルコアミラーゼ、及び少なくとも一つの菌類プロテアーゼを含む組成物を含むけれども、任意的に、組成物は他の酵素を含んでもよい。例えば、組成物を多様な適用(例えば、デンプン処理適用)に用いる場合、さらに、第二酵素を含んでよい。本発明によるブレンド組成物は発酵微生物及び他の成分及び他の第二酵素を伴って糖化段階及び/又は発酵段階において用いてよい。追加される酵素は、追加グルコアミラーゼ、追加アルファアミラーゼ、追加プロテアーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、キシラナーゼ、フィターゼ、プルラナーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ベータ‐グルカナーゼ、ガラクトシダーゼ、エステラーゼ、シクロデキストリントランスグルコシルトランスフェラーゼ(CGTases),ベータ‐アミラーゼ、及びそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない。
本発明の酵素ブレンド組成物はグルコアミラーゼ、アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼを含む。三つの酵素成分は一緒に混合される三つの酵素を含むブレンドされた製剤、又は本発明により含まれる組成物を得るためにプロセス段階の間に別個に添加される酵素成分を含むブレンドされた製剤として用いてよい。好ましくは、本発明の組成物をデンプン転換における段階の間に用い、その結果、下記に規定する活性比率が維持される。これは経時的(time‐wise manner)に組成物の別々の成分を加えることに関係し、その結果、酵素比は維持され、例えば、その成分を同時に添加してもよい。
a)配列番号1に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有するGA、配列番号5に対して少なくとも97%配列相同性を有するAkAA及びAFP、
b)配列番号1に対して少なくとも95%又は少なくとも97%配列相同性を有するGA、酸安定性AA、及びAFP、
c)配列番号1に対して少なくとも95%又は少なくとも97%配列相同性を有するGA、GSHE AA、及び配列番号14に対して少なくとも90%、95%又は99%の配列相同性を有するAFP、
d)GA、AkAA又はTrAA、及び配列番号14に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有する酸性菌類プロテアーゼ、
e)GA、AkAA、及び配列番号14に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有する酸性菌類プロテアーゼ、
f)配列番号1に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有するGA、AkAA、及び配列番号14に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有するAFP、
g)配列番号1に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有するGA、TrAA、及び配列番号14に対して少なくとも95%又は少なくとも97%の配列相同性を有する酸性菌類プロテアーゼ、
h)配列番号1に対して少なくとも95%の配列相同性を有するGA、配列番号14に対して少なくとも95%の配列相同性を有するAFP、及び配列番号5に対して少なくとも95%の配列相同性を有するAA、
i)配列番号1に対して少なくとも98%の配列相同性を有するGA、配列番号14に対して少なくとも98%の配列相同性を有するAFP、及び配列番号5に対して少なくとも98%の配列相同性を有するAA、及び
j)STARGEN(商標)001であって、酸安定性アスペルギルス カワチ(Aspergillus kawachi)アルファアミラーゼ、アスペルギルス ニガー(Aspergillus niger)グルコアミラーゼのブレンド(ジェネンコ インターナショナル社から商業的に入手可能)、及び酸性菌類プロテアーゼ、
を含む。
プロテアーゼは、GAU:SSU:SAPUによる測定として約1:1.5:0.1から約1:8:1である。
プロテアーゼは、GAU:SSU:SAPUにて測定して約1:2:0.2から約1:5:0.6である。
本発明はさらに発酵性糖類から最終産物を生産するための方法に関する。方法は
(a)デンプン含有粉砕穀物を含むスラリーをアルファアミラーゼと接触させ、液状化物を生産する段階、
(b)その液状化物をグルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼに接触させ、発酵性糖類を生産する段階、及び
(c)発酵生物の存在下発酵性糖類を発酵させて最終産物を生産する段階
を含む。前記方法において、工程(b)糖化及び(c)発酵は連続して行って又は同時に行ってもよい。グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼを液状化物に別個に添加してよい。あるいは、グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼを含む酵素ブレンド組成物を液状化物へ添加してよい。各段階を以下に詳しく記載する。
植物原料を含む基質を周知の方法により粉末にして又は粉砕してよい。植物原料は小麦、トウモロコシ、ライ、ソルガム(ミロ)、米、キビ、オオムギ、ライ小麦、キャッサバ(タピオカ)、ジャガイモ、サツマイモ、サトウダイコン、サトウキビ、及び大豆及びエンドウ豆のような豆類を含む植物から得られる。好ましい植物の原料は、トウモロコシ、オオムギ、小麦、米、ミロ、及びそれらの組み合わせを含む。植物原料はハイブリッド変異体及び遺伝的に修飾される変異体(例えば、異種性遺伝子を含むトランスジェニックトウモロコシ、オオムギ、又は大豆)を含んでよい。
上述のように得られた液状化物を所望の酵素比を出来る限り長く維持する単独投与又は分割投与にてグルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ及び酸性菌類プロテアーゼと接触してよい。
