JP2010526307A - 特異的免疫グロブリンクラスg抗体の検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)第1のアナライト特異的受容体および第2のアナライト特異的受容体と該サンプルを接触させる工程であって、それらの2つの受容体の一方は固相に結合しているか、または固相に結合することができ、もう一方の受容体はシグナル生成基を含有するか、またはシグナル生成基に結合することができる工程、ならびに
(b)該固相上の該シグナル生成基を測定することにより、該アナライトの存在および/または量を検出する工程
を含んでなり、ここで第1のアナライト特異的受容体が該アナライトに対する少なくとも2つの結合部位を含有し、第2のアナライト特異的受容体が、該第1の受容体に結合した少なくとも2つのアナライト分子の配置物に選択的に結合することができる、方法に関する。
(a)抗原に特異的である免疫グロブリンクラスGの抗体を含有するサンプルを、抗原、その抗原に特異的に結合した免疫グロブリンGおよび第2の受容体からなる免疫複合体が形成される条件下、オリゴマー形態または多量体形態の抗原を含みシグナル生成基を含有する第1の受容体、および抗原結合凝集免疫グロブリンGに選択的に結合し標識を含有する第2の受容体と接触させる工程、
(b)(a)からの反応混合物を、第2の受容体の標識に対する固定化結合相手を含有する固相と、(a)からの免疫複合体が第2の受容体を介して該固相に結合する条件下で接触させる工程、
(c)該シグナル生成基を利用して(b)から結合複合体を検出する工程
を含んでなる方法である。
(a)抗原に特異的である免疫グロブリンクラスGの抗体を含有するサンプルを、抗原、その抗原に特異的に結合した免疫グロブリンGおよび第2の受容体からなる免疫複合体が形成される条件下、オリゴマー形態または多量体形態の抗原を含み標識を含有する第1の受容体、および抗原結合凝集免疫グロブリンGに選択的に結合しシグナル生成基を含有する第2の受容体と接触させる工程、
(b)(a)からの反応混合物を、第1の受容体の標識に対する固定化結合相手を含有する固相と、(a)からの免疫複合体が第1の受容体を介して該固相に結合する条件下で接触させる工程、
(c)該シグナル生成基を利用して(b)から結合複合体を検出する工程
を含んでなる方法である。
1.1 本発明の方法
Elecsys(登録商標)2010自動分析装置(Roche Diagnostics GmbH)を使用して、天然血清中の抗風疹IgGを免疫学的に検出した。本発明の抗体を捕捉抗体として使用して測定を行った。この抗体のビオチンコンジュゲートをストレプトアビジンコート化磁気ビーズの表面上に固定化した。したがって、それはサンプルからの多量体風疹様粒子(RLP)に結合した抗風疹IgGに結合する。RLPに結合したルテニウム化モノクローナル抗体により、該複合体を検出した。Elecsys(登録商標)2010におけるシグナル検出は電気化学発光に基づくものであった。
実施例1の免疫学的方法を用いて、マスター・キャリブレータ(master calibrator)(MC)、陰性および陽性血清を抗風疹IgG抗体に関して試験した。
リウマチ因子を含有する市販のヒト血清サンプル(Bioclinical Partners)を、実施例1に記載されている本発明の方法を用いて、抗風疹IgG抗体に関して試験した。
Claims (24)
- サンプル中のアナライトの測定方法であって、以下の工程:
(a)第1のアナライト特異的受容体および第2のアナライト特異的受容体と該サンプルを接触させる工程であって、それらの2つの受容体の一方は固相に結合しているか、または固相に結合することができ、もう一方の受容体はシグナル生成基を含有するか、またはシグナル生成基に結合することができる工程、ならびに
(b)該固相上の該シグナル生成基を測定することにより、該アナライトの存在および/または量を検出する工程