つまり、分割投与量とは、所望の比における全体投与量を一以上に分割して添加し、二分割又は三分割を含むことを意味する。ある実施態様においては、全体投与量の一部分を初期に添加し、第二部分をプロセスにおける特定の時間に添加する。ある実施態様においては、、少なくとも一部分の投与量を糖化(又はSSF)の初期に添加し、糖化処理を始める。ある実施態様においては、酵素組成物中各酵素を液状化物に別々に、けれども、連続してまたは活性比が維持されるように十分短い時間にて添加してよい。あるいは、グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ及び酸性菌類プロテアーゼを含む酵素ブレンド組成物を糖化及び発酵の一つの間又は両方の間に添加してよい。グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ及び酸性菌類プロテアーゼの比はGAU:SSU:SAPUによる測定として好ましくは約1:1.5:0.1から約1:8:1、及びより好ましくは、約1:2:0.2から約1:5:0.6である。
即時発酵プロセスのある好ましい最終産物は例えばエタノールのようなアルコール産物である。さらなる実施態様においては、最終産物は、乾燥した蒸留穀物残渣(Distillers Dried Grains)(DDG)、可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣(Distillers Dried Grain plus Solubles)(DDGS)、のような発酵副産物であって、動物の飼料として用いられるものである。
発酵生物の例はエタノール生産微生物(ethanologenic microorganisms)又はアルコールデヒドロゲナーゼ及びピルビン酸デヒドロゲナーゼを発現し、ザイモモナス モビリス(Zymomonas moblis)(例えば、USP 5,000,000、USP 5,028,539、USP 5,424,202、USP 5,514,583及びUSP 5,554,520を参照願いたい)から得られるエタノール生産細菌類のようなエタノール生産微生物(ethanol producing microorganisms)である。さらなる実施態様においては、エタノール生産微生物はキシロースリダクターゼ及びキシリトールデヒドロゲナーゼであって、キシロースをキシルロースに変える酵素を発現する。さらなる実施態様においては、キシロース イソメラーゼはキシロースをキシルロースに変える。ある好ましい実施態様においては、ペントース類及びヘキソース類両方をエタノールへ発酵できる微生物を利用してよい。例えば、幾つかの実施態様においては、微生物は天然の微生物又は遺伝子組み換えをしていない微生物であり、他の実施態様においては、微生物は組み換え微生物でよい。
本発明の方法に従って生産される最終産物は発酵培地から分離及び/又は精製されてよい。分離及び精製の方法は周知であり、例えば培地を抽出、蒸留及びカラムクロマトグラフィー処理による方法である。幾つかの実施態様においては、最終産物は培地を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析にて処理することにより直接同定される。
から1マイクロモルのチロシンを遊離するプロテアーゼ酵素活性の量である)、及びGAU(グルコアミラーゼ ユニット(glucoamylase unit)であって、pH4.2及び60℃にて可溶性デンプン基質から時間当たりグルコースに換算して1gの還元糖を生産することのできる酵素量として規定される)。
粘度測定
グラスクッカー‐粘度計(glass cooker ‐viscometer)、LR‐2.STシステムIKAを粘度測定するために用いる。手短に説明すると、粘度計は、ユーロスター ラボテクニック パワー コントロール‐粘度計(Eurostar Labortechnik power control−viscometer)(ビスコクリック(Viscoklick)粘度計の粘度範囲は0から600Ncm)によって攪拌されるアンカーミキサーを有する2000mlの二重壁のガラス容器からなる。一般的に、本明細書に記載する実施例のために、デンプン基質及び適切な酵素量を含有するスラリーを粘度計容器に注いだ。温度及び粘度を85℃まで加熱する間記録し、インキュベーションをさらに60分から120分間続けた。Ncmとして測定される粘度は間隔を置いて記録した。
用いたグルコアミラーゼは表1に配列番号1として示すトリコデルマ レーシ(Trichoderma reesei)GA(TrGA)であった(また、US 2006/0003408、1/5/2006発行、及びUS 2006/0094080、5/4/2006発行を参照願いたい、両者は参照によりここに取り込まれる)。実施例にて用いる酸性菌類プロテアーゼは、配列番号14の配列を有するトリコデルマ レーシ(Trichoderma reesei)であった(また、US 2006/015342、7/13/2006発行、配列番号10を参照願いたい、参照により取り込まれる)。アルファアミラーゼは、本明細書にて配列番号5(米国特許第7,205,138)として示すアスペルギルス カワチ(Aspergillus. kawachi)アルファアミラーゼ(AkAA)であった。すべての特許出願はそれら全体を参照により本明細書に取り込まれる。
オリゴサッカライド反応産物の組成物を屈折率(refractive index)(RI)検出器(ERC−7515A RI検出器, Anspec Company Inc.)に接続し50℃に維持したHPLCカラム(レゼックス(Rezex) 8u 8% H, モノサッカライド)が備わったHPLC(ベックマンシステム(Beckman System) Gold 32 Karat Fullerton, CA)により測定した。サッカライド類は分子量に基づいて分離された。DP1の記号は、グルコースのようなモノサッカライド、DP2の記号は、マルトースのようなジサッカライド、DP3の記号は、マルトトリオースのようなトリサッカライド及び「DP4+」の記号は、4以上の重合(DP)度を有するオリゴサッカライドである。
エタノール発酵でのTrGA、AkAA及びAFPブレンド又は組成物の効果
この実施例は、エタノール発酵でのグルコアミラーゼ、アルファアミラーゼ及び酸性菌類プロテアーゼのブレンドの驚くべき有用性を示す。
マスバランス試験
酵母発酵の間、炭素転換効率(アルコール収率)に対するグルコアミラーゼ(トリコデルマ レーシ(Trichoderma reesei))を用いた酸性菌類プロテアーゼ(Danisco US, Inc, Genencor Division製のファームゲン(FERMGEN))及び酸安定性アルファアミラーゼ(配列番号5)の効果を分析した。液状化全粒粉砕トウモロコシを含む培地をさらにマスバランス試験に用いた。
1:TrGA、0.25GAU/gds トウモロコシ、
2:番号1+0.05SAPU AFP/gds トウモロコシ、
3:番号1+2.0SSU アルファアミラーゼ/gds.トウモロコシ、
4:番号1+0.05SAPU、AFP+2.0SSU アルファアミラーゼ/gds トウモロコシ
である。
Claims (20)
- グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼを含む組成物。
- グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼの比がGAU:SSU:SAPUで測定した場合、約1:1.5:0.1から約1:8:1であることを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼの比がGAU:SSU:SAPUで測定した場合、約1:2:0.2から1:5:0.6であることを特徴とする、請求項2に記載の組成物。
- 前記グルコアミラーゼがトリコデルマ(Trichoderma)、タラロミセス(Taleromyces)、ペニシリウム(Penicillium)、アスペルギルス(Aspergillus)及びフミコーラ(Humicola)から成る群から選択される菌類から得られることを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 前記グルコアミラーゼが配列番号1のアミノ酸配列と少なくとも90%の相同性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 前記グルコアミラーゼ配列番号1のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項5に記載の組成物。
- 前記酸安定性アルファアミラーゼがトリコデルマ(Trichoderma)又はアスペルギルス(Aspergillus)から得られることを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 前記酸安定性アルファアミラーゼが配列番号5、7、9、10、又は13のアミノ酸配列と少なくとも90%の相同性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 前記グルコアミラーゼが配列番号5のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項8に記載の組成物。
- 前記酸性菌類プロテアーゼがトリコデルマ(Trichoderma)から得られることを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 前記酸性菌類プロテアーゼが配列番号14のアミノ酸配列と少なくとも90%の相同性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 前記酸性菌類プロテアーゼが配列番号14のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項11に記載の組成物。
- さらに、第二のグルコアミラーゼ、第二のアルファアミラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、キシラナーゼ、第二のプロテアーゼ類、フィターゼ、プルラナーゼ、ベータアミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ベータ‐グルカナーゼ、ガラクトシダーゼ、エステラーゼ、シクロデキストリントランスグルコシルトランスフェラーゼ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される追加酵素を含むことを特徴とする、請求項1に記載の組成物。
- 発酵性糖類から最終産物を生産するための方法であって、
a.デンプン含有粉砕穀物を含むスラリーをアルファアミラーゼと接触させ液状化物を生産する段階、
b.前記液状化物をグルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼと接触させ発酵性糖類を生産する段階、及び
c.発酵生物の存在下発酵性糖類を発酵させ最終産物を生産する段階、
を含むことを特徴とする方法。 - 前記最終産物がアルコールであることを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- グルコアミラーゼ、酸安定性アルファアミラーゼ、及び酸性菌類プロテアーゼの比がGAU:SSU:SAPUで測定した場合、約1:1.5:0.1から約1:8:1であることを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 段階(b)と段階(c)を連続して行うことを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 段階(b)と段階(c)を同時に行うことを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 段階(b)が30から65℃及びpH3.0からpH5.0にて行うことを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 段階(c)が15−40℃及びpH3.0からpH6.5にて行うことを特徴とする、請求項14に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US98103507P | 2007-10-18 | 2007-10-18 | |