を含んでなり、ここで第1のアナライト特異的受容体が該アナライトに対する少なくとも2つの結合部位を含有し、第2のアナライト特異的受容体が、該第1の受容体に結合した少なくとも2つのアナライト分子の配置物に選択的に結合することができる、方法。 - 該アナライトが、抗原特異的抗体、特に、免疫グロブリンクラスGの抗原特異的抗体である、請求項1記載の方法。
- 該第1の受容体が該固相に結合しているか、または該固相に結合することができ、該第2の受容体が該シグナル生成基を含有するか、または該シグナル生成基に結合することができる、請求項1または2記載の方法。
- 該第2の受容体が該固相に結合しているか、または該固相に結合することができ、該第1の受容体が該シグナル生成基を含有するか、または該シグナル生成基に結合することができる、請求項1または2記載の方法。
- 該第1の受容体に結合した少なくとも2つのアナライト分子が凝集している、請求項1〜4のいずれか1項記載の方法。
- 該第1の受容体が該アナライトに対する少なくとも2つの異なる結合部位、少なくとも2つの同一の結合部位、または異なる及び同一の結合部位の組合せ、を含有する、請求項1〜5のいずれか1項記載の方法。
- 該第1の受容体がオリゴマー受容体または多量体受容体である、請求項1〜6のいずれか1項記載の方法。
- 第1の受容体が、該アナライトに対する結合部位として少なくとも2つのエピトープを含有する抗原を含む、請求項1〜7のいずれか1項記載の方法。
- 該第1の受容体がビーズを含む、請求項1〜8のいずれか1項記載の方法。
- 該第1の受容体が受容体前駆体の形態で提供される、請求項1〜9のいずれか1項記載の方法。
- 該受容体前駆体が、工程(a)の途中または前に互いに会合するかまたは互いに結合して該第1の受容体を形成するという性質を有する、請求項10記載の方法。
- 該第2の受容体がリウマチ因子様抗体である、請求項1〜11のいずれか1項記載の方法。
- 該第2の受容体が、少なくとも2つのパラトープを有する抗体である、請求項1〜12のいずれか1項記載の方法。
- 該第2の受容体が免疫グロブリンクラスMの抗体である、請求項1〜13のいずれか1項記載の方法。
- 該第2の受容体が、該アナライトに対する低いアフィニティおよび高いアビディティを有する抗体である、請求項1〜14のいずれか1項記載の方法。
- 該第2の受容体がモノクローナル抗体である、請求項1〜15のいずれか1項記載の方法。
- 工程(a)を、洗浄工程を行うことなく1つの反応混合物中で行う、請求項1〜16のいずれか1項記載の方法。
- 診断方法である、請求項1〜17のいずれか1項記載の方法。
- 第1のアナライト特異的受容体および第2のアナライト特異的受容体を含んでなるキットであって、それらの2つの受容体の一方が固相に結合しているか、または固相に結合することができ、もう一方の受容体がシグナル生成基を含有するか、またはシグナル生成基に結合することができ、第1のアナライト特異的受容体が該アナライトに対する少なくとも2つの結合部位を含有し、第2のアナライト特異的受容体が、該第1の受容体に結合した少なくとも2つのアナライト分子の配置物に選択的に結合することができる、キット。
- 第1のアナライト特異的受容体および第2のアナライト特異的受容体が、1つの反応混合物中での使用のために製剤化されている、請求項19記載のキット。
- 該第1の受容体が該固相に結合しているか、または該固相に結合することができ、該第2の受容体が該シグナル生成基を含有するか、または該シグナル生成基に結合することができる、請求項19または20記載のキット。
- 該第2の受容体が該固相に結合しているか、または該固相に結合することができ、該第1の受容体が該シグナル生成基を含有するか、または該シグナル生成基に結合することができ、請求項19または20記載のキット。
- サンプル中のアナライトの測定方法における、該アナライトに対する少なくとも2つの結合部位を含有するアナライト特異的受容体の使用。
- 診断方法における、請求項23記載の使用。
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