US60/981,035 | 2007-10-18 | ||
PCT/US2008/079827 WO2009052101A1 (en) | 2007-10-18 | 2008-10-14 | Enzyme blends for fermentation |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011500058A true JP2011500058A (ja) | 2011-01-06 |
JP5463294B2 JP5463294B2 (ja) | 2014-04-09 |
Family
ID=40090299
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010530065A Expired - Fee Related JP5463294B2 (ja) | 2007-10-18 | 2008-10-14 | 発酵用酵素ブレンド |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8048657B2 (ja) |
EP (1) | EP2201108B1 (ja) |
JP (1) | JP5463294B2 (ja) |
CN (1) | CN101827935A (ja) |
AR (1) | AR068924A1 (ja) |
BR (1) | BRPI0818546B1 (ja) |
CA (1) | CA2702949C (ja) |
DK (1) | DK2201108T3 (ja) |
ES (1) | ES2526116T3 (ja) |
MX (1) | MX2010004014A (ja) |
PL (1) | PL2201108T3 (ja) |
WO (1) | WO2009052101A1 (ja) |
Families Citing this family (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2363460A3 (en) * | 2004-12-30 | 2011-12-28 | Genencor International, Inc. | Acid fungal proteases |
ZA200706858B (en) * | 2005-02-18 | 2008-10-29 | Genencor Int | Polypeptides having alpha-amylase and granular starch hydrolyzing activity |
US7968318B2 (en) * | 2006-06-06 | 2011-06-28 | Genencor International, Inc. | Process for conversion of granular starch to ethanol |
ES2565060T3 (es) * | 2010-04-14 | 2016-03-31 | Novozymes A/S | Polipéptidos que tienen actividad de glucoamilasa y polinucleótidos que codifican los mismos |
AR082578A1 (es) * | 2010-08-06 | 2012-12-19 | Danisco Us Inc | SACARIFICACION Y FERMENTACION A pH NEUTRO |
WO2012088303A2 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Novozymes North America, Inc. | Processes for producing fermentation products |
CN102807937B (zh) * | 2011-05-31 | 2013-12-04 | 黑龙江省麒麟工贸公司 | 一种生料酒曲的制备方法 |
EP3246404B1 (en) * | 2011-10-28 | 2019-02-27 | Danisco US Inc. | Variant maltohexaose-forming alpha-amylase variants |
EP2785847B1 (en) * | 2011-12-02 | 2017-07-26 | Novozymes A/S | Liquefaction process with selected alpha-amylases and proteases |
CN102618602B (zh) * | 2012-03-30 | 2013-05-15 | 吴允山 | 甘薯渣酶法水解糖工艺 |
CN104321437A (zh) * | 2012-05-11 | 2015-01-28 | 丹尼斯科美国公司 | 使用来自棒曲霉(ASPERGILLUS CLAVATUS)的α-淀粉酶进行糖化 |
WO2014058572A1 (en) * | 2012-10-10 | 2014-04-17 | Danisco Us Inc. | Method of using alpha-amylase from talaromyces emersonii for saccharification |
US9617574B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-04-11 | Auburn University | Efficient process for producing saccharides and ethanol from a biomass feedstock |
US11939552B2 (en) | 2013-06-24 | 2024-03-26 | Novozymes A/S | Process of recovering oil |
PL3013967T3 (pl) | 2013-06-24 | 2022-03-21 | Novozymes A/S | Sposoby odzyskiwania oleju z procesów wytwarzania produktów fermentacji i sposoby wytwarzania produktów fermentacji |
AU2014312110B2 (en) * | 2013-08-30 | 2017-09-14 | The University Of Toledo | Enzymatic digestion of microalgal biomass for lipid, sugar, and protein recovery |
WO2015031477A1 (en) | 2013-08-30 | 2015-03-05 | Novozymes A/S | Enzyme composition and uses thereof |
WO2015048087A1 (en) * | 2013-09-25 | 2015-04-02 | Novozymes A/S | Processes of producing fermentation products |
WO2015057520A1 (en) * | 2013-10-16 | 2015-04-23 | Novozymes A/S | Processes of producing fermentation products |
WO2015066669A1 (en) * | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Danisco Us Inc. | Proteases in corn processing |
CN103725624B (zh) * | 2013-12-30 | 2016-03-23 | 广东启智生物科技有限公司 | 一种能降解利用餐厨废弃物的基因重组酿酒酵母 |
US20190002937A1 (en) * | 2015-12-21 | 2019-01-03 | Danisco Us Inc. | Improved granular starch conversion enzymes and methods |
CN112515093B (zh) * | 2020-12-02 | 2023-02-21 | 哈尔滨拓百世生物科技有限责任公司 | 一种全营养全谷多维膳食粉的加工方法 |
CA3202322A1 (en) | 2020-12-14 | 2022-06-23 | Anthony Newton | Method of starch processing |
CN113501644B (zh) * | 2021-06-29 | 2023-02-14 | 华南理工大学 | 一种提高有机固废厌氧发酵效率的制剂及其制备方法与应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006060062A2 (en) * | 2004-11-30 | 2006-06-08 | Genencor International, Inc. | Trichoderma reesei glucoamylase and homologs thereof |
WO2006073839A2 (en) * | 2004-12-30 | 2006-07-13 | Genencor International, Inc. | Acid fungal proteases |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US320153A (en) * | 1885-06-16 | Portable stacking-frame | ||
JPS5646831B2 (ja) | 1974-11-26 | 1981-11-05 | ||
JPS5534046A (en) | 1978-09-01 | 1980-03-10 | Cpc International Inc | Novel glucoamyrase having excellent heat resistance and production |
GB2089836B (en) | 1980-12-16 | 1984-06-20 | Suntory Ltd | Process for producing alcohol by fermentation without cooking |
US4760025A (en) | 1984-05-29 | 1988-07-26 | Genencor, Inc. | Modified enzymes and methods for making same |
US4587215A (en) | 1984-06-25 | 1986-05-06 | Uop Inc. | Highly thermostable amyloglucosidase |
US4618579A (en) | 1984-09-28 | 1986-10-21 | Genencor, Inc. | Raw starch saccharification |
US5424202A (en) | 1988-08-31 | 1995-06-13 | The University Of Florida | Ethanol production by recombinant hosts |
US5028539A (en) | 1988-08-31 | 1991-07-02 | The University Of Florida | Ethanol production using engineered mutant E. coli |
US5000000A (en) | 1988-08-31 | 1991-03-19 | University Of Florida | Ethanol production by Escherichia coli strains co-expressing Zymomonas PDC and ADH genes |
US5554520A (en) | 1988-08-31 | 1996-09-10 | Bioenergy International, L.C. | Ethanol production by recombinant hosts |
US5162210A (en) | 1990-06-29 | 1992-11-10 | Iowa State University Research Foundation | Process for enzymatic hydrolysis of starch to glucose |
GB9018426D0 (en) | 1990-08-22 | 1990-10-03 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to novel compounds |
JPH06502226A (ja) | 1990-10-05 | 1994-03-10 | ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド | セルラーゼによる綿含有織物の処理方法 |
US5789210A (en) | 1993-11-08 | 1998-08-04 | Purdue Research Foundation | Recombinant yeasts for effective fermentation of glucose and xylose |
US5514583A (en) | 1994-04-15 | 1996-05-07 | Midwest Research Institute | Recombinant zymomonas for pentose fermentation |
GB9416841D0 (en) | 1994-08-19 | 1994-10-12 | Finnfeeds Int Ltd | An enzyme feed additive and animal feed including it |
US5902581A (en) | 1995-12-04 | 1999-05-11 | Genencor International, Inc. | Xylanase from acidothermus cellulolyticus |
US5789166A (en) | 1995-12-08 | 1998-08-04 | Stratagene | Circular site-directed mutagenesis |
DE19752855C2 (de) | 1997-11-28 | 2003-04-03 | Bundesrepublik Deutschland Let | Retrovirale Pseudotyp-Vektoren mit modifizierten Oberflächen-Hüllproteinen und Verpackungszelle zu ihrer Herstellung für den selektiven Gentransfer |
US6352851B1 (en) | 1998-07-15 | 2002-03-05 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants |
JP2002520047A (ja) | 1998-07-15 | 2002-07-09 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | グルコアミラーゼ変異体 |
WO2002074895A2 (en) | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Novozymes A/S | Fermentation process including the use of enzymes |
CN1788083B (zh) | 2003-03-10 | 2011-10-05 | 诺维信公司 | 酒精产品生产方法 |
BRPI0416762A (pt) | 2003-11-21 | 2007-02-27 | Genencor Int | expressão de enzimas hidrolisantes de amido granular em trinchoderma e processo para produzir glicose a partir de substratos de amido granular |
US7413887B2 (en) | 2004-05-27 | 2008-08-19 | Genecor International, Inc. | Trichoderma reesei glucoamylase and homologs thereof |
CN1981037B (zh) | 2004-05-27 | 2011-08-31 | 金克克国际有限公司 | 白曲霉酸稳定性α淀粉酶的异源表达和在颗粒淀粉水解中的应用 |
CA2567485C (en) * | 2004-05-27 | 2015-01-06 | Genencor International, Inc. | Acid-stable alpha amylases having granular starch hydrolyzing activity and enzyme compositions |
KR101193480B1 (ko) | 2004-06-30 | 2012-10-23 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 전계발광 물질 및 소자 |
US7093959B2 (en) * | 2004-08-12 | 2006-08-22 | Frank Tsao | Outdoor lamp with projection range adjustment |
ZA200706858B (en) * | 2005-02-18 | 2008-10-29 | Genencor Int | Polypeptides having alpha-amylase and granular starch hydrolyzing activity |
-
2008
- 2008-10-14 US US12/250,789 patent/US8048657B2/en active Active
- 2008-10-14 CN CN200880111682A patent/CN101827935A/zh active Pending
- 2008-10-14 PL PL08840170T patent/PL2201108T3/pl unknown
- 2008-10-14 JP JP2010530065A patent/JP5463294B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-14 MX MX2010004014A patent/MX2010004014A/es active IP Right Grant
- 2008-10-14 EP EP08840170.8A patent/EP2201108B1/en active Active
- 2008-10-14 BR BRPI0818546-8A patent/BRPI0818546B1/pt active IP Right Grant
- 2008-10-14 ES ES08840170.8T patent/ES2526116T3/es active Active
- 2008-10-14 CA CA2702949A patent/CA2702949C/en active Active
- 2008-10-14 WO PCT/US2008/079827 patent/WO2009052101A1/en active Application Filing
- 2008-10-14 DK DK08840170.8T patent/DK2201108T3/en active
- 2008-10-17 AR ARP080104551A patent/AR068924A1/es unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006060062A2 (en) * | 2004-11-30 | 2006-06-08 | Genencor International, Inc. | Trichoderma reesei glucoamylase and homologs thereof |
WO2006073839A2 (en) * | 2004-12-30 | 2006-07-13 | Genencor International, Inc. | Acid fungal proteases |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2201108A1 (en) | 2010-06-30 |
CA2702949C (en) | 2017-04-04 |
WO2009052101A1 (en) | 2009-04-23 |
DK2201108T3 (en) | 2015-01-05 |
CA2702949A1 (en) | 2010-04-14 |
US20090203101A1 (en) | 2009-08-13 |
EP2201108B1 (en) | 2014-10-08 |
ES2526116T3 (es) | 2015-01-07 |
BRPI0818546A2 (pt) | 2014-10-14 |
MX2010004014A (es) | 2010-05-05 |
PL2201108T3 (pl) | 2015-03-31 |
AR068924A1 (es) | 2009-12-16 |
JP5463294B2 (ja) | 2014-04-09 |
CN101827935A (zh) | 2010-09-08 |
US8048657B2 (en) | 2011-11-01 |
BRPI0818546B1 (pt) | 2021-01-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5463294B2 (ja) | 発酵用酵素ブレンド | |
JP5463146B2 (ja) | アルファ‐アミラーゼを有するフィターゼを用いるデンプン加水分解 | |
JP5767438B2 (ja) | 粒状でんぷんからエタノールへの転化方法 | |
EP2049673B1 (en) | Native grain amylases in enzyme combinations for granular starch hydrolysis | |
JP5564441B2 (ja) | 糖化におけるグルコアミラーゼ及びブティアウクセラ属フィターゼ | |
JP5463349B2 (ja) | モラセスを用いた効率が向上した発酵法 | |
ES2639575T3 (es) | Utilización de glucoamilasa y fitasa de Buttiauxella durante la sacarificación | |
AU2017203294A1 (en) | Process for conversion of granular starch to ethanol | |
AU2012251931A1 (en) | Process for conversion of granular starch to ethanol |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101014 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121204 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130222 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131015 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131129 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140107 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140120 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5463294 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |